蒽酮_硫酸法快速测定蔗糖的研究及应用
多糖含量的测定方法
多糖含量的测定方法有多种，以下列举其中几种常用的方法： 1. 酚硫酸法：将样品与酚硫酸反应生成稳定的紫色化合物，通过测定紫色化合物的吸光度来确定多糖含量。
2. 蒽酮-硫酸法：样品经热水溶解后，乙醇沉淀，除去其他可溶性糖及杂质的干扰，用热水溶解沉淀物并稀释定容。
此法操作简便，测定速度快，可用于多糖的实时快速测定和定性分析。
3. 刚果红显色法：在一定条件下，刚果红显色剂能与乙酰甘露聚糖生成有色复合物，而不与麦芽糖糊精、蔗糖和葡萄糖等发生明显的显色反应。
由此可以建立定量分析芦荟多糖含量的刚果红显色分光光度法。
此外，还有其他方法如色谱法、光谱法等也可以用于多糖含量的测定。
具体使用哪种方法需要根据实验目的、样品性质和实验条件等因素进行选择。
蒽酮法测还原糖
总糖的含量的测定（蒽酮法）一、实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。
对于以上特定的糖类反应较稳定。
三、实验器材1.吸管2.试管3.分光光度计4.水浴锅5.电炉6.电子分析天平四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。
2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。
五、实验操作1.制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作。
表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作2.样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。
测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算：w —糖的质量分数（%）；C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；m —样品的质量（mg ）。
ｗ＝ CVｍ ×100%。
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖要点介绍
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖要点介绍硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。
加入5 mL浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
可溶性糖的测定（蒽酮比色法）
可溶性糖的测定——蒽酮比色法原理：可溶性糖与浓硫酸反应生成羟甲基糠醛，其与蒽酮生黄绿或蓝绿的糠醛衍生物，该物质在630nm(620)处有最大吸收峰，其浓度与可溶性糖的含量成正比。
试验用品：电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、1mL，2mL，5mL 移液管各一支、容量瓶（根据需稀释倍数选择25或50mL）、10mL 刻度试管或离心管、试管架（别用胶的）、指型管（大一点的便于震荡混匀液体）、漏斗、滤纸、洗瓶试验药品：蒽酮、乙酸乙酯、分析纯蔗糖、浓硫酸（优级纯或分析纯）、蒸馏水试验样品：玉米叶（干样）标液及标曲配制：蒽酮-乙酸乙酯试剂：称取分析纯蒽酮1g溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶，至于黑暗中保存，如有结晶析出可加热溶解。
1%蔗糖标准液：精确称取1.000g分析纯蔗糖加少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度线；100mg/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL，加入100mL容量瓶，加水至刻度线。
标曲：项目管号0 1 2 3 4 5各管中蔗糖含量（ug) 0 20 40 60 80 100 100mg/L蔗糖液（ml）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮乙酸乙酯试剂（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸（ml） 5 5 5 5 5 5 吸光度A630样品测定：称取0.05g样品于干燥的10mL刻度试管中，加蒸馏水10mL后放入水浴锅内沸水浴30min，再过滤到50mL容量瓶内混匀。
取干燥的指型管分别加入1.5mL蒸馏水、0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂、0.5mL样品溶液和5mL浓硫酸快速震荡摇匀后冷至室温比色（摇匀后反应10min左右可放入冷水中冷却）。
结果计算：可溶性糖含量=Mx×V×D×100V1×W×103Mx：标准溶液查得的糖含量（ug）V ：样品总体积（mL）V1：测定时的取用体积（mL）D ：稀释倍数（mg）103：样品重量单位由mg换算成ug的倍数。
蒽酮法实验报告
一、实验目的1. 熟悉蒽酮法检测还原糖的基本原理和方法。
2. 掌握蒽酮试剂的配制和操作步骤。
3. 通过实验，学会运用蒽酮法检测还原糖含量。
二、实验原理蒽酮法是一种检测还原糖的经典方法。
其原理是还原糖在酸性条件下，能与蒽酮发生显色反应，生成红色化合物。
根据溶液颜色的深浅，可以计算出还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 标准葡萄糖溶液- 样品溶液- 蒽酮试剂- 醋酸- 硫酸- 水浴锅- 移液管- 比色皿- 分光光度计2. 实验仪器：- 实验台- 电子天平- 移液器- 烧杯- 滴定管- 玻璃棒四、实验步骤1. 配制蒽酮试剂：- 称取0.1g蒽酮，加入100mL醋酸溶液，溶解后转移至1000mL容量瓶中，用醋酸溶液定容至刻度。
2. 标准曲线的制作：- 分别吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL标准葡萄糖溶液于6个试管中，依次加入5mL蒽酮试剂，混匀后放入水浴锅中加热10分钟。
- 取出试管，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL。
- 使用分光光度计在波长620nm处测定吸光度。
- 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品溶液的制备：- 称取一定量的样品，加入适量的蒸馏水，溶解后定容至100mL。
4. 样品溶液的测定：- 分别吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL样品溶液于6个试管中，依次加入5mL蒽酮试剂，混匀后放入水浴锅中加热10分钟。
- 取出试管，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL。
- 使用分光光度计在波长620nm处测定吸光度。
5. 还原糖含量的计算：- 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线中查得相应的葡萄糖浓度。
- 根据样品溶液的体积和浓度，计算还原糖含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：- 标准曲线的线性范围为0.5～2.5mg/mL。
2. 样品溶液的测定：- 样品溶液的吸光度在标准曲线的线性范围内。
3. 还原糖含量的计算：- 样品溶液的还原糖含量为（计算值）mg/mL。
蒽酮比色法快速测定葡萄糖
蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。
不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。
第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。
第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。
(二)试剂(1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。
溶解后置水中冷却备用。
此液当天配制。
(2)2mol/L氢氧化钾溶液。
(3)3mol/L盐酸溶液(5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。
溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。
(6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。
此液含糖为100μg/ml。
(三)测定步骤1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为2.0ml。
从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。
摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。
用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。
在分光光度计中,以640nm2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。
精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。
离心液倒入干净试管中。
再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。
蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]
![蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]](https://img.taocdn.com/s3/m/d594d35c7375a417876f8f16.png)
蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。
（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。
2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。
3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。
100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。
（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。
将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。
取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。
可溶性糖的测定3
10、11、13、14、试管号0 1、2、3 4、5/ml标准蔗
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1糖溶液(mL)
蒸馏水(mL) 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1蔗糖浓度(µg) 0 20 40 60 80 100
按上述取样量取好后+加5mL蒽酮试剂(加蒽酮期间最好放在冷水中以使反应时间一致)?震荡?95?水浴10分钟?震荡?自来水中冷却至室温?630nm比色4、绘制标准曲线:在excel中以蔗糖终浓度为横坐标，吸光值为纵坐标作散点
可溶性糖的测定
可溶性糖的测定
一、标准曲线制作
1、标准蔗糖溶液(100µg/ml):标准称取0.5g烘干的分析纯无水蔗糖溶于水?
蒸馏水定容到50mL?取0.5mL?蒸馏水定容至50mL
2、蒽酮试剂: 84ml浓硫酸(比重1.84)+16mL蒸馏水冷却至不烫手，称取0.15g
蒽酮，溶解其中，贮于具塞棕色瓶中，当天配置当天用。
2、查标准曲线，计算蔗糖浓度
注意事项:
与硫酸含水量、显色温度、显色时间有关，所有控制好这些条件，最好一致
2图，并拟合直线，看其拟合度R越大越好
二、样品测定
1、称0.1g过100目筛的烘干样品—?10ml离心管中—?6—7ml蒸馏水—?100?水浴，30分钟—?4800转/分5分钟—?收集上清液—?加水6-7ml离心，如此重复提取3次，收集三次上清液于50ml容量瓶中—?蒸馏水定容—?取待测液1.0ml—?加水1 ml—?加蒽酮5ml—?与标准曲线制作步骤同—?630nm下测,,,
无花果可溶性糖含量测定
无花果可溶性糖含量测定作者：苏云婷潘世会来源：《食品安全导刊》2024年第05期摘要：為了建立一个可靠且高效的测定方法，专门用于测量不同成熟度无花果中的可溶性糖含量，深入探索并精确改进蒽酮-硫酸比色法。
根据研究目的，针对性优化了显色时间、蔗糖标准液浓度与冷却比色时间，建立了可用于无花果果实可溶性糖含量测定的蒽酮-硫酸比色法。
实验结果显示，最佳显色时间为10 min，最佳蔗糖标准溶液浓度为100 μg·mL-1，最佳冷却比色时间为20 min。
回归方程y=0.005x+0.153 4（R2=0.998 2）。
通过检测不同成熟度的无花果，发现糖度变化趋势与可溶性糖含量变化趋势一致，可溶性糖含量可作为无花果产品质量控制指标。
关键词：无花果；可溶性糖；蒽酮-硫酸比色法Method for Determination of Soluble Sugar Content in FigSU Yunting1， PAN Shihui2*（1. Weihai Vocational College， Weihai 264200， China; 2. Shandong University， Weihai 264209， China）Abstract： In order to establish a reliable and efficient assay specifically for measuring the soluble sugar content in figs of different ripenesses， the anthone-sulfate colorimetric method was explored in depth and precisely improved. According to the purpose of the study， the color development time， the concentration of sucrose standard solution and the cooling colorimetric time were optimized， and an anthone-sulfate colorimetric method was established for the determination of soluble sugar content in fig fruit. The experimental results showed that the optimal color development time was 10 min， the optimal concentration of sucrose standard solution was 100μg·mL-1， and the optimal cooling colorimetric time was 20 min. The regression equationy=0.005x+0.153 4 （R2=0.998 2）. By detecting figs with different ripeness， it was found that the change trend of sugar content was consistent with the change trend of soluble sugar content， and the soluble sugar content could be used as a quality control index for fig products.Keywords： fig; soluble sugar; anthrone-sulfuric acid colorimetry可溶性糖在水果和蔬菜中的重要性是显而易见的，主要由单糖和寡糖组成。
糖含量测定
植物组织中可溶性糖含量测定(1)标准曲线的制作：1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其吸光度，以吸光度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
试剂 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10100µg/ml蔗糖标准液 0水（mL）蔗糖量（µg）0 20 20 40 40 60 60 80 80 100 100(2)可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取－，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25 mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
3．显色测定：吸取样品提取液 mL于20 mL刻度试管中（重复2次），加蒸馏水，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。
4．计算可溶性糖的含量（%） =（C×VT ×n×100）/（W×VS×106 ）C为从标准曲线查得的糖量（ｕg）； VT为提取液总体积（mL）VS为测定时取用的样品提取液体积（mL）；n 为稀释倍数W为样品质量（g）。
蒽酮法测定可溶性糖方法
蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。
（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。
2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。
3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加 ml浓硫酸，定容至刻度线。
100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。
v1.0 可编辑可修改（3）浓硫酸（比重）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
管号试剂01，23,45,67,89,10 100µ蔗糖/ml01水/ml21蔗糖量/µg020*********2．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。
将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。
取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。
3．可溶性糖的提取将样品从冰箱中取出，称取－ g，记录重量，使用镊子将样品夹入刻度试管中，加入10 mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 ml 容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量讲课稿
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。
二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。
当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。
三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。
在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在625nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
蒽酮法测定可溶性糖
Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定.该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦，因此,有特殊的应用价值。
但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深，葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差.糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为62０nm,故在此波长下进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一）实验材料任何植物鲜样或干样。
（二)试剂1。
80%乙醇。
2。
葡萄糖标准溶液(100μg/mＬ）:准确称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至1０0mL,使用时再稀释10倍（１00μg/mL)。
３.蒽酮试剂：称取1.0g蒽酮,溶于8０％浓硫酸(将９8%浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中）10０0mL中,冷却至室温,贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用2~3周。
（三）仪器设备分光光度计,分析天平，离心管,离心机，恒温水浴，试管,三角瓶,移液管（5、1、0。
5mL）,剪刀,瓷盘，玻棒,水浴锅，电炉，漏斗,滤纸。
三、实验步骤1。
样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5～1.0g(或干样粉末５~100mｇ),放入大试管中，加入15mL蒸馏水，在沸水浴中煮沸２0ｍin,取出冷却，过滤入１00mL容量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容至刻度．2.标准曲线制作取6支大试管，从0～5分别编号，加入各试剂。
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5－20s。
加入5 mL浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以 5－20s。
加入5 mL 浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)
3、结果计算
(C×V×n)
植物样品含糖量（％）＝
×100
(a×W×106)
C-糖含量（μg）； V-提取液体积（ml） a-吸取样品液体积（ml）；n-稀释倍数 W-样品重（g）
含糖总量一般为：2.1—20%
五、实验思考
P114：
2
下周实验：P167
植物组织中过氧化氢酶活性
测定（高锰酸钾滴定法）
实验9 可溶性总糖的测定(蒽酮法)
一、实验目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量 的原理和方法。
二、实验原理
强酸可使糖类脱水成糖醛或羟甲基糖醛，生 成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成 糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在630nm处有 最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅 与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。 一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
2、蔗糖标准曲线的制作
（1）取6支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度 的蔗糖溶液：
管号
水（ml） 蔗糖含量（μg）
0
2 0
1
0.2 1.8 20
2
0.4 1.6 40
ห้องสมุดไป่ตู้
3
0.6 1.4 60
4
0.8 1.2 80
5
1.0 1.0 100
100ug/L蔗糖标准液（ml） 0
（2）在每支试管中立即加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5ml 和5ml浓硫酸，混匀，盖上塞子，沸水浴中准确保温 1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。 以标准蔗糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标 准曲线。
三、实验器材
3.蒽酮测糖
实验3 总糖的测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液(l00 µg/ml)：精确称取100mg干燥葡萄糖，定容到1000ml.(2)浓硫酸(98%)(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甘薯四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中加入葡萄糖标注液和水后摇匀，立即放入冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂4.0 m1后，各管同时放置沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸7min后立即取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：称取500克市售白薯，洗净切碎后用食用加工机磨成匀浆，用4层纱布压滤，丢掉滤液，留残渣，将残渣放入烘箱内80-85o C烘干后，再用粉粹机粉粹，过筛，取过100目后的粉末为待测样品。
称取约5g待测样于锥形瓶中，加入80ml沸腾蒸馏水，放入水浴中提取30分，期间不断摇动锥形瓶。
取出过滤后，残渣用蒸馏水少量反复洗涤后，冷却至室温，用蒸馏水定容质100 ml。
4.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.0 ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以 5－20s。
加入5 mL 浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖
硫酸苯酚法与硫酸蒽酮法测多糖植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
（一）苯酚法测定可溶性糖【实验原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
【实验步骤】1．标准曲线的制作：取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以 5－20s。
加入5 mL 浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8 mL，在恒温下放置30min。
显色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。