小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察与微核的检验
乙酸，临用时现配），Giemsa 染液，2.2%柠檬酸钠，0.01M 磷酸缓冲液（PBS）pH6.8。 实验准备 溶液配制：
(1) 2.2%柠檬酸三钠：称 11g 柠檬酸三钠到 500ml 蒸馏水中，充分溶解； (2) 1%柠檬酸三钠：取 5g 柠檬酸三钠溶解到 500ml 蒸馏水中，充分溶解； (3) PBS（pH6.8): A 液：取 Na2HPO4 12g 溶于 500ml 蒸水中，充分溶解；
38 44 45 40 36 41 43 39
表 2 对苯二酚对动物骨髓嗜多染红细胞微核发生率
组别
剂量
动物数 受检细胞数 含微核细胞数 微核率
P值
(g/kg 体重)
(只)
(个)
(个)
(‰)
受试物 120
的核块，而在细胞浆中形成 1 个或数个独立于主核、直径小于主核的 1/3、染色与 主核一致但比主核淡的核小体，因比主核小，故称为微核。微核率的大小与作用因 子的剂量或辐射累积效应呈正相关。
6.凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核 试验来检测。各种类型的骨髓细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正 常核难以鉴别。嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个 阶段，此时红细胞的主核已被排出，因胞质内含有核糖体，Giemsa 染色后呈灰蓝色， 成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡桔红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微 核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的首选 细胞群。
判断制片优劣的标准，观察时选择分布均匀、疏密适度、形态完整、染色好的区 域镜检，由低倍镜到高倍镜，并按一定顺序镜检； ⑥此次实验用于制片透明的二甲苯为有毒物质，在透明的过程中要即使将盖子盖 好，注意不要将其泼洒在实验桌或者沾到皮肤，若出现池中情况应该及时用自来 水冲洗； ⑦最后在将涂片制成永久封片时，用注意所用的光学树脂胶应适量，过多容易使树 胶溢出而容易沾在盖玻片表面而使制片清晰度下降，影响观察； ⑧注意微核与颗粒异物、嗜多染红细胞与其他骨髓细胞不同阶段血细胞的区分。
染色体标本的制备及组型观察 实验报告
细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。
染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。
（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。
（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。
②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。
我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。
在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。
③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。
PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。
与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。
可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。
④空气干燥：使细胞与染色体易于分离⑤低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。
小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察
Isolation and staining of mouse meiotic metaphasechromosomes小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察xx 2011级生科四班201100140120 同组者：xx【实验目的】1、learn to isolate mouse testes cells and stain with Giemsa.学会分离小鼠睾丸细胞并用Giemsa染液染色2、Observe the number and morphology of mouse chromosomes观察小鼠染色体的数目及形态特征【实验材料】【Reagents】秋水仙素colchicine solution吉姆萨染液Giemsa stains solution生理盐水physiological saline氯化钾溶液KCl solution固定液fixation solution【Tools and equipments】Dissecting tray，beaker，centrifuge tube，microscope，glass slide，pipette，scissors，forceps，copper mesh.解剖盘，烧杯，离心管，显微镜，载玻片，吸管，剪刀，镊子，铜网【实验原理】meiosis is a process of reductional division in which the number ofchromosomes per cell is cut in half. In animals, meiosis always results in the formation of gametes, while in other organisms it can give rise to spores. 减数分裂是细胞分裂染色体数减半的过程，在动物中,减数分裂的结果总是在形成配子,而在其他生物可以产生孢子。
两种小鼠生精细胞染色体制备方法的探讨与评价
— 104 —CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.44 No.2 2021 解剖学杂志 2021年第44卷第2期两种小鼠生精细胞染色体制备方法的探讨与评价*卢文亮 孟卫京 薛春梅 杨 静 宁伟霞 毛国丽 郭兴萍△（山西省生殖科学研究所，太原 030006）摘要 目的：比较改良的体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法制作小鼠生精细胞减数分裂中期染色体标本的优劣。
方法：选用8~12周龄雄性Balb/c 小鼠，分别采用改良的体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法进行减数分裂中期染色体制备，并用Giemsa 染色。
光镜下观察小鼠生精细胞减数分裂不同阶段分裂相细胞染色体形态并计数，计算各分裂相细胞的检出率。
结果：体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法对生精细胞减数分裂中期染色体核型的检出率分别为10.37%和6.46%。
秋水仙素处理小鼠的最适浓度是4 mg/kg ，体内注射秋水仙素制备法制得的核型分裂相比空气干燥直接制备法多，直接制备法得到的染色体核型边缘清晰，更便于计数。
结论：体内注射秋水仙素制备法的优势在于核型分裂相多，而空气干燥直接制备法的优势在于染色体核型边缘清晰，更便于计数，可根据不同实验需求进行选择。
关键词 生精细胞；减数分裂；标本制备；小鼠Discussion and evaluation on chromosome preparation methodsof spermato genic cells in two groups of mice *Lu Wenliang ， Meng Weijing ， Xue Chunmei ， Yang Jing ， Ning Weixia ， Mao Guoli ， Guo Xingping △（Shanxi Institute of Reproductive Science ， Taiyuan 030006， China ）Abstract Objective ： To compare the advantages and disadvantages of the modified colchicine injection and the direct air drying methods for preparing meiotic metaphase chromosome of mouse spermatogenic cells. Methods ： Male Balb/c mice aged 8 to 12 weeks were used to prepare meiotic metaphase chromosomes by the modified colchicine injection and air drying ， respectively ， and stained with Giemsa. Under light microscope ， the chromosome morphology was observed and the mitotic phase cells were counted at different stages of meiosis in spermatogenic cells ， and the rate of cells in each phase was calculated. Results ： The detection rate of chromosome karyotypes in meiotic metaphase of spermatogenic cells by two methods was 10.37% and 6.46% respectively. The optimum concentration of colchicine for the mice was 4 mg/kg ， and the karyotype obtained by injection of colchicine in vivo was more than that by direct preparation. The chromosome karyotype obtained by direct preparation had clear edges and was easier to count. Conclusion ： Colchicine injection in vivo can obtain more karyotypes ， while air drying direct preparation can obtain clear chromosome karyotype edge ， which is easier to count ， and can be selected according to the different experimental requirements.Key words germ cell ； meiosis ； specimen preparation ；mousedoi ： 10.3969/j.issn.1001-1633.2021.02.003·论 著·*山西省卫生健康委科研项目（2019004）第1作者E-mail ：*****************△通信作者，E-mail ：***************收稿日期：2020-07-16；修回日期：2020-11-15生精细胞减数分裂期染色体分析是遗传学、组织学胚胎学、细胞生物学和生殖生物学研究的重要手段[1-2]。
简述小鼠染色体制备的流程
简述小鼠染色体制备的流程小鼠染色体制备。
选只小鼠，得挑健康的，不能是病怏怏的那种。
然后，得给它打麻药，让它舒舒服服地睡一觉。
这样咱们就能轻松取得细胞了。
取细胞这活儿，得迅速。
从骨髓或者脾脏里取，这得看实验需求。
取出来后，咱们得让细胞在低渗环境里待会儿，这样染色体就能胀大，看得更清楚。
然后，用固定液固定一下，这样细胞形态就稳定了。
接下来，就是染色和观察了。
用专门的染料给染色体上色，让它们变得五彩斑斓的。
然后，在显微镜下瞅瞅，看看这些染色体长啥样，数数有多少个。
这可得细心点，不能漏看了。
说起来，小鼠染色体制备这事儿，看着简单，其实挺考验技术的。
得选对小鼠，还得会取细胞、染色、观察。
不过，只要技术到位，就能得到清晰的染色体，为后面的研究打好基础。
小鼠精巢细胞减数分裂标本的制备与观察
小鼠细胞分裂标本的制备与观察一、实验目的a)掌握小鼠精巢染色体标本制作法。
b)观察减数分裂过程中不同时期的染色体。
c)观察腹水瘤细胞有丝分裂中不同时期的染色体形态。
二、实验原理a)减数分裂（Meiosis）是发生于生殖细胞的一种特殊的细胞分裂方式，DNA复制一次，而细胞连续分裂两次，形成单倍体的精子和卵子。
减数分裂远比有丝分裂复杂，经两次细胞分裂，分别称减数分裂Ⅰ、减数分裂Ⅱ，两次分裂间又一个较短的间期，这个间期DNA不复制。
b)雄性动物精子发生于睾丸曲精细管的生精上皮细胞，由其中的精原细胞经多次有丝分裂和生长，形成初级精母细胞，初级精母细胞经减数分裂形成次级精母细胞，次级精母细胞有丝分裂成精细胞，再经一系列变化成精子。
c)因此，通过分离曲细精管、剪碎并加入液体吹打，可使官腔各种细胞游离出来，然后经过低渗、固定、染色等过程就可制成包含减数分裂各期的标本。
三、实验试剂及仪器a)材料：成年雄性小白鼠b)用品：注射器、平皿、尖头镊子、剪刀（普通剪刀、眼科小剪刀）、吸管、离心管、离心机、玻片等。
c)试剂：1、100μg/ml秋水仙素。
2 、2％柠檬酸钠溶液3、 0.075M的KCI4、3:1甲醇:冰醋酸及1:1甲醇:冰醋酸（应现配）5、PH6.8，0.01M的PBS缓冲液6、Gimesa原液7、Gimesa工作液：1份Gimesa原液加9份PH6.8，0.01M的PBS缓冲液，混匀。
工作液应现用现稀释。
四、实验步骤a)细胞收集i.小鼠精巢细胞收集1.注射秋水仙素，增加中期分裂相。
(试验前4－5小时，小鼠腹腔注射秋水仙素0.5ml（100μg/ml）。
2.取睾丸并清洗。
断颈处死小鼠，剖开腹部，取出肾形睾丸，放入盛有4－5 ml2％柠檬酸钠溶液的平皿中，洗去污血，去掉胞外脂肪等物。
3.挑出曲细精管并剪碎。
弃污液，另加柠檬酸钠溶液1 ml，用尖头镊尖将曲细精管拉出，并用眼科剪尽量将其剪碎。
4.游离并收集细胞。
实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
收集到离心管中, 收集到离心管中
定容至6ml. 定容至
滴片： 滴片：
滴于玻片上， 滴1~2滴于玻片上，吹气， 滴于玻片上 吹气， 在酒精灯火焰过火2~3次， 次 在酒精灯火焰过火 做记号，凉干， 做记号，凉干，染色
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞 、 染色体中期分裂相。 染色体中期分裂相。 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液 、本实验中秋水仙素、低渗液、 各起什么作用？ 各起什么作用？ 3、简述实验中应注意那些关键问题？ 、简述实验中应注意那些关键问题？
4、预固定：加1mlCarnoy 、预固定： 固定液混匀 配平， 混匀， 固定液混匀，配平，离心 1000rpm/8分钟。 分钟。 分钟
3、低渗：37度恒温水浴 分钟。 3、低渗：37度恒温水浴30分钟。 度恒温水浴30分钟
5、固定：弃上清，再加 、固定：弃上清， Carnoy 固定液至 固定液至6ml刻度， 刻度， 刻度 悬浮，静置20分钟 分钟， 悬浮，静置 分钟，离心 同上。 同上。
实验六、小鼠骨髓细胞染色体标本 制备与观察
目的与要求ห้องสมุดไป่ตู้
1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的 方法； 方法； 了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。 2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。
实验原理
小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性， 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。 数量较多。
6、制片：去上清液,加少量固定 、制片：去上清液 加少量固定 混匀，滴片， 液，混匀，滴片， 7、染色：Giemsa染色 分钟 、染色： 染色10分钟 染色
取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。 取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。
小白鼠骨骼标本
小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察
姓名系年级组别同组者科目细胞生物学实验题目小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察学号小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察一．实验目的1．了解快速制备动物染色体标本的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的制备方法。
2．观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征。
3．掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。
二．实验原理（一）染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
染色体特征：1.数目（2n=？）2.长度（绝对长度、相对长度）3.着丝粒位置（M/SM/ST/T）4.随体与次溢痕的数目、大小和位置5.带型分析（二）操作方法小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。
利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。
在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。
通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。
用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。
由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理、低渗、固定、制片、染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。
哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。
03动物细胞染色体标本制作及组型实验概要
立即用吸管轻轻将细胞吹散，室温固定8min。 5. 800~1000r/min离心8min。 6. 弃去上清液，加入1ml新制Carnoy's固定液，用滴管轻轻将细胞吹散，制
➢ 生理盐水 ➢ Giemsa染液
3. 器材：显微镜、普通离心机、恒温水浴锅、剪 刀、镊子、滴管、量筒、小烧杯、试管架、染 色用玻璃板、载玻片、盖玻片。
实验方法
一、染色体标本的制做
1. 取小白鼠以每克重注射秋水仙素4 g，注射后14~16h，用断头法杀死小鼠， 取出睾丸用生理盐水洗去血污。
2. 把睾丸移入盛有1ml 0.3% KCl的低渗溶液的10ml的小烧杯内，用手术剪 将睾丸剪碎(呈乳白色)，将其用铜网过滤至一支10ml刻度离心管中以除去 残余组织块，向离心管中加入0.3% KCl低渗溶液至4ml，于37℃水浴中低 渗处理30min。
作业
1. 用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什么 不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？
2.小麦或黄豆根尖经中性红超活染色，为什么看到 生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞 中液泡数量变少，染色浅？
10. 在玻璃板上用废旧载玻片作支架, 使标本载玻片的标本面向下放 置到支架上, 在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液, 室温 染色30~35min。
11. 染色后的标本载玻片用流水冲洗1~2min，以冲洗掉多余的染 液。
12. 文火烤干后，进行显微镜观察。
13. 选择染色和分散较好、比较直且周缘清晰的分裂相染色体，封 片后在油镜下进行显微照相，并冲洗出照相底片。
动物遗传学教学实验“小鼠睾丸细胞减数分裂染色体标本制作”方法
课程教学C ur r i cul um T e ac hi ng 爝煎逦尉动物遗传学教学实验‘q、鼠睾丸细胞减数分裂染色体标本制作，方法改进的研究张燕军赖双英苏蕊张文广(内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古呼和浩特010018)摘要“减数分裂期染色体制备实置F’是动物遗传学实验课程重要内容。
本文介绍了小鼠睾丸细胞减数分裂染色体标本制作的改进方法，通过本方法可制备和观察到大量分散良好、背景清晰、染色体结构紧凑的睾丸细胞减数分裂各期分裂相，得到较好的实验效果。
关键词动物遗传学睾丸细胞减数分裂染色体改进中图分类号：G424文献标识码：AA ni m al G enet i cs T eachi ng Exper i m ent’’M ous e Tes t i s M ei ot i cC hr om os om e Speci m en’’M et hods I m pr ovem entZ H A N G Y anj un，L灿Shuangyi ng，SU R ui，Z H A N G W enguang(C ol l ege of A ni m al Sci e nce，I n ner M ongol i a A gr i cul t ur al U ni ve r s i t y,H ohhot，I nne r M ongol i a010018)A bs t r ac t’’P r epa ra t i on of m ei ot i c cl l r om os om es e xper i m e nt”i s al l i m port a nt pa r t of ani m al ge net i c s experi m ent cour se．Thi sar t i cl e des cr i bes t he m ous e t est i s m ei ot i c chr om os om e s peci m en of t he i m pr o ved m et hod，can be prepar ed by t hi s m e t hod and obs erved a l ar ge num be r of w el l—di sper s ed，cl ea r backgr ound，com pact t es t i cul ar m ei ot i c cl l r om os om e st r uct ur e of e ach phas e of t he di vi s i on，ge t be t t e r ex per i m ent al r es ult s．K ey w or ds ani m al gen et i cs；t est i cul a r cel l s；m ei osi s；cl l r om os om e；i m pr ovem ent遗传学既是一门历史悠久的学科，又是一门发展迅速、实践性很强的学科，研究范围正在不断拓宽和深化，新技术、新方法不断涌现。
小鼠生殖细胞染色体有带核型标本制备及带型分析.
实验四小鼠生殖细胞染色体有带核型标本制备及带型分析【实验原理及目的】真核体生殖细胞的形成是采取一种特殊方式的细胞分裂,即减数分裂。
在这一过程中,染色体只复制一次而核连续分裂两次,从而使细胞染色体数目减半。
本实验以小鼠精巢为实验材料,掌握小鼠精巢染色体及其有带核型标本的制作方法,了解不同带型的特点,观察减数分裂过程中不同时期染色体及细胞类型。
【实验材料及器具】性成熟的雄性小鼠、0.04%秋水仙素、2%柠檬酸钠、0.075mol/LKCl、冰醋酸、甲醇、pH6.8 磷酸缓冲液、pH6.8Giemsa 稀释液、0.1%胰酶溶液、0.1mol/LHCl、5%氢氧化钡溶液、2×SSC 溶液、天平、解剖器材、注射器、平皿、吸管、10ml 离心管、离心机、载玻片、染缸、水浴锅、恒温箱、恒温烤片仪、显微镜、显微照相设备、图片放大器材、胶卷、像纸及显定影器材等。
【实验方法及步骤】1.秋水仙素处理:取小鼠睾丸前3~4h,于小鼠腹腔内注入0.04%秋水仙素、每10g 体重注射0.1ml。
2.取细精小管:用断脊髓法处死动物,解剖取其睾丸置于2%柠檬酸钠溶液的平皿中。
然后用小剪刀剪开其外层白膜,用眼科镊子从睾丸中挑出细精小管,在平皿中用2%柠檬酸钠洗涤后置于5ml 2%柠檬酸钠溶液的离心管中。
3. 制备细胞悬液:待细精小管沉于离心管底后,用滴管头将细精小管研碎,经反复研磨和吹打,使处于减数分裂过程中的各期细胞游离于溶液中,弃大块膜状物制成细胞悬液。
4. 收集细胞:1500r/min 离心10min,弃上清,其沉淀物即是处于减数分裂过程中的各期细胞。
5. 低渗;.加0.075mol/LKCl 于离心管中,立即将沉淀物吹散打匀使细胞悬浮于离心管溶液中后,置37℃水浴低渗处理20min。
6. 固定:低渗处理后的细胞以1500r/min 离心10min,弃上清后,沿管壁加入新配甲醇-冰醋酸固定液(3:14ml。
立即将细胞团吹散打匀,置室温固定20min,即第一次固定。
小鼠骨髓和睾丸细胞在细胞生物学实验染色体制备中的应用比较
文章编号：2096-0387 (2018) 03-0081-03第4卷第3期 生物化工Vol.4 No.32018 年 6 月Biological Chemical EngineeringJun. 2018小鼠骨髓和睾丸细胞在细胞生物学实验染色体制备中的应用比较黄伟伟，李绍军，高梅，张斌(西北农林科技大学生命科学学院，陕西杨凌712100)摘要:染色体制备技术是细胞生物学的一项核心基础技术，也是高校细胞生物学实验常开的一项实验。
然而染色体制备 技术复杂，操作环节多，耗时长，影响因素多，在实际实验中获得理想染色体的成功率很低，因此需要进一步改进优化，提高成功 率，使学生真正掌握染色体标本的制备技术，了解染色体的数目以及形态特征。
本文比较了利用小鼠骨髓和睾丸细胞制备染色 体的优劣，并讨论了染色体制备过程中的注意事项和改进方法。
关键词：骨髓细胞；睾丸细胞；染色体制备 中图分类号：Q952文献标志码：AComparison of Mouse Bone Marrow Cells and Testicular Cells in the Cell Biology Experimentof Chromosomes PreparationHuang Wei-wei, Li Shao-jun, Gao Mei, Zhang Bin(College of Life Sciences, Northwest Agriculture and Forestry University, Shaanxi Yangling 712100)Abstract: The technique of chromosome preparation is one of the core technologies of cell biology, it is also an important experiment content of the cell biology experiment course in universities. However, chromosome preparation technology is complex, multiple operational taches, time consuming, and often influenced by many factors, the success rate for obtaining ideal chromosomes is very low in the actual experiment, so it needs to further improve and optimize the chromosomes preparation experiment to help students master the technology of chromosome preparation, and understand the morphology of chromosomes. This paper compared the advantages and disadvantages of mouse bone marrow cells and testicular cells using for chromosomes preparation, and discussed some precautions and improvement methods for chromosome preparation.Key words: Mouse bone marrow cells; Mouse testicular cells; Chromosomes preparation染色质是细胞遗传密码的物质载体，也是细胞代 谢和遗传活动的调控基础。
小鼠细胞染色体的制备与观察
固定
配平，离心 配平，
1000r/min.10’
处死小鼠 取睾丸， 取睾丸，分 离曲细精管 第一次低渗
0.4%KCl.37˚C.10ml. 2’
吸弃上清液 第二次低渗
吸弃上清，软化 吸弃上清，
60%冰醋酸.3ml.3’ 60%冰醋酸.3ml.3’
制片( 制片(滴1滴于冰冻 0.4%KCl.37˚C.10ml.5’ 载片上，分散，烘干) 载片上，分散，烘干) 吸弃上清液 Giemsa染色 Giemsa染色
遗传学实验
吴辉文
实验一、小鼠睾丸细胞 实验一、 染色体的制备与观察
一、实验目的
1、了解快速制备动物染色体的方法； 了解快速制备动物染色体的方法； 2、观察小鼠染色体的数目及其形态特征。 观察小鼠染色体的数目及其形态特征。
二、实验内容
秋水仙素处理
室温.固定Hale Waihona Puke 8ml. 室温.固定液8ml. 15’
小鼠染色体的制备观察染色
体的制备观察GE GROUP system office room [GEIHUA16H-GEIHUA GEIHUA8Q8-Life Science College实验报告姓名：柳伟雄学号：201300140062 班级：2013级生科一班 同组者：曾玮皤山东大学实验报告 2015年6月1日姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 同组者：曾玮墙 科目：细胞生物学实验 题目：小鼠染色体的制备、染色、观察 一、目的和要求1. 初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa 染色法，了解各操作步骤 的原理。
2. 了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3. 认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。
二、原理凡处于活跃増殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂， 均可用于染色体分析。
在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射 —定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法 制备染色体，细胞生物学即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：1.用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期，使中期染色体停留在赤道面处；2.用低渗法使细胞膨胀，以至于在滴片时细胞被胀破，使细胞的染色体铺展到载玻片上；3.空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平，经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。
主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
三、试剂和器材1•试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的立C1溶液）、0.3WKC1低渗溶液、固定液（甲醇:冰醋酸二3 : 1）、Giemsa染液Giemsa染液的配制:吉姆萨粉（Giemsa stain）甘油（AR）甲醇（AR）将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗粒为止，然后再分批加入甘油，放56/温箱中2h后，分批加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内（最好于0~4C。
简述小鼠染色体制备的流程
简述小鼠染色体制备的流程《简述小鼠染色体制备的流程嘿，小伙伴们，今天咱们就来唠一唠小鼠染色体制备这个有趣（嗯，有点复杂但又很奇妙）的流程。
首先呢，咱得逮住那只小老鼠。
这就像是一场小小的“抓捕行动”。
小鼠到处乱窜，仿佛知道自己即将面对一场特殊的“体检”。
把它抓住后，就要温柔又坚定地把它固定好，可不能让这个小机灵鬼捣乱哦。
然后，就是取骨髓的环节啦。
这一步感觉像是在小鼠的身体里挖掘宝藏般。
用合适的工具（比如注射器）小心地抽取骨髓细胞，就像采矿工人悄悄地开采珍贵的矿石一样。
这过程可得全神贯注，一点点偏差都不行，不然就会前功尽弃。
接着是细胞的低渗处理。
这时候我就想象成是给细胞做一个“温泉浴”，把细胞放到低渗溶液里，让细胞开始“飘飘然”起来，把它们的常态打乱，使得染色体能够更好地分散开来。
这“温泉浴”的时间可是相当关键，太短没效果，太长细胞可能就“泡坏”了。
再来就是固定环节啦。
就好像给染色体请了个严格的“保安”，用固定液让染色体保持现有的状态，乖乖地等待被观察。
这一步反复操作几次，确保染色体在这个过程中稳稳当当的。
随后呢，开始制作玻片。
把这些含有细胞的液体小心翼翼地滴到玻片上，轻轻吹动（这个场景就像是在给玻片上的细胞吹一阵微风，让它们分布得更均匀呢），让细胞完美地铺展在玻片上，这个过程充满了小心谨慎，每张玻片都是我们精心打造的“细胞小世界”的载体。
最后一步，当然就是染色啦。
选择喜欢的染色剂（就像给染色体挑选漂亮的衣服），一旦染上颜色，那一堆堆缠绕在一起的染色体就像是一条条色彩斑斓的彩带清晰地出现在我们眼前啦。
这样，小鼠的染色体就成功制备出来了，就像我们完成了一件超级微观世界的艺术品一样，有满满的成就感呢。
整个过程中，就像是在微观的世界里冒险，每一步都有惊喜或者是惊吓。
从抓小鼠的刺激，到最后成功看到染色体的欣慰，充满了各种奇妙的感受。
每一个步骤都得严谨对待，就像一场精细的魔法仪式，只要稍微出点小差错，那最后的结果可能就大打折扣啦。
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
大学课程遗传学实验小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察 JC课件
9.染色
10.镜检
【内容与方法】
1.动物预处理
• 4.预固定：现配固定液甲醇、冰
2.取材及收集细胞 醋酸（3：1）1ml，打匀，离心8分
3.低渗
钟（1000r/min），弃上清。
4.预固定
5.固定
6.再固定
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色 10.镜检
使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期，便于 观察
• 2.取材及收集细胞：颈椎脱臼法处
死小鼠，剪开后肢皮肤和肌肉，取出完整股骨，剔 除肌肉、肌腱，生理盐水洗净；剪去少许股骨头， 吸取4ml37℃预温0.075mol/L KCl低渗液冲洗两个
股骨的骨髓细胞至同一试管。
5.固定
6.再固定
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色
10.镜检
1.动物预处理 2.取材及收集细胞 3.低渗 4.预固定 5.固定 6.再固定 7.制备细胞悬液 8.滴片 9.染色 10.镜检
【内容与方法】
• 6.再固定：重复步骤5，本
次实验省略不做。
1.动物预处理
【内容与方法】
2.取材及收集细胞
3.低渗 4.预固定 5.固定 6.再固定
• 7.制备细胞悬液：倒净后重
新加适量固定液至半透明（或留 4~5滴 ） ，吸管缓慢打匀。
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色
10.镜检
【内容与方法】
1.动物预处理 2.取材及收集细胞 3.低渗 4.预固定 5.固定
3.低渗 4.预固定
，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察 到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色 体组型分析。
5.固定
如何做人的染色体制备？
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察
一、实验目的
1、了解快速制备动物染色体的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体的制备方法；
2、观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征；
3、掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。
二、实验原理
染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体（由于分裂旺盛）。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。
通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。
用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于分裂中期的细胞。
利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠睾丸细胞的染色体。
三、实验用品
解剖盘解剖剪镊子 10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜小鼠秋水仙素 0.3% KCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1） Giemsa染液 0.9%生理盐水
四、实验步骤
（一）标本的制备
1、取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法
杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。
2、放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。
3、用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。
37℃静置30分钟，
进行低渗处理。
以800～1000转/分离心8分钟。
4、弃上清液，加入2ml甲醇·冰醋酸固定液（3：1），并用吸管至管底吹气，
轻轻打散细胞，固定8分钟。
再以800～1000转/分离心8分钟。
5、弃上清液，加1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5分钟。
6、取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，
从载片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。
7、将玻片竖直放置于玻片盒中
一周后
（二）标本的染色与观察
1、用 Giemsa染色20 ～ 30分钟，采用倒置染色法：在玻璃板上用废旧玻
片做支架，使标本玻片的标本面朝下放置到支架上，在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液。
2、细水冲洗玻片背面，去多余染液，气干。
3、镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观
察染色体形态并计数。
五、实验结果
显微镜下（共有20个染色体）
所观察的细胞处于同一时期（分裂中期），即染色体螺旋化程度或染色体长短大致一样，小鼠染色体呈U形或V形在所观察的细胞周围，没有离散的单个或多个染色体存在。
染色体数目减半，推测是减数第二次分裂中期的细胞。
六、讨论与结论
1、离心务必要控制在800-1000r/min，过大会使细胞涨破，导致实验失败，时间也要控制，过长也会影响观察；
2、滴片时，玻片应是从冰水中取出，利于细胞分散。
距离一定高度滴下细胞悬液，并敲打，目的在于使细胞均匀分布和促进染色体展开；
3、采用倒置染色法，目的在于可使载玻片充分接触染液，若有杂质也可沉降至底部，不会和玻片直接接触。
作业：
总结染色体增加或减少的原因
1、滴片后敲打时用力过大，使部分染色体分散到其他区域，造成染色体数目的增加或减少。
2、精巢中存在发生减数分裂的细胞，有可能部分细胞处于减数第二次分裂中期，染色体数目为正常细胞的一半，为20。
3、极少可能，小鼠发生染色体数目变异。