胶乳微球与抗体蛋白相互作用机理的荧光光谱法分析
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公司 ；１苯 胺基 萘一一 － ８硝基 苯 甲酸 盐 （ ＡＮＳ ，美 国 Ｓｇ ） ｉｍａ公
球的相互作用总会存在 ， 而这些相互作用会 对 固定 于胶 乳微
球表面抗体蛋 白的功能特性 、空间结构 、生物 活性及其 在生 物诊断 中的应用产 生一定 的影 响，所以研 究它们之 问相互作 用 的机理 以及这些 相互作 用对胶 乳一 抗体蛋 白复合 物 中抗体
摘
要
利用共价偶联的方法制备 了胶 乳一 抗体 蛋 白复合 物 ，并采用 荧光 光谱 法对复合 物 的性质进 行 了研
究， 以揭示胶乳微球 与抗体蛋 白之 间的相互作用机理 。内源荧 光光谱分 析结果表 明 ， 共价偶联后 ，抗体蛋 白 的最大 发射峰发生显著蓝移 ， 大发射峰强 度显著 降低 ，抗体蛋 白的三级结 构发生了一定的变化 ， 最 胶乳微球 与抗体蛋 白之 间的相互作用对抗体蛋 白的内源荧光 有显著 的猝灭作 用 ， 灭效果 随着偶联体 系 ｐ 猝 Ｈ值 以及 胶乳浓度 的增加 而增强 ， 灭机制为静态猝灭 。 猝 外源荧光光谱分析结果表明 ， 共价偶联后抗体蛋 白的最大发
蛋 白性质 的影 响显得 意义重 大。近年 来 ，常用于研 究微球与
收 稿 日期 ：２ １—２２ ， 订 日期 ：２ １—６１ ０ ２０— ３ 修 ０ ２０ —０
基金项 目：国家科技部 （６ ８ ３计划） 目（ ０ ０ 项 ２ １ ＡＡ０ ２０ ） Ｎ ２ ８ ２￣ Ｎ家 自然科学基金项 目（ １ ７ ５４ 资助 ３ ０ １６ ） 作者简 介：俞思明 ，１８ ９ ５年生 ， 华南理工大学轻工与食品学院硕 士研究生
荧 光 光 谱 法 被 认 为 是 一 种 最 简 单 、最有 效 的 研 究 微 球 与蛋 白 质 问 相互 作 用 的方 法 ＿ ］ 】 。
利用共价偶联 法制 备 了胶乳一 体蛋 白复合物 ， 且采 抗 并 用荧光光谱 法研究了胶乳微球与抗体 蛋 白间的相互作用 以及 相互作用对抗体蛋 白结 构性质 的影 响 ，以期 为胶 乳一 抗体 蛋
白复合物在生物诊断中的应用提供理论基础 。
１ 实 验 部 分
１１ 材 料 与 试 剂 ．
胶乳 微球 （ 粒径 ２ ０ｎ ，德 国莫克 公 司；ＨＣ － ２ ｍ） Ｇ ￣单 克 隆抗 体 ， 国 Ｓｇ 公 司；卜乙基碳酰二亚胺盐酸盐 （ Ｅ２ ， 美 ｉｍａ Ｅ ｌ）
Ｎ 羟基琥 珀酰亚胺 （ ｕｆ＿ ＿ ｓ ｌ ＮＨｓ ， 为美 国赛 默飞世 尔科 技 ｏ ）均
中 图分 类 号 ：Ｑ １ ７
蛋 白质之间相互作用的方法主要有 ： 荧光光谱法 、 紫外一 可见
引 ห้องสมุดไป่ตู้
近年来 ， 包被有 抗体／ 抗原 的胶乳微 球 已被 广泛 应用 于 免疫诊断 中［ １ 免疫诊断 的理论 基础是抗 原与抗 体间 的特 。 异性反应＿ ，当抗原／ 体 连接在 胶乳 微球 表 面时 ，一旦抗 ｌ ３ ］ 抗
原 ／ 体 与 胶 乳 微球 上 的抗 体 ／ 原 发 生 特 异性 结 合 ，由 于 胶 抗 抗
光谱法 （ ＿ ｓ 、圆二 色谱法 （ Ｄ） ｕｖ ） Ｃ 、傅里 叶变换 红外 光谱
法 （ Ｉ Ｒ 及核磁共振法 （ Ｋ＇ ） Ｉ ＮＭＲ）７ 。 而 ，在这 些方 法 中， Ⅲ。 然 。
＊通 讯 联 系 人 ｅｍａ ： Ｙ ＠ ｗｏ ｄｏ ｃｒ．ｎ — ｉ ＰＰ ｌ ｎ ｆ． ｏ ｃ ｎ
ｅｍａ ：ｔｙｙ ＠１ ６ ｃｒ － ｉ ａｉａ ２ ．ｏ ｌ ｎ
第 ８期
司； 其余化学试剂均为分析纯 ；实验用水为去离子水 。
１ ２ 主要 仪 器 ．
超 声 波 细 胞 粉 碎 机 （Ｙ ９ Ｉ 型 ） Ｊ －２Ｉ ，宁 波 新 芝 生 物 科 技 股
份公 司； 荧光 光谱仪 （ －５ ０ ，日本 Ｈｉ ｃｉ ｋ 公 司。 Ｆ４ ０ ） ｔ ｈ ｉ ａ Ｋｏ １３ 胶乳～ ． 抗体蛋 白复合物的制备
射峰强度显著增强 ， 且随着偶联体系 ｐ 值的升高 ， Ｈ 抗体蛋 白的疏水性显著降低 ， 随着胶乳浓 度 的增加 ， 疏
水性逐渐升高 。
关键词
胶乳一 抗体蛋 白复合物 ； 抗体蛋 白；荧光光谱
文 献 标 识 码 ：Ａ Ｄ Ｉ １ ． ９ ４ｊｉ ｎ １０ —５ ３ ２ １ ）８２ ６—５ Ｏ ： ０３ ６ ／．ｓ ． ０ ００ ９ （０ ２ ０—１ ６０ ｓ
第３ 卷， ８ ２ 第 期
２ ０ １ ２年 ８月
光
谱
学
与
光
谱
分
析
Ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃｒｌＡｎ ｌｓｓ ｐ ｃｒ ｓｏ ｙ ａ ｄＳ ｅ ｔａ ａｙ ｉ
Ｖｏ ． ２ Ｎｏ ８ ｐ ２ ６ — １ ０ １３ ， ． ，ｐ １ ６２ ７ Ａｕ ｕ ｔ ０１ ｇ ｓ ，２ ２
乳 的凝 聚作用 ， 免疫反应从宏观上被放 大 了。所以将不 同的 抗原 ／ 抗体连接在胶乳 微球 表 面，通 过免 疫检 测 ，可将 一些 常见 疾病 ， 如肝炎 、流感等快速检测 出来 。 常用 的制备胶乳一 体蛋 白复合 物 的方法 有两 种 ：物理 抗 吸附法和共价偶联法。由于吸附会引起固定于胶乳 微球表 面 蛋 白的部分解 吸及结构的变化 ， 以用物理吸 附法制备 的胶 所 乳一 抗体蛋 白复合物特 异性低 ，在生物 诊 断 中的应用 受到 限 制Ⅲ ］ ４ 。共价偶联法能在最 大 限度 上控 制吸 附法 中出现 的问 题 ， 为 目前制备胶乳一 成 抗体蛋 白复合物 的主要方法 。 在胶乳一 抗体蛋 白复合 物 的制备 过程 中 ， 白 与胶乳 微 蛋
胶 乳 微 球 与 抗 体 蛋 白相 互 作 用 机 理 的 荧 光 光 谱 法 分 析
俞 思明 ，彭运 平 ，于淑娟 欢 ，吕 ，郭 丞
５ ０ ４ １６ ０
１ 华南理 工大学轻工与食品学 院，广东 广州 －
２ ．广州万孚生物技术有限公司 ， 广东 广州 ５０ ４ １ ６０
球的相互作用总会存在 ， 而这些相互作用会 对 固定 于胶 乳微
球表面抗体蛋 白的功能特性 、空间结构 、生物 活性及其 在生 物诊断 中的应用产 生一定 的影 响，所以研 究它们之 问相互作 用 的机理 以及这些 相互作 用对胶 乳一 抗体蛋 白复合 物 中抗体
摘
要
利用共价偶联的方法制备 了胶 乳一 抗体 蛋 白复合 物 ，并采用 荧光 光谱 法对复合 物 的性质进 行 了研
究， 以揭示胶乳微球 与抗体蛋 白之 间的相互作用机理 。内源荧 光光谱分 析结果表 明 ， 共价偶联后 ，抗体蛋 白 的最大 发射峰发生显著蓝移 ， 大发射峰强 度显著 降低 ，抗体蛋 白的三级结 构发生了一定的变化 ， 最 胶乳微球 与抗体蛋 白之 间的相互作用对抗体蛋 白的内源荧光 有显著 的猝灭作 用 ， 灭效果 随着偶联体 系 ｐ 猝 Ｈ值 以及 胶乳浓度 的增加 而增强 ， 灭机制为静态猝灭 。 猝 外源荧光光谱分析结果表明 ， 共价偶联后抗体蛋 白的最大发
蛋 白性质 的影 响显得 意义重 大。近年 来 ，常用于研 究微球与
收 稿 日期 ：２ １—２２ ， 订 日期 ：２ １—６１ ０ ２０— ３ 修 ０ ２０ —０
基金项 目：国家科技部 （６ ８ ３计划） 目（ ０ ０ 项 ２ １ ＡＡ０ ２０ ） Ｎ ２ ８ ２￣ Ｎ家 自然科学基金项 目（ １ ７ ５４ 资助 ３ ０ １６ ） 作者简 介：俞思明 ，１８ ９ ５年生 ， 华南理工大学轻工与食品学院硕 士研究生
荧 光 光 谱 法 被 认 为 是 一 种 最 简 单 、最有 效 的 研 究 微 球 与蛋 白 质 问 相互 作 用 的方 法 ＿ ］ 】 。
利用共价偶联 法制 备 了胶乳一 体蛋 白复合物 ， 且采 抗 并 用荧光光谱 法研究了胶乳微球与抗体 蛋 白间的相互作用 以及 相互作用对抗体蛋 白结 构性质 的影 响 ，以期 为胶 乳一 抗体 蛋
白复合物在生物诊断中的应用提供理论基础 。
１ 实 验 部 分
１１ 材 料 与 试 剂 ．
胶乳 微球 （ 粒径 ２ ０ｎ ，德 国莫克 公 司；ＨＣ － ２ ｍ） Ｇ ￣单 克 隆抗 体 ， 国 Ｓｇ 公 司；卜乙基碳酰二亚胺盐酸盐 （ Ｅ２ ， 美 ｉｍａ Ｅ ｌ）
Ｎ 羟基琥 珀酰亚胺 （ ｕｆ＿ ＿ ｓ ｌ ＮＨｓ ， 为美 国赛 默飞世 尔科 技 ｏ ）均
中 图分 类 号 ：Ｑ １ ７
蛋 白质之间相互作用的方法主要有 ： 荧光光谱法 、 紫外一 可见
引 ห้องสมุดไป่ตู้
近年来 ， 包被有 抗体／ 抗原 的胶乳微 球 已被 广泛 应用 于 免疫诊断 中［ １ 免疫诊断 的理论 基础是抗 原与抗 体间 的特 。 异性反应＿ ，当抗原／ 体 连接在 胶乳 微球 表 面时 ，一旦抗 ｌ ３ ］ 抗
原 ／ 体 与 胶 乳 微球 上 的抗 体 ／ 原 发 生 特 异性 结 合 ，由 于 胶 抗 抗
光谱法 （ ＿ ｓ 、圆二 色谱法 （ Ｄ） ｕｖ ） Ｃ 、傅里 叶变换 红外 光谱
法 （ Ｉ Ｒ 及核磁共振法 （ Ｋ＇ ） Ｉ ＮＭＲ）７ 。 而 ，在这 些方 法 中， Ⅲ。 然 。
＊通 讯 联 系 人 ｅｍａ ： Ｙ ＠ ｗｏ ｄｏ ｃｒ．ｎ — ｉ ＰＰ ｌ ｎ ｆ． ｏ ｃ ｎ
ｅｍａ ：ｔｙｙ ＠１ ６ ｃｒ － ｉ ａｉａ ２ ．ｏ ｌ ｎ
第 ８期
司； 其余化学试剂均为分析纯 ；实验用水为去离子水 。
１ ２ 主要 仪 器 ．
超 声 波 细 胞 粉 碎 机 （Ｙ ９ Ｉ 型 ） Ｊ －２Ｉ ，宁 波 新 芝 生 物 科 技 股
份公 司； 荧光 光谱仪 （ －５ ０ ，日本 Ｈｉ ｃｉ ｋ 公 司。 Ｆ４ ０ ） ｔ ｈ ｉ ａ Ｋｏ １３ 胶乳～ ． 抗体蛋 白复合物的制备
射峰强度显著增强 ， 且随着偶联体系 ｐ 值的升高 ， Ｈ 抗体蛋 白的疏水性显著降低 ， 随着胶乳浓 度 的增加 ， 疏
水性逐渐升高 。
关键词
胶乳一 抗体蛋 白复合物 ； 抗体蛋 白；荧光光谱
文 献 标 识 码 ：Ａ Ｄ Ｉ １ ． ９ ４ｊｉ ｎ １０ —５ ３ ２ １ ）８２ ６—５ Ｏ ： ０３ ６ ／．ｓ ． ０ ００ ９ （０ ２ ０—１ ６０ ｓ
第３ 卷， ８ ２ 第 期
２ ０ １ ２年 ８月
光
谱
学
与
光
谱
分
析
Ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃｒｌＡｎ ｌｓｓ ｐ ｃｒ ｓｏ ｙ ａ ｄＳ ｅ ｔａ ａｙ ｉ
Ｖｏ ． ２ Ｎｏ ８ ｐ ２ ６ — １ ０ １３ ， ． ，ｐ １ ６２ ７ Ａｕ ｕ ｔ ０１ ｇ ｓ ，２ ２
乳 的凝 聚作用 ， 免疫反应从宏观上被放 大 了。所以将不 同的 抗原 ／ 抗体连接在胶乳 微球 表 面，通 过免 疫检 测 ，可将 一些 常见 疾病 ， 如肝炎 、流感等快速检测 出来 。 常用 的制备胶乳一 体蛋 白复合 物 的方法 有两 种 ：物理 抗 吸附法和共价偶联法。由于吸附会引起固定于胶乳 微球表 面 蛋 白的部分解 吸及结构的变化 ， 以用物理吸 附法制备 的胶 所 乳一 抗体蛋 白复合物特 异性低 ，在生物 诊 断 中的应用 受到 限 制Ⅲ ］ ４ 。共价偶联法能在最 大 限度 上控 制吸 附法 中出现 的问 题 ， 为 目前制备胶乳一 成 抗体蛋 白复合物 的主要方法 。 在胶乳一 抗体蛋 白复合 物 的制备 过程 中 ， 白 与胶乳 微 蛋
胶 乳 微 球 与 抗 体 蛋 白相 互 作 用 机 理 的 荧 光 光 谱 法 分 析
俞 思明 ，彭运 平 ，于淑娟 欢 ，吕 ，郭 丞
５ ０ ４ １６ ０
１ 华南理 工大学轻工与食品学 院，广东 广州 －
２ ．广州万孚生物技术有限公司 ， 广东 广州 ５０ ４ １ ６０