高效液相色谱_蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
高效液相色谱法测定甜菜碱的含量
11
高效液相色谱法测定甜菜碱的含量
张倩茹 1 尹 蓉 1 殷龙龙 2 王贤萍 1 孙慧英 1 梁志宏 1*
（1 山西省农业科学院果树研究所果树种质创制与利用山西省重点实验室，山西太原 030031； 2 山西省农业科学院农产品加工研究所，山西太原 030031）
基金项目：山西省农业科学院“青枣及裂枣的加工产品研发及产品质量评价”（项目编号：YCX2018D2T12），山西省科技厅青年基金项目“木枣发 酵过程中甲醇产生机制及调控研究”（项目编号：201701D221200）；山西省农业科学院农谷研发专项“低酒精度枣汽酒饮品的研究与开 发”（项目编号：YGG1617）；山西省农业科学院公关项目“红枣酒类产品发酵过程中甲醇的控制工艺与技术”（项目编号：YGG17036）；山 西省重点研发计划“杂粮果蔬营养复合功能化太谷饼系列产品研究与开发”。
据文献报道，现阶段对甜菜碱含量的测定方法有滴
定法、分光光度计比色法、离子色谱法、液相色谱法、液相 色谱-质谱联仪法等。周畅［12］等采用比色法测定海产品 中甜菜碱含量，吴燕［13］等采用比色法测定枸杞子中甜菜 碱含量，杨雪［14］等用非水滴方法和离子色谱法比较了5种 产品的甜菜碱含量，吴英键［15］采用高效液相色谱－电喷 雾检测器法测定枸杞子中甜菜碱的含量，张弦飞［16］等采 用超高效合相色谱－串联质谱法快速测定枸杞中甜菜碱 含量，张文昔［17］等也采用超高效液相色谱-串联质谱法测 定了海藻肥中的甜菜碱。
提供了一种快速高效的方法，且灵敏度高，重复性好，简便易行。
关键词：高效液相色谱；甜菜碱；甲醇
中图分类号 S566.3
文献标识码 A 文章编号 1007-77ation of Betaine by High Performance Liquid Chromatography Zhang Qianru1 et al. （1Institute of Pomology，Shanxi Academy of Agricultural Sciences，Shanxi Key Laboratory of Germplasm Improvementand Utilization in Pomology，Taiyuan 030031，China） Abstract：An high performance liquid chromatography method for determination of betaine was built up. The Super⁃ sil SCX 5μm high performance liquid chromatography column was selected，the column was set at 40℃ ，using 0.01mol/L ammonium formate methanol∶water 85∶15（v/v）solution as mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min. The results showed that the method has a good linear relationship and high sensitivity，y=108284x-23952，R2=0.9994， the recovery rate between 99.45%-100.63%.This method provided a fast and efficient for determination of betaine， which was sensitive repeatable and easy to use. Key words：High Performance Liquid Chromatography；Betaine；Methanol
甜菜碱测定方法
甜菜碱药物分析进展甜菜碱（betaine，Bet）又名甘氨酸甜菜碱、甜菜素，化学名称是三甲基氨基乙酸或三甲铵乙内酯，19世纪最早发现于欧洲，是一种季铵型水溶性生物碱，广泛存在于动植物和微生物体内。
其分子式为C5H11NO2，结构式为（CH3）3N+CH2COO ，外观物理形状呈流动性，为鳞状或棱状白色结晶，易溶于水和甲醇，由于常温时极易吸湿潮解，应用时常将其制成甜菜碱盐酸盐（盐酸甜菜碱）。
自上世纪70年代以来，甜菜碱的研究渐成热点，已被广泛应用于畜牧、医药、农林、食品和日化等领域。
特别是在医药领域，甜菜碱许多优良的药理作用被相继发现，可用于对抗高同型半胱氨酸综合症，能保肝护肾、保持心脏与血管健康、维护消化系统、抑瘤抗癌、降压镇静、解热镇痛、耐缺氧、保护细胞抵抗高渗等等。
体内组织或排泄物中甜菜碱的测定有助于临床上诊断人体内代谢异常与否［1］，许多甜菜碱药效研究需要对其进行治疗药物监测，这都涉及到甜菜碱的分析测定。
如何更准确、简单、快速、经济地从生物样品中分离并定量甜菜碱，一直是学者们努力的方向。
1 从生物样品中提取分离甜菜碱基于甜菜碱的溶解性特点，从生物样品中提取甜菜碱最常用的方法有水提和醇提两种，如Hitz和Hanson［2］将生物样品90℃水浴1h，冷却后研磨，2 ℃去离子水浸提共3次，最后65 ℃减压浓缩；最早提出提取甜菜碱方法的Pearce等［3］使用甲醇对生物样品反复提取3次，然后于65 ℃减压浓缩。
国内有用碱性三氯甲烷提取甜菜碱的报道［4］,朴茨茅斯大学的杨昕等［5］则采用了混合提取法，将甲醇 氯仿 0.2 mol·L 1碳酸氢钾（12：5：1 v/v）加入生物样品，60 ℃分别提取2次，然后用甲醇 水（1：1 v/v）60 ℃加热提取，取得较好效果。
基于甜菜碱的两性季铵型生物碱的特殊结构，对其分离纯化大多使用离子交换法。
该方法是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同,经过交换平衡达到分离目的的一种柱色谱法［6］。
中药肉苁蓉多糖和总苷的提取分离及质量控制方法研究
摘要肉苁蓉为多年生草本植物，分布于新疆、内蒙古、陕西、甘肃、宁夏等地，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能。
本论文研究内容主要包括以下4个方面:1、肉苁蓉多糖的研究肉苁蓉多糖是肉苁蓉的有效成分之一，本文采用水提醇沉法对多糖进行提取分离，通过紫外分光光度法测定粗多糖和可溶性多糖的含量。
结果表明，粗多糖和可溶性多糖的含量分别为4.56%和17.41%；在肉苁蓉多糖提取研究的基础上对肉苁蓉多糖部位进行了研究，通过调节醇沉阶段的含醇量进行分段，用蒽酮-硫酸法对各部分多糖部位进行了含量测定。
结果显示，用20%乙醇沉淀所得多糖的含量最高，达到样品量的9.71%，占总多糖的44.0%。
2、肉苁蓉中毛蕊花糖苷的研究采用超声辅助提取法对肉苁蓉有效成分进行提取，用高效毛细管电泳法对肉苁蓉中毛蕊花糖苷进行含量测定。
详细考察了分离电压在8～25 kV范围和硼酸-硼砂缓冲溶液的pH在8.0～10.0之间对毛蕊花糖苷的分离影响，得到最佳分离条件为：电压8kV，运行缓冲溶液为30mmol/L的硼酸-硼砂（pH=9.0），室温，检测波长为334nm。
毛蕊花糖苷的浓度在0.015～0.375mg/mL 范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程y=13946x+560.32,(R2=0.9983) ，样品回收率为99.26%，RSD=1.16%，精密度RSD=0.96%。
通过上述研究，建立了毛蕊花苷的高效毛细管电泳含量测定方法，并用此方法测得肉苁蓉中毛蕊花糖苷的含量为样品的1.02～1.04%。
3、肉苁蓉中红景天苷的测定方法研究采用HPLC和HPCE两种方法对肉苁蓉中红景天苷的测定方法进行了研究。
用HPLC法对肉苁蓉中红景天苷的测定研究，采用色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为乙腈∶水(1∶9)，流速为1.0mL/min，室温，红景天苷的检测波长为278nm。
红景天苷在0.055～0.44µg范围呈良好的线性关系，其线性回归方程y=91207x－1097, (R2=0.9953) ，样品的回收率为94.8%，RSD= 1.50%，精密度RSD=0.39%。
盐生肉苁蓉中2种水溶性成分的薄层色谱鉴别
盐生肉苁蓉中2种水溶性成分的薄层色谱鉴别麦吾菊丹·阿力甫;杨建华;曹苑;谯明;胡君萍【摘要】[目的]建立盐生肉苁蓉药材中2种水溶性成分尿囊素和半乳糖醇的薄层色谱分析方法.[方法]采用硅胶G薄层板,分别对乙酸乙酯∶丙酮∶甲酸、氯仿∶异丙醇∶乙酸等6种不同的展开剂及25％对二氨基苯甲醛、10％硫酸乙醇、3％酸性高锰酸钾溶液、10％香草醛浓硫酸4种不同的显色剂进行考察,确定盐生肉苁蓉提取物中尿囊素、半乳糖醇的最佳薄层分析条件,并对不同产地盐生肉苁蓉中的2种成分进行鉴定.[结果]尿囊素的展开剂为乙酸乙酯∶丙酮∶甲酸(8∶l∶3),显色剂为25％对二氨基苯甲醛溶液;半乳糖醇的展开剂为乙酸乙酯∶异丙醇∶水∶甲酸(3∶4∶2∶1),显色剂为3％酸性高锰酸钾溶液.不同产地盐生肉苁蓉中均含有尿囊素和半乳糖醇.[结论]该方法快速简便、专属性强、重现性好,可快速鉴别肉苁蓉药材,是全面控制和评价盐生肉苁蓉药材质量的重要补充.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)019【总页数】3页(P55-57)【关键词】盐生肉苁蓉;尿囊素;半乳糖醇;薄层层析【作者】麦吾菊丹·阿力甫;杨建华;曹苑;谯明;胡君萍【作者单位】新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学第一附属医院,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9肉苁蓉属(Cistanche Hoffmg．et Link)为列当科(Orobanchaceae)多年生草本，是寄生在沙漠树木梭梭根部的寄生植物，为我国西北干旱地区特有的沙生濒危药材，素有“沙漠人参”之美誉［1］，具有增强免疫功能、补肾壮阳、抗氧化、抗衰老、抗辐射等功效［2］。
肉苁蓉作为一味传统名贵中药材，国内外学者对肉苁蓉苯乙醇苷类成分进行了广泛的化学成分、药理活性的研究，对肉苁蓉中其他水溶性成分少见报道，降低了肉苁蓉药材的利用率［3］。
肉苁蓉质量控制及评价的研究进展
展开剂，以改良的碘化铋钾试液为显色剂，结果显示 仅肉苁蓉含有与甜菜碱相同位置的斑点１５Ｊ。 ３．耋谱盗 光谱法具有直观、简便和快速等优点，在鉴别中 药材方面发挥重要作用。钟世杰等１６Ｉ采用红外光谱法 对新疆产四种肉苁蓉（肉苁蓉、管花肉苁蓉、盐生肉 苁蓉和迷肉苁蓉）的红外光谱鉴别分析，选用三个有 明显差异的波段，从峰位和峰数进行了比较鉴别。此 外，肉苁蓉与盐生肉苁蓉的６０％乙醇提取液在紫外 吸收光谱２００～５００ｎｍ波长范围吸收峰的差异，也可
指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别模式，对
中药产品的真实性和质量的一致性及稳定性均可有
效地加以检测和控制。国际上，如美国食品药品管理 局（ＦＤＡ）、欧洲共同体等也都提倡采用指纹图谱技术 对中草药产品进行质量评价。Ｊｉａｎｇｔ９Ｉ等应用高效液相 色谱一二极管阵列检测器一质谱的指纹图谱法鉴别肉 苁蓉属药材，利用主成分分析方法将肉苁蓉作为标 准模式比较其同其它肉苁蓉属药材的相同之处，另 外根据比较它们的保留时间、紫外光谱和极管阵列 检测器一质谱上的数据，鉴别出指纹图上有１８个主
二、有效成分的提取及含量测定研究
量和单糖组成葡萄糖组成，还确定了其空间结构为
直链葡聚糖，南ｌ，４－ｌｉｎｋａｇｅ ｇｌｃｐ和ｌ，６－ｌｉｎｋａｇｅ
ｇｌｃｐ
以３：ｌ的比例连接组成，与直链淀粉不同，为一种新
的葡聚糖。赵伟等［２５】从野生肉苁蓉茎中提取水溶性多 糖，经Ｓｅｖｅｇ法和酶法脱蛋白，超滤分级及Ｓｅｐｈａｄｅｘ
肉苁蓉的主要化学成分包括苯乙醇苷类、多糖、 环烯醚帖、甜菜碱和半乳糖醇等。目前，苯乙醇苷类 是研究最多的，共发现１７种苯乙醇苷类物质，这是 第一个被报道的具有神经保护作用的天然产品，并
在防止脂质过氧化发挥肝保护作用和清除ＮＯ自由
其单糖组成，测定其比旋光度并紫外光谱鉴定多糖 的纯度，发现该多糖的紫外光谱只有单一峰位、其不 同浓度乙醇的沉淀物比旋光度一致，提示此方法分 离纯化的多糖为均一组分。 ２．荃乙醇苷类
肉苁蓉的化学成分及药理作用研究进展
收稿日期:2009-03-18作者简介:李媛(1987-),女,硕士,研究方向:抗炎免疫药理学。
E -mail:liyuan870214@3通讯作者:张洪泉,教授,博士生导师,研究方向:抗炎免疫药理学。
E -mail:hqzhangyz@doi:10.3969/j .issn .1006-9690.2010.01.002肉苁蓉的化学成分及药理作用研究进展李 媛,宋媛媛,张洪泉3(扬州大学医药研究所,江苏扬州225001)摘 要 以近10年国内外发表的文献为依据,对肉苁蓉的生物学特性及其分布作了概述,并特别对化学成分及各种主要化学成分所具有的药理作用作一综述,并展望其发展前景。
关键词 肉苁蓉;资源分布;化学成分;药理作用中图分类号:S567 文献标识码:A 文章编号:1006-9690(2010)01-0007-05Advances i n Research of Chem i ca l Con stituen ts andM ed i c i n a l Acti v ity of C ist ancheL i Yuan ,Song Yuanyuan ,Zhang Hongquan(The Medical and Phar maceutical Acade my of Yangzhou University,Yangzhou 225001,China )Abstract Taking near 10years domestic and f oreign publicati on’s literature as the basis,this article has carried on the t otal outline t o the bi ol ogical characteristics of Cistanche and its distributi on .I n particular,the che m ical compositi on and the phar macol ogical effects of maj or che m ical constituents were revie wed,and l ook f or t o its p r os pects f or devel opment .Key words Herba Cistanche;res ource distributi on;che m ical compositi on;phar macol ogical effects 肉苁蓉(Herba Cistanche )是列当科(O r oban 2chaceae )肉苁蓉属(C istanche )植物肉苁蓉干燥带鳞叶的肉质茎,又名地精、金笋、苁蓉、大芸。
基于HPLC-QAMS_测定两种寄主肉苁蓉中6_种苯乙醇苷成分含量
2024年2月Feb.2024第48卷第1期Vol.48，No.1热带农业工程TROPICAL AGRICULTURAL ENCINEERING基于HPLC-QAMS 测定两种寄主肉苁蓉中6种苯乙醇苷成分含量安青郭晔红安芳芳马桃桃（甘肃农业大学农学院/干旱生境作物学国家重点实验室/甘肃省中药材规范化生产技术创新重点实验室甘肃兰州730070）摘要建立HPLC-QAMS 同时测定梭梭-肉苁蓉和四翅滨藜-肉苁蓉醇提液中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖、肉苁蓉苷A 、管花苷A 和2′-乙酰基毛蕊花糖苷的含量。
HPLC 法测定6种苯乙醇苷成分在各自线性范围内线性关系良好（r ≥0.9995），方法学考察RSD 均<3.0%，平均加样回收率为98.616%～100.203%，RSD 为1.645%～2.602%。
以松果菊苷为内参物，计算其它5个成分的RCF 分别为0.8839、1.0038、0.7510、0.8430和0.8515。
利用RCF 计算两种寄主肉苁蓉6种苯乙醇苷成分含量，QAMS 与ESM 测得的两种寄主肉苁蓉各成分含量无明显差异。
结果表明，建立的HPLC-QAMS 测定肉苁蓉醇提取液中6种苯乙醇苷成分的方法稳定可靠，可用于其质量控制及药效基础研究。
关键词肉苁蓉；高效液相色谱；一测多评法；苯乙醇苷中图分类号R284.1Determination of Six Phenylethanoid Glycosides in Two Hosts ofC.Deserticola by HPLC-QAMSAN QingGUO Yehong AN FangfangMA Taotao(Agronomy College,Gansu Agricultural University,State Key Laboratory of Aridland Crop Science,Key Laboratory of Standardized Production Technology Innovation of Traditional Chinese Medicinal Materials ofGansu Province,Lanzhou,Gansu 730070)AbstractTo establish HPLC-QAMS and determine echinoside,mulleinside,iso-mulleinside,cistanosideA,tubuloside A and 2'-acetyl-mulleinside in alcohol extracts of Haloxau-Cistanche and Cistanoside guadripennis.The HPLC method showed good linearity in their respective linear ranges (r ≥0.9995).RSD were all lower than 3.0%.The average recoveries were 98.616%～100.203%,and the RSDs were 1.645%～2.602%.Using Echinacoside as the internal reference,the RCFs of the other five components were calculated respectively as 0.8839, 1.0038,0.7510,0.8430and 0.8515,The contents of 6phenylethanolsides in two host species C.deserticola were calculated by RCF,and there was no significant difference between QAMS and ESM in the contents of 6phenylethanolsides in two host species C.deserticola .The results showed that the established HPLC-QAMS method for the determination of 6phenylethanolsides in C.deserticola alcohol extract was stable and reliable,could be used for its quality control and basic research on pharmacodynamics.KeywordCistanche deserticola ;HPLC;QAMS;phenylethanol glycoside传统肉苁蓉（Cistanche deserticola ）为寄生于梭梭（Haloxylon ammodendron ）根部的多年生寄基金项目：国家自然科学基金（No.31860349）；甘肃省科技计划（No.18YFlNA072，21CX6NH279）。
肉苁蓉的质量标准
肉苁蓉拼音名：Roucongrong英文名：HERBA CISTANCHES书页号：2000年版一部-103本品为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma的干燥带鳞叶的肉质茎。
多于春季苗未出土或刚出土时采挖，除去花序，切段，晒干。
【性状】本品呈扁圆柱形，稍弯曲，长3～15cm,直径2～8cm。
表面棕褐色或灰棕色，密被覆瓦状排列的肉质鳞叶，通常鳞叶先端已断，体重，质硬，微有柔性，不易折断，断面棕褐色，有淡棕色点状维管束，排列成波状环纹。
气微，味甜、微苦。
【鉴别】 (1) 取本品粉末1g，加含0.5％盐酸的乙醇溶液8ml，加热回流10分钟，趁热滤过，滤液加氨试液调节至中性，蒸干，残渣加1％盐酸溶液3ml 使溶解，滤过。
取滤液1ml,加碘化铋钾试液1～2滴，生成橘红色或红棕色沉淀。
(2) 取本品粉末1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取麦角甾苷对照品，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-9％醋酸溶液(20:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3) 取本品粉末1g，加80％乙醇10ml，加热回流10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取肉苁蓉对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取甜菜碱对照品，加80％乙醇制成每1ml 含5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲醇-水-醋酸(9:2:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。
研究生笔记锁阳的研究进展
中药锁阳指纹图谱和原花青素的提取及提取物抗氧化的研究高乃群S080106018一.前言在新世纪,具有我国传统文化和独特优势的中药正面着前所未有的挑战和发展机遇.一方面,随着社会的发展,人类疾病谱已悄然发生改变,医疗模式已由单纯的疾病治疗变为预防.保健.治疗.康复相结合的模式.传统医学发挥着越来越大的作用.生存环境的不断恶化,使人类回归自然的忽视越来越高,因而传统医药备受青睐.[2]另一方面,我国传统中药在国际市场正面临诸如日本.韩国.印度泰国等传统医药国家和德国.法国等欧洲国家植物药的巨大冲击.由于我国传统中药生产的众多产品不能符合国际标准和要求,目前只有百分之几的国际市场销售份额也可能进一步萎缩.[3]所以建立一套完整的符合国际标准的中药检测质量体系很重要.HPLC和EC是面前最常用的两种中药的检测标准.中药指纹图谱库的国家标准的建立也势在必行.中药有效成分提取量化也迫在眉睫.中药有效成分的提取的目的是拿到能够实现该药理功能的有效成分，而非本中药的主要成分。
通过定向提取的成分集合，可以用HPLC测得有效成分的含量，根据含量和工艺收得率及原处方的生药用量，计算出该提取物的配伍剂量。
从而使复方的成分得以量化，质量得以稳定。
确保了医生开什么药，患者用什么药;医生开多少，患者用多少;医生怎么开，患者怎么用。
确保了医和药的统一，处方和药品的统一，药性和疗效的统一，医生和患者的统一。
[4][5]二.锁阳中原花青素的研究[原植物〕多年生寄生革伞．无叶绿素．高10一100cm。
茎圆柱状．暗紫红色．有散生鳞片，基部膨大。
穗状花序生于茎顶，棒状、长圆形或狭椭圆形．生密集的花和鳞片状色片,花杂性．暗紫色。
坚果球形。
药材性状〕个品呈扁圆柱形．微弯曲．[1][药材性状]本品为扁圆柱型,长5—15cm。
直径1.5---5 cm表面棕色或棕褐色，组糙．具明显纵沟及不规则凹陷，有的残存三角形的黑棕色鳞片。
体重．质硬．难折断．断面浅棕色或棕褐色．有黄色三角状维管束。
hplc-elsd测定肉苁蓉中甜菜碱甘露醇果糖葡萄糖和蔗糖的含量
•基础研究-HPLC-LSD 测定肉@蓉中甜菜碱甘露醇果糖葡萄糖和蔗糖的含量!石子仪J 吴云2'3'4g ，朱月f 1,崔海鸥1 ,王敏J 殷洪梅2'3'4，姜勇1 ,屠鹏飞"1.北京大学药学院中医药现代研究中d ,北京100191；2江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港222047；3.中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港222047；4.中药提取物精制新技术重点实验室，江苏 连云港222047［摘要］目的：采用HPLCELSD ,建立肉@蓉药材中润肠通便有效组分甜菜碱、甘露醇、果糖、葡萄糖、蔗糖的多指标含量测定方法'方法：采用Shodee Ashaigak NH2P-50 4E 色谱柱(250 mm x4. 6 mm % 5 x m ),流动相为乙 月青-水(77：23),流速为0.7 mL-min-1 ;柱温为25 C ，检测器漂移管温度为100C ,气体流量为3.0L-min-1 °结果：在建立的液相色谱条件下％ 5个待测成分分离完全，甜菜碱、甘露醇、果糖、葡萄糖、蔗糖进样量分别在0. 099 2 ~2. 976 0* 0. 198 8 -5. 964 0* 0.510 8 〜6. 129 6、1.217 6 -6. 529 2、0. 198 4 -5. 953 2 x g 线性良好；精密度、重复性、稳定性及回收率试验结果均符合含量测定要求，甜菜碱、甘露醇果糖*葡萄糖和果糖的平均回收率(n =6)分别为98.49%* 100.48%* 99. 27%* 98. 39% * 98. 97% ° 58批荒漠肉@蓉样品中甜菜碱、甘露醇*果糖*葡萄糖和蔗糖的含量分别在 2. 73% -17. 65%* 2. 46% -16. 34%* 2. 52% 〜22. 74%* 0. 97% - 14. 06%* 3. 15% 〜27. 16%,10批管花肉@蓉样品中甘露醇*果糖和葡萄糖的含量分别在1.00% -13.(M%* 2. 98% -8. 85%* 1.09% -5. 33%,未检出甜菜碱及蔗糖成分’结论：该方法简便灵敏准确性高*重复性好，能够实现对肉@蓉药材润肠通便功效的质量控制，同时可用于区分荒漠肉@蓉与管花肉@蓉’甜菜碱和蔗糖含量的不同为肉@蓉不同基原植物质地和生境的不同提供了理论依据°［关键词］肉@蓉；甜菜碱；甘露醇；果糖；葡萄糖；蔗糖；含量测定［中图分类号］R284. 1［文献标识码］A ［文章编号］1673W890(2019) 12-1641W6doi ：10. 13313/j. imn. 1673W890. 20190320006Quantitative Determicahon of Betaine , Mannitol , Frrctosu , Glucost and Sucrost icCistanches Herda by HPLC-ELSDSHI Zi-yi 1c , WU Yun 2%3%40, ZHU Yue-mei 1 , CUI 日0：-'1 , WANG Min 1 , YIN Hong-meV'3'4 ,J<ANGYong 1 , TUPeng-eei 1"1. Modern Research Center for TTM , School of Pharmaceutical Sciences % Peking University % Beijing 100191 % China ；2. Jiangsu Kaniof Pharmaceutical Co. % Lt % Jiangse Lianyungang 222047 % China ；3. State Key Laboratorb of Nee-tech for Chinese Medicic Pharraceutical Process % Jiangse Lianyungang 222047 % China ；4. The Keyfor O ic Nee Teecnique Research of TCM Extractiof and Purfcatiog %Jiangsu Lian#ungang 222047% China+ Abstract ］Objective : To develop an HPLC-PLSD method for simultaneous determination of laxative components %betaine % mannitol % fructose % glucose and sucrose in Cistanches Herba. Methods : The samples were separated on a Shodee Ashaipak NH2P-50 4E (250 mmx4.6 mm % 5 x m ) cooumn at25 e. The mobi oe phase was acetonit ei oe-wate e (77：23) % andthe C ow rate was 0. 7 mL • min -1. The detector drift tube temperature was 100 C % and the gas C ow rate was 3. 0 L • min -1.!［基金项目］国家重点研发计划(2017YFC1702402)；社会发展(SH1624)-［通信作者］ 屠鹏飞％教授％博士生导师％研究方向：天然药物活性成分与新药研究、中药质量分析；Tel ： ( 010 )82802750 % E-mail : pengfeitu@0并列第一作者・1641・Results：The linear r anges for betaine,mannitoi,fructose,glucose and sucrose were0.0992-2. 9760^g,0.19885.9640!g,0.510861296!g, 1.2176-.5292!g and0.1984-5.9532!g,respectively；and their average recoveries were98.49%,100.48%,99.27%,98.39%and98.97%,0100X00.The conWnts of betaine,mannitol,fructose, glucose and sucrose in58batches of C.deserticola were2.73%-17.65%, 2.46%-16.34%, 2.52%-22.74%,0.97%-14.06%,and 3.15%-7.16%,respectively.While the conWnts of mannitol,fructose,and glucose in10batches ofC.iubulosy were 1.00%-13.04%, 2.98%-8.85%,and1.09%-.33%,respectively,and be W ine and sucrose were undetected.Conclusions:The established HPLC quantitative method is simple,sensitive,accurate,and reproducible,and can be used to control the quality of Cistanches Herba and distinguish between C.•eserticolo and C.iubulosw The ddferent contents of be W ine and sucrose supply a theoretical basis for the two ddferent source plants of Cistanches Herba.+Keyworls]Cistanche Herba；betaine；mannitol;fructose;glucose;sucrose；content determination中药肉@蓉为列当科植物肉@蓉CistancCe slesePmola Y.C.Ma或管花肉@蓉CistancCe tubulose（Schenk）Wight干燥带鳞叶的肉质茎。
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定中药材肉苁蓉中甜菜碱含量的方法.采用Waters Spherisorb S5 NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温25℃,流动相为0.1%(体积分数)三氟乙酸水溶液-甲醇(体积比为15:85),流速0.6 mL/min.蒸发光散射检测器参数:漂移管温度90℃,喷雾器温度45℃,载气(氮气)压力110kPa(16 psi).结果表明,该法具有良好的线性关系,同时,不同种肉苁蓉的测定结果表明:管花肉苁蓉不含甜菜碱,因此建议将甜菜碱作为标志物质来鉴别正品肉苁蓉(Cistanche deserticola Y. C.Ma)和管花肉苁蓉(C.tubulosa(schenk)R.Wight).
作者：龚立冬曹玉华侯建霞 GONG Lidong CAO Yuhua HOU Jianxia 作者单位：江南大学化学与材料工程学院,江苏,无锡,214122 刊名：色谱ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY 年，卷(期)：2007 25(2) 分类号：O65 关键词：高效液相色谱法(HPLC) 蒸发光散射检测(ELSD) 甜菜碱(betaine) 肉苁蓉(Herba Cistanche)。
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
ｌ
２ ３
正 品 肉 苁 蓉 （ ｉｔｎ ｈ ｅｅｔ ｏａ Ｃ ｓ ｃ ｅｄｓｒｉ ｌ ａ ｃ
正 品 肉 苁 蓉 （ ｉ ｔｎ ｈ ｅ ｅ ｔ ｏａ Ｃ ｓ ｃ ｅｄ ｓ ｒｉ ｌ ａ ｃ
Ｃ ．Ｍａ） 内 蒙古
Ｃ ．Ｍａ） 甘 肃 新 疆
典规定 以列 当科 植 物 肉苁 蓉 （ ｉｔｎ ｈ ｅｅ ｔ ｏａ Ｃ ｓａ ｃ ｅｄｓｒｉ ｌ ｃ ｙ ．Ｍａ 的干燥 带鳞 片 肉质茎 入 药 。肉苁 蓉 中 ．Ｃ ）
关 键 词 ： 效 液 相 色 谱 法 （ Ｐ Ｃ）蒸 发 光 散 射 检测 （ Ｌ Ｄ） 甜 菜 碱 （ ｅａ ｅ ； 高 Ｈ Ｌ ； ＥＳ ； ｂ ｔｉ ） 肉苁 蓉 （ ｒａＣ ｓａ ｃ ｅ ｎ Ｈｅｂ ｉｔｎ ｈ ）
中 图分 类 号 ： ６ ８ ０ ５ 文 献 标识 码 ： Ｂ 文 章 编 号 ：０ ０ ８ ｌ （ ０ ７ ０ —２ ００ １ ０ —７ ３ ２ ０ ） ２ ０ ８ —２ 栏 目类别 ： 术 与 应 用 技
肉苁 蓉 （ ｒ ａ Ｃ ｓａ ｃ ｅ 为列 当科 肉苁 蓉 属 Ｈｅｂ ｉｔｎ ｈ ）
表 １ 四个 肉苁 蓉 样 品 的 种 属 和 产 地
样 品 种 产 地
多年生 高等 寄生 植物 。始 载 于 《 农本 草 经 》 具有 神 ，
填精补 髓 、 血 润 燥 、 色 延 年 之 功效 。 中 国药 养 悦
Ｓ ｈ ｒ ｏｂ Ｓ Ｈ， ２ ０ ｍｍ × ． ｐ ｅｉ ｒ ５ Ｎ （ ５ ｓ ４ ５ｍｍ ，５ ｉ ） ｍ 分 ｘ
文 献 ［ ］ 道 甜菜碱 有 许 多药 理 活 性 。甜 菜碱 含 量 ５报 测 定 的方法 多样 ， 献 报 道 有 光 谱 法 、 层 扫 描 文 薄
HPLC—ELSD测定肉苁蓉及管花肉苁蓉中半乳糖醇含量
HPLC—ELSD测定肉苁蓉及管花肉苁蓉中半乳糖醇含量作者：赵奎君梁丽娟毕丹等来源：《中国中医药信息》2012年第08期摘要：目的建立肉苁蓉及管花肉苁蓉中半乳糖醇含量的测定方法，为肉苁蓉质量标准的制定提供依据。
方法通过建立半乳糖醇的高效液相色谱含量测定方法，对20个批次的肉苁蓉和管花肉苁蓉中半乳糖醇进行分析。
色谱条件：采用Alltech Pevail Carbohydrate ES色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 µm），以乙腈-水（80∶20）为流动相，流速为1.0 mL/min；进样量为10 µL；蒸发光散射检测器漂流管温度为80 ℃，载气流速为3.0 L/min。
结果半乳糖醇在89.6～1 120 mg/L范围内峰面积对数值与进样量对数值有良好的线性关系（r=0.999 0），方法检出限为15.998 mg/L，定量限为79.903 mg/L，肉苁蓉和管花肉苁蓉中半乳糖醇的平均回收率（n=5）分别为100.34%和101.11%，RSD分别为1.72%和1.33%。
结论该方法简便准确，灵敏度高，重复性好，可以作为肉苁蓉的质量控制方法。
关键词：肉苁蓉；管花肉苁蓉；高效液相色谱-蒸发光散射检测器；半乳糖醇中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）08-0052-03肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa （Schrenk） R.Wight的干燥带鳞叶的肉质茎[1]，功能补肾阳、益精血、润肠通便，为常用名贵中药，被列入《香港中药材标准》研究计划。
肉苁蓉主要活性成分为苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素类、寡糖酯类、多元醇以及多糖类化合物等。
2010年版《中华人民共和国药典》（一部）在含量测定项下采用高效液相色谱法（HPLC）分别对肉苁蓉中2种苯乙醇苷类成分松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量进行了限度检查，但对起润肠通便作用的主要药效成分半乳糖醇没有明确的含量限定[2]。
EPA安全化学成分清单增添130种化学物质
［ ４ ］ 丁永胜 ， 牟世 芬 ． 氨基酸 的分析方 法及其应用 进展 ［ Ｊ ］ ． 色谱 ，
２ ０ ０ ４ ， ２ ２ （ ３ ） ： ２ ｌ ２ １ ５ ．
［ ５ ］ 于 泓， 牟世芬 ． 氨基 酸 分析 方 法 的研 究进 展 ［ Ｊ ］ ． 分 析化 学 ，
黄红娜 ， 张丹参 ， 郑晓霞 ， 等． 甜菜碱 的提取 、 分离及测定含量方 法的研究进展 ［ Ｊ ］ ． 医学综述 ， ２ ０ ０ ９ ， １ ５ （ ２ ２ ） ： ３ ４ ９ ２ — ３ ４ ９ ４ ． 汪以真 ， 徐 梓荣 ， 冯杰 ． 甜菜碱对 猪 肉品质 的影 响及 机理探 讨 ［ Ｊ ］ ． 中国农业科学 ， ２ ０ ０ ０ ， ３ ３ （ １ ） ： ９ ９ ９ ．
王婷 ， 等： 离子色谱法测定饲料中的甜菜碱
６ ３
样 品 中保 留时 间 与峰 面积 的相对 标 准偏 差结 果见 表 ３ 。 由表 ３可 知 ， 甜 菜 碱 保 留 时 间 的重 现 性 相 对 标 准偏差为 ０ ． １ ８ ％， 峰 面积 的重 现 性 相 对 标 准 偏 差 为
参 考 文 献
保 留时 间 ／ ｍｉ ｎ Ｒ Ｓ Ｄ／ ％
３ ・ ６ ４１６ ， ４ ３ ． ６ １ ４ ７６ ， ３ ３ ． ７ ６ ５ ３’
峰 面 积
４ ３ ８ ０２ ３ ２ ｌ ， ３ ８ ２０ ７ ７ ， ３８ ５ｌ Ｏ ７’ ３ ９ ９ ３ ４ ３ ８ ３ ８ Ｏ
．
ＲＳ Ｄ／ ％
１
．
仪器， ２ ０ ０ ８ （ ） ： ６ ７ ＿ ６ ９ ．
１ ９ ９ ０ （ ３ ） ： ４ Ｏ — ４ ４ ．
［ ６］ 张文德 ． 食 品中添加剂 甘氨酸的 比色分析 ［ Ｊ ］ ， 化学分析计量 ，
糖浓度对肉苁蓉(Cistanche deserticola)细胞系生长及甜菜碱积累的影响
糖浓度对肉苁蓉(Cistanche deserticola)细胞系生长及甜菜碱积累的影响张静;李予霞;张霞【摘要】以新疆准蔼尔盆地古尔班通古特沙漠野生肉苁蓉为材料建立细胞系,比较不同糖浓度情况下细胞系的生长量、苯丙氨酸解氨酶(L-phenylalanin ammo-nialyase,PAL)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及甜菜碱的含量等,结果发现,在糖浓度从10 g/L增加到25 g/L的过程中,肉苁蓉细胞系生长量增加,当糖浓度达到30 g/L时,细胞系生长受到抑制,生长周期明显缩短.随着糖浓度的增加,甜菜碱在细胞系中的含量增加.这一结果为新疆内苁蓉悬浮培养选定了一个比较合适的糖浓度范围,对建立大规模细胞系有所帮助.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2010(029)004【总页数】3页(P44-45,49)【关键词】糖浓度;PAL;SOD;甜菜碱【作者】张静;李予霞;张霞【作者单位】石河子大学生命科学学院,新疆,石河子,832003;石河子大学生命科学学院,新疆,石河子,832003;石河子大学生命科学学院,新疆,石河子,832003【正文语种】中文【中图分类】S567;S566.3肉苁蓉(Cistanche deserticola)是我国一种传统的药用植物。
现代医学研究表明，肉苁蓉的有护肝保肾，提高免疫力以及抗衰老的作用［5］。
近年来，由于过度采挖，野生肉苁蓉资源濒于枯竭。
在这种情况下，细胞培养由于生产周期短，易于实现工厂化规模生产等原因，在肉苁蓉资源的开发利用和保护过程中越来越受到关注。
糖作为细胞培养中的碳源，对于细胞系能否正常生长具有重要作用。
浓度过低不能满足材料生长的需要，浓度过高又会造成培养液渗透压偏高，从而抑制材料生长，甚至导致材料细胞脱水死亡。
因此，寻找合理的糖浓度对于肉苁蓉细胞系的建立有着重要作用。
1.1 材料肉苁蓉野生植株采自新疆农八师148团沙漠。
1.2 方法1.2.1 愈伤组织的诱导与扩繁以肉苁蓉肉质茎、鳞片和花器作为外植体，培养基参照文献［5］。
肉苁蓉药方做法
肉苁蓉药方做法肉苁蓉，在人们眼里只是美食的一种，很多人会选择肉苁蓉来炖汤炖肉吃，肉苁蓉也可以用来炒菜吃，跟这个山药有些相似，但是很多人不知道肉苁蓉还有药效，用来作为中药的话功能也是很不错的，肉苁蓉可以做了药物之后对人们的身体有很多好处，可以用来治疗和改善很多疾病，那么这个肉苁蓉的药物的做法是什么?(1)取本品粉末1g，加含0.5%盐酸的乙醇溶液8ml，加热回流10分钟，趁热滤过，滤液加氨试液调节至中性，蒸干，残渣加1%盐酸溶液3ml使溶解，滤过。
取滤液1ml,加碘化铋钾试液1～2滴，生成橘红色或红棕色沉淀。
(2)取本品粉末1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取麦角甾苷对照品，加甲醇制成每1ml 含2.5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-9%醋酸溶液(20:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品粉末1g，加80%乙醇10ml，加热回流10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取肉苁蓉对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取甜菜碱对照品，加80%乙醇制成每1ml含5mg 的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲醇-水-醋酸(9:2:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点;在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。
【含量测定】照高效液相色谱法(附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-甲醇-1%醋酸溶液(10:15:75)为流动相;检测波长为334nm。
理论板数按麦角甾苷峰计算应不低于3000。
甜菜碱的提取分离及测定方法介绍
甜菜碱的提取分离及测定方法介绍甜菜碱的简介甜菜碱广泛分布于动物、植物、微生物中。
植物是外源性甜菜碱的主要来源,如麦麸、麦胚、波菜、甜菜等都富含这种生物碱,谷物含量较少,在大多数植物体和海生无脊柱动物以及微生物体内含量较高。
甜菜及一些中草药(如地骨皮、枸杞子、黄芪、连翘等)含有较多的甜菜碱。
甜菜是甜菜碱含量最高的植物之一,甜菜的糖蜜是甜菜碱的主要来源。
甜菜碱分子式为(CH3)NCH200-,相对分子质量117.15,化学名称为三申铵乙内酯或三甲基甘氨酸,分子结构比较简单,与氨基酸、甲硫氨酸、胆碱化学结构比较相似,都属于季胺碱类物质。
据文献报道,甜菜碱具有促进脂肪代谢、抗脂肪肝、保护肾脏、降压、缓和应激、增进食欲、稳定维生素等多种药理作用。
甜菜碱在畜牧业上作为生物刺激剂,可促进家畜生长,增加产蛋量;还可以降低动物肝脏中脂肪的含量,减少动物的胴体背熛厚度:在生产日化行业中可作两性表面活性剂、保混剂:在食品行业可作为食品添加剂、防腐剂等;在医药方面,甜菜碱具有配著降低外周血管阻力,扩张外周血管的作用:在类脂代谢中,甜菜碱能促进类脂质的转化,具有对肝脏脂肪变性起防护作用;盐酸甜菜碱有抗小鼠高半胱氨酸、戊四氮和电体克惊厥作用;并有延缓印防已毒素引发惊阪的作用:家还可作为透保护剂、自面基活除剂或皮肤抗衰剂。
我国对甜菜碱的应用是从80年代开始的,但发展较快,目前年总需求至少在150000T以上。
甜菜碱的提取分离提取甜菜碱的结晶呈鳞状或棱状,易吸潮,加热至3I℃左右分解,味甜,极易溶于水,易溶于甲醇,溶于乙醇,难溶于乙醚,经浓氢氧化钾溶液的分解反应可生成三甲胺。
利用它这些物理性质,提取方法大多可概括为水提和醇提两种即溶于水或甲醇、乙醇溶剂。
目前可以从多种生物种提取得到甜菜碱,如从枸杞甜菜,肉苁蓉、甜菜制糖废蜜中提取。
由于不同的物质性质不同,所以有着不同种提取方法。
例如用水提-石醇法(用水煎煮制成浸膏,用石灰粉调pH12,然后加95%乙醇再制成浸膏)从枸杞浸膏中提取甜菜碱。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
(RSD )分别为 0172%, 2155%和 2112%,表明该测定 方法是可靠的 。
配制系列浓度的标准溶液进样 , 以甜菜碱的峰 面积 ( Y)的对数为纵坐标 , 甜菜碱的质量 ( X )的对 数为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 , 回 归 方 程 为 lgY = 11440 3·lgX + 61866 5, 相关系数 ( r2 )为 01999, 表 明甜菜碱在质量 0125 ～3 μg 范围内有良好的线性 关系 。以 3倍信噪比确定检出限为 011μg。 2. 3 回收率试验 精确称取内蒙产样品约 015 g, 提取 , 在 1 m L 样品中加入 1 g /L 的标样 25μL,测得方法的加样回 收率为 9912%。 2. 4 样品测定 精确称取 4种肉苁蓉样品各约 015 g, 提取 , 测 定 , 3次测定的结果见表 2。标样及样品的 H PLC 2 ELSD 图谱见图 1。
样品 1# 2# 3# 4#
表 2 样品中甜菜碱含量的测定结果
测定结果 / (m g / g)
平均值 / (m g / g)
73. 50 73. 94 73. 42
73. 62
57. 85
58. 01 未检出 未检出
57. 63
57. 80 / /
RSD / % 0. 38 0. 34 / /
图 1 ( a )甜菜碱对照品 、( b )内蒙古产肉苁蓉样品 、( c )甘肃产肉苁蓉样品和 ( d )新疆产肉苁蓉样品的 H PL C 2EL SD 图谱
8 ( 2) : 35
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
肉苁蓉 ( H e rba C is ta n ch e)为列当科肉苁蓉属 多年生高等寄生植物 。始载于《神农本草经 》, 具有 填精补髓 、养血润燥 、悦色延年之功效 [ 1 ] 。中国药 典规定以列当科植物肉苁蓉 ( C is ta n che dese r tico la Y. C. M a )的干燥带鳞片肉质茎入药 [ 2 ] 。肉苁蓉中 的甜菜碱 ( b e ta ine )含量丰富 [ 3 ] ,是它的主要化学成 分之 一 。甜 菜 碱 的 化 学 名 称 是 三 甲 基 氨 基 乙 酸 (C5 H11 NO2 ) ,最早从甜菜中分离得到 , 是一种广泛 分布于动植物组织中的季铵型水溶性生物碱 [ 4 ] , 是 人体唯一可替代叶酸或 S 2腺苷蛋氨酸的甲基供体 。 文献 [ 5 ]报道甜菜碱有许多药理活性 。甜菜碱含量 测定的方法多样 , 文献报道有光谱法 [ 6 ] 、薄层扫描 色谱法 [ 7 ] 、高效液相色谱法 ( H PLC ) [ 8 ] 、酸碱滴定及 重量法 [ 9, 10 ]等 。其中 , H PLC 兼具分离效率高 、分析 结果准确的特点, 已成为甜菜碱测定的首选方 法 [ 11 ] 。由于甜菜碱缺乏生色基团 、极性较大 , 目前 对甜菜碱的测定大多采用柱前衍生 2H PLC 2紫外检 测的方法 [ 12 ] , 虽然灵敏度和选择性有了很大的改 善 ,但是操作较为繁琐 。本实验采用 H PLC 2蒸发光 散射检测器 ( ELSD )对中药肉苁蓉中的甜菜碱进行 了测定 ,方法快速 、简便 ,测定结果令人满意 。
ห้องสมุดไป่ตู้
2 结果与讨论
2. 1 色谱条件的选择 甜菜碱具有季铵碱性基团和羧酸酸性基团 , 是 极性较大的两性物质 。实验尝试用酸 、碱以及缓冲 溶液抑制极性 , 采用 C18柱反相色谱分离模式测定
收稿日期 : 2006207228 第一作者 :龚立冬 , 女 ,硕士研究生 , E 2m a il: gong_ld @ s ina. com. cn. 通讯联系人 :曹玉华 ,女 , 教授 , Te l: ( 0510) 85800939, E 2m a il: yuhuacao @ yahoo. com. cn. 基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (N o. 20375013) .
测定结果表明 , 新疆和云南产的管花肉苁蓉中 未检出甜菜碱 ,内蒙和甘肃产正品肉苁蓉中的甜菜 碱含量较为丰富 。目前 , 苯乙醇苷类物质 、甘露醇 、 甜菜碱均被建议作为评价肉苁蓉质量标准的物质 , 但本研究小组的前期工作发现 , 正品肉苁蓉和管花 肉苁蓉中均含有含量相近的苯乙醇苷类物质和甘露 醇 。因此 ,可以是否含有甜菜碱作为鉴别正品肉苁 蓉和管花肉苁蓉的参考依据 。
北京 : 人民卫生出版社 , 1986: 127 [ 6 ] Va ldes M a rtinez S E. A na lys t, 1983, 108 ( 1 290) : 1 114 [ 7 ] 杨东辉 , 王积福 , 魏璐雪. 中国中药杂志 , 1997, 22 ( 10) : 608 [ 8 ] M a r M 2H H, R idky T W , G a rne r S C, Ze ise l S H. J N u tr B io2
2007年 3月 M a rch 2007
色
谱
C h in ese J ou rn a l of C h rom a tog raph y
Vo l. 25 N o. 2 280～281
高效液相色谱 2蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
龚立冬 , 曹玉华 , 侯建霞
(江南大学化学与材料工程学院 , 江苏 无锡 214122)
chem , 1995, 6: 392 [ 9 ] 张立木 , 张颖 , 牛瑞仙 , 齐永秀 , 李同德 , 郝立勇. 泰山医学
院学报 , 2005, 26 ( 2) : 149 [ 10 ] 江泽荣 , 包文芳 , 范知宇 , 高顺国. 沈阳药学院学报 , 1989,
6 ( 2) : 140 [ 11 ] 李炜 , 张丹参. 医学综述 , 2006, 12 ( 8) : 506 [ 12 ] 杨昕 , C live B a rw e ll, 刘焱文. 中国中医药信息杂志 , 2001,
参考文献 :
[ 1 ] 吴向美 , 屠鹏飞. 北京大学学报 (医学版 ) , 2004, 36 ( 1) : 24 [ 2 ] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 : 一部. 北京 : 化学工
业出版社 , 2000: 103
[ 3 ] 陈妙华 , 刘凤山 , 许建萍. 中国中药杂志 , 1993, 18 ( 7) : 424 [ 4 ] 田玉顺 , 金宝渊. 延边医学院学报 , 1996, 19 ( 1) : 54 [ 5 ] 国家医药管理局中草药情报中心站. 植 物 药 有 效 成 分 手 册.
摘要 :建立了高效液相色谱 2蒸发光散射检测法测定中药材肉苁蓉中甜菜碱含量的方法 。采用 W a te rs Sp he riso rb S5 N H2色谱柱 ( 250 m m ×416 m m , 5μm ) ,柱温 25 ℃,流动相为 011% (体积分数 )三氟乙酸水溶液 2甲醇 (体积比 为 15∶85) ,流速 016 m L /m in。蒸发光散射检测器参数 :漂移管温度 90 ℃,喷雾器温度 45 ℃,载气 (氮气 )压力 110 kP a ( 16 p s i) 。结果表明 ,该法具有良好的线性关系 , 同时 , 不同种肉苁蓉的测定结果表明 :管花肉苁蓉不含甜菜 碱 ,因此建议将甜菜碱作为标志物质来鉴别正品肉苁蓉 ( C is ta n che dese r ticola Y. C. M a )和管花肉苁蓉 ( C. tu 2 bu losa ( sch en k) R. W igh t) 。 关键词 :高效液相色谱法 (H PLC ) ; 蒸发光散射检测 ( ELSD ) ; 甜菜碱 ( be ta in e ) ; 肉苁蓉 ( H e rba C is ta n che) 中图分类号 : O 658 文献标识码 : B 文章编号 : 100028713 ( 2007) 0220280202 栏目类别 :技术与应用
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
第 2期
龚立冬 ,等 :高效液相色谱 2蒸发光散射检测法测定肉苁蓉中的甜菜碱
·281·
甜菜碱 ,由于 ELSD 本身检测方法的限制 ,实验选用 甲醇和水作为流动相 , 采用挥发性的 TFA、三乙胺 调节水相的 pH 值 。结果显示 :当流动相的 pH 值从 210到 910,以 015为步长变化时 , 甜菜碱的保留时 间短 ,且不随 pH 值而改变 , 说明加入弱酸 、弱碱或 调节缓冲溶液酸度均不能改善甜菜碱在 C18柱上的 保留行为 。而加入离子对试剂来抑制甜菜碱的极性 又是 ELSD 检测所不允许的 。若用离子交换色谱 柱 ,同样不能避免使用盐溶液 ,因此本实验采用了弱 极性的氨基柱 ,利用挥发性的弱酸作洗脱液分析两 性物质甜菜碱 。 选择不同配比和不同酸度的甲醇 2水作为流动 相进行考察 。在水相中加入不同浓度的 TFA, 当其 体积分数从 0105%变化到 011%时 , 甜菜碱的保留 时间逐渐增大 , 且与样品中相邻峰的分离度增加 。 进一步试验了 011% TFA 水溶液与甲醇的配比 , 考 虑到分离度 、峰形以及分析时间 , 选择 011% TFA 水 溶液与甲醇的体积比为 15∶85。 2. 2 重复性 、线性范围 、回归方程及检出限 取 1 g /L 甜菜碱标准溶液 2μL 进样 ,日间重复 进样 7次 ,保留时间 、峰高和峰面积的相对标准偏差
1 实验部分
1. 1 仪器和试剂 W a te rs 1525 二元泵 ; W a te rs 2420 ELSD; 雾化 载气 : 氮 气 ( 99199%) ; Em p ow e r 色 谱 软 件 。甲 醇 (色谱纯 ) ,水 (重蒸水 ) 。其他试剂为分析纯 。盐酸 甜菜碱标准品 ( ≥99%)购自 S igm a 公司 。肉苁蓉药 材均由洛阳高新开发区陆生天然植物研究所王忠东 教授提供并鉴定 ,其种属及产地见表 1。