DTT含量测定

二硫苏糖醇（DTT）含量测定操作细则

1.方法：钼酸铵法

2. 适用范围：本细则适用于HPV疫苗制品中的二硫苏糖醇含量的检测。

3. 责任人：质量检测人员。

4. 仪器与试剂：

4.1 仪器：

4.1.1 分光光度计

4.1.2 电子天平

4.1.3 吸管、量筒、中试管、试管架、烧杯

4.1.4 水浴锅

4.2 试剂配制：

4.2.1 0.04mol/L钼酸铵（A液）：称取5g钼酸铵，加蒸馏水溶解至100ml，4℃保存。

4.2.2 乙酸盐缓冲液（B液）：称取0.295g无水乙酸钠、0.9676ml冰乙酸，加蒸馏水溶解至100ml，4℃保存。

4.2.3 0.2M NaH2PO4（C液）：31.012g NaH2PO4H2O加蒸馏水溶解至1000ml 4.2.4 DTT标准液：50ug/ml

4.2.4 显色液：A液+B液+2 mlC液

5. 操作：

5.1 标准曲线

精确量取标准DTT溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分别加入试管中，补水至1ml，各管中均加入显色液1ml，80℃水浴锅4h 后，690nm测定其OD 值，空白管调零。

5.2 样品测定

精确量取适量样品补水至1ml，各管中均加入显色液1ml，80℃水浴锅4h 后，690nm测定其OD值，

6. 计算结果：

6.1 标准工作曲线：

分别计算平行管OD值均值，将各稀释标准的DTT含量对其相应的OD值均值进行线性回归处理，求出其回归方程。

6.2 样品DTT含量计算：

将待测样品的OD值均值带入回归方程，计算出相应的值，本数值乘以相应的稀释倍数即为样品的DTT含量。

7. 注意事项：

7.1 各稀释度均应做两管平行

7.2标准曲线的线性方程r值不应小于0.99