蛋白水解度测定方法
蛋白质水解度的简易测定方法
蛋白质水解度的简易测定方法蛋白质水解度是指蛋白质在特定条件下被水解的程度。
测定蛋白质水解度的主要方法之一是采用“肽键长度”测定法。
以下是测定蛋白质水解度的简易方法及步骤：一、准备相关试剂和器材1.蛋白质溶液：你需要准备一定浓度的蛋白质溶液，以便进行后续的测定。
2.氢氧化钠溶液：用于中和蛋白质溶液中的酸。
3.茚三酮溶液：用于与肽键发生反应，生成紫色产物。
4.醋酸溶液：用于调节溶液的pH值。
5.滴定管和滴定剂：用于滴定蛋白质溶液中的游离氨基。
二、测定步骤1.调节溶液的pH值：用醋酸溶液调节蛋白质溶液的pH值至4.5～5.0之间。
这个pH范围是蛋白质中肽键与茚三酮反应的最佳条件。
2.加入茚三酮：向蛋白质溶液中加入一定量的茚三酮溶液，充分混合后静置10～15分钟。
3.加热：将混合液加热至100℃左右，保持加热状态数分钟，使反应完全。
4.中和：待混合液冷却后，用氢氧化钠溶液调节pH值至9～10之间，使混合液呈现碱性。
此时，未水解的氨基与茚三酮反应生成的产物会转变为黄色。
5.滴定：使用滴定管，用已知浓度的盐酸滴定混合液中的游离氨基，直至颜色变化为粉红色。
这个过程需要耗费一定的时间。
6.计算肽键长度：通过滴定所消耗的盐酸浓度和体积，可以计算出混合液中游离氨基的浓度。
再根据蛋白质中氨基酸的结构通式，可以计算出肽键长度。
三、注意事项1.在调节pH值时，要注意细致地使用精密的pH试纸或酸度计进行测量，以保证结果的准确性。
2.在加入茚三酮后，要充分混合并静置一段时间，以确保反应完全。
3.在加热过程中，要确保混合液受热均匀，并保持适当的加热时间以确保反应完全。
4.在滴定过程中，要保证滴定管的清洁度，避免因滴定剂污染而影响结果的准确性。
同时，需要多次摇晃混合液，以确保滴定剂与游离氨基充分反应。
5.在计算肽键长度时，需要考虑到蛋白质中不同氨基酸的构象和结构通式。
同时，还要注意温度和离子强度等因素对肽键长度的影响。
综上所述，测定蛋白质水解度的简易方法是可行的。
蛋白质水解物水解度的测定
蛋白质水解物水解度的测定
蛋白质水解物水解度是指蛋白质的分解能力，反映其特定化学和物理状态的能力。
它是饮食营养研究，氨基酸、肽链分离研究，腺体功能研究以及蛋白质工程及其他各种研究的重要指标。
因此，测定蛋白质水解物水解度对科学技术和医药卫生研究有着重要的意义。
蛋白质水解物水解度的测定主要是利用蛋白质的有机化学性质，用吡咯烷醇法、酸碱回流法或乙溴脩乙腈法等有效分析方法进行测定，因而在分析中不仅要测定蛋白质溶液中含有量有多少，还要根据技术参数判断抽样物质的水解情况。
吡咯烷醇法测定蛋白质水解物水解度通常是先用乙酸乙酯将抽取物中粗品脂肪
酯化，然后用硫酸银电泳池分别测定溶液中的可混溶蛋白和不混溶蛋白，最后利用其峰图的光谱图所显示的结论，来评定蛋白质水解物的水解度。
酸碱回流法测定蛋白质水解物水解度，主要是用恒定pH值的溶液将抽取物溶解，通过混合溶液中可溶蛋白和不溶蛋白，在紫外分光光度计上测定混合液中可溶性蛋白含量，来评价蛋白质水解物的水解度。
乙溴脩乙腈法测定蛋白质水解物水解度，主要是先使抽取物经过乙溴脩乙腈处理，将不溶性蛋白和其有机混合物分流，再用阴离子交换树脂将其树脂柱状分离，最后通过吸光度光谱测定乙溴脩乙腈处理后，抽样物质的可混溶蛋白含量，以评定其水解度。
以上是蛋白质水解质水解度测定方法，它是检测蛋白质结构及其分解情况的有
效方法，是蛋白质工程与医药生物技术研究的重要参考。
因此，正确准确的测定技术必须被正确使用，以确保研究成果的可靠性。
蛋白质水解度的测定
参考文献
[ 1] Alder- Nissen J. Determination of the Degree of Hydrolysis of Food Protein Hydrolysates by T rinitrobenzenesulfonic Acid [ J] . J. Agric Food Chem. , 1979, 27: 1256) 1262
[ 4] Qin- yun Chen. Effect of Amide contents in wheat gluten hydrolysates on the thermal flavor generation, ph. D. thesis, Rutgers university, U. S. A, 1995: 54) 56
茚三酮比色法( 完全水解液做标准) 1715 2413 2816
附图 不同方法测定的水解度
3 结果和讨论
311 结果 为了验 证此 种 方法 的可 行性, 本 研 究用 Fla-
vorzyme 对菜籽蛋白进行水解, 用同一种水解液采用 10% 三氯乙 酸沉淀法、甲醛滴 定法[ 2] 、茚三 酮比色 法[ 2] 和本文所介绍的方法分别进行测定, 结果见附 图和附表。 312 讨论
蛋白质水解度的简易测定方法_袁斌
文章编号:10083464(2002)02011303蛋白质水解度的简易测定方法袁斌1,吕桂善2,刘小玲2(1深圳市成业冷冻有限公司,广东深圳518019;2广西大学生物技术与糖业工程学院,广西南宁530004)摘要:介绍了一种比较简单可行的蛋白质水解度的测定方法,该方法基于国外通用的pH ST A T 法,不需要特别的仪器,化学试剂耗量少,测定结果可靠,便于实验室和工业化生产使用。
关键词:蛋白质;水解度;pH ST A T 法中图分类号:T Q 936.1 文献标识码:AThe simple method of determining for the degree ofhydrolysis of proteinsYU ANG Bin 1,LU Gui shan 2,LIU Xiao ling2(1Shenzhen Cheng ye Freeze Cor por ation Limited,Shenzhen 518019,China;2Biotechnolog y and Sug ar Engineering Colleg e ,Guangx i U niv .,Nanning 530004,China )Abstract :A simple and w orkable method ,w hich w as based o n pH STAT method ,fo r deter-mining the deg ree of hydr olysis o f pro tein ,was intr oduced in the present paper.This metho d can be used in lab and food industry w ith g ood results and little reagents consumptions.Key words :pro tein;deg ree of hydr olysis;pH ST AT Method蛋白质是人体必不可少的营养素,在人体的代谢和生长过程中起着十分重要的作用。
蛋白水解度测定方法
蛋白水解度测定方法蛋白水解度（Protein Hydrolysis）是指蛋白质在特定的水解条件下被分解的程度。
测定蛋白水解度的方法有很多种，以下是其中几种常见的方法：1.肽图分析法（Peptide Mapping）肽图分析法是一种通过蛋白质在特定条件下水解得到的肽片段的分离和鉴定，来推断蛋白质序列和结构信息的方法。
该方法的原理是，不同的肽片段与固定相的结合能力不同，从而可以在色谱柱上分离出不同的肽片段。
通过对这些肽片段的分析，可以得到蛋白质的一级结构信息，进而计算出蛋白质的水解度。
2.游离氨基含量法（Free Amino Acid Content）游离氨基含量法是通过测定蛋白质水解液中游离氨基的含量，来计算蛋白质的水解度。
该方法的基本原理是，蛋白质水解后生成的游离氨基酸与某些特定的试剂反应，生成有色产物，通过测定有色产物的吸光度，可以得出游离氨基酸的含量。
根据游离氨基酸的含量，可以计算出蛋白质的水解度。
3.肽谱法（Peptide Mass Spectrometry）肽谱法是通过分析蛋白质水解液中肽片段的质量，来推断蛋白质的序列和结构信息。
该方法的基本原理是，不同的肽片段在质谱仪中碎裂后产生不同的离子峰，通过对这些离子峰的分析，可以得出肽片段的质量。
根据肽片段的质量，可以推断出蛋白质的序列和结构信息，进而计算出蛋白质的水解度。
4.生物化学法（Biochemical Methods）生物化学法是通过研究蛋白质在生物体内的代谢过程，来推断蛋白质的水解度。
该方法的基本原理是，蛋白质在生物体内的代谢过程受到许多因素的影响，如酶的活性、底物的浓度、代谢途径等。
通过对这些影响因素的研究，可以推断出蛋白质的水解程度。
5.免疫学法（Immunological Methods）免疫学法是通过检测蛋白质在生物体内的免疫原性，来推断蛋白质的水解度。
该方法的基本原理是，蛋白质在生物体内的免疫原性与其分子量、构象等因素有关。
4种大米蛋白水解度测定方法比较
DOI ：10.16465/431252ts.201705104种大米蛋白水解度测定方法比较李皖光，汪桃花，王新文，季一顺（安徽省粮油产品质量监督检测站，合肥安徽230031）Science and Technology and Economy［摘要］采用pH-stat 法、甲醛滴定法、茚三酮比色法和TCA 指数法4种方法，检测了碱性蛋白酶在一定底物浓度和工艺条件下大米蛋白水解度的变化，并进行了较为深入的对比。
结果表明：在固定水解条件下，4种方法检测结果所反映蛋白质水解度的变化规律均符合碱性蛋白酶的酶解变化过程。
4种检测方法中，TCA 指数法测定的水解度偏高，与其他3种方法的差异较大，而pH-stat 法、甲醛滴定法和茚三酮比色法的结果相差不大，均具有较高的准确度。
［关键词］碱性蛋白酶；大米蛋白；水解度；pH-stat 法；甲醛滴定法；茚三酮比色法；TCA 指数法收稿日期：2017-09-02作者简介：李皖光，男，硕士，工程师，主要从事粮食安全与质量检测工作。
通信作者：季一顺，男，教授级高级工程师，主要从事粮油食品安全卫生指标研究。
大米蛋白具有合理的氨基酸组成，较高的生物利用率及低过敏性等特点，受到科研人员的高度重视，各种针对大米蛋白的提取方法和应用方法层出不穷，相关的功能产品也被不断的开发。
其中，使用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶等在一定条件下水解大米蛋白，使其转换为可溶性的肽，提高了蛋白质的溶解性，成为大米蛋白研究的主流方向之一[1]。
蛋白质经酶水解有助于改善其营养价值和功能特性，在水解过程中，产物的质量控制对其应用特性的影响是极为重要的。
为了获得理想的特殊风味和功能特性，需要严格控制大米蛋白的水解程度。
蛋白质水解度是衡量蛋白质水解程度的重要指标[2]。
目前测定蛋白质水解度的方法主要有pH-stat 法[3]。
甲醛滴定法[4—5]和茚三酮比色法[6]等。
不同的检测方法导致最终结果的偏差较大，有关几种检测方法的对比和差异少有报道。
蛋白质水解度测定方法综述
使用荧光光度计在吸收波长为 ３４０ ｎｍ 条件下测
法，采用本方法测定蛋白质水解度时，不需要经典的 定衍生物的荧光度。水解度的计算公式：
ｐＨ－ ｓｔａｔｅ 法那样，对反应体系的 ｐＨ 值进行在线控制，
ＤＨ＝１００ｎ／Ｎ
而只需在水解结束后将反应体系的 ｐＨ 调至 ７．０，并记
式中：ｎ 代表牛乳蛋白水解后肽键的平均数，Ｎ 代
原料大豆中游离氨基酸进行测定，计算如下：
４ 小结
ＤＨ＝ 水解蛋白质的７－．８（ＮＨｍ２ｍ含ｏｌ量／ｇ）－ ０．３３（ｍｍｏｌ／ｇ）×１００ ％
其中：０．３３ 是原料大豆样品中游离氨基含量，可根 据自己样品测定值代入。
但是由于不同氨基酸和水合茚三酮显色不同，对 测量结果有部分偏差，例如脯氨酸和羟脯氨酸与茚三 酮反应产生黄色物质，因其 α－ 氨基被取代，所以产生 不同的衍生物。郭兴凤［１３］利用待水解原料的完全水解 液作为标准， 消除了由于不同氨基酸与茚三酮结合产
蛋白质由不同的氨基酸通过肽键相连所组成，在 这些氨基酸中一部分可以由人体自己合成，称为非必 需氨基酸；而另外约有八种氨基酸必需由食物供给， 称为必需氨基酸。食物中如含有全部的必需氨基酸， 而且数量又多，这种食物蛋白质营养价值就高。但是， 存在一个问题，就是如何使蛋白质或氨基酸更有利于 人体的吸收，因此国内外通过对此进行大量的研究表 明：蛋白质通过水解，水解为二肽或三肽的产物在人 体内要比自由氨基酸易于吸收，比没有水解的蛋白质 更易于吸收［１］。因此在用不同的蛋白质酶对蛋白质进 行水解时，必须要对水解度进行测定。
在水解过程中，当肽键断裂后，就会有一个新的 － ＣＯＯＨ 和 － ＮＨ２ 形成，因此，水解肽键的数，就可以根 据水解后测定新形成的末端 － ＣＯＯＨ 或 － ＮＨ２ 基团的 量确定。
食用蛋白质水解度的改良测定方法
食用蛋白质水解度的改良测定方法摘要：当制备水解蛋白的时候，测定水解度（DH）是至关重要的。
已建立的三硝基苯磺酸（TNBS）发被认为是测定酶水解度的常用方法。
然为，三硝基苯磺酸法费时费力，不能连续的测定水解反应程度，并且需要使用有危险不安全的化学试剂。
本文阐述了一种基于基本氨基酸与邻苯二甲醛（OPA）反应的水解度测定方法。
结论是使用OPA法测定蛋白质的水解度更准确，方便，迅速，有更为广泛的使用范围，并且较之TNBS方法更环保。
关键词：水解度，食用蛋白，水解，蛋白质水解，测定介绍在蛋白质水解物当中，检测反应的一个关键参数就是水解度（DH）。
DH值呗定义为断开的肽键的百分比：DH=h/h tot*100%试中htot是每蛋白质当量中肽键总数，h是被水解的肽键数。
Htot是取决于原料的氨基酸组成。
在各种文献中，人们已经建立了几种测定蛋白质水解物DH值的方法，例如pH-stat法，渗压法，可溶性氮法以及三硝基苯磺酸（TNBS）法。
pH-stat法（Jacobsen 等，1957）测定DH值是基于一种基准物（或是由于水解物pH值变化产生的酸）来保持水解过程中的pH值。
基准物质的使用量与DH值是成比例的。
在实际的蛋白质水解试验中，Ph-stat法的使用仅限于pH略高于7的条件下（Adler-Nissen,1986）。
当水解反应的DH值达到约30%时，采用Ph-stat法来测定水解度并不经济可行，在pH>7的单一酶反应系统中使用该方法是不可取的。
这将使最适pH值低于7的酶不适用Ph-stat法。
另外，在水解反应当中添加基准物可能会导致最终产物的使用不尽如人意。
在水解反应当中，混合物冰点的降低值可以通过渗压计（冰点测定器）来测得。
这与DH值是相关的（Adler-Nissen,1984）.渗压法是一种可以在多种反应当中使用的快速方法。
这种方法的限制之处就在于它不能测定粘度大的溶液及溶质溶解度高的溶液，例如在长期反应当中作为防腐剂的盐。
一种测定大豆蛋白质水解度的简易方法_邹险峰
第20卷第6期长春大学学报V o.l20N o.6 2010年6月J OU RNAL OF CHANGCHUN UN I VER SI TY June2010一种测定大豆蛋白质水解度的简易方法邹险峰,陈星,高长城(长春大学农产品深加工吉林省普通高校重点实验室,吉林长春130022)摘要:介绍了一种新的测定大豆蛋白质水解度的方法,G-25色谱层析法。
该方法利用快速蛋白纯化系统将大豆蛋白水解多肽溶液进行G-25色谱层析,根据蛋白峰和肽峰面积计算蛋白质的水解度,并与甲醛滴定法进行了比较。
结果表明,G-25色谱层析法测定的大豆蛋白水解度略低于甲醛滴定法。
该方法快速、简便,可以普遍适用于各种蛋白质水解度的测定。
关键词:大豆蛋白质;水解度;G-25色谱层析中图分类号:S56511;Q51文献标志码:A文章编号:1009-3907(2010)06-0025-04大豆蛋白质是目前最重要的植物蛋白源,含有人体需要的全部8种必需氨基酸,且比例合理,氨基酸含量与动物蛋白相似,特别是赖氨酸含量可达到动物蛋白水平。
但是,大豆蛋白质分子量大,溶解度低,含有腹胀因子、胰蛋白酶抑制剂、血球凝集素等抗营养因子,易受温度、酸碱度等理化因素影响,且有一定的抗原性,消化率和生物利用率都远远不及鸡蛋和牛奶等动物蛋白质。
大豆多肽是大豆蛋白质经蛋白酶水解而成的多种低分子量多肽混合物,通常由3~6个氨基酸组成,其分子量主要分布在1000Da左右。
大豆多肽具有与大豆蛋白质相同的氨基酸组成,消除了对人体有害的各种抗营养因子,抗原性更低,溶解性极佳,易吸收,还具有提高免疫力、抗疲劳、降低胆固醇等多种生理功能。
因此,大豆多肽正在被广泛研究并应用。
在实际生产过程中,采用水解度(Degree ofH ydrlysis,DH)来反映大豆蛋白质的水解程度,作为重要的产品质量检定标准。
水解度通常定义为:DH=h/h tot@100%式中h为水解后每克蛋白质被裂解的肽键毫摩尔数(m#m o l/g),h to t为每克蛋白质的肽键毫摩尔数(m#m o l/g)。
蛋白质水解度的测定方法研究
蛋 白质是一种高营养化合物， 但是从对人体作用
来说， 它不 如氨基 酸利 于 人 体 的 吸收 ， 因此 ， 为 了提 高 蛋 白质 的功 效 ， 往 往 需要 将 其 水 解 。蛋 白质 这种 高 分
子 化合 物是 由无 数个 氨 基 酸通 过 肽键 缩 合 而成 ， 它 可 以通 过化 学方 法水解 ， 也 可 以通过 蛋 白酶 进 行 催化 水
Ｓ Ｏ ｔ ｈ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｉ ｓ ｎ ｏ ｔ ｄ ｅ ｓ ｉ ｒ ａ ｂ ｌ ｅ ．Ａｃ ｉ ｄ － ｓ ｏ ｌ ｕ ｂ ｌ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｂ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｂ ｙ ｔ ｒ ｉ ｃ ｈ ｌ ｏ —
关 键词 ： 甲醛滴定 法 ； 茚三 酮法 ； 三氯 乙酸法
中图分 类号 ： Ｔ Ｓ ２ ０ １ ． ２ １ 文献 标志码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ０ － ９ ９ ７ ３ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ３ ． ０ ２ ２ 文章编 号ห้องสมุดไป่ตู้： １ ０ ０ ０ － ９ ９ ７ ３ （ ２ Ｏ １ ４ ） Ｏ ３ 一 ｏ ０ ８ ８ 一 Ｏ ３
（ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ，Ｎｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ａ ｓ ｔ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｈ ａ ｒ ｂ ｉ ｎ １ ５ ０ ０ ３ ０ ，Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
蛋白质水解度测定方法综述_徐英操
ｈｏ ｈｏ
×１００
式中：ｈｓ 和 ｈｏ 分别代表 ＷＰＩ 水解产物中和没进行
水解的 ＷＰＩ 中氨基酸浓度；ｈｔ 代表用 ６ ｍｏｌ／Ｌ 盐酸完全
水解 ＷＰＩ 产物中总的氨基酸的浓度。没有酶的没水解
的蛋白质溶液视为 ０ ％ＤＨ。
ｐＫ＝ｐＨ２＋ｌｏｇ（ｂ２－
ｂ１）－
ｌｏｇ（１０
ｐＨ － ２
ｐＨ１×ｂ２－
综述
食品研究与开发
２００７．Ｖｏｌ．２８．ＮＯ．０７ １７５
解，放出氨和二氧化碳，氨基酸生成醛，水合茚三酮则 ３．２ 水溶性蛋白质的测定
生成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中，还原型茚三酮、
蛋白质通过酶水解，形成易溶解的小分子的多肽
氨和另一分子茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
溶液，使得溶解性增加，因此在一定程度上，水解度的
根据水解度的定义如果直接用水解后游离氨基总 增加及可溶性蛋白的含量也可以用来表征蛋白质水解
含量计算水解度，由于用水合茚三酮显色法无法判断 的程度。测定水溶性蛋白质的方法很多，有福林 － 酚
水解后的游离氨基是原样品中本来就含有的还是经水 法、双缩脲法、考马斯亮蓝等。
解产生的，因此，赵新淮，冯志彪［１２］对此进行研究，并对
肽键数，这里的 ｈ 和 ｈｔｏｔ 单位经常用 ｍｍｏｌ／ｇ 表示。对于 一个特定的蛋白质，ｈｔｏｔ 是一个常数，一般采用文献中 的经验值，比如：大豆蛋白质的 ｈｔｏｔ 值为 ７．８ ｍｍｏｌ／ｇ，酪 蛋白质的 ｈｔｏｔ 值为 ８．２ ｍｍｏｌ／ｇ，也可以根据蛋白质中氨 基酸的组成成分计算得到［２］。
蛋白质由不同的氨基酸通过肽键相连所组成，在 这些氨基酸中一部分可以由人体自己合成，称为非必 需氨基酸；而另外约有八种氨基酸必需由食物供给， 称为必需氨基酸。食物中如含有全部的必需氨基酸， 而且数量又多，这种食物蛋白质营养价值就高。但是， 存在一个问题，就是如何使蛋白质或氨基酸更有利于 人体的吸收，因此国内外通过对此进行大量的研究表 明：蛋白质通过水解，水解为二肽或三肽的产物在人 体内要比自由氨基酸易于吸收，比没有水解的蛋白质 更易于吸收［１］。因此在用不同的蛋白质酶对蛋白质进 行水解时，必须要对水解度进行测定。
蛋白水解度测定方法
蛋白水解度(DH测定方法—OPA法一、定义水解度(DH是指蛋白质中被水解的肽键占总肽键的百分比。
其基本计算公式如下:DH=被水解的肽键数蛋白质总肽键数×100%=hhtot×100%h tot的值根据不同的底物蛋白会有所不同,h是用等价serine NH2表示的。
ℎ=Serine NH2−βαmeqv/g protein更多α,β,htot的精确数值请参见备注。
此处的DH是指样品相对于原始底物的水解度,如果要计算水解反应前后的水解度,需要使用如下公式:DH=h1−h0htot×100%h0: 水解反应前样品相对原始底物的水解度;h1: 水解反应后样品相对原始底物的水解度。
二、原理OPA(邻苯二甲醛法测定蛋白质水解度的原理是OPA在β-巯基乙醇的存在下会与自由α-氨基形成黄色化合物,其在340nm处有特征吸收,用分光光度计可检测其OD值。
实际使用中1,4二巯基苏糖醇(DTT比β-巯基乙醇更易使用。
三、试剂测试所需试剂及设备如下:硼砂(CAS 1303-96-4 AR十二烷基硫酸钠(SDS, CAS 151-21-3 AR邻苯二甲醛(OPA,CAS 643-79-8,纯度97%(sigma1,4-二巯基苏糖醇(DTT,CAS 3483-12-3,纯度99%(sigma丝氨酸(serine标准品(CAS 302-84-1(sigma紫外可见分光光度计(可测340nm吸光值容量瓶100ml,200ml,500ml各数个10ml测试管数个3.1 OPA试剂A1. 将7.620g硼砂(CAS 1303-96-4和200mg十二烷基硫酸钠(SDS溶解于150ml去离子水中。
溶解完全后方可加入其他试剂。
A2. 将160mg邻苯二甲醛(OPA,纯度97%溶解于4ml无水乙醇中。
溶解完全后将此OPA溶液转移至上述A1溶液中,并用去离子水冲洗,转移。
A3. 将176mg 1,4-二巯基苏糖醇(DTT,纯度99%加入到A1溶液中,去离子水冲洗,转移。
大豆蛋白水解物水解度测定的研究
大豆蛋白水解物水解度测定的研究引言：大豆蛋白是一种重要的植物蛋白资源，具有丰富的营养价值和广泛的应用前景。
而大豆蛋白水解物作为大豆蛋白的加工产物，其水解度对其功能性和应用性能起着重要影响。
因此，本研究旨在通过测定大豆蛋白水解物的水解度，探究其在食品、医药等领域的应用潜力。
一、大豆蛋白水解物的定义与性质大豆蛋白水解物是通过蛋白水解酶对大豆蛋白进行水解得到的产物。
其主要成分是多肽和游离氨基酸，具有良好的营养价值和生理功能。
二、大豆蛋白水解物水解度的测定方法1. 琼脂糖电泳法：利用琼脂糖凝胶电泳技术，根据不同水解程度的大豆蛋白水解物在电泳板上的迁移距离差异，来评估其水解度。
2. 高效液相色谱法：通过对大豆蛋白水解物中不同分子量多肽的分离和检测，来确定其水解度。
3. 紫外吸收光谱法：根据大豆蛋白水解物在特定波长下的吸光度变化，来推测其水解程度。
三、大豆蛋白水解物水解度的影响因素1. 水解酶种类和用量：不同种类和用量的水解酶对大豆蛋白的水解效果有显著影响。
2. pH值和温度：适宜的pH值和温度可提高水解酶的活性，进而影响大豆蛋白的水解度。
3. 反应时间：较长的反应时间有助于提高大豆蛋白的水解程度。
4. 大豆蛋白浓度：适宜的大豆蛋白浓度可以提高水解酶的利用率和水解度。
四、大豆蛋白水解物水解度的应用1. 食品领域：大豆蛋白水解物可作为功能性食品添加剂，提高食品的营养价值和口感。
2. 医药领域：大豆蛋白水解物具有抗菌、抗氧化、降血压等多种生理功能，可以应用于药物的研发和制备。
3. 养殖领域：大豆蛋白水解物在动物饲料中的应用可以提高饲料的蛋白质利用率和动物的生长性能。
结论：通过测定大豆蛋白水解物的水解度，可以评估其在食品、医药等领域的应用潜力。
水解酶种类和用量、pH值和温度、反应时间以及大豆蛋白浓度等因素都会对大豆蛋白的水解度产生影响。
大豆蛋白水解物在食品、医药和养殖等领域具有广阔的应用前景，可以为人们的生活和健康带来积极的影响。
蛋白质水解度的测定方法研究
蛋白质水解度的测定方法研究一、本文概述蛋白质作为生命活动的重要物质基础，其水解度的测定对于理解蛋白质的结构与功能、评估蛋白质在生物体内的代谢状态以及优化蛋白质的加工利用等方面具有重要意义。
本文旨在探讨蛋白质水解度的测定方法，包括其定义、影响因素、测定原理以及常用的测定方法，并对各种方法的优缺点进行比较分析。
通过本文的阐述，旨在为相关领域的研究者提供一套全面、系统的蛋白质水解度测定方法参考，推动蛋白质水解度研究的深入发展。
本文将明确蛋白质水解度的定义，即蛋白质在特定条件下被水解成氨基酸或多肽的程度。
接着，分析影响蛋白质水解度的主要因素，包括水解条件、酶的种类和活性、底物浓度等。
在此基础上，探讨蛋白质水解度测定的基本原理，涉及水解反应的速率控制和产物分析等方面。
本文将详细介绍常用的蛋白质水解度测定方法，包括滴定法、色谱法、电泳法以及近年来新兴的光谱法等。
每种方法都将从其原理、操作步骤、适用范围以及优缺点等方面进行阐述。
同时，通过对各种方法在实际应用中的案例分析，为研究者提供具体、实用的参考。
本文将对各种蛋白质水解度测定方法进行综合评价，比较它们的优缺点，并提出针对性的改进建议。
展望蛋白质水解度测定方法的发展趋势，以期为相关领域的研究提供新的思路和方法。
通过本文的论述，希望能够为蛋白质水解度测定方法的研究提供有益的参考和借鉴，推动相关领域的研究和发展。
二、蛋白质水解度测定方法概述蛋白质水解度的测定是了解蛋白质在特定条件下的降解程度，对食品、医药、饲料等领域的产品质量控制和工艺优化具有重要意义。
目前，蛋白质水解度的测定方法主要包括化学法、光谱法、色谱法以及电化学法等。
化学法是最早用于测定蛋白质水解度的方法之一，主要利用水解产生的氨基酸与特定试剂反应，通过比色或滴定等方式确定水解程度。
这类方法操作简便，但准确性受多种因素影响，如反应条件、试剂纯度等。
光谱法利用蛋白质或其水解产物在特定波长下的吸光性质，通过测定吸光度值来计算水解度。
蛋白水解物水解度测定方法的研究
蛋白水解物水解度测定方法的研究一、本文概述本文旨在深入研究并探讨蛋白水解物水解度的测定方法。
蛋白水解物，即蛋白质经过水解反应后的产物，其水解度的测定对于了解蛋白质的结构与功能、优化蛋白质水解工艺以及评估蛋白质水解产物的营养价值具有重要意义。
因此，本文将从多个方面对蛋白水解物水解度的测定方法进行系统研究，以期为提高蛋白水解物质量评价和工业生产过程的优化提供理论依据和技术支持。
具体而言，本文将首先综述现有的蛋白水解物水解度测定方法，包括化学法、光谱法、色谱法等，并分析其优缺点和适用范围。
在此基础上，本文将重点研究基于现代分析技术的水解度测定新方法，如高效液相色谱法、质谱法等，以提高测定的准确性和灵敏度。
本文还将关注水解度测定过程中的影响因素，如温度、pH值、水解时间等，以揭示其对水解度测定结果的影响规律。
通过本文的研究，期望能够为相关领域的研究人员和技术人员提供一套系统、全面的蛋白水解物水解度测定方法，以推动蛋白质水解技术的不断发展和应用领域的拓展。
二、蛋白水解物水解度测定方法概述蛋白水解物水解度的测定对于了解蛋白质在生物体内的消化、吸收和代谢过程，以及优化蛋白酶的催化效率具有重要意义。
水解度是描述蛋白质被水解成氨基酸或多肽的程度，其测定方法主要基于水解产物的分析。
目前，常用的蛋白水解物水解度测定方法主要包括化学法、光谱法和色谱法。
化学法主要利用氨基酸与某些化学试剂的特异性反应来测定水解产物的量，如茚三酮法和甲醛滴定法。
这些方法操作简便，但精度相对较低，且易受干扰。
光谱法如紫外-可见光谱法和荧光光谱法，通过测定水解产物在特定波长下的吸光度或荧光强度来推算水解度。
这种方法灵敏度高，但需要对样品进行预处理，且可能受到其他物质的干扰。
色谱法如高效液相色谱法（HPLC）和氨基酸自动分析仪，能够对水解产物进行分离和定量分析。
这些方法准确性高，但操作复杂，成本较高。
近年来还出现了一些新的测定方法，如基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法，以及利用近红外光谱、拉曼光谱等现代光谱技术的方法。
蛋白质水解度快速定性测定
蛋白质水解度快速定性测定
一、原理
具有两个或两个以上的肽键的化合物都具有双缩脲反应。
肽黄金中小分子蛋白与铜离子结合形成紫红色复合物，豆粕及大豆浓缩蛋白中的大分子蛋白质则与铜离子形成紫色复合物。
本方法适合于大豆蛋白，能够快速的比较肽黄金与大豆浓缩蛋白以及原豆粕中蛋白质分解度的差异。
二、试剂
1、10%NaOH溶液
2、0.1g/ml硫酸铜溶液
三、测定步骤
1、样品处理：将样品碾碎，称取过200目筛样品50mg，装入
比色管；
2、加1ml蒸馏水，摇匀；
3、加10%NaOH溶液1ml，混合均匀；
4、加1滴0.1g/ml硫酸铜溶液，迅速摇匀，对着目光灯观察颜
色变化。
四、判定
大豆浓缩蛋白或豆粕：蓝色或兰紫色
肽黄金：紫红色。
蛋白质水解度的简易测定方法
蛋白质水解度的简易测定方法1.实验原理：蛋白质水解度的测定方法通常基于蛋白质中的特定氨基酸残基（如酪氨酸）在酸性和碱性条件下发生水解产生的特定产物的定量测定。
本实验基于酸性条件下酪氨酸的水解反应，通过测定水解后产生的酪氨酸相关物质的含量来计算蛋白质水解度。
2.实验步骤：步骤1：样品制备称取适量的待测蛋白质样品，加入一定体积的适宜浓度的酸性溶液（如6MHCl），并通过搅拌使蛋白质样品均匀分散。
将样品置于恒温水浴中，在一定的酸性条件下进行水解反应。
步骤2：样品处理在水解反应结束后，取出样品并进行处理。
将样品中的酸成分中和，通常使用适量的氢氧化钠溶液进行中和。
同时，可添加适量的酸性指示剂进行中和状态的可视化判断。
步骤3：产物分析将处理后的样品转移至分析容器中，并适当稀释。
利用合适的分析方法，如紫外可见光谱法、高效液相色谱法（HPLC）或毛细管电泳等分析方法，测定样品中特定产物（如酪氨酸）的含量。
步骤4：计算水解度根据上一步骤中测得的特定产物的含量，结合待测蛋白质的初始浓度和水解反应的体积等参数，可计算蛋白质的水解度。
水解度的计算公式如下：水解度（%）=（水解产物浓度/总蛋白质初始浓度）×100%3.实验注意事项：-实验中的酸性条件需要根据待测蛋白质的特性和水解反应的要求进行调整，确保水解反应的有效进行。
-在中和步骤中，应严格控制中和剂的用量，以避免影响产物浓度测定的精确性。
-在产物分析步骤中，要选择合适的分析方法，并注意样品预处理的影响，以确保分析结果的准确性和可靠性。
-实验过程中需要进行严格的操作控制，避免误差的引入，影响实验结果的准确性。
4.结论：本实验介绍了一种简易测定蛋白质水解度的方法。
通过在酸性条件下进行水解反应，并测定水解产物的含量，可以计算蛋白质的水解度。
这种方法具有简单、快速、准确的特点，适合于大规模的蛋白质水解度测定。
但需要注意实验操作的精确性和条件的合理性，以确保实验结果的可靠性和准确性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
将 400ul 丝氨酸标准溶液加入到一个装有 3mlOPA 试剂的测试管中（时间点 0）， 混合均匀（5S）后精确静置 2min 后立即读取 340nm 的吸光值。
在测空白和样品值之前测 2 个标准品，另 2 个标准品在测完空白和样品后再测。标 准品的吸光值取 4 次的平均值。
一般情况下 ODstand.≈0.8
������
更多 α，β，htot 的精确数值请参见备注。 此处的 DH 是指样品相对于原始底物的水解度，如果要计算水解反应前后的水解度，需要 使用如下公式：
h1 − h0 DH = htot × 100%
h0: 水解反应前样品相对原始底物的水解度； h1: 水解反应后样品相对原始底物的水解度。
二、 原理 OPA（邻苯二甲醛）法测定蛋白质水解度的原理是 OPA 在 β-巯基乙醇的存在下会与自由 α氨基形成黄色化合物，其在 340nm 处有特征吸收，用分光光度计可检测其 OD 值。实际使 用中 1，4 二巯基苏糖醇（DTT）比 β-巯基乙醇更易使用。
3.2 丝氨酸标准溶液 将 50mg 丝氨酸（serine）溶解于 500ml 去离子水中。此溶液中 Serine-NH2 约为 0.9516 meqv/L.
3.3 样品溶液
将 Xg 样品溶解于 100ml 去离子水中，X 的值在 0.1～1.0 之间。
如果样品蛋白含量为 80%，则 X 取 0.1g，如果样品蛋白含量为 8%，则 X 取 1.0g。
4. 样品测试 将 400ul 样品溶液加入到一个装有 3mlOPA 试剂的测试管中（时间点 0），混合均 匀（5S）后精确静置 2min 后立即读取 340nm 的吸光值。 因为吸光值会随时间变化，所以读取 OD 值的时间必须是同样的（2min）。
五、 计算
5.1 计算 h
Serine
NH2=
������������������������������������������������−������������������������������������������ ������������������������������������������.−������������������������������������������
蛋白水解度（DH）测定方法—OPA 法
一、 定义
水解度（DH）是指蛋白质中被水解的肽键占总肽键的百分比。其基本计算公式如下：
被水解的肽键数
h
DH = 蛋白质总肽键数 × 100% = htot × 100%
htot 的值根据不同的底物蛋白会有所不同，h 是用等价 serine NH2 表示的。 ℎ = ������������������������������������ ������������2−������ meqv/g protein
h=
������������������������������������ ������������2−������ ������
meqv/g
protein
各底物的 α 和 β 具体数值见附表。
如果未对底物进行测试，α 和 β 可按 1.00 和 0.40 粗略计算。
5.2 计算 DH
DH= ℎℎ1���−���������ℎ������0*100%
∗
0.9516meqv/L∗0.1∗100
������∗������
������/������������������������������������������������
Serine NH2 X P 0.1
meqv serine NH2/g protein g sample (0.1~1.0g) protein % in sample sample volume in L
3. 空白测试 将 400ul 去离子水加入到一个装有 3mlOPA 试剂的测试管中（时间点 0），混合均 匀（5S）后精确静置 2min 后立即读取 340nm 的吸光值。 测 4 次空白取平均值。一般情况下 ODblank≈0.07。 *如果用 5% SDS 溶液取样灭酶，则空白就是 5% SDS 溶液。
*水解实验中可取 100ul 水解样品加入到 900ul，5%（W/W）8℃以备测试。计算时注意蛋白浓度的变化。
四、 测试步骤
使用分光光度计测试所有样品的 340nm 吸光值，空白对照为去离子水。
1. 加 3ml OPA 试剂到所有的测试管中。 分析一个样品所需的测试管： 标准溶液 4 个 空白 4 个 样品溶液 2×2 个 每个样品须测 2 次，每次需有一个平行样，故需 4 个测试管。
h0: 水解反应前样品相对原始底物的水解度；
h1: 水解反应后样品相对原始底物的水解度。
备注： 大豆、面筋、酪蛋白、乳清、明胶、肉、鱼
OD 值在 0.2～1.2 之间的读数会比较准确，太小或太大精确度都会有影响。因此须注 意丝氨酸标准品浓度和样品中蛋白浓度是否合适。
Reference
P.M. Nielsen, D.Petersen, and C. Dambmann, 2001. Improved Method for Determining Food Protein Degree of Hydrolysis. Journal of Food Science Vol.66 NO.5 (642-646)
AR AR （sigma） （sigma） （sigma）
紫外可见分光光度计（可测 340nm 吸光值） 容量瓶 100ml，200ml，500ml 各数个 10ml 测试管数个
3.1 OPA 试剂
A1. 将 7.620g 硼砂（CAS 1303-96-4）和 200mg 十二烷基硫酸钠（SDS）溶解于 150ml 去离子水中。溶解完全后方可加入其他试剂。
A2. 将 160mg 邻苯二甲醛（OPA，纯度 97%）溶解于 4ml 无水乙醇中。溶解完全后 将此 OPA 溶液转移至上述 A1 溶液中，并用去离子水冲洗，转移。
A3. 将 176mg 1,4-二巯基苏糖醇（DTT，纯度 99%）加入到 A1 溶液中，去离子水冲 洗，转移。
A4. 用去离子水将 A1 溶液定容至 200ml. 此试剂现配现用。
三、 试剂
测试所需试剂及设备如下： 硼砂 （CAS 1303-96-4） 十二烷基硫酸钠（SDS, CAS 151-21-3） 邻苯二甲醛（OPA，CAS 643-79-8，纯度 97%） 1,4-二巯基苏糖醇（DTT，CAS 3483-12-3，纯度 99%） 丝氨酸（serine）标准品 （CAS 302-84-1）