柠檬苦素检测
柠檬苦素质量标准

柠檬苦素质量标准
柠檬苦素的质量标准因用途和纯度要求而异。
以下是关于柠檬苦素质量标准的一些信息:
柠檬苦素的质量标准通常包括以下几个方面:
1. 纯度:柠檬苦素的纯度是衡量其质量的重要标准之一。
根据不同的用途,纯度要求会有所不同。
一般来说,食品级柠檬苦素的纯度应达到98%以上。
2. 外观:柠檬苦素的外观应为淡黄色或类白色粉末,无杂质和异味。
3. 含量:柠檬苦素的含量应符合相关标准,以保证其有效性。
一般来说,食品级柠檬苦素的含量应达到97%以上。
4. 安全性:柠檬苦素应符合国家食品安全标准,无毒、无害、无残留,对人体无害。
5. 稳定性:柠檬苦素应具有一定的稳定性,能够在常温下保存不易变质,不易氧化和变色。
总之,柠檬苦素的质量标准需要根据具体用途和客户需求来确定。
在生产过程中,需要采取一系列质量保证措施,确保产品的质量稳定性和可靠性。
同时,也需要注意产品的安全性,确保产品的使用不会对人体造成危害。
反相高效液相色谱法测定枳实中柠檬苦素的含量
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反相高效液相色谱法测定枳实中柠檬苦素的含量
蔡艳芳;江国荣
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2015(8)32
【摘要】目的分析反相高效液相色谱法测定枳实中柠檬苦素的含量。
方法采用Hypersil BDS C18(200mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈∶水=45∶55,流速为1.0ml/min,柱温为32℃,检测波长为220nm。
结果枳实中柠檬苦素的含量测定方法线性关系良好,柠檬苦素在0.0365~0.5568μg(r=0.9995)与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.40%,RSD值为1.79%(n=6)。
结论反相高效液相色谱法测定枳实中柠檬苦素的含量,方法简便、准确、重复性好,可用于枳实中柠檬苦素的含量测定。
【总页数】2页(P90-91)
【作者】蔡艳芳;江国荣
【作者单位】广东省佛山市第一人民医院.中山大学附属佛山医院药剂科;广东省佛山市第一人民医院药剂科
【正文语种】中文
【中图分类】R837
【相关文献】
1.反相离子对高效液相色谱法测定枳实中辛弗林的含量
2.反相高效液相色谱法测定苦豆子总碱中槐定碱含量
3.反相高效液相色谱法测定枳实、枳壳中橙皮甙和柚皮
甙的含量4.反相高效液相色谱法测定颈痛消丸中龙胆苦苷的含量5.反相高效液相色谱法同时测定鼻咽清颗粒中龙胆苦苷、迷迭香酸和蒙花苷含量
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柠檬苦素抑制胃癌细胞转移的作用及机制研究

胃癌是一种严重威胁人类生命的致死性疾病,全球每年约723000人死于胃癌[1]。
由于胃癌早期一般没有明显症状,胃癌被确诊时通常已是晚期,并伴有肝、肺、腹膜和淋巴结的转移。
一旦形成远处转移灶,患者5年生存率下降到10%以下,中位生存期为9~10个月[2]。
目前,手术、放疗以及化疗是治疗胃癌的主要手段,但由于晚期胃癌患者术后会出现肿瘤转移和复发,提高患者总体生存率仍然是一个巨大的挑战[1]。
因此,开发有效抗肿瘤转移的药物显得尤为迫切。
有研究证实[3],源于中草药的单体和提取物不仅毒性小,且具有显著的抗肿瘤效果,已成为目前抗癌药物研究的热点。
2017年欧洲科学家调查发现,柑橘属水果,对消化系统和上呼吸道癌症有很好的预防作用[4]。
随着柑橘综合利用的深入,各种有效成分逐步被提取和分离出来,尤其以存在于桔皮及柚皮中柠檬苦素(limonin )在预防和控制肿瘤方面显示良好的效果[5]。
因其药理作用强,毒性低,不良反应轻而受到越来越多学者的重视与青睐,但其对于胃癌细胞转移的抑制作用及相关信号通路和靶点的研究,国内外鲜见报道。
信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)作为一种已知与癌细胞增殖和转移相关的致癌转录因子,磷酸化后与STAT 家族的其他成员形成同源二聚体或异二聚体。
随后,活化的STAT3复合物易位到细胞核中,启动STAT3靶基因的转录,其中就包括基质金属蛋白酶9(MMP-9)[6],而MMP-9的表达与胃癌的恶性程度呈正相关[7],提示MMP-9是胃癌转移过程中的一个重要因素。
因此,本研究旨在初步探讨柠檬苦素抑制胃癌细胞体内外转移的作用以及与STAT3/MMP-9信号通路的相关性,以便为阐明柠檬苦素的抗癌新功能和抗肿瘤新机制以及研发具有我国自主知识产权的肿瘤生物治疗柠檬苦素抑制胃癌细胞转移的作用及机制研究刘伯霞1,2,申琴1,2,焦海燕1,2,李涛3,陈静1,2(1.宁夏医科大学基础医学院,银川750004;2.宁夏回族自治区生育力保持教育部重点实验室,银川750004;3.宁夏医科大学总医院肿瘤外科,银川750004)文章编号:1674-6309(2020)04-0340-06·论著·收稿日期:2019-09-27基金项目:国家自然科学基金(816660500;81560485;81260339);宁夏基础医学“西部一流”学科人才培养项目(NXYLXK2017B07;NXYLXK2017A05);宁夏自然科学基金(NZ16142)作者简介:刘伯霞(1995-),女,宁夏人,在读硕士研究生,研究方向:肿瘤药物靶向治疗。
橘核中柠檬苦素的提取与含量测定

1 . 2 . 2 标 准品 溶液 的制备
化等药理作用 。迄今 已从植物体中发现了 3 0 0多 种柠檬苦素类化合物 , 其中 5 0 多种是从柑橘属植物 中分离出来 。本 文研究 高效液相 色谱测定橘核
中柠檬苦素含量的方法 , 可为开发橘核药用价值及
质量控制提供一定依据 。
B
橘 核为 芸香 科植 物 橘 C i t r u s r e t i c u l a t a B l a n c o 及 其栽 培 变种 的干 燥 成 熟种 子 , 主产 于江 西 、 浙江、 福
他 试剂 均为 分析 纯 。
1 . 2 实验方 法 1 . 2 . 1 样 品溶 液 的制备
分离与分析 。E — m a i l : a d a x h d @t z e . e d u . C I 3 。
科
学
技
术
与
工
程
1 3卷
>乙腈 >乙酸 乙酯 。并 且 乙醇在 安 全 性 、 经 济 成本 方 面性能更 优 , 因此 , 乙醇是 较为 理想 的提取溶 剂 。 进一 步 比较 不 同浓 度 乙 醇一 水 溶 液 ( 5 0 % ~ 1 0 0 %) 的提 取效果 , 提 取率 随着 乙 醇浓 度 的升 高先 增 大后 减 小 , 以7 0 % 乙 醇 的 提 取 效 果 最 理 想 。所
建、 四川等地 , 有理气、 散结、 止痛的功效 , 用于疝气 疼痛 、 睾丸肿痛 、 乳 痈 乳 癖 ¨r 2 J 。研 究 表 明 , 橘 核 中 主要活性成分为柠檬苦素及其类似物 , 该类物质具
有抗 肿 瘤 、 镇 痛抗炎 、 抗焦虑镇静 、 防虫杀虫 、 抗 氧
橘 核经 干燥 、 粉碎过 6 0 目筛 , 于 索 氏提 取 器 中 以石 油 醚 脱 脂 至 无 色 。取 脱 脂 后 橘 核 粉 末 , 加 入 7 0 % 乙醇 , 料液 比 1 : 3 0 , 5 0。 I = 下 超 声 提 取 2次 , 3 0 a r i n / 次 。抽滤 , 合并 滤 液浓缩 至干 , 用 甲醇溶 解并定 容至 2 5 mL , 摇匀后经 0 . 4 5 t x m微 孔 滤 膜 过滤 ,
柠檬苦素,诺米林含量测定方法
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编号:FZD0163 枳实提取物中柠檬苦素和诺米林的含量测定方法
一、色谱条件
色谱柱:Hypersil ODS C18 4.6×150mm 5μm
流速:1.0mL/min
检测波长:210nm
灵敏度:0.01AUFS
柱温:25℃
进样量:10μ
流动相:A:甲醇-水(40:60,V/V)
B:甲醇-水(60:40,V/V)
梯度条件: T(min) A% B%
0 100 0
16 0 100
40 0 100
40.01 100 0
二、溶液制备
1.对照品溶液制备精密称取柠檬苦素和诺米林约10mg于50mL容量瓶中,加入甲醇溶解定容。
2.品溶液制备精密称取提取物样品适量于50mL容量瓶中(控制柠檬苦素的浓度大于20ug/ml,诺米林的浓度大于10ug/ml),加甲醇约30ml,超声振荡20min,冷却至室温,定容,用0.45μm滤膜过滤后,即得样品溶液。
三、样品测定
在上述色谱条件下,等仪器稳定,基线平稳后,进样测定,柠檬苦素和诺米林的保留时间分别为18、22min左右,与杂质分离良好,用外标法计算各组份含量。
分光光度法测定椪柑果皮中柠檬苦素类似物
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分光光度法测定柱柑果皮中柠檬苦素类似物吴杨伟(金华职业技术学院,浙江金华321017)喃要]以桔皮为原材料,以3种不同脱脂剂和提取剂对柠檬苦素的提取效果不同而进行多组实验,从中选择出最好的脱脂剂石油醚和提取剂丙酮,使提取的效果达到最好。
再从快速测定法中。
以721分光光度计的不同波K T钡,Ig_,从中选择出最大吸收波长,综合比较得出,桔皮中柠檬苦素的最佳测定方法是快速法、测定条件为5f1)nm波长、以石油醚和丙酮作为最佳脱脂溶刺和提取溶剂。
实验结果显示,快速法所测柠檬苦素类似物的含量为0.034%,传统方法所测柠檬苦素类似物的含量为0.021%。
哄键词]柠檬苦素;脱脂剂;提取荆;最失吸收波长据统计2000年全国柑桔种植面积12万总产量1235万t,面积和产量分别位居廿界第—和第三。
由于总产量的不断增加,柑桔皮渣等废弃物造成的环境污染也不容忽视,若柑桔果实的可食率以65%计算,皮渣废弃物的比例为35%,按2000年产量计算,柑桔皮渣废弃物达432万t,造成的污染程度可想而知。
如何加强柑桔深度加工研究,尤其是利用柑桔果实皮渣废弃物提取一些生物洲生物质,并加以利用,是提高柑桔产业效益,减少柑桔皮渣废弃物污染的重要途径。
柠檬苦素及其类似物(柠檬苦素类物质)在柑桔果实中,特别是在果皮、种子中含量丰富(葡萄柚种子中柠檬苦素占种-7-_鲜重的1.5%),由于这类物质具有抗癌与保健的功效,以及高效的除虫作用,因此,越来越受到人们的重视。
利用柑桔果实皮渣废弃物提取柠檬苦素类化合物,原料廉价,提取效率高,具有广阔的商业生产前景。
因此,对柑桔中柠檬苦素的含量加以测定,从而测出其中是否柠檬苦素及类1以物,以及含量的多少,对柠檬苦素的应用和方便的提取有一定的帮助。
1材料与方法1.1关验材精口柑果皮:市售药材(粉碎备用)12实验试剂无水乙醇、乙醚、正己烷、氯仿、二氯甲烷、丙酮、浓硫酸、对二一甲氨基苯甲醛、三氯化铁、召由醚(均为分析纯)反应液:125m g对二一甲氨基苯甲醛溶解于100m L硫酸一无水乙醇混合液(V:V=65:35)中,加入05m L O.9%三氯化铁溶液(O.909三氯化铁定溶于10.OO m l蒸馏水),现配现用。
高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素
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高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素徐旭耀;黄秋儿;黄惠玲【摘要】HPLC was applied to the determination of limonin in citrus peels. The sample was ultrasonically extracted with (φ) 70% ethanol solution at 50℃ for 75 min. Sinochrom ODS-BP (250 min×4. 6 mm, 10 μm) column was used as stationary phase, a mixture of acetonitrile and water mixed in the ratio of 45 to 55 (by volume) was used as mobile phase; UV detection at 210 nm was used in the determination. Linear relationship between values of peak area and mass concentration of limonin was obtained in the range of 12. 0-384 mg·L^-1 Values of average recovery and RSD (n=5) found were 99.9% and 1.8% respectively.%提出了高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素含量的方法。
样品用体积分数为70%乙醇溶液于50C超声提取75min。
以Sinochrom ODS-BP(250min×4.6mm,10μm)为分离柱,以乙腈-水(45+55)溶液作为流动相,用紫外检测器在波长210nm处进行测定。
柠檬苦素的质量浓度在12.0-384mg·L^-1范围内与其峰面积呈线性关系,方法的平均回收率为99.9%,相对标准偏差(n=5)为1.8%。
219316082_柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展
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王夜梅,李江南,尹会平,等. 柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展[J]. 食品工业科技,2023,44(12):470−479. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022070069WANG Yemei, LI Jiangnan, YIN Huiping, et al. Research Progress on Extraction, Separation, Purification and Detection Technology of Limonins in Citrus[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(12): 470−479. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022070069· 专题综述 ·柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展王夜梅1,李江南1,尹会平1,张耀海1,陈爱华1,苏学素2,焦必宁1,*(1.西南大学柑桔研究所,农业农村部柑桔产品质量安全风险评估实验室(重庆),农业农村部柑桔及苗木质量监督检验测试中心,农业农村部柑橘类果品质量安全控制重点实验室,重庆 400712;2.西南大学化学化工学院,重庆 400715)摘 要:柑橘是世界第一大类水果,每年有大量的柑橘加工副产品产生,这些副产品中含有丰富的类柠檬苦素化合物,具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒等多种生理作用,已被应用于食品、医药和农业等领域。
开发高效的类柠檬苦素提取、分离纯化技术,研发快速的类柠檬苦素分析检测方法,有着重要的理论和实践价值。
本文介绍了柑橘中类柠檬苦素结构特征及含量,重点综述了类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术。
总结发现新兴技术如超声辅助、超临界流体提取类柠檬苦素的提取效率较好,联合应用大孔树脂吸附、高速逆流色谱、制备型高效液相色谱法分离效果好。
不同产地枳实、枳壳中柠檬苦素含量比较研究
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( .C e guU i r t o . C M,C e g u6 13 1 h nd nv s y f e i T . h nd 1 17;
2. Th e d n s fS ae Ke a o ao y o s u c sS se Re e r h a d De e o me t e Br e i g Ba e o tt y L b r t r fRe o r e y tm s a c n v lp n Ut iai n o i e e He b lMe i i e i z to fCh n s r a d c n s Co—c n tucin d b e Mi ity o ce c l — o sr to e y Th n sr fS in e
arn i a odl er e tnhp h nai fio i w si ter g f . 22~50 g ( = .9 9 ;r— uat dgo na l i si.T el eryo m nn a n h neo 0 0 ih i r ao i t l a 0 .5 r 099 ) e
关键词 :枳实 ;枳壳 ;柠檬苦素 ;高效液相色谱
中图分类号 :T 2 2 3 S 0 . 文献标识码 :A 文章编号 :10 06—2 1 ( 0 1 0 0 2 0 5 3 2 1 )5— 16— 4
Th e er ia i i ed t m n t on on I mOnn i r c u ur n i i i n fu t s a a t mma u u i t rS an r cu r n i fO die e tar a d fu t s au a t r m f r n e s i
柠檬汁中苦味物质的脱除试验
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第32卷第5期2007年10月 昆明理工大学学报(理工版)Journal of Kun m ing University of Science and Technol ogy (Science and Technol ogy )Vol .32 No 15 Oct .2007收稿日期:2007-01-19.基金项目:昆明理工大学基金项目(项目编号:1401)第一作者简介:赵天瑞(1964-),男,副教授.主要研究方向:食品工艺过程.E -ma il:ztr219@yahoo 1com 1cn柠檬汁中苦味物质的脱除试验赵天瑞,樊建,覃宇悦(昆明理工大学化学工程学院,云南昆明650224)摘要:试验采用活性炭、硅藻土对柠檬汁进行吸附脱苦,研究了不同温度、活性炭用量及脱苦时间等因素对柠檬汁的脱苦效果.结果表明:使用014%的活性炭在室温20℃下,处理时间45m in,其脱苦效果最好,对柠檬苦素的脱除率为6319%,可溶形固性物、总酸的损失率分别为217%及9113%,颜色和风味保持良好.关键词:柠檬汁;活性炭;柠檬苦素;脱苦中图分类号:TS26412文献标识码:A文章编号:1007-855X (2007)05-0100-04Exper i m en t of the Rem ova l of B itter Subst ance from L em on Ju i ceZHAO Ti an 2ru i,F AN J i an,Q I N G Yu 2yue(Faculty of Chem ical Engineering,Kun m ing University of Science and Technol ogy,Kun m ing 650224,China )Abstract:U sing active carbon and diat om ite as the ads orbent t o re move the bitter substance fr om le mon juice,debittering effect is studied at different te mperature,the quantity of active carbon and the p r ocessing ti m e .The result shows that when 014%of active carbon is added int o le mon juice at r oom te mperature (20℃)and the p r o 2cessing ti m e is 45m inutes,the p referable conditi on is obtained with the rati o of li m onjn re moval 6319%,the l ost of diss olubility s olid and t otal s our 217%and 9113%,and the col or and the flavour keep ing good .Key words:le mon juice;active carbon;li m onin;debitterizati on0引言柠檬为芸香科柑桔属、枸橼柠檬类植物,此类共有4个种和1个变种,即柠檬(C.li m on ),来檬(C.auran tifolia ),黎檬(C.li m onia ),香橼(C.m edica )及佛手(C.F ingered C itron ).柠檬原产于喜马拉雅东部,包括印度和我国西藏东南部[1].云南德宏和四川安岳是我国2个较大的柠檬主产区.柠檬是重要的天然香料和食品饮料原料.由果皮提取的柠檬油可以回添到柠檬汁产品或其他加工过的果汁中以增强风味,在食品及日用化工产品中用途极为广泛.新鲜柠檬果汁饮料清新爽口,维生素含量丰富,每100g 鲜果汁含维生素A 20国际单位,维生素B10104mg,维生素C 53mg 等.然而,柠檬在鲜果榨汁、必要的工艺处理及产品储藏期,均会产生不同程度的风味劣变,其特征是柠檬的天然香气减弱,出现苦味、呛味、陈味.产生苦味的主要物质是柠碱(li m onin ),又称为柠檬苦素.柠碱并不存在于完整的果实中,此时存在的是其前体物.当果实榨汁后,在酸和柠檬苦酸D -环内酯酶的作用下前体物柠檬苦酸就转化为柠碱,使果汁的苦味加重[2].加热工艺及接触空气会使该变化更加明显.研究表明,苦味前体物主要存在于柠檬果实的果核、果皮及囊衣中,这些苦味物质按化学结构分为两大类:一类是三萜系化合物的衍生物柠檬苦素类,代表物为柠檬苦素(li m onin )、诺米林(no m ilin )等;另一类是黄烷酮糖苷类化合物,代表物为柚皮苷、新橙皮苷等[3,6].在柠檬汁生产中,这些苦味物质溶入柠檬汁内,严重影响产品的品质和价值,需进行脱苦操作.本研究以使用方便、安全性高的活性炭及硅藻土为吸附剂进行吸附脱苦,以苦味主体物质柠檬苦素为主要检测指标,结合β-环状糊精的使用,取得了脱苦和风味保持的良好效果.1材料与方法111原料柠檬鲜果:购自昆明水果市场.吸附剂:硅藻土与活性炭,均为食品级.112主要仪器设备锥型榨汁机;HH -2恒温水浴锅;721-100型分光光度计;阿贝折光仪;LXJ -ⅡB 数显离心机等.113分析方法可溶性固形物的测定:阿贝折光仪测定.总酸的测定:酸碱滴定法(以柠檬酸计).柠檬苦素的测定:分光光度法(实际测定值为柠檬苦素类似物)[4,5].维生素C 的测定:2,6-二氯酚靛酚法.114试验方法11411不同吸附剂脱苦效果的鉴别柠檬原汁的制备:将柠檬鲜果清洗干净、沿横径切成两瓣,用锥型榨汁机榨汁.再用150μm 和200μm 尼龙滤布依次过滤,得柠檬原汁.吸附剂的筛选:分别在柠檬汁中添加1%的活性炭、硅藻土,于室温、65℃下恒温搅拌60m in,然后在5000r/m in 下离心15m in 除去吸附剂,上清液再过滤.取清汁作稀释调配品尝其风味,鉴别脱苦效果.11412活性炭最适脱苦条件的研究1141211适宜温度的选择在柠檬汁中添加016%的活性炭,于室温、45、65℃下恒温搅拌60m in,然后在5000r/m in 下离心15m in 除去吸附剂,上清液再过滤.取清汁测定柠檬苦素类似物、可溶性固形物、总酸及Vc 含量,并作稀释调配品尝其风味,确定适宜温度.1141212活性炭用量的确定在柠檬汁中添加不同剂量的活性炭,于上述实验的适宜温度下恒温搅拌60m in,后续操作方法同1141211,确定活性炭的最适用量.1141213活性炭处理时间的确定在柠檬汁中添加适宜用量的活性炭,于前一实验得出的最适温度下恒温搅拌15,30,45,60,75m in,后续操作方法同1141211,以确定活性炭的最适作用时间.11413β-环状糊精的使用以上述脱苦处理过的柠檬汁为原料,调配果汁含量为5%,蔗糖含量为9%的柠檬果汁饮料,分别添加0102%,0104%,0106%,0108%,011%的β-环状糊精,灌装杀菌、冷却.保存一定时间后品尝鉴别其风味.2结果与讨论211不同吸附剂的脱苦效果用活性炭于室温和65℃下脱苦处理后的柠檬汁,苦味均明显变淡,汁液清澈透明,表明活性炭具有明显的脱苦效果;用硅藻土于室温和65℃下脱苦处理后的柠檬汁,汁液透明度提高,但苦味基本没有变化,表明硅藻土没有良好的脱苦效果.因此选择活性炭作吸附脱苦剂.101第5期 赵天瑞,樊 建,覃宇悦:柠檬汁中苦味物质的脱除试验201昆明理工大学学报(理工版) 第32卷212活性炭的最适脱苦条件的确定21211活性炭适宜处理温度的确定在活性炭用量016%,处理时间60m in,不同温度下活性炭对柠檬汁的脱苦效果如表1.表1 不同温度下活性炭对柠檬汁的脱苦效果Tab.1 Effect of d i fferen t te m pera ture on deb itter i za ti on温度柠檬苦素含量/(μg・mL-1) 可溶性固形物含量/% 总酸/(g・100mL-1) 维生素C含量/(mg・100mL-1) /℃脱苦前脱苦后脱除率/%脱苦前脱苦后损失率/%脱苦前脱苦后损失率/%脱苦前脱苦后损失率/% 20231681026610715712410612451471213501242111611 45231671666715715712410612451221613501240141915 65231661587211715710617612451151715501237162412活性炭用量016%,时间60m in. 从表1可知,当温度为20,45,65℃时,柠檬苦素的脱除率分别为6610%,6715%,7211%,温度对柠檬苦素脱除率的影响并不十分显著.可溶形固性物、总酸的损失有一定差异,但对产品品质影响不大;Vc的损失随温度升高而增加.就苦味方面的感官分析,不同温度下处理的果汁其苦味没有明显的差异,苦味都明显变淡.在65℃下处理的产品出现轻微的蒸煮气味,感官品质变差,温度效应和搅拌混入氧可能是其原因.综合以上因素,选择在室温20℃下对柠檬果汁进行吸附脱苦,既能有效地脱除苦味物质,又能较好地保持柠檬汁的清新风味.21212活性炭最适用量的确定脱苦温度20℃,时间60m in时,不同剂量活性炭的脱苦效果如表2.表2 不同用量活性炭对柠檬汁的脱苦效果Tab.2 Effect of d i fferen t am oun t of acti ve carbon on deb itter i za ti on用量柠檬苦素含量/(μg・mL-1) 可溶性固形物含量/% 总酸/(g・100mL-1) 维生素C含量/(mg・100mL-1) /%脱苦前脱苦后脱除率/%脱苦前脱苦后损失率/%脱苦前脱苦后损失率/%脱苦前脱苦后损失率/% 012231614153816715713217612451905145501246157137 014231681386415715712410612451629193501243151314 016231681026610715712410612451471213501242111611 018231671586719715711513612451221613501241101813 110231671176916715710617612451041912501239162111脱苦温度20℃,时间60m in.由表2可以看出,活性炭用量从012%增加到014%时,柠檬苦素的脱除率由3816%上升到6415%,剂量效应关系非常明显;而从014%增加到110%时,柠檬苦素的脱除率由6415%上升到6916%,剂量效应关系已比较微小.在风味方面,以012%的活性炭处理的果汁,其苦味仍然比较重;以014%~110%的活性炭处理所得的果汁,其苦味明显减弱至基本合理(柠檬汁中应保留一定量的苦味物质以体现产品特征)的程度.因此,采用014%的活性炭用量比较合理.21213活性炭适宜处理时间的确定根据上述2组实验结果,在适宜温度(室温)下,以最适剂量(014%)的活性炭来处理柠檬果汁,不同时间的脱苦效果如表3.表3 不同时间下活性炭对柠檬汁的脱苦效果Tab.3 Effect of d i fferen t processi n g ti m e on deb itter i za ti on时间柠檬苦素含量/(μg・mL-1) 可溶性固形物含量/% 总酸/(g・100mL-1) 维生素C含量/(mg・100mL-1) /m in脱苦前脱苦后脱除率/%脱苦前脱苦后损失率/%脱苦前脱苦后损失率/%脱苦前脱苦后损失率/% 15231613194111715713217612451895161501247116116 30231610175417715713217612451748101501245139176 45231681516319715713217612451679113501244181018 60231681386415715712410612451629193501243151314 75231671836618715711513612451581016501242101613脱苦温度20℃,活性炭用量014%.由表3可知,脱苦处理时间从15m in 延长到45m in 时,柠檬苦素的脱除率由4111%增加到6319%,呈快速增加的趋势;时间再延长,脱除率增加幅度已较小.在达到确定的工艺目的时,过程时间越短越好.因此,应选择45m in 为最佳处理时间.213β-环状糊精的使用效果以上述方法脱苦处理过的柠檬汁为原料,调配果汁含量为5%,蔗糖含量为9%的柠檬果汁饮料.同时,在以上配方中分别添加0102%,0104%,0106%,0108%,011%的β-环状糊精,灌装杀菌、冷却.7d 后品尝鉴别其风味,结果如表4所示.表4 β-环状糊精的用量对风味的影响Tab 4 Effect of d i fferen t am oun t of β-CD on fl avour用量/%感官评介0102苦味适宜,其它风味基本不变0104苦味减弱,其它风味基本不变0106苦味明显降低,味道变淡0108无苦味,味道平淡011无苦味,味淡,无原料特征从表4可以看出,β-环状糊精对柠檬汁苦味的掩蔽作用是比较明显的,这也说明β-环状糊精对柠檬苦素及其类似物具有包埋作用.实际上,苦味是去除了,但苦味物质和β-环状糊精仍然存在于产品体系中.因此,我们不能简单地说β-环状糊精能够去除苦味物质.对柠檬汁而言,由于其酸度太高(平均约6%的柠檬酸),在食品饮料中的用量一般不超过5%,否则酸味太重.若以活性炭脱苦处理后的柠檬汁来调配柠檬饮料,苦味物质的含量已很低,添加0102%~0104%的β-环状糊精可有效抑制产品在储藏期的风味劣变.而对比实验表明,在未经处理的柠檬汁中使用011%~012%的β-环状糊精也不能起到良好的作用,这说明脱苦操作对产品质量的保持起到了根本的作用.3结论研究结果表明,柠檬汁加工过程中必须进行脱苦操作,且活性炭对柠檬汁中的类柠檬苦素具有较好的脱除效果.在常温20℃下,使用014%的活性炭对柠檬汁处理45m in,对柠檬苦素的脱除率为6319%,Vc 的损失率为1018%,同时产品的颜色和风味保持良好.脱苦处理后的柠檬汁在使用时,添加0102%~0104%的β-环状糊精可有效抑制产品在储藏期的风味劣变.参考文献:[1]贾敬贤,贾定贤,任庆棉,等.中国植物及其野生近缘植物[M ].北京:中国农业出版社,2006:486-487.[2]刘邻渭.食品化学[M ].北京:中国农业出版社,2002:146.[3]万萍,张方晓.柑橘汁脱苦条件的研究[J ].食品与机械,2001(2):14-15.[4]江钊,何晋浙,郑欲国,等.柑橘果醋加工中柠檬苦素的微生物酶降解研究[J ].中国酿造,2002(2):21-23.[5]田庆国,丁霄森.测定橘核中柠檬苦素类似物的分光光度法[J ].分析测试学报,1999(9):45-46.[6]徐仲伟,刘心恕.三种脱苦方法脱除柑橘汁苦味的研究[J ].食品与发酵工业,1992(4):6-15.301第5期 赵天瑞,樊 建,覃宇悦:柠檬汁中苦味物质的脱除试验。
柚核中柠檬苦素纯化工艺的研究

柚核中柠檬苦素纯化工艺的研究
柚核中的柠檬苦素是一种重要的植物类酚,它可以被用来制作许多药物,可以提高人体健康,提高机体免疫力。
因此,柚核中柠檬苦素的纯化工艺具有重要的实际意义。
柚核中柠檬苦素的纯化工艺主要有提取法和分离法两种。
提取法的柠檬苦素主要是通过硫酸/甘油提取技术从柚核提取出来的,这种
方法提取后的柠檬苦素可以有效提高柠檬苦素的纯度。
另一种方法是通过分离法实现柠檬苦素的纯化,常用的分离法有浓缩分馏法、填料层析法、沸石层析法、气相色谱法等。
柚核中柠檬苦素的实用技术有助于提高柠檬苦素的纯度。
具体来说,硫酸/甘油提取技术可以有效提取柠檬苦素,并且提高柠檬苦素
的纯度;分离法可以有效分离柠檬苦素,以提高柠檬苦素的纯度。
此外,还可以利用过滤、冻结干燥以及活性炭等其他方法,进一步提高柠檬苦素的纯度。
柚核中柠檬苦素的纯化工艺的可行性论证是非常重要的。
在柠檬苦素的纯化工艺上,可以采用原位反应分析,以及懒惰分子船方法,来检测柠檬苦素的纯度,以及确定纯化工艺的可行性。
对于半透膜反应过程,采用原位检测,确定纯化工艺的可行性。
此外,柚核中柠檬苦素的纯化工艺还可以采用免疫结合法,将柠檬苦素定向结合到特定的免疫体,实现高纯度的柠檬苦素提取。
总之,柚核中柠檬苦素的纯化工艺可以通过提取法和分离法实现,可以有效提高柠檬苦素的纯度,并可行性论证。
具体的技术可以通过
原位反应分析、懒惰分子船方法以及免疫结合法等来实现,帮助提高柠檬苦素的纯度,有助于提高药物的有效性。
超声波提取柠檬苦素

操作步骤
⑤将滤液旋转挥发至总体积的三分之一。 (即样液) ⑥减压蒸馏滤液至浸膏状。 ⑦二氮甲烷溶解,加2倍体积异丙醇,4℃低 温结晶石油醚洗涤,得无色片状晶体。 ⑧计算得率。
工艺流程图
石油醚超声脱脂
80%乙醇提取
脱脂粉末 乙醇提取物
干燥的 柑橘粉
减压蒸馏 无色片 状晶体 二氮甲烷溶解,加2倍体积异丙醇, 4℃低温结晶石油醚洗涤, 浸膏
计算含量
式中:A 1 为标液中柠檬苦素的峰面积;A 2 为样品溶液中柠 檬苦素峰面积;C 为标液中柠檬苦素的质量浓度( m g /ml ); 样品质量。
计算得率
提取率=产品目标物质含量*产品质量/ (原料目标物质含量*原料质量)
得率=产品质量/原料质量
超声波提取技术
• 超声波在溶剂和样品之间产生声波空化作用,使 固体样品分散,增大样品与萃取溶剂之间的接触面 积,提高目标物从固相转移到液相的传质速率。
.
超声波提取的原理
•超声波在物质介质中的相互作用效应可分为热效应、空化效 应和机械传质效应。超声波的热效应、机械传质作用及空化作 用成为超声技术在提取应用中的三大理论依据。
样品前处理
鲜果皮、桔核100kg,于40一45℃鼓 风烘干,烘干后于粉碎机中粉碎至80目, 用石油醚超声脱脂后密封包装于一4℃冰 箱中,备用。
.
标准曲线的制作
1、柠檬苦素标准溶液的配制 精确称取柠檬苦素标准品5.0m g ,用甲醇溶 解定容至 25 ml容量瓶中配成0.2mg/ml 的标准 液,用0.45 μm的微孔滤膜过滤,备用。 2、标准曲线的绘制 取柠檬苦素标准溶液分别进样5 、1 0、1 5、 2 0、2 5、3 0、3 5μl 于液相色谱仪中,检测峰 面积。以浓度( C ) 为横坐标,峰面积( A )为纵 坐标,绘制标准曲线。
HPLC 法测定不同产地和品种柠檬 果皮中柠檬苦素和诺米林含量

㊀Guihaia㊀May2020ꎬ40(5):744-750http://www.guihaia-journal.comDOI:10.11931/guihaia.gxzw201901020涂勋良ꎬ张利ꎬ秦帆ꎬ等.HPLC法测定不同产地和品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量[J].广西植物ꎬ2020ꎬ40(5):744-750.TUXLꎬZHANGLꎬQINFꎬetal.DeterminationoflimominandnomilinofdifferentvarietiesoflemonpeelfromdifferentareasbyHPLC[J].Guihaiaꎬ2020ꎬ40(5):744-750.HPLC法测定不同产地和品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量涂勋良1ꎬ张㊀利3ꎬ秦㊀帆1ꎬ万㊀斌1ꎬ吕秀兰2∗(1.四川省农业科学院园艺研究所ꎬ成都610066ꎻ2.四川农业大学园艺学院ꎬ成都611130ꎻ3.四川农业大学理学院ꎬ四川雅安625014)摘㊀要:该研究建立了同时测定檬苦素和诺米林含量的高效液相色谱法ꎬ并采用该方法对8种不同柠檬样品中柠檬苦素和诺米林含量进行了测定ꎮ色谱条件如下:安捷伦EclipseXDB ̄C18(250mmˑ4.6mmꎬ5μm)色谱柱ꎬ流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)ꎬ梯度洗脱ꎬ流速为1.0mL min ̄1ꎬ柱温为30ħꎬ波长为210nmꎮ结果表明:3个产地尤力克果皮中柠檬苦素含量依次为云南瑞丽(EUR_D)㊁四川安岳(EUR_C)和广东河源(EUR_Y)ꎬ诺米林含量依次为EUR_D㊁EUR_C和EUR_Yꎻ不同品种柠檬果皮中柠檬苦素含量依次为北京柠檬(M_NM)㊁粗柠檬(R_NM)㊁无核柠檬(S_NM)㊁热那亚(RNY)㊁里斯本(LSB)ꎬ诺米林含量依次为S_NM㊁R_NM㊁LSB㊁RNY和M_NMꎮ综上结果表明ꎬ不同产地和品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量均存在不同程度差异ꎬ该HPLC法可为不同产地和不同品种柠檬果实质量鉴别㊁资源评价及深度开发提供理论依据ꎮ关键词:柠檬ꎬ柠檬苦素ꎬ诺米林ꎬ高效液相色谱法(HPLC)中图分类号:Q946㊀㊀文献标识码:A文章编号:1000 ̄3142(2020)05 ̄0744 ̄07开放科学(资源服务)标识码(OSID):DeterminationoflimominandnomilinofdifferentvarietiesoflemonpeelfromdifferentareasbyHPLCTUXunliang1ꎬZHANGLi3ꎬQINFan1ꎬWANBin1ꎬLÜXiulan2∗(1.HorticultureResearchInstituteꎬSichuanAcademyofAgriculturalSciencesꎬChengdu610066ꎬChinaꎻ2.CollegeofHorticultureꎬSichuanAgriculturalUniversityꎬChengdu611130ꎬChinaꎻ3.CollegeofSciencesꎬSichuanAgriculturalUniversityꎬYa an625014ꎬSichuanꎬChina)Abstract:Thisstudyestablishedanhigh ̄performanceliquidchromatography(HPLC)methodforsimultaneousdetermi ̄nationoflimoninandnomilininCitruslimonꎬandthecontentsoflimoninandnomilinineightdifferentlemonsamples收稿日期:2019-03-04基金项目:国家现代农业产业技术体系四川创新团队专项项目ꎻ四川省科技支撑计划项目(2013FZ0036)[SupportedbyGrantsfromSpecialFundoftheNationalModernAgriculturalIndustryTechnologySystemofSichuanInnovationTeamꎻKeyTechnologyResearchandDevelopmentProgramoftheScience&TechnologyDepartmentofSichuanProvince(2013FZ0036)]ꎮ作者简介:涂勋良(1987-)ꎬ男ꎬ重庆綦江人ꎬ博士ꎬ助理研究员ꎬ研究方向为观赏植物繁育与栽培ꎬ(E ̄mail)txl0103@163.comꎮ∗通信作者:吕秀兰ꎬ博士ꎬ教授ꎬ研究方向为果树学ꎬ(E ̄mail)xllvjj@163.comꎮwasdeterminedbythismethod.ThechromatographicconditionwasperformedonanAgilentEclipseXDB ̄C18(250mmˑ4.6mmꎬ5μm)column.Themobilephaseconsistedof0.1%aqueousphosphoricacid(A)andacetonitrile(B)wasinvokedasgradientelutionwiththeflowrateat1.0mL min ̄1.Thecolumntemperaturewassetat30ħandthedetectionwavelengthwassetat210nm.Theresultswereasfollows:ThecontentoflimonininthelemonpeelofthreeproducingareaswasRuiliꎬYunnan(EUR_D)ꎬAnyueꎬSichuan(EUR_C)andHeyuanꎬGuangdong(EUR_Y)respectivelyꎬwhilethecontentofnomilinwasEUR_DꎬEUR_CandEUR_YꎻThecontentoflimoninindifferentvarie ̄tiesoflemonpeelwasMeyerlemon(M_NM)ꎬRoughlemon(R_NM)ꎬSeedlesslemon(S_NM)ꎬGenoa(RNY)andLisbon(LSB)ꎬwhilethecontentofnomilinwereS_NMꎬR_NMꎬLSBꎬRNYandM_NM.Theresultsdisplayedthatthecontentoflimoninandnomilininlemonpeelfromdifferentareasandvarietieswasdifferent.TheHPLCmethodcanpro ̄videatheoreticalbasisforthequalityidentificationꎬresourceevaluationandin ̄depthdevelopmentoflemonfruitsfromdifferentareasandvarieties.Keywords:Citruslimonꎬlimominꎬnomilinꎬhigh ̄performanceliquidchromatography(HPLC)㊀㊀柠檬苦素类似物(limonoids)是存在于芸香科(Rutaceae)和楝科(Meliaceae)植物中的一类具有呋喃环并且高度氧化的三萜类次生代谢产物(Maieretal.ꎬ1977)ꎮ在柑橘属中主要有苷元和糖苷两大类(潘利华等ꎬ2007)ꎬ它们是引起柑橘属果汁泛苦的主要原因之一ꎮ迄今已从柑橘属中分离出38种类似物和21种配糖体(Mannersꎬ2007)ꎬ常见的有柠檬苦素(limomin)㊁诺米林(no ̄milin)㊁奥巴叩酮(obacunone)㊁诺米林酸(nomilinicacid)和脱乙酰诺米林(deacetylnomilin)等ꎮ诺米林在植物茎韧皮部合成并转移至其他组织(Moriguchietal.ꎬ2003)ꎬ在酶的作用下ꎬ通过不同生物合成途径合成柠檬苦素㊁醋酸柠檬苦酯㊁宜昌根辛和卡拉敏等类似物(蔡护华和桥永文男ꎬ1996)ꎮ柠檬苦素类似物具有抗癌(Tanakaetal.ꎬ2000ꎻMilleretal.ꎬ2004)㊁抗氧化(Sunetal.ꎬ2005ꎻZouetal.ꎬ2016)㊁抑菌(罗水忠等ꎬ2006ꎻ李彪等ꎬ2012b)㊁抗炎镇痛(温靖等ꎬ2007)㊁除虫杀虫(李彪等ꎬ2012a)㊁抑制HIV病毒复制(Battinellietal.ꎬ2003ꎻYuetal.ꎬ2015)㊁降低胆固醇等多种生物活性ꎮ目前ꎬ柠檬苦素类似物主要测定方法有分光光度法(田庆国和丁霄霖ꎬ1999)㊁放射免疫测定法(Mcintoshꎬ2000)㊁薄层色谱法(Ohtaetal.ꎬ1993)㊁毛细管胶束电色谱方法(Raynoretal.ꎬ2015)㊁快速色谱法(flashchromatography)(Ramanetal.ꎬ2005)㊁高效液相色谱法(Bilaletal.ꎬ2013ꎻBreksaetal.ꎬ2015ꎻMannersetal.ꎬ2015)㊁LC/MS(Mannersetal.ꎬ2004ꎻWooetal.ꎬ2006)㊁LC ̄ToF/MS(Yuetal.ꎬ1993)ꎮBilaletal.(2013)采用HPLC法测得血橙中柠檬苦素为479.77μg mL ̄1ꎬ粗柠檬中诺米林为54.23μg mL ̄1ꎬ甜橙 succari 中诺米林仅为0.37μg mL ̄1ꎮ孟鹏和郑宝东(2012)采用UPLC法测得柠檬苦素含量依次为琯溪蜜柚>脐橙>尤溪金柑>柑橘ꎬ诺米林含量依次为脐橙>琯溪蜜柚>柑橘>尤溪金柑ꎮ彭腾等(2012)采用RP ̄HPLC法测得柠檬苦素含量依次为沙糖桔(金堂)>蜜橘(广元)>蜜橘(龙泉)>椪柑(新津)>椪柑(金堂)>广柑(青白江)>蜜橘(蒲江)ꎮ为了提高柠檬副产物的高效利用率ꎬ促进柠檬产业蓬勃发展ꎬ本研究选取了3个不同产地和5个不同品种柠檬为供试材料ꎬ采用HPLC法对柠檬苦素和诺米林含量进行定性和定量分析ꎬ发现不同柠檬果品间的含量差异ꎬ为柠檬品种鉴定㊁资源开发利用提供理论依据ꎬ从而提高柠檬果品的综合利用价值ꎮ1㊀材料与方法1.1材料、仪器和试剂样品为相同成熟度的成熟柠檬果实ꎬ柠檬样品信息详见表1ꎮ将果肉与果皮分离ꎬ果皮样品经冷冻干燥ң粉碎后备用ꎮBT124S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)ꎻFW ̄80高速万能粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)ꎻLC ̄20AB型高效液相色谱仪(日本5475期涂勋良等:HPLC法测定不同产地和品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量表1㊀柠檬样品信息表Table1㊀Informationoflemonsamples产地Producingarea品种Variety编码Code采收期Harvesttime四川安岳AnyueꎬSichuan尤力克EurekaEUR_C2015-10-22云南瑞丽RuiliꎬYunnan尤力克EurekaEUR_D2015-08-31广东河源HeyuanꎬGuangdong尤力克EurekaEUR_Y2015-09-18广东连南LiannanꎬGuangdong无核柠檬SeedlesslemonS_NM2015-09-21四川安岳AnyueꎬSichuan热那亚GenoaRNY2015-10-22重庆北碚BeibeiꎬChongqing里斯本LisbonLSB2015-10-30重庆北碚BeibeiꎬChongqing北京柠檬MeyerlemonM_NM2015-10-30重庆北碚BeibeiꎬChongqing粗柠檬RoughlemonR_NM2015-10-30图1㊀柠檬苦素和诺米林的化学结构式Fig.1㊀ChemicalstructuresoflimoninandnomilinShimadzu公司)ꎻLGJ ̄12冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司)ꎻSB ̄600DTD超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)ꎻUPH ̄Ⅱ ̄20T超纯水机(四川沃特尔水处理设备有限公司)ꎻ索氏提取器ꎮ对照品柠檬苦素(批号MUST ̄13021606)㊁诺米林(批号MUST ̄12072101)购自成都曼思特生物科技有限公司ꎬ化学结构式如图1所示ꎬ各标准品纯度均满足定量检测需求ꎻ乙腈(色谱纯ꎬ美国Fisher公司)ꎻ磷酸㊁丙酮和石油醚(60~90ħ)(均为分析纯)购自成都科龙化工试剂厂ꎻ自制超纯水ꎮ1.2方法1.2.1色谱条件㊀色谱柱:AgilentEclipseXDB ̄C18(250mmˑ4.6mmꎬ5μm)ꎻ流动相:0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)ꎻ梯度洗脱:10%~50%B(0~10min)ꎬ50%~60%B(10~20min)ꎬ60%~90%B(20~25min)ꎬ90%~10%B(25~35minꎬ10%B(35~40min)ꎻ流速:1.0mL min ̄1ꎻ检测波长:210nmꎻ柱温:30ħꎻ进样体积:10μLꎮ1.2.2对照品溶液制备㊀精确称量对照品柠檬苦素2.83mg㊁诺米林2.54mgꎬ分别用80%丙酮溶解到10mL容量瓶中ꎬ超声使其充分溶解ꎬ定容ꎬ配成283mg L ̄1柠檬苦素和254mg L ̄1对照品储备液ꎮ吸取适量对照品储备液采用梯度稀释法配制了系列质量浓度的混合标准溶液ꎮ1.2.3供试品溶液制备㊀用定量滤纸包好冷冻干燥后的果皮样品ꎬ用石油醚(60~90ħ)在索氏提取器内彻底脱脂24hꎬ将脱脂样品置于干燥器中ꎬ待石油醚(60~90ħ)完全挥发ꎬ样品干燥后取出备用ꎮ称取0.5g上述粉末ꎬ置具塞锥形瓶中ꎬ加入80%丙酮溶液10mLꎬ称重ꎬ超声(80Wꎬ40kHzꎬ50ħ)1.5hꎬ冷却后用80%丙酮补重ꎮ0.22μm微孔滤膜过滤ꎬ收集滤液备用ꎮ2㊀结果与分析2.1HPLC色谱结果混合对照品与EUR_C供试品溶液的HPLC色谱图详见图2ꎮ在1.2.1条件下ꎬ柠檬苦素和诺米林分离度均大于1.8ꎬ分离效果极佳ꎬ目标峰对称性好ꎮ2.2标准曲线的建立在1.2.1条件下ꎬ平行测定各质量浓度按1.2.2制备的混合对照品溶液3次ꎬ取其峰面积平均值ꎬ以对照品质量浓度为X坐标ꎬ平均峰面积为Y坐标ꎬ绘制标准曲线ꎮ结果显示柠檬苦素和诺米林在一定质量浓度范围内与相应峰面积之间线性关系良好(表2)ꎮ2.3方法学考察2.3.1精密度试验㊀在1.2.1条件下ꎬ重复测定6次按1.2.2制备的混合对照品储备液ꎬ结果显示柠檬苦素和诺米林平均峰面积的RSD分别为0.88%㊁647广㊀西㊀植㊀物40卷1.柠檬苦素ꎻ2.诺米林ꎮ1.Limoninꎻ2.Nomilin.图2㊀对照品混标(A)与EUR_C(B)的HPLC色谱图Fig.2㊀HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A)andlimonoidsextractedfromEUR_C(B)表2㊀柠檬苦素和诺米林的线性回归关系、检出限和定量限Table2㊀LinearregressionrelationshipꎬLODandLOQoflimoninandnomilin柠檬苦素类似物Limonoids回归方程Regressionequation相关系数Correlationcoefficient(R2)线性范围Linearrange(μg mL ̄1)检出限LOD(μg mL ̄1)定量限LOQ(μg mL ̄1)柠檬苦素LimoninY=42630.98X-4839.5051.00000.03~5.660.070.24诺米林NomilinY=57153.92X-4903.0051.00000.03~5.080.090.290.95%ꎬ说明仪器精密度良好ꎮ2.3.2稳定性试验㊀在1.2.1条件下ꎬ取按1.2.2制备的EUR_C供试溶液ꎬ分别于0㊁2㊁4㊁6㊁8㊁12和24h后进行HPLC分析ꎬ结果显示柠檬苦素和诺米林平均峰面积的RSD分别为0.76%㊁1.02%ꎬ说明供试品溶液在24h内稳定ꎮ2.3.3重现性试验㊀在1.2.1条件下ꎬ重复测定6次按1.2.2制备的EUR_C供试溶液ꎬ结果显示柠檬苦素和诺米林平均峰面积的RSD分别为0.63%㊁0.78%ꎬ说明该方法重现性较好ꎮ2.3.4加标回收率试验㊀在1.2.1条件下ꎬ在EUR_C供试溶液中加入定量的对照品储备液ꎬ重复测定6次ꎬ由表3可以看出ꎬ柠檬苦素和诺米林的加标回收率分别为100.36%㊁99.79%ꎻRSD分别为1.07%㊁1.12%ꎬ说明该方法准确度较高ꎮ2.4不同产地柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量测定结果在1.2.1条件下ꎬ参照1.2.2制备供试品溶液ꎬ对不同产地尤力克柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林进行定量和差异性分析ꎬ结果见表4ꎮ由表4可知ꎬ不同产地尤力克果皮中柠檬苦素和诺米林含量存在不同程度的差异ꎮ云南瑞丽和四川安岳两地的尤力克柠檬果皮中柠檬苦素的含量没有差异ꎬ含量分别为0.421和0.418mg g ̄1ꎬ广东河源的尤力克柠檬果皮中柠檬苦素的含量为0.337mg g ̄1ꎬ与云南瑞丽和四川安岳两地的含量呈显著差异ꎻ不同产地对尤力克柠檬果皮中诺米林含量的影响较大ꎬ其中云南瑞丽的含量最高ꎬ为0.269mg g ̄1ꎬ其余两地依次是四川安岳(0.219mg g ̄1)和广东河源(0.070mg g ̄1)ꎬ云南瑞丽与四川安岳两地的含量呈显著差异ꎬ且均与广东河源产地的含量呈极显著差异ꎮ2.5不同品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量测定结果在1.2.1条件下ꎬ参照1.2.2制备样品溶液ꎬ对不同品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林进行定量7475期涂勋良等:HPLC法测定不同产地和品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量表3㊀柠檬苦素和诺米林加标回收率试验结果Table3㊀Recoveryratestestsforlimoninandnomilin柠檬苦素类似物Limonoids样品含量Contentofsample(mg g ̄1)添加量Addedcontent(mg g ̄1)测得量Foundedcontent(mg g ̄1)回收率Recoveryrate(%)RSD(%)柠檬苦素Limonin0.2780.2830.563100.361.07诺米林Nomilin0.2190.2540.47299.791.12表4㊀不同产地尤力克柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量Table4㊀Contentsoflimoninandnomilinoflemonpeelfromdifferentareas产地Area编码Code含量Content(mg g ̄1)柠檬苦素Limonin诺米林Nomilin四川安岳AnyueꎬSichuanEUR_C0.418ʃ0.04Aa0.219ʃ0.02Ab云南瑞丽RuiliꎬYunnanEUR_D0.421ʃ0.04Aa0.269ʃ0.03Aa广东河源HeyuanꎬGuangdongEUR_Y0.337ʃ0.03Ab0.070ʃ0.01Bc㊀注:同一列数值后大写字母表示差异极显著(P<0.01)ꎻ同一列数值后小写字母表示差异显著(P<0.05)ꎮ下同ꎮ㊀Note:Capitallettersinthesamecolumnmeanextremelysignificantdifferences(P<0.01)ꎻLowercaselettersinthesamecolumnmeansig ̄nificantdifferences(P<0.05).Thesamebelow.和差异性分析ꎬ结果见表5ꎮ由表5可知ꎬ不同品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量差异显著ꎮ北京柠檬中柠檬苦素的含量与其他4个品种存在极显著差异ꎬ达到0.589mg g ̄1ꎬ其余依次为粗柠檬(0.464mg g ̄1)㊁无核柠檬(0.393mg g ̄1)㊁热那亚(0.334mg g ̄1)㊁里斯本(0.326mg g ̄1)ꎬ且粗柠檬与无核柠檬㊁热那亚㊁里斯本也存在极显著差异ꎬ而后三者之间无差异ꎮ里斯本㊁热那亚和北京柠檬的诺米林含量存在显著差异ꎬ含量分别为0.203㊁0.130㊁0.050mg g ̄1ꎬ而无核柠檬和粗柠檬与前三者含量之间的差异极显著ꎬ且两者之间差异极显著ꎬ含量分别为0.688㊁0.386mg g ̄1ꎮ3㊀讨论与结论高效液相色谱法(HPLC)是测定柠檬苦素类似物最常用的方法之一ꎮMannersetal.(2015)建立了同时测定不同柑橘种子中17种柠檬苦素类似物含量的高效液相色谱法ꎻ刘亮等(2007)建立了同时测定柑橘中柠檬苦素和诺米林含量的高效液相色谱法ꎮ本研究建立了同时测定不同柠檬果品中柠檬苦素和诺米林含量的高效液相色谱法ꎬ采用常规的乙腈-磷酸缓冲体系可在20min内完成柠檬苦素和诺米林的同时测定ꎮ该方法操作简单ꎬ具有较好的精密度㊁重现性㊁稳定性及高回收率等特点ꎬ可作为测定柠檬果品中柠檬苦素和诺米林含量的常规分析方法ꎬ为柠檬果实质量评价提供理论依据和手段ꎮ柠檬苦素类似物研究主要集中在不同类型柑橘比较ꎬ少有不同产地与不同品种间的比较ꎮ本研究对供试样品中柠檬苦素和诺米林的检测结果表明成熟柠檬果品中柠檬苦素含量明显高于诺米林含量ꎬ无核柠檬(柠檬苦素:0.393mg g ̄1ꎬ诺米林:0.688mg g ̄1)除外ꎮ这是因为诺米林是柠檬苦素类似物生物合成途径的原始前体ꎬ柠檬苦素生物合成途径是柑橘类水果中柠檬苦素类似物的主要代谢途径(蔡护华和桥永文男ꎬ1996)ꎬ诺米林含量的降低意味着柠檬苦素含量的升高ꎬ形成 此消彼长 的趋势ꎬ该研究结果与此相同ꎮ847广㊀西㊀植㊀物40卷表5 不同品种柠檬果皮中柠檬苦素和诺米林含量Table5㊀Contentsoflimoninandnomilinoflemonpeelsindifferentvarieties品种Variety编码Code含量Content(mg g ̄1)柠檬苦素Limonin诺米林Nomilin里斯本LisbonLSB0.326ʃ0.03Cc0.203ʃ0.02Cc北京柠檬MeyerlemonM_NM0.589ʃ0.06Aa0.050ʃ0.01De粗柠檬RoughlemonR_NM0.464ʃ0.04Bb0.386ʃ0.04Bb无核柠檬SeedlesslemonS_NM0.393ʃ0.04BCbc0.688ʃ0.07Aa热那亚GenoaRNY0.334ʃ0.03Cc0.130ʃ0.01CDd㊀㊀从本研究结果可以看出ꎬ3个产地的尤力克果品中柠檬苦素和诺米林含量存在显著差异ꎬ这与3个产地的气候条件㊁水分和土壤等条件息息相关ꎮ柠檬树体生长和果实发育的适宜年均气温为17~19ħꎬ四川安岳的年均气温为18.5ħꎬ年均降水量为924.9mmꎬ正是柠檬生长的最佳适宜条件ꎬ安岳年产柠檬鲜果70万tꎬ占全国总产量的80%ꎬ排全世界第8位ꎬ综合上述因素ꎬ安岳被称为 中国柠檬之乡 ꎮ从5个不同品种柠檬的比较实验结果可得出柠檬苦素含量依次为北京柠檬>粗柠檬>无核柠檬>热那亚>里斯本ꎬ诺米林含量依次为无核柠檬>粗柠檬>里斯本>热那亚>北京柠檬ꎮ8个柠檬果品中柠檬苦素和诺米林的含量差异显著ꎬ其累积规律与不同产地的生态气候条件㊁不同品种㊁不同部位㊁不同生长发育阶段㊁不同采收期及采后储运等诸多因素密不可分ꎮ随着柠檬多元化的功能性产品开发ꎬ有待进一步对柠檬种植资源进行综合的品质评价ꎬ建立完善的质量评价体系ꎮ依据不同品种活性成分含量的差异ꎬ培育并栽培推广专用型的柠檬品种ꎬ具有广泛的市场前景ꎮ参考文献:BATTINELLILꎬMENGONIFꎬLICHTNERMꎬetal.ꎬ2003.EffectoflimoninandnomilinonHIV ̄1replicationoninfectedhumanmononuclearcells[J].PlantMedꎬ69(10):910-913.BILALHꎬAKRAMWꎬHASSANSAꎬetal.ꎬ2013.Determina ̄tionoflimoninandnomilincontentsindifferentCitrusculti 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比色法测印楝种仁提取物中柠檬苦素类物质的含量_李永红

第25卷第2期西 南 农 业 大 学 学 报Vol.25,No.2 2003年4月Journal of Sou th west Agricultu ral University Apr.2003文章编号:1000-2642(2003)02-0150-03比色法测印楝种仁提取物中柠檬苦素类物质的含量李永红,张 毅,肖卫民,杨光伟*(西南农业大学生物中心,重庆 400716)摘要:印楝素(Azadirachti n,C35H44O16)以及相似的柠檬苦素类物质(AZRL,azadirachtin related limonoids)与加入了硫酸的香兰素甲醇溶液有显色反应。
以此为基础,通过选择比色波长及优化香兰素浓度、硫酸加入量、反应时间几个因素,得到一种用比色法测定印楝种仁提取物中AZRL含量的方法。
并测定了3种印楝种仁提取物中的AZRL含量。
关 键 词:印楝素;柠檬苦素类;比色法中图分类号:Q503 文献标识码:ADETERMINATION OF LI MONOIDS IN NEEM SEED KERNEL WITH COLORIMETRYLI Yong-hong,ZHA NG Yi,XIAO Wei-m in,YANG Guang-wei*(Biotechnolical Technology Research Center,Southwest Agricultural University,Chongqing400715,China)Abstract:A colorimetric procedure for determining AZRL(azadirachin related limonoids)contents in the extracts from neem seeds was developed by selection for a desirable wavelength and op timizati on of the reaction conditions(vanillin concentration,volume of H2SO4added,and reaction time)based on the fact that a colorization reaction occurs between azadirachin(C35H44O16)and AZRL,on the one hand,and acidified vanillin in methanol,on the other.Applied to determine AZRL content in3neem kernel extracts,thi s procedure gave satisfactory resul ts.Key words:Azadirachtin;limonoids;colori metry印楝(Azadirachta indica A.Juss)是楝属热带植物,原产印度、巴基斯坦等国。
柠檬苦素的色谱研究进展
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柠檬苦素的色谱检测方法研究进展摘要:赣南脐橙主要以鲜食为主,脐橙加工业落后,其主要原因为脐橙等柑橘类汁具严重的后苦作用,影响产品风味。
其中柠檬苦素为加工中主要苦味来源。
本文就柠檬苦素的色谱检测方法作简要的概述,旨在为脐橙的深加工中控制产品的质量提供一些参考。
关键词:脐橙;柠檬苦素;检测;色谱前言赣南是我国著名的脐橙生产基地,素有“中国脐橙之乡”之称。
赣南脐橙年产量已经突破150万吨,但目前国内对脐橙的开发利用率较低,95%以上产品仍依赖鲜销;且赣州以纽荷尔脐橙为主栽品种,占种植品种的90%以上,上市集中,常常出现“丰产不丰收”,脐橙滞销,果农“卖果难”等问题。
解决赣南脐橙滞销问题,最可行的办法就是大力发展脐橙深加工,而脐橙原料在深加工过程中变苦,是困扰脐橙果酒生产的难题。
脐橙鲜食或其鲜榨果汁并无苦味,但压榨的橙汁在室温中存放几个小时或在冰箱中冷藏过夜,会变苦。
这种脐橙果汁中的延迟苦味源于无苦味的前体物生成了柠檬苦素。
据报道,脐橙等柑橘类汁出现延迟苦味的原因主要是在酸性、加热、冰冻或机械损伤等逆境环境条件下,果实中所存在的非苦味的柠檬苦素A环内酯转变成了具有强烈苦味的柠檬苦素[1]。
脐橙苦味主要来自柠檬苦素类(limonin)的变化。
柠檬苦素含量的高低直接影响脐橙及其产品的品质,测定柠檬苦素的含量可用于控制脐橙及其相关产品的质量。
随着仪器分析技术的广泛应用和检测技术的发展,研究者建立了多种检测柠檬苦素类似物的方法,主要有分光光度法、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)等。
1.薄层层析法薄层色谱法的优点是简便快捷,缺点是由于是目测,结果误差较大,所以分析重现性一直束缚着其的发展。
Dreyer 在最初的柠檬苦素检测方面做出了重要贡献,1965 年,Dreyer 首次使用薄层层析法( TLC) 对柠檬苦素类似物甙元进行了定量分析,用核磁共振技术(NMR)对柠檬苦素结构的解析[2]。
随后Hasegawa 和Bennett 利用这两种方法分离、鉴定30 种柠檬苦素苷配基和20 种柠檬苦素配糖体[3]。
QuEChERS-HPLC测定柚类果实中柠檬苦素类化合物

QuEChERS-HPLC测定柚类果实中柠檬苦素类化合物
钟世欢;陈青俊;王京;叶佳明;杨琳;王岳;陈云义;孙崇德
【期刊名称】《食品与发酵工业》
【年(卷),期】2022(48)4
【摘要】建立了柠檬苦素类化合物的QuEChERS-HPLC检测方法,同时测定了不同品种柚类果实中柠檬苦素、诺米林、黄柏酮3种柠檬苦素类化合物含量。
样品经乙腈均质超声提取,离心后取上清液,用QuEChERS净化管净化,通过CAPCELL PAK C_(18)MG色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)梯度洗脱分离,检测波长为210 nm,二极管阵列检测器。
结果表明,方法在0.10~200μg/mL线性良好,相关系数大于0.999,平均回收率为99.0%~100.3%,相对标准偏差为1.0%~2.1%。
柚类果实不同品种以及不同果实组织部位中3种柠檬苦素类化合物含量差异显著。
该研究可为柠檬苦素类化合物在食品和医药等领域的利用研究提供参考。
【总页数】5页(P261-265)
【作者】钟世欢;陈青俊;王京;叶佳明;杨琳;王岳;陈云义;孙崇德
【作者单位】赞宇科技集团股份有限公司;浙江公正检验中心有限公司;浙江大学果实品质生物学实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R28
【相关文献】
1.渗滤法从柚籽中提取柠檬苦素类化合物
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3.柑桔果实中柠檬苦素类化合物的研究现状与展望
4.柚籽中类柠檬苦素的初提工艺研究
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柠檬苦素(Limonin),又称为黄柏内酯、吴茱萸内酯,和其他类似物化合物是柑橘类水果呈现苦味的主要原因,存在于柑橘、葡萄柚、柠檬、橘子中。
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