遗传学实验设计方案

实验名称：不同浓度的N a Cl溶液下植物根尖细胞毒性探究

一．实验目的

1、了解染色体畸变的类型原理。

2、了解微核检测的原理及其遗传学上的意义。

3、掌握豌豆根尖的微核检测技术。

二. 实验原理

微核（MCN），是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。是有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体拍片段，在间期细胞中形成的一个人或多个圆形或杏仁状结构。

许多理化因素，如化学药剂作用于分裂细胞而产生微核，形成微核的染色体断片或染色体在有分裂过程中行动滞后，在末期未进入主核，当子细胞进入下一次分裂间期，他们便形成主核之外的小

核，即微核。已证实可用简易微核计数来代替复杂中期畸变染色体数。用微核技术可了解化学药剂对植物体潜在的遗传危害。

三．实验材料

1、材料：豌豆（2n=14）实验室提供。

2、试剂：蒸馏水（空白对照）、0.5mol∕LNaCl、1.0mol∕LNaCl、2mol∕LNaCl、70%乙醇、卡宝品红，冰醋酸，6mol∕L盐酸。

3、器材：培养皿、镊子、移液管、滤纸、载玻片、盖玻片、显微镜、烧杯、离心管、刀片等。

四．实验方法步骤

1．浸种催芽将实验用的豌豆浸入盛有清水的烧杯中，浸泡1-2d，期间至少换水两次，种子吸胀后在

25。C温箱中催芽12-24h，待初生根长出1-2cm左右，选取根部发育良好的作为检测材料。

2．根尖处理选24粒初生根生长良好，根长一致的种子，每处理选6粒，分别放入盛有10ml0.5mol

∕LNaCl、1.0mol∕LNaCl、2mol∕LNaCl溶液和蒸馏水的培养皿中，蒸馏水处理作对照。根尖处理24h。

3．根尖细胞恢复培养处理后的种子用自来水浸洗3次，洗净后再置入铺有湿润滤纸的培养皿中，恢

复培养24h。

4．根尖细胞固定将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长幼根，换入70%乙醇中置4。C冰箱中保存备用。

5．酸解用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，加入6mol∕L盐酸，将幼根浸没，酸解10min，使幼根软化。

6．染色吸取盐酸。用蒸馏水清洗幼根3次，置于载玻片上，截下1-2mm长的根尖，滴一滴卡宝品

红染色8min，加盖玻片。

7．镜检在40倍镜显微镜下，凡小于主核1/3以下的，同主核有相同染色效果的，圆形、椭圆形或其

他类似的形状的染色物质都可以算作微核。

五、结果与分析

表1 NaCl溶液对有丝分裂的影响

NaCl溶液浓度细胞数分裂相有丝分裂指数（%）0（蒸馏水）

0.5mol∕L

1.0mol∕L

2mol∕

表2 NaCl溶液对有丝分裂的影响

NaCl溶液浓度细胞数微核数畸变数微核率（‰）畸变率

0（蒸馏水）

0.5mol∕L

1.0mol∕L

2mol∕

（微核率=微核数/总细胞数、畸变率=畸变数/总细胞数）

3.画出染色体畸变图

六、讨论