倒置显微镜的使用

7. 调焦
1）将样品放置载物台中。 2）转动同轴粗微调旋钮，将标本对好焦。
8. 聚光器中心调节
1）确信10X 物镜在光路中。 2）将“视场光阑调节杆”降低直到能从目镜看到视场光 阑像。 3）转动“聚光器调焦钮”升降聚光器，使视场光阑像清 晰地成象在标本面上。 4）转动两个“聚光器中心调节螺钉”，使视场光阑像在 视场中心。 5）更换40X 物镜。 6）调节“视场光阑调节杆”，使视场光阑的象与视场大 致相同。 7）转动两个“聚光器中心调节螺钉”，使视场光阑像在 视场正中。
明视场(BF)镜检 关键点： 从光路中卸下其它形式观察需要 的所有光学组件，聚光器调节好（调节 聚焦和对中），转动孔径光阑调节好像 的清晰度。
1. 复位
1） 逆时针转动，松开透射照明器中的 “聚光器再聚焦指紧螺钉”。 2） 把“目镜筒转盘”设置到＜O＞位。 3） 把显微镜右侧的“中间放大倍数刻度 盘”打到＜1X＞。 4） 逆时针转动，松开显微镜右侧粗∕微调 旋钮后面的“物镜再聚焦定位环”
4. 调节光路
1） 把10X 物镜转到光路中。 2） 把显微镜右侧的“光路转换盘”转到＜1＞ 的位置。（100%光到观察口） 3） 向上推透射照明器上的“视场光阑杆”完全 打开视场光阑。 4） 将系统聚光器上的“孔径光阑杆”转至右侧 极限处把“孔径光阑”完全打开。 5） 转动聚光器调焦旋钮把聚光器调至最低位置。
微分干涉（DIC）显微术

可观察到样品的立体感，适用于显微操纵等， 彩色图像。因塑料培养皿的不均衡张力在DIC 下呈现干涉条纹、DIC不宜用于普遍使用的塑 料培养皿。DIC的光通亮大，可用到100倍物镜。 需配DIC聚光器等附件，使用明场物镜。 1．用明场找到视野 2．压入起偏器，选择相应模块 3．调节孔径光栅至最佳效果。
1. 操作之前要求：
（1）检查荧光装置的工作时间，如荧光灯 的工作时间超过使用寿命，应予以更换。 （2）使用物荧光载波片 （3）每次使用之间必须间隔20分钟。
2. 用明场找到视源自文库。 3. 关闭明场光源，打开荧光电源预热5分 钟。 4. 开启荧光盘，并根据要求选择荧光通道。 5. 激发荧光发生器，打开光闸，即可进行 观察。
实验1 特殊显微镜结构及操作技术
【目的】 了解TE2000-U型倒置显微镜的基本组件、原 理，掌握其基本操作。 【材料】 1．高等动、植物各类组织永久制片； 2．培养皿（瓶）中的活细胞或微生物；
3．口腔上皮细胞的临时装片。
【实验用品】
1．试剂：10μg/mL罗丹明123的磷酸缓冲液 （PBS）荧光染料。 2．器材：倒置显微镜，相差显微镜附件（相差 物镜、转盘聚光器、对中环形光阑和绿色滤色 镜等），微分干涉显微镜附件（起偏镜、检偏 镜和渥拉斯顿棱镜等），荧光显微镜附件（荧 光发射器、激发滤片和阻断滤片等），载玻片， 盖玻片，牙签，滤纸条，擦镜纸，镊子，滴管。
10. 更换样品

利用显微镜主体上的“物镜再聚焦定位 环”，照明器上的“倾斜装置”，“聚 光器再聚焦指紧螺钉，可容易更换样品。
11. 显微镜操作结束后 1) 关闭电源开关(开关拨至O) 2) 灯室冷却后，把显微镜上的聚乙烯防尘 罩盖好。
相差（PH）显微术

观察透明细胞或其他透明样品，需配相衬聚光 器、相衬物镜、相衬环等附件。相衬板将衍射 光推迟1/4波长，振幅相减，样品暗，背景亮， 称正反差或暗反差，分正低（DL）、正低低 （DLL）和中型暗相差（DM）。折光率较强的 样品用后者。相衬板将直射光推迟1/4波长， 振幅相加，样品亮，背景暗，称负反差或明反 差，分负中（NM）和负高（NH）。折光率较 小的样品用后者。
9. 进行观察
1）选择要使用的物镜 2）移动系统聚光器上的“孔径光阑调节杆”， 使孔径为物镜数值孔径的70－80%。（“把目 镜筒转盘”设到＜B＞位置，转动勃氏镜调焦 螺钉使其聚焦，当观察到物镜的出瞳和孔径光 栏的象时，调节其大小。） 3）调节“视场光阑调节杆”使视场光阑像与视 场相大致相同。 4）把透射照明器里的“ND 减光片”进入或退出 光路以调节视场亮度。

关键点：将有ph 标记的物镜与物镜相同 ph 标记的聚光器模块一起送入光路，在 进行显微术前，校正(对中)物镜里的相差 板及聚光器模块里的环形光阑。
1. 用明视场（BF）显微术对样品聚焦。 2. 相差观察时对显微镜的调整。 1) 将ph 物镜转入光路。 2) 转动“聚光器转盘”，使其与在光路中 的物镜(步骤1中所安置的)具有相同的ph 标记。 3) 向右转动聚光器上的“孔径光阑调节 杆”，完全打开孔径光阑。
K： LHS-H100P-1 12V100W 灯室
Q： 聚光器支架下降定位螺钉
T-DS 30W 透射照明器 A： 防尘滑片(可移动) B： F 堵口滑片(可移动) C： 聚光器安装支架 D： 6V30W 灯 室 E： 滤色片滑片 F： 安装附加装置M4 螺纹孔
系统聚光器
T-DH 100W 透射照明器 A： 聚光器孔径光阑 B： 聚光器模块 C： 聚光器模块固定螺钉 D： 聚光镜(有三种可选： ELWD、LWD、HMC) E： 环形光阑调中螺钉(仅 用于相差模块中)
荧光（E）显微术

适用于本身属于或被染色后形成荧光体的样品。 荧光体在一定波长光（紫外或可见）的激发下 发光（即荧光，波长长于激发光）。需配荧光 附件和滤光器等。前者主件为激发光源，一般 分汞灯系统和卤灯系统，汞灯既适用于紫外光 激发也适用于可见光激发，且能量较高；后者 只适用于可见光激发。（此处插入拍摄图片）
1. 目镜筒及目镜 A:屈光度调节环 B:目镜 C:目镜筒转盘 O:开 B:勃氏镜(带有聚焦螺钉) C:关(光闸) M:2.5 倍放大
2. 显微镜机体
3. 透射照明器: 透射照明器必须根据规定使用灯 泡(12V100W 或6V30W)。T-DH 100W 透射 照明器需灯室。
A： 视场光阑调节杆
2. 打开透射照明器
1） 把电源后部的“外部开关”打到开的 位置； 2） 把电源“电源开关”打开。(把开关拨 至│)； 3） 按下显微镜左侧的“照明器开关”接 通灯泡。
3. 调节灯泡亮度保证色彩真实。
1） 把显微镜左侧的“亮度调节盘”设置 成＜12V100W＞； 2） 把透射照明器中的“NCB11 滤色片” 插入光路中； 3） 把透射照明器中的“ND4 滤色片”插 入光路中。
3. 对中环形光阑 1) 把“目镜筒转盘”设到<B>位置，转动 勃氏镜聚焦螺钉，使环形光阑像清晰。 2) 用六角起子转动聚光器模块中的两个 “环形光阑对中螺钉”，使环形光阑像 与物镜中的相差板环形像同心。 3) 把目镜筒转盘位置再转到<O>上。调中 心手轮
4. 进行观察
1) 把聚光器“孔径光阑”完全打开。 2) 移动透射照明器上的“视场光阑调节杆”，使 视场光阑像大小与视场大小接近。 3) 把透射照明器上的“NCB11 滤色片”从光路 中移开，把“GIF 滤色片”移进光路。(提高反 差) 4) 可通过把“ND 滤色片”移进或移出光路来调 节视场亮度。
一、倒置显微镜的构造与使用
（一）倒置显微镜的构造 倒置显微镜由目镜、透射照明器、聚光器、载 物台、物镜和显微镜机体等部件构成，以 TE2000-U显微镜为例介绍。 TE2000-U 显微镜配有：T-DH 100W 透射照明 器、LHS-H100P-1 12V100W 灯室、12V100W 卤素灯、TE2-PS100W 电源、T-SR 矩形载物 台、T-TD 双目镜筒D、CFI 10X 目镜、T-N6 六孔物镜转换器，系统聚光器、物镜、电源线 等。
5. 使用不同放大倍数的物镜进行观察 1) 把所需放大倍数的相差物镜移入光路。 2) 转动“聚光器转盘”，使其与在光路上 物镜（步骤1中所安置的）具有相同的ph 标记。 3) 调节放入光路中的环形光阑中心。(见程 序3)
6. 更换样品 利用使用显微镜主机上的“物镜再聚焦 定位环”，透射照明器上的“倾斜”装 置及“聚光器再聚焦指紧螺钉”，可容 易更换样品。 7. 显微镜操作结束后与明视场显微术步骤 相同。
5. 明视场观察时对显微镜的调整

把“聚光器转盘”转到＜A＞位置。
6．调节视度及瞳距
1）将显微镜前部的“摄影取景框转盘”逆时针 旋转，使摄影取景框进入光路。 2）用左眼对着左侧目镜，转动目镜 “屈光度调 节环”，使取景框中的双十字线清晰成像。 3）用右眼对着右侧目镜，转动目镜 “屈光度调 节环”，使取景框中的双十字线清晰成像。 4）将显微镜前部的“摄影取景框转盘”顺时针 旋转，使其退出光路。 5）调节目镜瞳距，将两目镜视场所见的影像重 合在一起。
T-DS 30W透射照明器(霍夫曼观察)
ELWD-S 聚光器
A：调中杆指紧螺钉 B：调中杆 C：转盘
SLWD 聚光器
T-SR矩形载物台
A：载物环湾 B：载物台Y 轴方向 移动控制旋钮 C：载物台X 轴方向 移动控制旋钮
（二）由TE2000-U，100W 透射照明器， 系统聚光器，以及T-TD 目镜筒D 组成的显 微镜系统。
C： 聚光器再聚焦制动器 E： 聚光器固定螺钉
B： 滤色片滑片
D： 聚光器调焦旋钮 F： 聚光器安装定位孔
G： 聚光器安装定位槽
I： 聚光器调中螺钉 M： 灯室盖指紧螺钉 O： 聚光器支架指紧螺钉
H： 聚光器转动指紧螺钉
J： 聚光器安装(可转动)支架 L： 灯室固定螺钉 N： 聚光器支架(可移动) P： 灯室线
【实验原理和方法】
倒置显微镜是一种用于生物组织细胞离体 培养观察的光学显微装置，能直接对培养皿、 培养瓶的标本进行显微观察。由于它的物镜、 物体和光源位置刚好与立式显微镜颠倒，被称 为倒置显微镜。倒置显微镜的物镜在下，聚光 器在上，被观察样品置于位于上方的聚光器之 下，聚光器具有远大于物镜的工作距离。因此， 适应于培养皿或培养瓶中样品的观察。高档倒 置显微镜可根据不同观察要求，增加相差、微 分干涉反差物镜或荧光发射装置，构建成相差 显微镜、微分干涉显微镜或荧光显微镜。