方法一 多糖提取与测定
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多糖提取与测定 方法一
一、多糖含量的测定（标准曲线的建立）
采用苯酚-硫酸法测定植物多糖含量，标准曲线的建立：分别取 0、0.4mL、 0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL、1.6 mL 及 1.8 mL 浓度为 100ug/ml 的标准葡萄糖溶液， 各加蒸馏水至 2.0 mL， 再加入 6%苯酚 1.0 mL， 浓硫酸 5.0 mL， 静置 10min，摇匀，室温放置 20min，然后在 490nm 处测光密度值 A，横坐标为 多糖微克数，纵坐标为光密度值，得到多糖测定标准曲线，计算得回归方程。 植物多糖含量的计算：根据所测样品提取液的光密度值 A，利用线性回归方 程，计算得到多糖的含量。 二、浸膏率的测定 把水煎煮液过滤后的葛根滤渣置于烘箱中， 在 50℃条件下烘烤甘草残渣 3h， 冷却 30min，迅速精密称定重量，再在上述温度下干燥 1h，冷却、称重，至连 续两次称重的差异不超过 5mg 为止，根据减失的重量，计算甘草的浸膏率。浸 膏率的计算公式为： 浸膏率 =
ຫໍສະໝຸດ Baidu
试验三 1 2 3 光 避 冷 照 光 藏
（3） Ph 值为 7.0 时，不同加热温度（水浴）对【 40℃ 50℃ 60℃ 70℃ 温 度 时间 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 30min 60min 含量 （4） 90℃下，不同 PH 值（5-8）对【 5.5 6.0 6.5 7.0 Ph 值 5.0 含量 Ph 值 6.0 含量 Ph 值 7.0 含量 Ph 值 8.0 含量 6.1 7.1 8.1 6.2 7.2 8.2 6.3 7.3 8.3 6.4 7.4 8.4 6.5 7.5 8.5
(4)提取次数对多糖总糖含量的影响 用较适合的料液比、提取温度、提取时间、分别提取 1、2、3 次。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (5)乙醇浓度对多糖总糖含量的影响 分别以 65%、70%、75%、80%、85%、90%乙醇、无水乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 乙醇浓度 总糖含量 提取率
】稳定性的影响 80℃ 90℃ 1 2 3 1 2 3
】稳定性的影响 7.5 8.0 8.5
9.0
6.6 7.6 8.6
6.7 7.7 8.7
6.8 7.8 8.8
6.9 7.9 8.9
（5） 温度与时间对 PH 值（澄明度、相对密度、ph 值）的影响
单因素考察实验
分别考察料液比、提取温度、提取时间、乙醇沉淀浓度和提取次数对植物多 糖总糖含量的影响。多糖的含量=植物多糖的含量/植物原料的重量 x100%。 (1)料液比对多糖总糖含量的影响 称取干燥恒重药材 10.00g， 以不同料液比 1:10、 1:15、 1:20、 1:25、 1:30(8-12 倍)，在 90℃的水浴下提取 2h，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (2)提取时间对多糖总糖含量的影响 称取干燥恒重药材 10.00g，采用较适合的料液比、在 90℃的水浴下，分别 用 0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h 进行提取，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (3)提取温度对多糖总糖含量的影响 用较适合的料液比、提取时间，分别在 50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、 100℃水浴下提取，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率
原药材质量−残渣质量−乙醇提取液挥干质量−石油醚提取液挥干质量 原药材质量
× 100%
三、多糖提取流程
方法一： 植物组织切成小块→匀浆→热水浸提→过滤→上清液蒸发浓缩→加无水乙 醇沉淀， 静置 48h→抽滤→沉淀物用 95%乙醇、 无水乙醇、 丙酮各淋洗 2 次→60℃ 真空干燥→得粗多糖 方法二： 称 取干燥至恒重的葛 根 85.0g 先经 80%乙醇回流 提取 2 次，第一次提取 2h， 第二次提取 3h， 除去单糖和 低聚糖；抽滤，药渣经真空 干燥后用石油醚（60-90℃） 回流脱脂提取 2 次，第一次 提取 2h，第二次提取 3h， 抽滤，药渣经真空干燥后， 加蒸馏水回流，微博处理， 抽滤，去上清液，浓缩记得 葛根多糖。 方法三： 称取干燥葛根 4.0g，加 400ml 去离子水，85℃水浴回流提取 2h，抽滤，将 滤液定溶于 500ml。测定总多糖含量。
稳定性影响试验：
加测：颗粒剂冲泡为液体时，测定不同温度、不同时间、不同 PH 值下各有 效成分的（稳定性）含量、澄明度、相对密度、ph 值变化等。 （1） 加速试验 （2） 水及光照条件对【 】稳定性的影响 名称 试验一 试验二 1 2 3 1 2 3 平行试验 条件 光 避 冷 光 避 冷 照 光 藏 照 光 藏 序号 时长 含量
一、多糖含量的测定（标准曲线的建立）
采用苯酚-硫酸法测定植物多糖含量，标准曲线的建立：分别取 0、0.4mL、 0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL、1.6 mL 及 1.8 mL 浓度为 100ug/ml 的标准葡萄糖溶液， 各加蒸馏水至 2.0 mL， 再加入 6%苯酚 1.0 mL， 浓硫酸 5.0 mL， 静置 10min，摇匀，室温放置 20min，然后在 490nm 处测光密度值 A，横坐标为 多糖微克数，纵坐标为光密度值，得到多糖测定标准曲线，计算得回归方程。 植物多糖含量的计算：根据所测样品提取液的光密度值 A，利用线性回归方 程，计算得到多糖的含量。 二、浸膏率的测定 把水煎煮液过滤后的葛根滤渣置于烘箱中， 在 50℃条件下烘烤甘草残渣 3h， 冷却 30min，迅速精密称定重量，再在上述温度下干燥 1h，冷却、称重，至连 续两次称重的差异不超过 5mg 为止，根据减失的重量，计算甘草的浸膏率。浸 膏率的计算公式为： 浸膏率 =
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试验三 1 2 3 光 避 冷 照 光 藏
（3） Ph 值为 7.0 时，不同加热温度（水浴）对【 40℃ 50℃ 60℃ 70℃ 温 度 时间 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 30min 60min 含量 （4） 90℃下，不同 PH 值（5-8）对【 5.5 6.0 6.5 7.0 Ph 值 5.0 含量 Ph 值 6.0 含量 Ph 值 7.0 含量 Ph 值 8.0 含量 6.1 7.1 8.1 6.2 7.2 8.2 6.3 7.3 8.3 6.4 7.4 8.4 6.5 7.5 8.5
(4)提取次数对多糖总糖含量的影响 用较适合的料液比、提取温度、提取时间、分别提取 1、2、3 次。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (5)乙醇浓度对多糖总糖含量的影响 分别以 65%、70%、75%、80%、85%、90%乙醇、无水乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 乙醇浓度 总糖含量 提取率
】稳定性的影响 80℃ 90℃ 1 2 3 1 2 3
】稳定性的影响 7.5 8.0 8.5
9.0
6.6 7.6 8.6
6.7 7.7 8.7
6.8 7.8 8.8
6.9 7.9 8.9
（5） 温度与时间对 PH 值（澄明度、相对密度、ph 值）的影响
单因素考察实验
分别考察料液比、提取温度、提取时间、乙醇沉淀浓度和提取次数对植物多 糖总糖含量的影响。多糖的含量=植物多糖的含量/植物原料的重量 x100%。 (1)料液比对多糖总糖含量的影响 称取干燥恒重药材 10.00g， 以不同料液比 1:10、 1:15、 1:20、 1:25、 1:30(8-12 倍)，在 90℃的水浴下提取 2h，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (2)提取时间对多糖总糖含量的影响 称取干燥恒重药材 10.00g，采用较适合的料液比、在 90℃的水浴下，分别 用 0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h 进行提取，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (3)提取温度对多糖总糖含量的影响 用较适合的料液比、提取时间，分别在 50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、 100℃水浴下提取，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率
原药材质量−残渣质量−乙醇提取液挥干质量−石油醚提取液挥干质量 原药材质量
× 100%
三、多糖提取流程
方法一： 植物组织切成小块→匀浆→热水浸提→过滤→上清液蒸发浓缩→加无水乙 醇沉淀， 静置 48h→抽滤→沉淀物用 95%乙醇、 无水乙醇、 丙酮各淋洗 2 次→60℃ 真空干燥→得粗多糖 方法二： 称 取干燥至恒重的葛 根 85.0g 先经 80%乙醇回流 提取 2 次，第一次提取 2h， 第二次提取 3h， 除去单糖和 低聚糖；抽滤，药渣经真空 干燥后用石油醚（60-90℃） 回流脱脂提取 2 次，第一次 提取 2h，第二次提取 3h， 抽滤，药渣经真空干燥后， 加蒸馏水回流，微博处理， 抽滤，去上清液，浓缩记得 葛根多糖。 方法三： 称取干燥葛根 4.0g，加 400ml 去离子水，85℃水浴回流提取 2h，抽滤，将 滤液定溶于 500ml。测定总多糖含量。
稳定性影响试验：
加测：颗粒剂冲泡为液体时，测定不同温度、不同时间、不同 PH 值下各有 效成分的（稳定性）含量、澄明度、相对密度、ph 值变化等。 （1） 加速试验 （2） 水及光照条件对【 】稳定性的影响 名称 试验一 试验二 1 2 3 1 2 3 平行试验 条件 光 避 冷 光 避 冷 照 光 藏 照 光 藏 序号 时长 含量