《细胞化学染色》PPT课件 (2)

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• 细胞化学染色一般包括固定、显示、复染等步 骤。
• 主要用于：
• 显示细胞或组织的酶、蛋白质、糖类、脂类、 无机盐（如铁）等化学成分的含量及分布状况；
• 研究细胞组织来源及分化程度；为疾病的诊断、 鉴别诊断及治疗提供重要的依据。
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中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （NAP）
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• ㈢.临床意义：
• ⒈类白血病反应与慢性粒细胞白血病的鉴别诊断：前 者显著增高，阳性率常达90%以上，积分常高于200分； 后者显著减低，积分可感染 时多为正常或稍低。
• ⒊淋巴细胞白血病时常增高；单核细胞白血病时正常 或增高；慢性中性粒细胞白血病时增高，其它各型粒 细胞白血病时减低；白血病伴感染时增高。
Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝 黑色颗粒占胞浆面积的25%～ 50%。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀， 小到中等颗粒约占胞浆面积 的50%～75%。
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Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀，小 到中等颗粒约占胞浆面积的50% －75%。
• Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
• 2. 也可用新鲜配制的六偶氮副品红为重氮盐，配方为： 10ml a-磷酸萘酚钠溶液中加六偶氮副品红50μl，其 NAP阳性反应呈红色颗粒状。六偶氮副品红：4%副品 红（2N盐酸）溶液与4%亚硝酸钠溶液1∶1混合，静置 1min。
• 3. 重氮盐应适量，过量会导致染色失败，出现假阴性； 量不足，则阳性反应较弱。
• ㈠.原理： • 方法一（偶氮偶联法）：在PH9.2~9.8的碱性溶
液中，细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸萘酚 钠水解，生成a-萘酚和磷酸钠，再以稳定的重 氮盐与萘酚偶联生成不溶性有色偶氮染料沉淀， 定位于细胞浆中。
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试剂：
• 1.固定剂：1∶9福尔马林乙醇液，即40％甲醛溶液（福 尔马林）10ml加无水乙醇90ml混合即得。
流水冲洗，待干。 • 3、中性红溶液复染3分钟，流水冲洗，干后鏡检。
• 结果判断：
• 阳性反应呈蓝黑色颗粒状，定位于细胞浆中。
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• 计数方法：
• 按碱性磷酸酶活性强弱，分为5级 (0－IV或0－++++) 。
• 0级 0 胞浆呈原色，无颗粒。 • Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，阳性颗粒占胞浆的25%－50%。 • Ⅱ级 ++ 阳性颗粒约占胞浆面积的50%－75%。 • III级 +++ 阳性颗粒占胞浆面积的75%－100%。 • Ⅳ级 ++++ 胞浆充满蓝黑色致密的阳性颗粒，占胞浆面
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• 试剂：
• 1.固定剂：40%甲醛溶液（福尔马林）。
• 2. 工作液配制：
• 蒸馏水
37ml
• 0.2mol/L pH4.7醋酸缓冲溶液 6ml
• 0.15mol/L（5%）硝酸铅
1ml
• 0.1mol/L（3.2%）β－甘油磷酸钠 2ml
• 3.稀硫化铵溶液（临用时现配）：取硫化铵水 剂0.75ml加蒸馏水至50ml。
Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
Ⅳ级 ++++ 胞浆充满深黑色致密的 团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中 到大颗粒占胞浆面积的l00%。
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• 注意事项：
• 1. 重氮盐以坚固篮BB盐为最佳，其次为坚固篮B盐及 坚固篮RR盐。
• 4.甲基绿溶液：1g甲基绿溶于50ml蒸馏水中。
• 4. 工作液配好后应立即使用（5min以内）。
• 需用感染发热病人或正常人外周血涂片作为阳性对照。
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• ㈡.正常分布： • 阳性反应主要见于成熟中性粒细胞（杆状及分叶粒
细胞）中，反应结果以阳性率和积分值报告。
• 正常参考值：成人NAP阳性率28.7％（20%－40%）， 积分32.1（20－80）。
临床血液学和血液学检验
第四章 造血检验的基本方法
华中科技大学同济医学院 医学检验系
陈万新
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第二节 细胞化学染色
• 细胞化学（或组织化学）是在细胞形态 学的基础上运用无机化学、有机化学或 生物化学等技术研究细胞在发育、增殖 分化过程中的主要化学成分的定位、定 量及代谢功能状态的学科，是细胞形态 学的重要组成部分。
• 2 . a- 磷 酸 萘 酚 钠 溶 液 ： 1 0 0 mg a- 磷 酸 萘 酚 钠 溶 于 100ml0.2mol/L（pH9.1～9.7）Tris缓冲溶液中，混匀后 4℃保存。
• 3.Tris缓冲溶液（0.2 mol/L pH9.2）：Tris粉（三羟甲基 氨基甲烷）2.43g溶于100ml蒸馏水中，加浓盐酸0.2ml （0.167ml）。
• ⒋真性红细胞增多症、骨髓纤维化、再生障碍性贫血 时增高，PNH时常减低。
• 5.某些肿瘤的鉴别诊断，如骨肿瘤、消化道肿瘤的肿瘤 细胞碱性磷酸酶常为较强阳性反应。
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酸性磷酸酶染色（ACP）
• 方法一：Gomori硫化铅法 • 原理：
• 在酸性条件下（pH4.7）酸性磷酸酶能将底物（甘油磷 酸钠）水解，产生－PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉 淀，定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化铵作用， 生成棕黑色的硫化铅沉淀。
积的l00%，甚至遮盖胞核。
• 每例的血片，均计数100个中性粒细胞（杆状核及分叶核 粒细胞），求出NAP阳性细胞的百分比(阳性率)，并按 酶活性的强弱不同，求得阳性指数(积分)。
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0级 0 胞浆呈原色，无颗粒。
Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝 黑色颗粒占胞浆面积的25%～ 50%。
• 4.工作液配制（临用时现配）：取a-磷酸萘酚钠溶液 1.5ml于试管内37oC水温箱中预热5分钟，加坚固篮BB 盐1.5mg，混匀即可。
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• 染色步骤：
• 1、干燥涂片（观察片及阳性对照片），滴加固定剂
布满血膜固定5秒钟，流水冲洗，待干或滤纸吸干。 • 2、滴加作用液室温下（或37oC）染色15～20分钟，