酵母菌的培养及观察

酵母菌的培养和观察

目的认识酵母菌的形态特征，了解培养酵母菌的方法。

实验前的思考人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。约在6000年前，就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。

材料器具甜酒酿汁液，新鲜酵母，豆芽；显微镜，载玻片，盖玻皮，玻璃棒，镊子，滴管，吸水纸，酒精灯，石棉网，火柴，漏斗架，玻璃斗，量杯，三角烧瓶，烧杯，天平，量筒，棉絮；蔗糖，乳酸，碘液。

步骤

1．观察酵母菌

（1）用滴管从甜酒酿的汁液中吸取一滴汁液，滴在载玻片上，用针摊开，盖上盖玻片，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着无数酵母菌。再换高倍镜仔细观察一个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多小颗粒，也有几个大的液泡（图示）。有的酵母菌的一端长出大小不同的突起，这是酵母菌的芽体。芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前又长出突起。这种繁殖方法叫出芽繁殖。

（2）在盖玻片一边加一滴碘液，从另一边用吸水纸把染液引入盖玻片下。不久就能看到被染成棕褐色的细胞核和变成蓝紫色的淀粉粒。

2．培养酵母菌

（1）用蔗糖液培养在盛有100毫升的三角烧瓶里加5克蔗糖，煮沸。等到溶液稍稍冷却，加一小块鲜酵母，用玻璃棒搅拌均匀；再用棉絮塞紧瓶口。然后把烧瓶放在25～30℃的温暖地方，数小时后就可见到溶液里有气泡产生，并散发出酒味。这是因为酵母菌正在把糖分解成乙醇和二氧化碳。

（2）二三天后吸取溶液在显微镜下观察，就可看到已培养出大量酵母菌。

注意事项

1．观察酵母菌时，视野里杂质较多，有淀粉粒、半分解的淀粉团块、曲霉孢子和其它杂菌等等，只要掌握住酵母菌的形状和体内具有液泡，尤其是染色后体内具有褐色的核和蓝色的淀粉粒这些特点，就可以跟其它杂菌区分开来。

2．发酵在缺氧的环境里仍能良好地进行，不必为了增加氧气去搅拌已放入菌种的培养液。

分析和讨论

酵母菌是少数能在缺氧环境里生存较长时间的一种微生物，它属于兼性菌类。在一般情况下进行有氧呼吸。如环境中有丰富的糖类，它进行缺氧呼吸。其过程如下：

1．C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+2.87×103兆焦（有氧呼吸）

2．C6H12O6→2CO2+2C2H5OH+109×103兆焦（缺氧呼吸）

建议培养酵母菌还可以采用下列两种方法。

1．用乳酸、豆芽汁和蔗糖液培养

（1）取10克豆芽放入100毫升水中，加热煮沸半小时，盛起，用细布过滤。在滤液里加5克蔗糖和5毫升乳酸，配成液体培养液。

（2）把鲜酵母半块或老面（发酵后晾干的面粉团）打碎，投入培养液中，放在黑暗温暖的地方，二三天后就可以培养出大量酵母菌。

2．用巴斯德培养液培养

酵母菌需要的无机营养来自外界环境。如果在培养液内适当增加氮、磷等元素，效果会更好。巴斯德培养液的配方如下：

蔗糖15克，碳酸铵1克，磷酸氢钾0．2克，磷酸钙0．02克，硫酸镁0．02克，蒸馏水100毫升，培养方法跟上述的相同。

于运联中学生物学实验大全1994年12月酵母菌的培养与转形作用

Ⅰ.目的

酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）是一种很有用的真核生物，他拥有生物的特性，可用原核生物的方式培养，其基因组较小，复制时间短，可作为基因分析，在分子生物学研究上的突破，很多都是以它为材料。在

工业上酵母菌也很重要，例如：啤酒、面包、酒、重组胜和蛋白质之合成皆与酵母菌有关。

在重组DNA技术中，酵母菌（yeast）乃是一种很重要的寄主生物，可用质体DNA为媒介物引入外来DNA并表现之。转型技术与大肠杆菌相似，但其方法需修饰以瓦解其细胞壁，常用的两种方式进行酵母菌的转型作用，一是使酵母菌形成Spheroplast，此法较麻烦需将细胞壁去掉，另一种是用

碱性阴离子（例如：LiCl或RbCl）加上热休克快速地处理完整的细胞，本实验用后者来实行，收集对数生长期的酵母菌细胞，经碱性阴离子及热休

克处理，可使细胞外鞘发生变化，有利于吸收质体DNA，正如大肠杆菌一样（参照实验5），不同的因子会影响效率，质体DNA吸收能力与质体的大小、DNA的构形、寄主品系、筛选步骤有关，与大肠杆菌的转形作用相比有显着的差别是转形效率，酵母菌的转型效率在每1 m g质体DNA中，约可获取103-104转形细胞。

II.酵母菌的培养

1.仪器用具：

a. 30 ℃恒温箱

b. 酒精灯

c. 接种环

2.药品与试剂：

a. yeast 菌株：

EGY48〔MAT α, ura3, his3, trp1, LexAop(x6)-LEU2〕

YM4271〔MATaura3-52, his3-200, lys2-801, ade2-101, ade5, trp1-901, Leu2-3,112, try1-501, gal 80∆gal 4∆ade5::hisG〕

Y187〔MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901,

Leu2-3,112,gal4∆, gal 80∆, cyhr2, LYS2::GAL

UAS -HIS3

TATA

-HIS3,

URA3::GAL1

UAS -GAL1

TATA

-LacZ〕

Y190 [MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-90, leu2-3, 112, gal4∆,gal80∆, cyh r2,

LYS2::GAL1uas-HIS3

TATA -HIS3, URA3::GAL1uas-GAL1

TATA

-lacZ]

b. YPD培养液、培养基（参照实验4）

3.方法与步骤：

１）单一菌落（single colony）之分离，请参照实验4。分别将酵母菌养于YPD培养液或培养基中，至于30 ℃之培养箱中约3-5天。

２）隔周实验前，取出酵母菌落并观察。