山楂含片中熊果酸的含量测定

山楂含片中熊果酸的含量测定
目的建立山楂片中熊果酸的含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法测定熊果酸。

色谱柱：phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm），流动相：以乙腈-0.1%磷酸水洗脱，流速1.0ml/min，检测波长：210nm，柱温40℃。

结果阴性对照无干扰，熊果酸在13.5～53.9ng范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为98.3%，RSD=0.9（n=9），该法操作简便，方法稳定，专属性强，可作为三箭草和堂山楂含片的质量控制方法。

标签：山楂含片；HPLC；熊果酸；含量测定
三箭草和堂山楂含片由山楂、白砂糖制成。

山楂中富含熊果酸等成分，具有疏肝理气，活血化瘀，助消化等功效，主要用于治疗脂肪肝和肝纤维化等症状。

本研究采用HPLC法对三箭草和堂山楂含片中指标成分熊果酸进行含量测定。

经查阅文献，尚未有对其成分熊果酸做含量测定的报道。

1 仪器与试药
1.1 仪器Aglient 1260生物惰性四元高效液相色谱仪，德国梅特勒-托利多XA205DU电子分析天平。

1.2样品山楂含片：广西梧州三箭制药有限公司保健品厂出品（批号20120816，20121217，20120320）；阴性样品：按处方缺山楂按工艺制备。

熊果酸对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：110742-200517，供含量测定用）；其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm）；乙腈-0.1%磷酸水溶液（68：32）为流动相；流速为
1.0ml.min-1；检测波长为210nm。

2.2 对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备精密量取本品粉末3g，置于50ml锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，称定重量，超声20min，放置室温后用甲醇补足重量，摇匀，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各4μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值。

按外标法以峰面积计算，即得。

2.5 专属性考察取阴性样品，按2.3制备阴性供试品溶液，按2.1 色谱条
件测定。

结果表明在该色谱条件下，阴性对照无干扰，见图1。

2.6 标准曲线的制备精密称取熊果酸对照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度（浓度为： 1.078mg.mL-1）作为对照品储备液，精密吸取对照品储备液，1ml置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻度（浓度为：0.1078mg.mL-1），摇匀，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液，按2.1色谱条件分别进样分别吸取上述对照品溶液1、5、8、10、20μl，注入高效液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标（Y），熊果酸对照品进样量（mg）为横坐标（X）绘制标准曲线，得线性方程：Y=1941.82X +0.185（r=0.9999）结果表明：熊果酸在1
3.5～53.9ng范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.7 精密度实验取同一份供试品溶液，按2.1色谱条件，连续进样5次，测定峰面积积分值，RSD=0.3%。

表明仪器精密度良好。

2. 8 稳定性实验取同一份样品溶液，放置0、2、4、6、8、10h，按2. 1色谱条件，分别测定峰面积积分值，按外标法以峰面积计算RSD为0.8%。

结果表明待测物在10小时内稳定。

2.9 重复性实验精密称取同一批的样品（批号：20120816），按2.3 供试品溶液的制备方法试验，平行操作5份，按2.1色谱条件近样测定，按外标法以峰面积计算，结果平均含量是5.3mg.g-1，RSD=0.6%。

结果表明本方法重复性良好。

2.10 加样回收率实验精密称取已测定含量的山楂含片（批号：20120816），（熊果酸含量为5.3mg.g-1）1.0g，平行取样9份。

分别上述浓度为1.078mg.mL-1的熊果酸对照品溶液0.5、0.8、1ml，每个加样量平行做3份。

按2.3 供试品溶液的制备方法制备供试品溶液、按2.1色谱条件测定，按外标法以峰面积计算回收率，平均回收率为98.3%（n=9），RSD=0.9%。

2.11 样品含量测定按2.3 供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，2.1的色谱条件，2.4 测定法测定了本品2批样品中的熊果酸含量，见表1。

3讨论
3.1 提取方法的比较比较甲醇加热回流与超声提取的对实验结果的影响，结果熊果酸含量基本一致；甲醇超声20、30、50min的比较，发现超声时间熊果酸含量一致，说明甲醇超声20min乙腈能把山楂含片中熊果酸完全提取出来，出于对简便易行的考虑，决定采用超声20min；故采用甲醇作为提取液，超声20min 提取熊果酸。

3.2 流动相的选择比较甲醇-0.1%磷酸（68：32），乙腈-0.1%磷酸（68：32）的效果，结果有机相选用乙腈时，峰型分离度较好。

3.3 检测波长的选择参考《中国药典》2010年版一部木瓜中熊果酸的检测
[1]，选择210nm作为熊果酸的检测波长。

参考文献：
[1]中国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010（一部）：57.编辑/许言。