有机酸测定

反相液相色法谱测定 10 种有机酸
马淑伟 郭亦如 杨定忠
（Agela Technologies 天津 300457）
摘要： 本文建立了一种利用高效液相色谱同时分析 10 种有机酸的方法， Venusil MP C18 (5μm 4.6 在
mm x 250 mm ) 色谱柱上,0.1mol/L K2HPO4(pH2.05 )溶液和乙腈做梯度洗脱,流速为 1.0mL/min,柱温为
30 ℃,紫外检测波长为 210nm 时,可以很较好地分离常见的 10 种有机酸。 关键词：反相液相色谱 有机酸
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实验部分
1. 1 仪器与试剂
高效液相色谱系统:岛津LC-10A XMTG-8000 型柱温箱 酸度计(PHS-25) 分析纯磷酸、磷酸氢二钾(天津市化学试剂三厂)
1. 2 色谱条件
色谱柱: Venusil MP C18 (5μm,4.6mmi.d. ×250mm) 流 速:1.0mL/min
进样量:20μL 波 柱 长:210nm 温:30 ℃
流动相: 缓冲盐：13.6 克磷酸氢二甲溶解到 1000ml 水中，用磷酸调 pH=2.05，过滤； 梯度条件： 时间（min） 0 18 30 乙腈（%） 0 0 20 缓冲盐（%） 100 100 80
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2 结果与讨论 2. 1 检测波长的选定
用200～350nm (紫外) 光对10种有机酸的标准溶液进行扫描,结果表明10种有机酸均在210nm附近 有较大的吸收,重复性好,不受流动相中其他物质的干扰,故以下实验均采用210nm 波长进行检测。
2. 2 流动相浓度的选择
将流动相分别配成0.05 、0.10 、0.15 和0.20mol/L 的K2HPO4 溶液(用H3PO4 调pH 值为2.05 ) ,对 各有机酸进行分离。结果表明: 逐步增加流动相中磷酸盐的浓度,有机酸均能得到分离,且不影响分离效 果，但考虑到色谱柱的使用寿命，最终选定0.10 mol/L.
2. 3 流动相pH 值的选择
以不同pH 值(用H3PO4 调节)的0.10mol/L的K2HPO4溶液作流动相,测定各有机酸的保留时间,结果 显示流动相pH值对有机酸的分离影响很大。 综合考虑各有机酸间的分离度和色谱柱的pH范围， 选定2.05.
2. 4 分离条件的优化
以分离的影响因素流动相pH值、乙腈含量、流速和柱温做正交试验对分离条件进行优化，最终得 到优化条件：（1）由于丁酸保留太强所以选用梯度洗脱；（2）流速选用1.0ml/min；（3）柱温为30℃；
图1
10 种有机酸图谱
1 甲酸 2 丙酮酸 3 苹果酸 4 乳酸 5 乙酸 6 柠檬酸 7 琥珀酸 8 延胡索酸 9 丙酸 10 丁酸
2. 5 检测限、标准曲线、回收率
取同一果汁样品2 份,其中一份作本底,另一份添加一定量的10种有机酸标品溶液后测定各成分含量, 每份样品进行5 次平行测定,考察方法的回收率和精密度,以峰高A (mV) 对质量浓度C(mg/L) 求得线性 回归方程,以3 倍信噪比( S/ N ) 计算最小检测出限。
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表1 有机酸 甲酸 丙酮酸 苹果酸 乳酸 乙酸 柠檬酸 琥珀酸 延胡索酸 丙酸 丁酸
10种有机酸的回归方程、回收率和检测限 回归方程 检测限（µg/mL） 1.89 0.11 0.51 0.36 1.08 0.43 1.83 0.65 0.19 0.12 回收率 98.1 99.2 100.3 96.9 99.6 98.2 100.8 101.2 97.4 100.5
C = 3. 904+0. 7499×10-4 A C=0.0142+1.603×10-5A C =-0 .2998+2.983 ×10 -4 A C = 6. 601+0. 2120 ×10-4 A C =0. 2652+0. 9513×10 - 4 A C =0 .0153+4.966 ×10 -4 A C =0 .2320+1.06 ×10 -3 A C=0.1380+1.380×10-4A C=0.0705+1.920×10-3A C=5.1213+1.01×10-4A
3 结论：
经多次实验结果证明: 采用Venusil MP C18 (5μm,4.6mmi.d. ×250mm)色谱柱, 0.1mol/L 流速1.0mL/min, 在210nm 波长下,可以较好地分离果汁中常见 K2HPO4(pH2.05 )溶液和乙腈做梯度洗脱， 的10种有机酸，该方法具有测试组分多、简便等优点,对于鉴别果汁真假、控制果汁质量具有重要的意 义。
参考文献： [1]李小平, 姚浔平, 范建中, 金米聪，果汁中9种有机酸的反相高效液相色谱法测定，中国卫生检验杂志 2008年4月第18卷第4期
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