实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用

的检测

导学案

【学习目标】

1. 尝试用吸附法制作固定化α-淀粉酶。

2. 应用固定化α-淀粉酶进行淀粉水解的测定。

3. 说明酶固定化的方法及制作原理。

4. 通过此实验探讨固定化酶的应用价值。

一、基础盘点：酶与固定化酶

1．酶：活细胞产生的具有催化作用的一类有机物，它是生物体内各种化学反应的催化剂。

2．固定化酶：将________的酶用________或________方法________，使之成为________而又有________的制剂。

3．将酶改造成固定化酶的原因是：由于酶________，且不利于________，所以要将酶改造成固定化酶。

4．酶固定化的方法有：________法、________法、________法和________法等。本实验用的是________法。

5．固定化酶作用的机理：将固定化酶________，当________时，在________的作用下

________。

二、自主探究：α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测实验

1. 实验目的：

(1)制备。

(2)进行的测试。

2. 实验原理：用法将α-淀粉酶固定在上。一定浓度的淀粉溶液经过后，可使淀粉水解成。用（）

测试，若流出物呈________色，表明有________生成。

淀粉――→α­淀粉酶

――→β­淀粉酶

――→糖化淀粉酶

葡萄糖 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色

3．本实验使用的酶及特性：本实验使用的酶是 的α-淀粉酶，其作用的最适宜pH 为________，最适宜温度为________。

4．实验设备及用品：5 mL 塑料注射器、50 mL 烧杯、滴管、自行车用气门芯及夹子、注射器架、试管或微量离心管3支。 5．实验材料及其制备：

⑴α­淀粉酶的固定化：在烧杯中将5 mg 溶于4 mL 中 (由于 ，可能有些不溶物)； 再加入5g________，不时搅拌30 min ；然后将上述溶液装入1支注射器中 (该注射器的下端接有________并用________封住)，石英砂体积约4 mL 用 倍体积的蒸馏水_______此注射器以除去 ，流速为1 mL/min 。

⑵可溶性淀粉溶液：取________mg 可溶性淀粉溶于100 mL________中，搅拌均匀。 ⑵可溶性淀粉溶液：称取0.127 g 和0.83 g 。加蒸馏水100 mL ，完全溶解后装入滴瓶中。 6．实验步骤：

固定化α-淀粉酶，装入注射器中

以0.3mL/min 的流速滴加 过柱 流出5mL 的淀粉溶液后接收0.5mL 流出液

滴加 溶液，观察颜色。用水稀释____倍后再观察颜色。

用_____倍柱体积的蒸馏水洗涤固定化柱。放置在____⑵冰箱中，几天后重复实验 7．预期实验结果：

三、我的困惑： 四、实验优化方案：

五、最终实验结果

你的实验达到预期实验结果了吗？若没有，请分析失败原因。

六、真题感悟

1、（2019浙江自选，17）利用紫甘薯制酒可提高其附加值。请回答：

⑴由于酶在水溶液中不稳定，因此常将酶固定在某种介质上制成。

⑶紫甘薯匀浆流经α-淀粉酶柱后，取适量流出的液体，经脱色后加入KI-I2溶液，结果液体呈红色。表明该液体中含有。

A. 淀粉

B. 糊精

C. 麦芽糖

D. 葡萄糖

2、（2019浙江自选，17）

(1)某兴趣小组欲利用固定化酶进行酶解淀粉的实验，分组见下表。

将吸附了α­淀粉酶的石英砂装入柱中后，需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去________。按上表分组，将配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液进行KI­I2检测。若流出液呈红色，表明有______生成；若各组呈现的颜色有显著差异，则流出液中淀粉水解产物浓度最高的是________组。

(2)下列关于上述固定化酶实验的叙述，错误的是______。

A．固定化酶柱长度和淀粉溶液流速决定了酶柱中酶的含量

B．淀粉溶液流速过快会导致流出液中含有淀粉

C．各组实验所用的淀粉溶液浓度应相同

D．淀粉溶液的pH对实验结果有影响

3、（2019浙江自选，17）某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。请回答下列问题。

土样中的

菌种筛选―→菌株

鉴定―→

优良菌株

扩大培养―→

植酸酶

提纯―→

植酸酶

固定化―→

植酸酶

特性分析

（4）在合适条件下，将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的钙离子溶液中，使液滴形成凝胶固体小球。该过程是对酶进行。

A.吸附

B.包埋

C.装柱

D.洗涤

（5）温度与植酸酶相对酶活性的关系如图所示。下列叙述错误的是。

A.测试温度中，固定化与非固定化植酸酶的最适温度分别

为60 ℃和45 ℃

B.测试温度范围内，固定化植酸酶的相对酶活性波动低于

非固定化植酸酶

C.固定化与非固定化植酸酶相比，相对酶活性在80%以上

时的温度范围较宽

D.65 ℃时固定化与非固定化植酸酶的相对酶活性因蛋白质变性而位于最低点

七、巩固练习

1、下列各项中属于固定化酶优点的是（）

A. 有利于增加酶的活性

B. 有利于产物的纯化

C. 有利于提高反应速度

D.有利于酶发挥作用

2、下列关于α­淀粉酶的固定化过程的叙述中错误的是()