B族链球菌检测的标准操作程序
人B族溶血性链球菌GBS酶联免疫分析

人B族溶血性链球菌(GBS)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T1.0 ng/L -40 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中B族溶血性链球菌(GBS)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人B族溶血性链球菌(GBS)水平。
用纯化的人B族溶血性链球菌(GBS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入B族溶血性链球菌(GBS),再与HRP标记的B族溶血性链球菌(GBS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的B族溶血性链球菌(GBS)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人B族溶血性链球菌(GBS)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
B族链球菌快速鉴定试剂层析法使用说明书

【注意事项】
1. 本产品仅供体外诊断一次性使用,请在有效期 内使用。
2. 本产品的贮存温度为 6~28℃,请勿冻存。 3. 本试剂中的 1 号抽提液中含有少量亚硝酸钠、 2 号抽提液中含有少量乙酸,可能对皮肤有一定腐蚀 性,请避免与人体直接接触,并做好防护。 4. 为了获得最佳的检验结果,最好采用顶端为人 造纤维或者涤纶材质的塑料柄擦拭棒,因为棉签可能 有脂肪、漂白剂等的残留,对样本造成影响;同时注 意正确的样本采集方式。 5. 不同批号、不同品种的试剂组分不得混用。 6. 试剂卡开封后 2 小时可能失效,造成误诊,建 议在 1 小时内使用。 7. 所有标本、废液、拭子、抽提管等均按传染性 污染物处理。
2. 将拭子放入已加入抽提液的抽提管中,搅动拭
子数秒钟,在管壁上反复挤压,室温静置 5 分钟。 3. 摇动拭子数秒钟,在管壁上反复挤压,旋转。 4. 挤出液体后取出拭子,管内的抽提物即为检测
样本。 5. 从铝箔袋内取出鉴定卡,垂直滴入 2-3 滴样本
于样品孔中,10~15 分钟内判定结果;2h 后检测结果 无效。
B 族链球菌快速鉴定试剂(层析法) 使用说明书
【产品名称】 通用名称:B 族链球菌快速鉴定试剂(层析法) 英文名称:Group B Streptococcus Rapid
Diagnostic Kit (Chromatography)
【包装规格】 20 人份/盒,40 人份/盒,80 人份/盒
【预期用途】 用于体外鉴定女性阴道宫颈拭子样本中的 B 族
106CFU/mL、107CFU/mL 的 B 族链球菌)进行测定,
GBS-DNA试剂准备 (2)

GBS-DNA试剂准备标准操作规程
1.目的
规范B族链球菌核酸DNA定性检测的试剂准备操作。
2.范围
GBS-DNA 定性检测实验的PCR 反应液配制。
3.操作人员
PCR室在岗工作人员。
4. 操作步骤
4.1 GBS—DNA试剂准备
4.1.1 试剂复融:从冰箱中取出B族链球菌核酸检测试剂盒,从试剂盒中取出GBS- PCR 反应液、酶混合物、UNG,提取固形物、浓缩清洗液。
GBS - PCR 反应液置于室温复融,复融后把试剂震荡混匀并放于掌式离心机上离心5 秒。
酶混合液不需复融,震荡混匀后放于掌式离心机上离心5 秒,立即放回4 ℃冰箱。
4.1.2 排PCR 管:在PCR 管盒上排列n 个PCR 管(n =标本数+阴性对照+阳性对照),并盖上PCR 盒盖。
4.1.3 配液:取出GBS-PCR反应液,将n×44.3μL GBS-PCR反应液,n×0.5μL Taq DNA Polymerase,n×0.2μL UNG加入一个离心管并振荡混匀,瞬时离心后,分装至n个PCR反应管,每管45μL,盖上管盖后转移到样本处理区的传递窗内。
4.1.4 清洗液制备:取出10×浓缩清洗液与灭菌纯化水按1:9进行稀释。
4.1.5 配液结束后立即把PCR 主反应液、酶混合物、UNG置于一20 ℃冰箱,将提取固形物、清洗液及阳性对照、阴性对照、内参照转移到样品处理区的传递窗内。
B族链球菌筛查
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孕35-37周取阴道和直肠拭子做GBS检测
GBS(+)
给予青霉素预防
产时高危因素:产时发热 ≥38℃,胎膜早破≥18小时 进行GBS检测未做
GBS(+)
(对于青霉素过敏的病患)
GBS(-)
GBS(-)
毋须药物预防
否
是
青霉素G首剂480万单位,后每4小时240—320万单位静滴 直至分娩或阿莫西林首剂2g,后每4小时1g静滴直至分娩
70年代美国新生儿GBS感染的发病率是(2~3) /1000活产婴,病死率大于 50%。90年代以来,美国的产前抗生素预防策略使GBS感染的发病率和病 死率均有所降低,其中新生儿早发型GBS感染的发病率下降了70% ,但在 晚发型却没有明显变化。
CDC与其他机构共同制定了《围产期B族 链球菌感染筛查及防治指南》,并于 2002年和2010年进行了修改,发病率从 90年代早期1.7/1000个新生儿降低到了 近些年的0.34-0.37/1000个新生儿。
法国进口(10个月效期) 用于孕妇阴道—肛肠样本中B族链球菌检测时的选择性增菌 培养基中成分有助于含多种微生物标本中链球菌的生长。 培养基中含抗生素(萘啶酸和粘菌素)能抑制标本附属菌群中的
大部分革兰氏阴性菌的生长。
10
B链筛查培养基
B族链球菌筛查培养基是一种选择性产色培养基,供医疗机构用于筛查临 床样本中孕妇B族链球菌携带情况。 由不同种类的蛋白胨、3种显色底物和抗生素组成,这些成分能够通过培 养基上生长出的浅粉色到红色菌落来筛查无乳链球菌。 其它细菌和酵母菌多数不在这种培养基中生长,或产生紫色、蓝色,无 色的不典型菌落。 典型的无乳链球菌落呈浅粉色到红,圆形呈珍珠状
显色培养基操作最简单
链球菌检验作业指导书(副本)

链球菌检验作业指导书1主题内容与适用范围本作业指导书规定了链球菌的检验方法。
本作业指导书适用于患者的生物样品(如:尿液、脓液、脑脊液、痰等)及医院物体表面涂抹样本及使用中消毒剂链球菌的检验。
2引用标准GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂全国临床检验操作规程(第三版)临床微生物学诊断与图解(第二版)周庭银编著3 设备和材料3.1 无菌棉拭子。
3.2 无菌5cm×5cm规格板。
3.3 温箱:36±1℃,42℃。
3.4 显微镜。
3.5 灭菌广口瓶:500mL。
3.6 灭菌三角烧瓶:500mL,250mL。
3.7 灭菌吸管:10mL、1mL。
3.8 天菌平皿:90mm×15mm。
3.9 灭菌小试管:内径3mm,长5cm。
3.10 灭菌毛细管。
3.11 无菌注射器:5mL、10mL3.12 橡皮乳头。
3.13 载玻片。
3.14 酒精灯。
3.15 灭菌金属匙或玻璃棒。
3.16 接种棒、镍铬丝。
3.17 试管架、试管篓。
4 培养基和试剂4.1 1%葡萄糖肉汤:按GB/T 4789.28中4.1规定。
4.2 血琼脂平板:按GB 4789.28中4.6规定。
4.3 SCDLP液体培养基:按卫生部《消毒技术规范》附录A.23中规定。
4.4 麦康凯琼脂:按GB 4789.24中4.4规定。
4,5 6.5%氯化钠肉汤:见附录A1。
4.6 马尿酸钠培养基:按GB/T 4789.28中3.9规定。
4.7 过氧化氢酶试验:按GB 4789.28中3.21规定。
4.8 蛋白胨水、靛基质试剂:按GB 4789.28中3.13规定。
4.9 氨基酸脱羧酶试验培养基:按GB 4789.28中3.12规定。
4.10 糖发酵管:按GB 4789.28中3.2规定。
4.11 溶血性检查:见附录A1。
4.12 杆菌肽敏感试验:见附录A4。
4.13 CAMP 试验:见附录A5。
4.14 胆汁-七叶苷试验:见附录A64.15 6.5%NaCl生长试验:见附录A7。
b族链球菌取标本方法

b族链球菌取标本方法全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:b族链球菌是一种致病性较强的细菌,常见于喉咙、鼻腔、皮肤等部位,是导致很多呼吸道感染和皮肤感染的罪魁祸首。
因此,及早发现并诊断出感染b族链球菌的病例至关重要。
而取得准确和可靠的标本是进行病原学检测的第一步,下面我们就来详细介绍一下关于b族链球菌取标本的方法。
1. 常见的b族链球菌感染部位b族链球菌感染常见于咽喉部、鼻腔、耳部、皮肤等处。
因此,在取标本时要根据具体的感染部位选择合适的方法和工具。
2. 咽拭子标本的取法咽拭子是检测b族链球菌最常用的标本之一。
取法如下:a. 病人在取标本前应口腔漱口,并将头部向后仰,暴露咽部。
b. 用无菌的咽拭子从咽部刮取样本,注意避免触及舌头或口腔其他部位。
c. 将取得的样本送入无菌培养皿或运送管中,并立即送检。
3. 鼻拭子标本的取法鼻腔是b族链球菌的另一个常见感染部位,取鼻拭子标本的方法如下:a. 病人应将头向后仰,鼻孔向上。
b. 用无菌的鼻拭子轻轻刮取鼻腔内表面的分泌物,避免刺激鼻腔黏膜。
c. 将取得的样本送入无菌培养皿或运送管中,妥善保存并送检。
4. 皮肤标本的取法对于皮肤感染的病例,取皮肤标本是非常重要的。
方法如下:a. 先用无菌消毒液清洁皮肤感染部位。
b. 用无菌的棉签或拭子采集皮肤分泌物或表皮组织。
c. 将取得的样本置于无菌容器中,并送检。
5. 其他标本的取法除了咽拭子、鼻拭子和皮肤标本外,b族链球菌感染还可以通过血液、唾液、痰液等多种生物标本进行检测。
在取这些标本时,同样要注重无菌操作,避免交叉污染。
总的来说,取得准确的b族链球菌标本是进行病原学检测的首要步骤。
通过合理选择取样部位和方法,保证标本的无菌操作,可以有效提高检测结果的准确性和可靠性。
希望以上方法对您有所帮助,提醒大家在进行标本采集时务必注意个人防护,避免感染交叉和二次污染的发生。
感谢您的阅读!第二篇示例:b族链球菌是一种常见的致病菌,会引起多种感染疾病,包括咽炎、中耳炎、皮肤感染等。
b族链球菌显色鉴定培养基说明书

b族链球菌显色鉴定培养基说明书一、引言B族链球菌是一类常见的细菌,它们广泛存在于自然界中,包括土壤、水体、动植物体内等。
B族链球菌对人类和动物的健康有着重要的影响,因此对其进行准确的鉴定和检测具有重要意义。
本说明书旨在介绍一种新型的B族链球菌显色鉴定培养基,以帮助实验室进行准确的鉴定工作。
二、材料与方法1. 培养基配方:- 蛋白胨:10克- 葡萄糖:5克- 氯化钠:5克- 磷酸二氢钾:2克- 氯化钾:0.2克- 溴酚红:0.02克- 纯化水:1000毫升2. 培养基制备:a. 将蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、氯化钾溶解于纯化水中,加热至沸腾,搅拌均匀。
b. 将溴酚红溶解于适量的纯化水中,加入到培养基中,搅拌均匀。
c. 调整pH值至7.2-7.4。
d. 用适当容器装入培养基,高压灭菌。
三、结果与讨论B族链球菌显色鉴定培养基是一种基于显色反应的鉴定方法。
该培养基中的溴酚红能够与B族链球菌产生的酸性代谢产物发生反应,使培养基呈现红色。
通过观察培养基的颜色变化,可以初步判断是否存在B族链球菌。
在实际应用中,我们可以将待测样品接种于B族链球菌显色鉴定培养基上,然后进行培养。
如果培养基在24小时内呈现红色,说明存在B族链球菌。
如果培养基保持黄色,说明不存在B族链球菌。
需要注意的是,B族链球菌显色鉴定培养基只能初步判断是否存在B族链球菌,不能确定具体的菌种。
因此,在鉴定结果为阳性的情况下,还需要进行进一步的鉴定工作,如形态学观察、生化试验等。
四、结论B族链球菌显色鉴定培养基是一种简单、快速的鉴定方法,能够初步判断是否存在B族链球菌。
该培养基的制备方法简单,成本低廉,适用于实验室中的常规鉴定工作。
然而,需要注意的是,该培养基只能初步判断是否存在B族链球菌,不能确定具体的菌种,因此在实际应用中还需要结合其他鉴定方法进行综合分析。
通过本说明书的介绍,相信读者对B族链球菌显色鉴定培养基有了更深入的了解。
希望这种新型培养基能够在实验室中得到广泛应用,为B族链球菌的鉴定工作提供便利和准确性。
医院微生物室链球菌属鉴定标准操作规程

XXXX医院
微生物室链球菌属鉴定标准操作规程
1 目的
2 适用范围
3 工作职责
4 检验步骤
4.1 培养特性
4.2 形态与染色
4.3 生化反应
5 药物敏感实验
6 结果报告
7 注意事项
1 目的
规范链球菌属鉴定标准操作规程,确保检验结果准确可靠。
2 适用范围
各类痰、尿、粪、脓液、血、拭子、分泌物、静脉导管、气管穿刺抽取的痰液等标本。
3 工作职责
检验人员严格执行本程序。
4 检验步骤
4.1 培养特性
在血琼脂平板上菌落呈灰暗色、扁平、干燥、边缘不整齐,可出现β-溶血、α-溶血或不溶血,根据上述特征,可初步推测链球菌的种类。
4.2形态与染色
选择平板上的可疑菌落涂片、革兰染色、镜检,观察细菌的形态和染色性,并估计标本中大致的含菌量。
镜下可见革兰染色阳性细菌,菌体形态圆或卵圆形,成链状或不规则排列。
4.3 生化反应
生化试验主要包括触酶试验、杆菌肽、CAMP、PYR、6.5% NaCl生长试验、胆汁七叶苷、胆汁溶菌试验、奥普托新敏感试验和多种糖类发酵试验等。
可用VITEK自动微生物鉴定系统鉴定链球菌。
5 药物敏感实验
采用K-B法,用血琼脂药敏平板,抗生素选用参考CLSI的标准。
6 结果报告
所有的标本如分离出链球菌,应尽可能鉴定至种,报告“XX菌生长”。
7 注意事项
7.1 操作人员在工作过程中要注意生物安全防护,要戴口罩和手套。
7.2 所有报告结果后的标本及污染物,必须经高压灭菌、焚烧或浸泡杀菌剂中。
b族链球菌检测是什么意思

b族链球菌检测是什么意思B族链球菌(Streptococcus group B,简称GBS)是一种常见的细菌,它可以存在于人体的消化道和生殖道中。
GBS感染在新生儿和成人中都比较常见,但在特定人群中尤为重要,特别是孕妇和新生儿。
GBS感染在孕妇中引起了极大的关注,因为它可能对胎儿产生严重的并发症,包括早产、羊水感染、新生儿败血症、脑膜炎和败血症等。
因此,GBS检测被视为孕妇护理和儿科保健的重要组成部分。
GBS检测是用来确定孕妇是否携带了这种细菌的过程。
它通常在孕妇怀孕期间的第35至37周进行。
这是因为在大多数孕妇中,GBS 菌群会在分娩前几周逐渐增加并达到最高水平。
进行GBS检测有两种常见的方法:获得性GBS孵育和GBS标准检测。
获得性GBS孵育是将从阴道或直肠取得的样本孵育在含有GBS 生长的培养基上,以确定细菌是否存在。
而GBS标准检测则是通过分析孕妇的尿液和血液样本来检测GBS。
许多医学专家和机构提倡对所有孕妇进行GBS检测,这样可以及早识别GBS携带者并采取预防措施。
而没有进行GBS检测的孕妇则有可能在分娩过程中将细菌传递给胎儿,增加新生儿感染的风险。
在进行GBS检测后,如果结果呈阳性(即孕妇携带GBS),孕妇将被建议在分娩开始前的妇产科手术室内接受抗生素治疗。
抗生素通常是通过静脉注射给予的,并且会在分娩开始前的一到四个小时内开始。
这样的治疗有助于减少GBS传播给新生儿的风险。
GBS检测对于新生儿的健康至关重要。
如果GBS感染未加以控制,新生儿可能会出现一系列严重的并发症。
因此,对于被诊断为GBS 携带者的孕妇,它们的新生儿通常会接受特殊的监测和护理。
这可能包括分娩时在婴儿体内注入抗生素,以预防并处理GBS感染。
GBS检测并不属于孕妇产前常规筛查中最主要的一项,但它被认为是非常有必要的。
一些研究表明,GBS检测和预防措施的使用可以显著降低新生儿的感染率,从而减少新生儿死亡率和致残率。
虽然GBS感染在孕妇和新生儿中是常见的,但请注意,它并不会对所有人造成严重的问题。
β型溶血性链球菌的测定

一、编制目的为规范本单位β型溶血性链球菌的检测编制本作业指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中β型溶血性链球菌的测定。
三、编制依据GB/T 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:a)恒温培养箱:36℃±1℃;b)冰箱:2℃~5℃;c)厌氧培养装置;d)天平:感量0.1g;e)均质器与配套均质袋;f)显微镜:10×~100×;g)无菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)或微量移液器及吸头h) 三角烧瓶;i)无菌培养皿:直径90mm;j)pH计或pH比色管或精密pH试纸;k)水浴装置:36℃±1℃;l)微生物生化鉴定系统。
五、培养基和试剂5.1.改良胰蛋白胨大豆肉汤5.2 哥伦比亚CNA血琼脂5.3 哥伦比亚血琼脂5.4 革兰氏染色液5.5 胰蛋白胨大豆肉汤5.6 草酸钾血浆5.7 0.25%氯化钙(CaCl2)溶液5.8 3%过氧化氢(H2O2)溶液5.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡六、检验程序溶血性链球菌检验程序见图1图1溶血性链球菌检验程序七、操作步骤7.1样品处理及增菌以无菌操作取样25g(ml),加入装有灭菌225mlmTSB的均质杯,用旋转刀片式均质器以8000r/min~10000 r/min均质;或加入装有225ml mTSB的均质袋中,用拍击式均质器连续均质1min~2min,液体样品振荡混匀即可。
于36℃±1℃,厌氧培养18h~24h。
7.2 分离将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂,36℃±1℃,厌氧培养18h~24h,观察菌落形态。
溶血性链球在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm~3mm,灰白色、半透明、光滑、表面凸起、圆形、边缘整齐,并产生β型溶血。
7.3 鉴定7.3.1分纯培养挑取5个(如小于5个则全选)可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液,36℃±1℃,培养18h~24h。
B 族链球菌核酸检测试剂(荧光 PCR 法) 标准说明书

ICS11.100C 44YY 中华人民共和国医药行业标准YY/T XXXX—XXXXB族链球菌核酸检测试剂(荧光PCR法) Group B Streptococcus DNA detection kit (fluorescent PCR)(征求意见稿)XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施目次前言.................................................................................................................................................................... I I 1范围.. (1)2规范性引用文件 (1)3要求 (1)4试验方法 (2)5 标签和说明书 (2)6 包装、运输、贮存 (3)附录A(资料性附录) (4)参考文献 (5)前言本标准按照GB/T1.1-2009 《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写》给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由国家食品药品监督管理总局提出。
本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会(SAC/TC 136)归口。
本标准起草单位:本标准主要起草人:B族链球菌核酸检测试剂(荧光PCR法)1 范围本标准规定了B族链球菌核酸检测试剂盒的要求、实验方法、标识、标签、使用说明书、包装、运输和贮存。
本标准适用于通过荧光PCR法原理,定性检测新生儿特定部位或女性阴道、直肠分泌物及其培养物中的B族链球菌,以快速检出B族链球菌核酸的诊断试剂盒。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T191 包装储运图示标志(ISO 780)YY/T 0466.1医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分:通用要求(ISO 15223-1)GB/T 29791.1 体外诊断医疗器械制造商提供的信息(标示)第1部分:术语、定义和通用要求3 要求3.1 外观外包装应符合制造商的要求。
b族链球菌检查ic24

b族链球菌检查ic24摘要:1.背景介绍2.b族链球菌检查ic24的定义3.b族链球菌检查ic24的作用4.b族链球菌检查ic24的检测方法5.b族链球菌检查ic24的优缺点6.我国在b族链球菌检查ic24方面的应用7.结论正文:1.背景介绍b族链球菌(GBS)是一种常见的细菌,可以导致各种感染,包括新生儿败血症、肺炎、脑膜炎等。
因此,对孕妇进行b族链球菌检查是非常重要的。
ic24是一种b族链球菌检查方法,具有较高的准确性和敏感性。
2.b族链球菌检查ic24的定义ic24是一种b族链球菌检查方法,全称为“Invasive Conjunctival and Corneal Infections”,中文名称为“侵袭性结膜炎和角膜炎感染”。
这种方法主要通过检测孕妇的宫颈分泌物中b族链球菌的存在,以评估孕妇感染b族链球菌的风险。
3.b族链球菌检查ic24的作用ic24方法的主要作用是帮助医生评估孕妇感染b族链球菌的风险,从而为孕妇提供个性化的预防措施。
例如,对于高风险孕妇,医生可能会建议她们在分娩时使用抗生素,以降低新生儿感染的风险。
4.b族链球菌检查ic24的检测方法ic24检测方法主要通过检测孕妇宫颈分泌物中的b族链球菌特异性抗原,来判断孕妇是否感染了b族链球菌。
这种方法具有较高的敏感性和特异性,可以有效地识别出感染b族链球菌的孕妇。
5.b族链球菌检查ic24的优缺点优点:- 高敏感性和特异性,可以准确识别感染b族链球菌的孕妇;- 操作简单,方便快捷;- 非侵入性,对孕妇和胎儿无伤害。
缺点:- 无法确定细菌的毒力,即无法判断细菌是否具有致病性;- 对于某些特殊类型的b族链球菌,可能存在检测盲区。
6.我国在b族链球菌检查ic24方面的应用目前,我国已经引进并推广了ic24方法,作为孕妇b族链球菌感染的筛查工具。
在许多大医院的产科门诊,医生都会为孕妇提供ic24检测服务,以便及时发现感染b族链球菌的孕妇,并给予相应的预防措施。
微生物检验实验室链球菌属标准操作规程
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微生物检验实验室链球菌属标准操作规程1. 概述链球菌是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多,目前临床上仍延用Lancefield血清学方法进行分群(A、B、C、D、F、G群),或根据溶血现象(β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血)进行分类。
2.标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1 形态与染色:革兰阳性球菌,固体培养基上单个或成双排列,较少呈链状排列;肉汤培养基中呈长链排列;从脓液、尿液和痰液等标本直接涂片镜检,呈单个、成双或短链排列。
3.2 培养特性:在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应:a溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环;B溶血周围有明显较大的完全透明环;。
溶血(不溶血)无异常变化。
周围有灰绿色的狭窄溶血环;肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平,周围有草绿色溶血环。
3.3 生化反应:触酶试验阴性,对各种碳水化合物的分解因菌种而异,链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌分解菊糖,胆汁溶菌试验阳性,Optochin试验敏(抑菌环>14mm)。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征:革兰阳性球菌,单个、成双或链状排列,菌落较小、可出现:a溶血、B溶血或不溶血,触酶试验阴性。
3.4.2根据溶血及关键性试验,对链球菌进行推测性鉴定分群:A群链球菌(化脓性链球菌):β溶血,杆菌肽敏感。
B群链球菌(无乳链球菌):β溶血,CAMP试验阳性,马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌(似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等):CAMP试验、马尿酸钠、65g/L氯化钠耐盐试验均为阴性,杆菌肽耐药(抑菌试验阴性)。
D群非肠球菌(马肠链球菌、牛链球菌、变形链球菌等):胆汁七叶苷试验阳性,65g/L氯化钠耐盐试验为阴性。
D群肠球菌(粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌和坚忍肠球菌等):胆汁七叶苷、65g/L氯化钠耐盐试验阳性,45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
β型溶血性链球菌的测定
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一、编制目的为规范本单位β型溶血性链球菌的检测编制本作业指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中β型溶血性链球菌的测定。
三、编制依据GB/T 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:a)恒温培养箱:36℃±1℃;b)冰箱:2℃~5℃;c)厌氧培养装置;d)天平:感量0.1g;e)均质器与配套均质袋;f)显微镜:10×~100×;g)无菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)或微量移液器及吸头h) 三角烧瓶;i)无菌培养皿:直径90mm;j)pH计或pH比色管或精密pH试纸;k)水浴装置:36℃±1℃;l)微生物生化鉴定系统。
五、培养基和试剂5.1.改良胰蛋白胨大豆肉汤5.2 哥伦比亚CNA血琼脂5.3 哥伦比亚血琼脂5.4 革兰氏染色液5.5 胰蛋白胨大豆肉汤5.6 草酸钾血浆5.7 0.25%氯化钙(CaCl2)溶液5.8 3%过氧化氢(H2O2)溶液5.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡六、检验程序溶血性链球菌检验程序见图1图1溶血性链球菌检验程序七、操作步骤7.1样品处理及增菌以无菌操作取样25g(ml),加入装有灭菌225mlmTSB的均质杯,用旋转刀片式均质器以8000r/min~10000 r/min均质;或加入装有225ml mTSB的均质袋中,用拍击式均质器连续均质1min~2min,液体样品振荡混匀即可。
于36℃±1℃,厌氧培养18h~24h。
7.2 分离将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂,36℃±1℃,厌氧培养18h~24h,观察菌落形态。
溶血性链球在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm~3mm,灰白色、半透明、光滑、表面凸起、圆形、边缘整齐,并产生β型溶血。
7.3 鉴定7.3.1分纯培养挑取5个(如小于5个则全选)可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液,36℃±1℃,培养18h~24h。
B族链球菌
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国内围产期GBS 感染的预防工作可以借鉴美国CDC2010年发布的GBS 预防指南,对于怀孕35-37周的孕妇进行阴道和直肠的GBS 筛检,这样能够提高预防效率,节省资源,同时能够大量减少不必要的抗生素使用。
泰普GBS筛检方案4GBS 的现代分子生物学检测GBS 筛检方法对比实时荧光PCR 技术实时荧光PCR 一般流程:快捷的操作流程:3小时实时荧光PCR 技术,是指在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的积累实时监测整个PCR 进程,最后通过扩增曲线对模板进行分析的方法。
随着实时荧光PCR 技术与相关PCR 仪的出现,彻底改变了以往利用末端法对基因进行检测的方法。
这种实时荧光PCR 技术较传统的方法有如下的优势:1)缩短实验时间,不需要进行PCR 后的电泳跑胶鉴定;2)由于数据的采集与分析都由仪器完成,不再依靠肉眼观察电泳的结果,所以检测的灵敏度与重复性大大提高;3)由于实时荧光PCR后无需开盖,所以可以非常好地防止污染的发生。
国外研究也显示,实时荧光PCR检测方法与标准的细菌培养方法在GBS检测的敏感性和特异性方面均达90%以上,达到筛检标准,已经得到美国食品和药品管理局(FDA)的批准并应用于临床。
因此,在国内采用实时荧光PCR技术进行GBS筛检是最快速、可靠的方法。
5泰普生物GBS核酸检测试剂盒产品预期用途本试剂盒基于实时荧光PCR技术平台,采用分子信标(Molecular Beacons)探针技术和特异引物技术,适用于临床样品中GBS的快速检测,可用于GBS感染的辅助诊断及疗效监控。
产品特点国内独家、技术领先;自主研发、专利技术;灵敏性高、特异性强;简便快捷、重复性好;闭管操作、避免污染。
GBS感染的防治预防GBS感染主要集中于从母婴双方消除GBS带菌状态(药物预防)着手或给新生儿保护性免疫(主/被动)。
药物预防及治疗青霉素一直以来作为预防治疗GBS感染的首选药物,目前最常用的预防及治疗方法是用青霉素G首剂500万单位静脉注射,每4—6小时250万单位;或氨苄青霉素首剂2g静脉注射,每4—6小时1g,直至分娩。
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B族链球菌检测的标准操作程序
【目的】
保证检测结果准确可靠。
【适用范围】
适用于本实验室的检验人员。
【该SOP 变动程序】
本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。
【试剂】
1.试剂名称:B族链球菌(GBS)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
2.生产厂家:北京现代高达生物技术有限责任公司
3.包装规格:20人份/盒
贮藏条件及有效期:试剂盒应置2-8℃存放12个月。
【仪器设备】
1.仪器名称:
2.仪器厂家:
3.仪器型号:
4.仪器校准:本仪器由仪器厂家工程师负责校准。
【检验原理】
本试剂盒利用Taqman探针实时PCR技术,针对B族链球菌基因组特异且无高频SNP位点的序列区域cAMP因子,设计出特异性引物和探针,配以全封闭PCR体系,检测标本中的B族链球菌DNA。
体系中通过加入内参照系统排除PCR反应过程中可能的假阴性结果,并通过加入UNG避免可能的扩增污染物造成的假阳性结果。
【标本要求】
1. 样本采集:采用藻酸钙、普通棉拭子或涤纶拭子采集生殖道或直肠等部位带上皮细胞的分泌物标本。
(1)妊娠34-37周孕妇生殖道分泌物:先拭去阴道过多的分泌物,采用无菌拭子插入阴道至内1/3处,沿阴
道壁轻轻旋转取得分泌物,将采集的拭子置于无菌管中,密闭送检;
(2)妊娠34-37周孕妇直肠分泌物:将拭子插入肛门,在肛门括约肌以上约2.5cm处,沿肠壁轻轻旋转取得标本,将采集的拭子置于无菌管中,密闭送检;
(3)样本一经送检,则应尽快送至检测实验室,运输应符合当地法规。
2. 标本存放:待测样本在2-8℃保存不应超过24小时;-18℃以下保存不超过4天。
样本的冻融次数:实验数据证明,样本冻融6次以内无影响,但应尽量避免冻融。
3. 样本的运输条件:冷冻(干冰运输)4天内无影响,冷藏(冰袋运输)2天内无影响。
4. 含血样本无法正常检测应避免。
5. 研究显示,常用栓剂药物“保妇康栓”会对试剂盒检测造成较大影响,因此取样前应避免该药品的使用。
【检验方法】
1. DNA提取(在样品处理区操作)(1)妊娠34-37周孕妇生殖道或直肠分泌物:取含有分泌物的生理盐水1ml13000rpm离心10 min,弃上清液,沉淀(如不明显可再重复一遍离心)加无菌生理盐水1ml混匀,13000rpm离心5 min,弃上清。
沉淀加入50μl DNA提取液充分混匀,99℃~100℃加热处理10min,13000rpm 离心10min,吸取上清至1.5ml离心管中保存,DNA提取完毕。
(2)GBS阳性对照品提取:取50μlGBS阳性对照品加入1.5ml离心管中(用灭菌生理盐水补齐至1ml),13000rpm离心10min,弃上清。
沉淀加入50μl DNA提取液充分混匀,99-100℃加热处理10min,13000rpm离心10min,吸取上清至1.5ml离心管中保存,DNA提取完毕。
(3)空白对照品提取:同GBS阳性对照品提取。
建议:DNA提取完毕后应尽快进行PCR检测,以保证检测效果;
2. GBS PCR反应液配制(在试剂准备区进行)
解冻试剂,在打开盖子之前震荡并短暂离心各试剂管。
按标本数量(需包含阴性对照品及GBS阳性对照品)分装GBS PCR反应液。
按每管35μl分装至0.2ml PCR反应管/板中,转入样品处理区。
3. 加样(在样品处理区进行)
分装好的各反应管/板分别加入处理好的DNA样品5μl、阴性对照品5μl及阳性对照品各5μl。
短暂离心使所有试剂集中到反应管底部(不能有气泡),确定盖好管盖或封膜后,立即进行PCR 扩增反应。
注意:阳性定量参考品含有高浓度的目标DNA,请务必小心操作,避免污染
4. PCR 扩增(在PCR 检测区进行)
按以下方案运行仪器程序:
(1)UNG 反应:50℃2 min;
(2)预变性:95℃5min;
(3)PCR:(95℃15sec→60℃35sec) 45 个循环;60℃时分别检测FAM 和HEX 通道荧光信号,选择反应体系40 μl。
5. 阈值设定
阈值设定在空白对照正常扩增曲线的上方,基线设定可选择3-5 个循环,一般情况选择为5.00,若是最高浓度样本的Ct 值小于5.00,则在3~5 之间按照低于最高浓度样本Ct 值设定;这类高浓度样本应稀释后再进行检测。
具体仪器设定如下:
ABI 7500 基线、阈值设定:调整Baseline 的Start 值可在3~5 之间,End 值≤5.00,阈值线设定以刚好超过正常空白对照扩增曲线(无规则的噪音线)的最高点,即空白对照Ct 值或者“Undet”为准;
6. 质量控制
(1)FAM 通道检测结果:
a) 空白对照品:Ct 值不显示;
b) CT 阳性对照品:Ct<30.00;
(2)HEX 通道检测结果:内参照:Ct≤35.00;
注:以上要求需在同一次实验中同时满足。
7. 检测结果分析和判定
(1)阴性结果判定:如果FAM 通道无Ct 值显示, 而HEX 通道信号正常(Ct≤35.00),则该样品为阴性; (2)阳性结果判定:
a) 若样品的FAM 通道Ct≤38.00,则判定样品为阳性;
b) 若样品的38.00<Ct≤45.00,则建议对该样本进行重试,如重试结果仍为38.00<Ct≤45.00 或Ct≤38.00,则判定为阳性;如Ct 不显示且HEX
通道信号正常(Ct≤35.00),则判定为阴性。
注:HEX 通道是内参照的信号通道,通过HEX 信号检测可排除由于PCR 体系的干扰因素或性能下降造成的假阴性反应。
8. 扩增曲线形态:正常扩增为标准S 形扩增曲线
【结果解释】
实验室存在试剂污染,样品交叉污染会出现假阳性结果;试剂运输;保存不当或试剂配置不准确引起的试剂性能下降,出现假阴性或试剂定量不准确的结果。
内参照HEX 通道无Ct 值显示表明PCR 反应受到抑制,扩增失败。
本试剂盒检测结果不能直接作为临床确诊或排除病例的依据,仅供临床医生参考。
【检验方法的局限性】
当待检测样本中被检测核酸浓度低于1×103 基因拷贝/ml 时可能会发生假阴性结果。
【注意事项】
1. 实验前请仔细阅读本说明书;
2. 每次实验应设置阴性对照品;试剂使用前应充分融化并混匀;自备灭菌生理盐水;
3. 反应管中应尽量避免气泡的产生,管盖需盖紧;
4. 实验室必须严格遵循PCR 基因扩增实验室的管理规范,操作人员必须经过培训,合格后方能上岗;
5. 实验过程严格分区进行,即试剂准备区、样本处理区和PCR 检测区,各区的白大衣、手套和帽子等不能带入其它区域,各区仪器设备不能带入其它区域;
6. 请使用无菌带滤芯吸头,实验中废弃的吸头应弃于含10%次氯酸钠的废液缸中;实验全过程必须带一次性手套;
7. 扩增结束后不要打开管子,应密封丢弃于指定容器中;
8. 实验完毕用10%次氯酸钠或75%酒精清理实验工作台及移液器等相关物品,并用紫外灯照射;
9. 不同批号的试剂不得混用,请勿使用过期产品;
10.请根据所使用荧光PCR 仪选择相配套的PCR 管/板。
11.仅用于体外诊断。
操作人员部门主管质量负责人姓名**** **** ****
日期年月日。