生物制品分析概论讲义--山东省药品检验所--石峰
生物制品分析概论资料
3）用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖胶板，以除去未结合蛋白。
4）将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液中染色，用脱 色液脱色至背景无色，沉淀线呈清晰蓝色为止。
应仅与抗人血清或血浆产生沉淀线，与抗马、抗猪、 抗牛、抗羊血清或血浆不产生沉淀线。
鉴别试验
沈阳药科大学
系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与
鉴别试验
ChP人血白蛋白的鉴别
沈阳药科大学
1）将完全溶胀的1.5%琼脂糖溶液倒于水平板上（每平方厘米加 0.19ml琼脂糖），凝固后打孔，直径3mm，孔距3mm（方阵型）。
2）中央孔加入抗血清，周边孔加入供试品溶液，并留一孔加入
免疫双扩散法
相应阳性对照血清。每孔加样20μ l，然后置水平湿盒中，37℃ 水平扩散24小时。
根据用途分为三类
1）预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗、联合疫苗 2）治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子及DNA重组技术制品 和单克隆抗体
3）诊断类：体内诊断类、体外诊断类
根据所用材料、制法或用途分为以下几类：
一、分类
疫苗类药物
指用病毒或立克次体接种于动物、 鸡胚，或经组织培养后加以处理 制造而成。
沈阳药科大学
安全性
使用安全，副作用小。
使用后能产生相应效力。 02
有效性
制品的生产工艺、储存条件、 成品的药效、稳定性、外观、 包装、使用方法和价格可接受。
03
可接受性
沈阳药科大学
CONTENTS
第三节
3
鉴别试验
鉴别试验
沈阳药科大学
免疫双扩散法
01 02
免疫电泳法
免疫印迹法
03
04
免疫斑点法
生物制品分析概论山东省药品检验所石峰PPT课件
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需做效价测定 对于生物制品有效成分的检测，除应有一般化学方法或理化 分心进行有效成分含量测定外，更应根据产品的特异生理效应或专一化反应 拟定其专属性的生物效价测定方法，以表征其所含生物活性成分的含量。
例：人凝血酶原复合物的效价测定。
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三、生物制品的全程质量控制
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需检查生物活性 生物制品对热、酸、碱、重金属及pH等变化敏感，各种理 化因素的变化易对生物活性产生影响。特别是多肽和蛋白质。除理化分析， 还需生物检定，防止蛋白质失活
要求安全性检查 物制品组分复杂，有效成分浓度很低，生物大分子杂质含 量比较高，生产工艺复杂，易引入特殊杂质和污染物。如重组乙型肝炎疫 苗涉及的安全性检查包括：细胞外源因子检查、原液、半成品、成品中有 关血清白蛋白残留量、CHO细胞DNA残留量检查、热原检查、过敏试验、 异常毒性检查等。
人免疫球蛋白 人凝血因子
Ⅷ
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（二）生物制品的特点
分子量不是定值。大部分生物制品的活性组分均为大分子的生命物质（如蛋白 质、多肽、核酸、多糖类等）。组分相同，但相对分子量不同而产生不同的生 理活性，因此常需进行相对分子量的测定。
生化法结构确证。由于有效结构或分子量不确定，其结构的确证很难沿用化学 药物或结构已知的生化药物所常用的方法，还需要生物化学分析如：氨基酸组 成、N末端氨基酸序列、肽图等。
产品相关杂质：二聚体和多聚体、脱氨或氧 化产物、突变物、裂解产物等
工艺添加剂：残余抗生素、蛋白分离剂聚乙 二醇、乙醇、佐剂氢氧化铝，产品稳定剂如 辛酸钠、肝素，防腐剂苯酚、硫柳汞，细菌 与病毒灭活剂甲醛、戊二醛等。
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生物制品学生物制品的质量管理、检定与标准化.ppt课件
第一节 生物制品的BMP管理
六、生物制品GMP认证检查要点 5 ．芽孢菌制品，系用炭疽杆菌、破伤风梭菌、 肉毒梭菌等含有芽孢菌来生产制备的制品，芽 孢菌是微生物对外周环境抵抗力最强的生命单 位。 芽孢菌在自然界可存活数十年及百年之久， 100℃可耐受 2 小时以上，在 70 ％酒精中存活 20年，低温和干燥对其毫无作用。
2018年11月26日星期一 5
第一节 生物制品的BMP管理
三、GMP的作用和特点： 5、在管理系统上，GMP要求有生产管理部门和 质量管理部门两权分立的特点，在组织上两者 的地位是恶行的，在人事上两部门的负责人不 能互相兼任。 6、GMP强调人员素质、卫生要求、无菌要求、 核对制度以及质量监督检查制度。
第二节 生物制品的质量检定
生物制品的基本属性和特点 其起始材料均为生物活性物质； 生物制品生产加工全过程是生物学过程，是 无菌操作过程； 有些生物制品的生产过程是有毒或有菌的过 程; 生物制品多为蛋白质或多肽类物质，分子量 较大，并具有复杂的分子结构, 较不稳定，易 失活，易被微生物污染，易被酶解破坏。
2018年11月26日星期一 9
第一节 生物制品的BMP管理
六、生物制品GMP认证检查要点
2．死毒与活毒 “活毒”是制备灭活疫苗的第一阶段或减毒活疫苗生产 时，将生产用细菌或病毒株进行大规模培养制备，其 生产过程和生产场所、生产设备、器材含有大量活的 细菌或活的病毒生物体，称之为“活毒”。 “死毒”是制备灭活疫苗时，第一阶段生产出大量活 细菌或或病毒后，到第二阶段，对活生物体加入一定 量甲醛或适宜灭活剂，将全部细菌或病毒杀死，称之 为“死毒”。 “活毒”与“死毒”的生产场所、生产设备及器材， 须严格分开。
2018年11月26日星期一
药物分析》生化药物分析ppt演示课件
发现并确定有 分离或合成控制 治疗作用的Pr 该Pr合成的基因
基因工程药物
分离纯化
将该基因导 入受体细胞
受体细胞 表达该Pr
6
重组胰岛素原的合成
胰脏
胰岛素原基因
胰岛素原
反转录酶
与质粒 连接
感染 E.coli
(A)n 胰岛素原mRNA cDNA
重组质粒
mRNA
转化细菌
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基因工程药物主要类别
蛋白质多肽类：
5）生物活性检查
6）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质 检查、外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残 留量等
7）效价（含量）测定 9
二、检验的程序和方法
收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》 程序和方法包括：
鉴别、杂质检查、安全性检查、含量 （效价）测定
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1.鉴别
反应序列信息
1）理化鉴别法：UV、肽图等
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2）生化分析法
❖ 酶法：
酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析
酶分析法
以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法
❖免疫分析法
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3）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性
测定效价时采用参考品，体内、体外 方法测定活性，计算效价IU
同时测定蛋白含量，计算特异比 （比活性，IU/mg）
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例：冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程
应用普通的或以基因工程、细胞工程、 蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得 的微生物、细胞及各种动物和人源的组 织和液体等生物材料制备的药品
分类：
自动免疫制品
菌苗、疫苗、类毒素
免疫血清
诊断制品
其他（包括血液制品、组织制品等）
5
Chap20生物制品分析概论
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a
无菌试验 基因工程药物中可能杂质与污染物检查
外源性DNA测定、宿主细胞蛋白质 致突变试验 生殖毒性试验
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a
第三节 常用定量分析法
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a
23
a
24
a
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a
色谱法
1．反相高效液相色谱法(RP-HPLC) 以(C4、C8、C18)烷基硅烷键合相为柱填料，以 甲醇-水、乙腈-水或甲醇、乙腈与缓冲液构成的 溶液为流动相，以紫外、荧光或电化学检测器为
低电渗流和吸附现象，可将毛细管内壁涂层。 (2)毛细管凝胶电泳：在毛细管中装入单体，引发
聚合形成凝胶，主要用于测定蛋白质、DNA等 大分子化合物。
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a
(3)胶束电动毛细管色谱 在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷 基硫酸钠，形成胶束，被分离物质在水相和 胶束相(准固定相)之间发生分配并隨电渗流 在毛细内迁移，达到分离。本模式能用于中 性物质的分离。
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a
过敏试验
过敏试验是检查异性蛋白的试验。药物中若夹 杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种 过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者 可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下 降，甚至休克和死亡。
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a
降压物质检查法 (Test for Depressor Substances)
降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低 的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低 的物质。
检测手段，这种色谱体系在生化药物(例如肽 类、氨基酸、蛋白质、多糖等)定量分析中应用 广泛。
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a
2.高效离子交换色谱法(HPIEC) HPIEC是蛋白质、多肽分离分析中常见的方法之 一。具有较高质量的活性回收。
学术会议闭幕式主持词
学术会议闭幕式主持词学术会议闭幕式主持词 1恭敬的领导、老师，亲爱的同学们，大家晚上好！首先，感谢大家能够在忙碌的周末中抽出时间来参加本次的讲座交流会。
我是今晚的主持人金晶。
为配合学院学风建设系列活动，开阔理工科同学的视野，让我系的学生对自己的未来有一个更清晰的规划，我系组织开展了本次学术交流活动。
本次交流活动主要通过座谈交流的形式开展，内容包括三个重要方面，分别为就业、考研和专业学术竞赛。
针对本次的学术交流会，我们还特意邀请了我系在相关方面有资深经验的老师以及学长学姐们，旨在让在坐的每位参预者能够在聆听和交流的过程中，对学业有一个更深层次的理解和自我解答，引导一种自我思量的思想。
接下来，请允许我向大家介绍一下出席本次学术交流会的老师与学长学姐，他们分别是：电子工程系行政秘书兼辅导员赵慧老师、电子工程系专业指导老师林斌老师、电子工程系张浩学长、陈智斌学长、阙良文学长、学长。
让我们以热烈的掌声对他们的到来表示热烈的欢迎和衷心的感谢!首先，让我们分别有请赵慧老师与张浩学长和我们分享一下他们关于就业相关方面的认识和经历！感谢赵慧老师和张浩学长的精彩分享！从他们的言谈中，我们不难发现，他们想要告诉我们这样一个道理：珍惜大学这个环境下给我们提供的各种充实自己的机会，认真学习、扎实工作，全面提升自身素质，为以后的职业生涯打下坚实的基础，为今后就业提供更多的机会！如今，越来越多的同学选择本科毕业后继续读研，就业压力的增大以及自身对专业更高的要求是同学们选择读研的两大重要原因。
本次学术交流会，我们特意邀请了林斌老师和陈智斌学长，让他们和大家交流一下他们关于考研的心得体味。
让我们以热烈的掌声欢迎他们！感谢林斌老师和陈智斌学长珍贵的亲身经历分享！兴许准备读研的同学们每一个人的学习方式是不一样的，但我相信，每一个准备读研并且坚持到最后的学子，都应该有着敢于吃苦的勇气和坚持不懈的毅力！众所周知，我系在智能车比赛以及电子作品设计大赛方面，都获得过骄人的成绩，我系也涌现了一大批相关方面的人材。
生物制品分析概论
三、生物鉴别法
生物学法 利用生物体对生物制品特定的生物活性
的反应为基础进行供试品的鉴别即为生 物学法。
三、生物鉴别法
示例：注射用重组人促红素（CHO细胞） 人促红素具有刺激网织红细胞生成的生物作用。 给小鼠皮下注射供试品后，其血液中网织红细 胞的数量随着人促红素注射量的增加而升高。 因此，中国药典2010年版三部收载的注射用重 组人促红素（CHO细胞），其原液的检定依据 人促红素独特的生物学活性，即采用网织红细 胞法。
需要标准品或对照品在同一条件下进行对照试验。 生物制品的鉴别不是由一项试验就能完成，而是依
据其特异的分子结构和(或)其他特性(包括理化性质 和生物学活性等)设计一组试验来全面评价一种药物。
一、理化鉴别法
化学法：通常利用药物与某试剂在一定条件下反应， 生成有颜色的产物或沉淀进行鉴别。
蛋白质类生物制品——蛋白质变性反应 胰蛋白酶+对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐→紫色 胃蛋白酶+鞣酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液→沉淀
重组人生长激素、重组人胰岛素、重组人干扰素1b、重 组人白细胞介素-2、重组人红细胞生成素（EPO）等
生物药物分类
生化药物
生物合成药物
生物制品
生物药物分类
生化药物:一般系指从动物、植物及微生物提取的， 也可用生物-化学半合成或用现代生物技术制得的生 命基本物质及其衍生物、降解物以及大分子结构修 饰物等，如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、辅酶、多 糖、脂质、核苷酸类等。
洗涤
兔抗大肠杆菌菌 体蛋白抗体
酶标板固相
菌体蛋白 含量
加入供试品 菌体蛋白与抗体结合
示例： ELISA法检测大肠杆菌表达系统生产的重组 制品中残留菌体蛋白含量
(推荐)《生物制品分析》PPT课件
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重量法：根据样品中分离出来的单体或化合物的重 量测定所含成分的含量的方法。
提取法：用适宜的溶剂提取样品中的某成分后挥去溶 剂进行测定的方法。
挥发法：利用被测组分的挥发性，或经过衍生化后将 其转化成挥发性物质来进行测定的方法。
沉淀法：将被测组分转化成沉淀，称定沉淀的重量来 计算含量的方法。
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光谱分析方法
比色法
利用样品与显色剂发生现色反应，根据反应产 物的颜色强度来测定含量。Elson-Morgan
硫酸软骨素的比色法测定：在酸性条件下使样品 水解成氨基己糖，再在碱性条件下与乙酰丙酮和 二甲氨基苯甲醛反应生成红色的产物，该产物在 525 nm处有最大吸收。
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具体试验操作： 1、制备对照品溶液－氨基葡萄糖 2、制备供试品溶液－硫酸软骨素 3、反应和测定－缩合反应和比色测定
生化药物 Biochemical drugs 生物合成药物 Biosynthetic drugs 生物制品 Biological products
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生化药物：生化药物是指从动物、植物及 微生物中提取的,或采用生物化学合成和现 代生物技术制得的生命基本物质及其衍生 物、降解产物以及大分子的结构修饰物等， 如氨基酸、多肽、蛋白质等。
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生物制品：是应用普通的生物技术获得 的微生物、细胞及组织等生物材料制备 用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
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生化药物和基因工程药物的分类
Hale Waihona Puke 氨基酸、多肽和蛋白质生酶和辅酶类
化 多糖类
药
物 脂质类药物
核酸及其降解产物
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基 因
激素和神经递质类 胰岛素、生长激素
工 细胞因子类 人干扰素、人白细胞素、促红细胞生成素
生物制品概述及检查要点ppt课件
2019-30来自重组DNA产品质量控制要点
6. 半成品及成品应按现行《中国生物制品规程》相关 标准进行检定；
7. 工程菌株应进行菌落形态、革兰氏染色、抗生素的 抗性、电镜检查、生化反应、表达量、质粒酶切图 谱等检查；
8. 工程细胞应进行外源因子（细菌、真菌、支原体、 病毒）检查、致病性实验、细胞鉴别试验、表达量 测定等；
主要产品：人血白蛋白
静注人免疫球蛋白
人免疫球蛋白
人凝血因子
特异性免疫球蛋白等
2019
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细胞因子和重组DNA产品
由健康人血细胞增值、分离、提纯或由重 组技术制成的多肽类或蛋白类制剂。
主要产品：干扰素(IFN) 白细胞介素(IL) 集落刺激因子(CSF) 红细胞生成素 (EPO)等
2019
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诊断制品
排斥野毒
病原
4. 可提纯抗原，加入佐剂增加 免疫效果
缺 1. 抗原不稳定，灭活即失效 1. 一般需注射2~3次才明显有效
2. 易污染其它病原 点
2. 一般仅产生体液免疫
3. 抗原要求量大，制造工艺较 繁琐
2019
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三、生物制品的基本属性和特点（一）
其起始材料均为生物活性物质；
生物制品生产加工全过程是生物学过程，是无 菌操作过程；
2019
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3
二、生物制品分类
按生物制品的组成和性质可分为: 疫苗（Vaccines） 抗毒素及免疫血清(Antitoxin and Antisera) 血液制品（Blood Products） 细胞因子和重组DNA产品（Cytokines and Recombinant DNA Products） 诊断制品(Diagnostic Reagents) 其他制品
生物制品检验技术
生物制品检验技术第一章绪论第一节生物制品概述一、生物制品的概念生物制品是应用普通或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物细胞及各种动物和人原的组织和液体等生物材料制备的。
用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
(主要包括细菌疫苗、病毒疫苗、血液制品、重组产品及诊断试剂等。
）二、生物制品检验的性质和任务（一）性质适用化学、物理化学或生物化学的方法和技术来研究生物制品的质量及其控制方法，是一门研究和开发生物制品及其质量控制的“技术学科”。
（二）内容检测生物制品的形状坚定生物制品的化学组成检查生物制品的杂质限量测定生物制品的含量（三）生物制品检验的任务1.生物制品的常规检验--以“生物制品质量全面监控”为中心，开展生物制品质量检验①成品检验(原料,制剂)②生产过种种质量控制(中间体),优化工艺③贮藏过程中的质量控制(稳定性考察)2.为新制品研究开发提供科学的质量控制方法①新制品开发及新剂型质量及稳定性研究②天然产物活性成分的化学结构确证③现代生物计数所研制的生物制品质量标准研究三、生物制品于药品的区别生物制品是药品的一大类别，但生物制品的其实材料都具有生物活性、其制备过程是无菌操作的生物学过程，并以生物学技术和分析技术来控制其原料，中间品及成品的质量。
因此，应根据生物制品生产和质量管理的固有特性，对生物制品的特殊要求进行规定。
药品：指用于预防、治疗、诊断人的疾病，有目的地调节人的生理机能并规定有适应症，用法和用量的物质。
（包括材料、重要饮片、中成药、化学原料及其制剂、抗生素、生化药品、放射性药品、血清制品和诊断药品等）小结生物制品是现代医学发展较早的一个领域。
随之额相关科学技术的发展，生物制品也最初的有关疫苗和血清发展到目前包括重组DNA产品在内的已批准上市的各种生物制品200多种，而且新的生物制品品种人迅速增加，现有的传统生物制品也不断摇陈出新，制品质量不断改进，并在预防，治疗和诊断疾病中发挥重要作用。
国际学术会议主持稿范本
国际学术会议主持稿范本主持词的写作特点就是自由随性。
不同主持词内容适应不同的节目，一个好的活动开展，不可或缺的是主持人富有魅力的主持。
今天小编在这里给大家分享一些有关于国际学术会议主持稿，供大家参考一下，希望对大家有所帮助。
国际学术会议主持稿1各位领导、各位来宾、老师们：金秋送爽，桂花飘香。
今天，我们迎来了酉阳教育界最尊贵的客人——全国教育改革家、特级教师魏书生老师。
作为新学年的一大盛事，魏老师将与我们一起分享他几十年教育教学的宝贵经验。
在这里，我谨代表酉阳县委教育工委、县教委以及全县15万师生员工向魏老师表示热烈的欢迎和崇高的敬意!花甲之年的魏书生老师莅临酉阳，我们全县师生倍感荣幸!关于魏老师，人们对他有这样的评语——魏书生曾是一名工人，却写了150次申请要求做老师。
魏书生是语文老师，用20个课时就教完200个课时的内容，且学生成绩好得出奇。
魏书生同时出任几个班的班主任，不管什么样的学生到了他的手上，个个品学兼优。
魏书生是一位称职的丈夫和父亲，家庭和谐，儿子以优异成绩考入清华大学。
魏书生曾是中国一位同时担任中学班主任、中学语文教师的市级在任教育局长。
魏书生巡游讲学海内外，至今演讲1400多场次、上公开课1000多节，所到之处，场场爆满。
魏书生不是作家，却出版了几十本专著，本本畅销。
魏书生从未上过大学，却做过大学校长，且同时被聘请为几所大学的兼职教授。
魏书生不是学者，但他的教育思想却作为教育成果在海内外推广了几十年。
魏书生看起来其貌不扬，但他光芒四射：他是"全国优秀班主任"、"全国十大杰出青年"、"全国十佳师德标兵"、"特级教师"、"全国劳动模范"、"全国有突出贡献的专家"、"五一劳动奖章"等荣誉称号的获得者，甚至有人把他尊称为"穿西装的孔子"，而他却始终认为自己最名副其实的称号还是"人民教师"。
生物制品分析概论
第三十四页
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二、生化鉴别法
1.酶法：
例：尿激酶的鉴别---气泡上升法
原理：
尿激酶
激活
牛纤维蛋白溶酶原
牛凝血酶
牛纤维蛋白原
蛋白结块 结块溶解：气泡上升
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方法：
取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白 原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝 血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水 浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝结，凝 结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结 块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白， 同法操作，凝结块在2小时内不溶。
重组人促红素：最大吸收 279nm±2nm； 最小吸收250nm±2nm；在320nm~360nm 处无吸收峰
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3.高效液相色谱法
主峰保留时间和肽图的一致性
结合N-末端氨基酸序列分析，是蛋白质 类生物制品精确的鉴别方法
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高效液相色谱法：
1、反相高效液相色谱法
2、分子排阻色谱法 毛细管电泳 1、毛细管区带电泳CZE
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重组DNA制品
天然基因
合成的核 苷酸序列
重组
内切酶 载
的遗
连接酶 体
传物
导
质
入
目的 分离纯化 受体
到
产物
细胞
增殖、表达
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重组DNA制品
• 细胞因子类 • 生长因子类 • 激素类 • 酶类 • 疫苗 • 单克隆抗体
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诊断制品
• 用于检测相应的抗原、抗体或机体免疫 状态的制品。
生物鉴别法
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