生物化学设计性实验报告

中央民族大学生命与环境科学学院

生物化学综合性设计实验报告

2012年12月

一种简便快捷提取小白鼠肝脏DNA 的方法 One a simple and convenient Methods of Genome DNA Extraction of

mouse

一种简便快捷提取小白鼠肝脏DNA的方法

吕梦春

中央民族大学生命与环境科学学院北京100081）

摘要: 主要运用了盐洗法提取小白鼠肝脏的基因组DNA, 利用分光光度计测定其OD260与OD280的吸光值,计算比率估计核酸的纯度, 并利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置, 鉴定DNA.实验结果显示，用盐析法提取的DNA纯度较高。是一种简单高效的提取动物肝脏的方法。

关键词:小白鼠;DNA提取; 琼脂糖凝胶电泳

One a simple and convenient Methods of

Genome DNA Extraction of mouse

Meng-chun Lv

（MINZU university of china,BEIJING,100081）

Abstract：The genome DNAs of mouse were extracted with . Then the ration of OD260 andOD280 was determined by ultraviolet spectrophotometer. The purity of the nucleic acid was calculated and the position of DNA segments in the gel was observed by agar sugar gel electrophoresis Finally, the methods was showed a simple, convenient, swift and economic method to genome DNA extraction.

Keywords: mouse; genome DNAs; agar sugar gel electrophoresis;

1.前言

20世纪50年代初, DNA被证明是所有生物最主要的遗传物质. 随着生物化学、分子生物学和遗传学的发展以及基因工程等生物技术的创立,有关DNA的实验技术也得到了飞速发展. 无论是基因工程, 还是蛋白质工程, 首先都需要从生物体中提取基因组DNA( genomic DNA), 所以DNA的分离提取在分子生物学以及相关学科的研究中是一个非常重要的步骤, 分离得到DNA样品质量的好坏直接关系到下一步实验的成败. 而基因组DNA提取和纯化方法的灵敏度、特异性直接影响DNA的质量. 因此, 许多学者一直在努力探索各种基因组DNA 的提取方法. 目前, 国内外已有多种提取DNA的方法, 如水煮法、酚抽提法、甲酰胺解聚法、盐酸胍裂解法、盐析法等. 在众多方法中,虽然有人对其进行过比较, 但究竟哪一种方法更适用于普遍意义上的DNA提取, 还未见报道. 本实验采用常用的盐洗法对小白鼠肝脏基因组DNA进行提取,是一种简便、快捷、实用的基因组DNA提取方法.

1.1实验目的

学习从生物中分离DNA（盐析法）的原理和方法；

掌握测定核酸DNA的原理和方法；

掌握核酸DNA的琼脂糖电泳的原理和方法；

1.2实验原理

1.2.1关于基因组DNA

不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。

本次试验中，主要利用不同浓度的NaCl 溶液, 将DNP和RNP从样品中抽提出来. 将抽提得到的核蛋白用SDS处理, DNA即与蛋白质分开. 可用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去,

而DNA则溶解在溶液中. 向溶液中加入适量的乙醇, DNA即析出. 为了防止DNA酶解, 提取时加入EDTA( 乙二胺四乙酸) 抑制DNase.加入了RNA酶，分解RNA。

1.2.2关于DNA纯度测定

紫外吸收是是实验室中最常用的测定DNA或RNA的方法，核酸样品的纯度可用紫外分光光度法进行测定、读出260nm与280nm的吸光度（A）即光密度（OD）值，从A260/A280的比值即可判断样品的纯度。纯DNA的A260/A280应大于1.8，纯的RNA应达到2.0.样品中如含有杂蛋白及苯酚，A260/A280比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法做定量测定。对于纯的样品，只要读出260nm的A值即可算出其含量。

通常以A值为1相当于50μg/ml双螺旋DNA,或40μg/ml单链DNA（或RNA），或20μg/ml寡核苷酸计算。这个方法既快速又相当准确，而且不会浪费样品。对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分理处区带后，经溴化乙锭染色在紫外灯下粗略地估计其含量。

1.2.3关于琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。

琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。

蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚苯烯酰胺低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。

DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH 溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。

我们需注意：

1）准备干净的配胶板和电泳槽

注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象

2）选择电泳方法