凝胶层析填空题1凝胶层析的分离原理有这三种
现代生化技术复习题
. 第一章提取与分离技术一、名词解释1、机械破碎法2、物理破碎法3、温度差破碎法4、压力差破碎法5、超声波破碎法6、渗透压变化法7、化学破碎法8、酶促（学）破碎法9、自溶法10、抽提11、盐溶12、盐析13、沉淀分离法14、分段盐析15、K S分段盐析16、β分段盐析17、等电点沉淀法18、有机溶剂沉淀法19、复合沉淀法20、金属盐沉淀法21、选择性变性沉淀法二、填空题1、细胞破碎的方法有、和。
2、机械破碎法按照使用机械的不同可分为、和。
3、常用的物理破碎法有、和等。
4、常用的压力差破碎法有、和等。
5、化学破碎法采用的表面活性剂有和两种。
其中之一按其带电荷性质又可分为和两种。
6、根据抽提时所采用的溶剂或溶液的不同。
抽提的方法主要有、、和等7、常用的沉淀分析法有、、、、和等。
8、常用的金属盐沉淀法有和。
9、蛋白质盐析时，带入大量盐离子杂质，可采用、和方法脱盐。
10、要分离和提纯核酸过程中，常用来沉淀DNA和RNA。
11、常用的使蛋白质沉淀的方法有、、、和等。
12、三、是非题（对的打√、错的打×）1、渗透压变化法可用于革兰氏阳性菌的破碎。
（）2、有机溶剂破碎细胞主要是使细胞膜磷脂结构破坏，从而使细胞膜的透过性增强。
（）3、用化学法破碎细胞提取酶时，经常用离子型表面活性剂。
（）4、用化学法破碎细胞提取酶时，用非离子型表面活性剂最好。
（）5、对于具有细胞壁结构的细胞采用酶法破碎时，应根据细胞壁结构选择不同的酶。
（）6、酸性物质易溶于酸性溶剂中，碱性物质易溶于碱性溶液中。
（）7、在等电点时两性电解质溶解度最小。
（）8、抽提两性电解质时应避开其等电点。
（）四、选择题1、利用突然降压法破碎革兰氏阴性大肠杆菌应选择期的细胞破碎效果最佳。
A 调整期B 对数生长期C 平衡期D衰退期2、提取膜结合酶采用法破碎细胞最佳。
A 高压冲击法B 突然降压法C 渗透压变化法3、超声波破碎法最适合于破碎。
A 动物细胞B 植物细胞C 微生物细胞4、利用超声波法破碎微生物细胞对期的细胞破碎效果最佳。
凝胶层析_实验报告
一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理和操作方法。
2. 掌握凝胶层析分离混合物中不同组分的基本技能。
3. 分析实验结果，验证实验原理。
二、实验原理凝胶层析是一种基于分子筛效应的分离技术。
该技术利用凝胶的孔隙结构，使不同分子量的物质在凝胶柱中受到不同的阻滞作用，从而实现分离。
凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛，分子量不同的物质通过凝胶柱的速度也不同。
在凝胶层析实验中，样品被注入凝胶柱，随着洗脱液的流动，不同分子量的物质会以不同的速度通过凝胶柱，从而实现分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：混合样品、葡聚糖凝胶、洗脱液（如蒸馏水、乙醇等）。
2. 实验仪器：凝胶层析柱、注射器、恒流泵、收集器、滤纸、烧杯等。
四、实验步骤1. 准备凝胶层析柱：将葡聚糖凝胶倒入层析柱，轻轻敲打柱底，使凝胶均匀分布。
2. 洗脱液平衡：将凝胶层析柱放入盛有洗脱液的烧杯中，使凝胶充分浸泡。
3. 样品制备：将混合样品与洗脱液按一定比例混合，制成样品溶液。
4. 注射样品：将样品溶液注入凝胶层析柱。
5. 收集分离组分：随着洗脱液的流动，不同分子量的物质会以不同的速度通过凝胶柱。
将收集器放置在凝胶柱下方，收集分离组分。
6. 分析实验结果：观察收集到的组分，分析实验结果。
五、实验结果与分析1. 分离效果：通过凝胶层析实验，成功分离出混合样品中的不同组分。
2. 分组情况：根据收集到的组分，分析其分子量大小，确定分离效果。
3. 实验原理验证：实验结果表明，凝胶层析能够有效分离混合物中的不同组分，验证了实验原理。
六、实验讨论1. 凝胶层析的原理：凝胶层析的原理是基于分子筛效应，通过凝胶的孔隙结构，使不同分子量的物质在凝胶柱中受到不同的阻滞作用，从而实现分离。
2. 影响分离效果的因素：实验过程中，洗脱液的种类、流速、凝胶的孔径等因素会影响分离效果。
在实验中，应严格控制这些因素，以确保分离效果。
3. 实验结果分析：通过分析实验结果，可以了解不同组分在混合样品中的含量和分子量大小，为后续研究提供数据支持。
5 葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质
葡聚糖凝胶柱层析 分离纯化蛋白质
教学目标
了解：层析技术的基本原理;
有效分配系数Kav的计算。
理解：葡聚糖凝胶的选择和准备。 掌握：凝胶层析的原理和操作方法;
积Ve有关：
Kav = （Ve — Vo）/（Vt — Vo）
Vt和Vo恒定，Ve随分离物分子量的变化而变化
？ 思考：为什么分离物分子量越大Kav值越小
葡聚糖凝胶柱层析法的特点
天然凝胶：一些糖类物质，如淀粉、琼脂及琼脂糖等。 人工合成凝胶：葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两大类。
葡聚糖凝胶（Sephadex）：由许多右旋葡萄糖单位通过 1，6-糖苷键联结成链状结构，再由交联剂交联形成不溶 水的多孔网状高分子化合物。
溶解度 等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀等
电荷 电泳、离子交换层析等
吸附性质 吸附层析
对配体分子 亲和层析 的亲和力
凝胶层析的基本原理
凝胶层析（又叫分子筛层析或排阻层析） 指混合物随流动相经过装有凝胶作为固 定相的层析柱时，各组分因分子大小不 同而被分离的技术。
凝胶层析的过程
凝胶层析过程的数理关系
适用范围
脱盐、小肽等 低分子量蛋白、多肽 中、低分子量蛋白、多肽 中、高分子量蛋白 高分子量蛋白
X：① 交联度。X越小，交联度越大，网孔越小，适用于分离低分子 量产品。反之亦然。
② 吸水量。G-25表示：1g干胶吸水2.5mL，依次类推。
• 本实验中用Sephadex G 50（分离分子量范围 1500~20000），以蒸馏水为洗脱剂。
生物制药工艺学习题凝胶层析
第七章凝胶层析一、填空题1、凝胶层析的分离原理有、、。
这三种分离原理是互相补充的，在通常情况下起主导作用；的作用随流速增加而加强；只有在流速很高时才起作用。
2、琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大，其分离范围随着凝胶浓度上升而，颗粒强度随浓度上升而。
3、凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响。
一般来说，细粒凝胶柱流速低，洗脱峰窄，分辨率，多用于等。
粗粒凝胶柱流速高，洗脱峰平坦，分辨率，多用于等。
4、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大倍以上的柱体积，以上的柱比，较吸液量、较粒的凝胶固定相。
5、溶质通过色谱柱时造成的峰加宽效应包括、、、。
6、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于，其越小，凝胶孔径越；而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于。
二、选择题1、凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是（）A.凝胶排斥B.凝胶吸附C.柱床过长D.流速过低2、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<1，其原因是（）A.水合作用B.凝胶吸附C.柱床过长D.流速过低3、在凝胶层析中样品各组分最先淋出的是（）A.分子量最大的B.体积最大的C.分子量最小的D.体积最小的4、为了进一步检查凝胶柱的质量，通常用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是（）A.观察柱床有无沟流B.观察色带是否平整C.测量流速D.测量层析柱的外水体积5、在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是（）A.粗且长的B.粗且短的C.细且长的D.细且短的三、名词解释1、全排阻：2、类分离：3、分级分离：4、柱比：5、操作压：6、全渗入：7、分离度R s：四、问答题1、试述公式V e=V0+K d V i 各字母的物理意义。
2、利用凝胶层析如何测定蛋白质的分子量？3、凝胶层析的应用主要有哪些？并说明其原理。
第七章凝胶层析（答案）一、填空题1、凝胶层析的分离原理有平衡排除理论、扩散分离理论、流动分离理论。
凝胶层析法的原理及应用
凝胶层析法的原理及应用原理凝胶层析法是一种分离和纯化生物大分子的常用方法。
它利用凝胶的孔隙结构和生物大分子的大小、形状、电荷等特性来实现分离。
凝胶通常是由聚丙烯酰胺、琼脂糖等材料制成，形成了一种类似于海绵状的结构。
在凝胶层析法中，样品首先加载到凝胶柱或凝胶板上，然后通过加入缓冲液，使样品在凝胶中进行扩散。
扩散的速率取决于生物大分子的特性和凝胶的孔隙大小。
较大的分子会更慢地扩散，而较小的分子则会更快地扩散。
分离的原理基于这样的事实：样品中的生物大分子在凝胶中扩散并与凝胶中的孔隙进行互相排斥。
较大的分子会受到较大的阻力，因此在凝胶中停留的时间更长。
而较小的分子则会更快地通过凝胶孔隙。
通过调整凝胶的孔隙大小和选择合适的缓冲液pH值、离子强度等条件，可以实现按照分子大小和形状的分离。
应用凝胶层析法广泛应用于生物化学、分子生物学、蛋白质组学等领域的分离和纯化工作。
以下是一些常见的应用：1.蛋白质分离与纯化：凝胶层析法是蛋白质分离与纯化的常用方法之一。
可以根据不同的分子量选择不同的凝胶柱或凝胶板，实现蛋白质按照分子量的分离纯化。
2.DNA/RNA分离和纯化：凝胶层析法也可以用于DNA和RNA的分离和纯化。
通过选择合适的凝胶孔隙大小和调整缓冲液条件，可以实现不同大小的DNA/RNA分子的分离和纯化。
3.脱盐和浓缩：在凝胶层析过程中，可以通过透析和洗涤步骤去除样品中的盐和其他杂质。
此外，也可以利用凝胶的亲水性来浓缩目标分子。
4.药物分子筛选：凝胶层析法也可用于药物分子筛选。
通过以目标分子为模板，筛选出与其有特异性亲和力的分子。
5.分析性凝胶层析：凝胶层析法还可以用于生物大分子的定量分析。
通过将样品和标准分子一同加载到凝胶中，可以通过测量样品和标准分子的扩散距离来确定样品中特定分子的含量。
结论凝胶层析法是一种重要的生物大分子分离和纯化的方法。
它基于凝胶的孔隙结构和生物大分子的特性，实现了按照分子大小、形状和电荷的分离。
生化分离技术 考试复习题库(含详细答案)
《生化分离》考试复习题库一、选择题1.下列不是超临界萃取工艺的方法是（）。
A 等温法B 等压法C 吸附法D 交换法2.影响絮凝效果的因素有很多，但不包括（）。
A 絮凝剂的浓度B 溶液pH值C 溶液含氧量D 搅拌速度和时间3.葡聚糖凝胶色谱属于排阻色谱，在化合物分离中，先被洗脱下来的为（）。
A 杂质B 小分子化合物C 大分子化合物D 两者同时下来4.当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（）。
A 增大B 减小C 先增大，后减小D 先减小，后增大5.下列不能提高发酵液过滤效率的措施是（）。
A 增大滤过面积B 降低料液温度C 加压或减压D 加入助滤剂6.下列方法中，哪项不属于改善发酵液过滤特性的方法A 调节等电点B 降低温度C 添加表面活性物质D 添加助滤剂7.助滤剂应具有以下性质（）A 颗粒均匀、柔软、可压缩B 颗粒均匀、坚硬、不可压缩C 粒度分布广、坚硬、不可压缩D 颗粒均匀、可压缩、易变形8.在发酵液中除去杂蛋白质的方法，不包括（）A 沉淀法B 变性法C 吸附法D 萃取法9.下列关于速率区带离心法说法不正确的是（）A 样品可被分离成一系列的样品组分区带B 离心前需于离心管内先装入正密度梯度介质C 离心时间越长越好D 一般应用在物质大小相异而密度相同的情况10.助滤剂是一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。
以下不属于助滤剂的是（）A 氯化钙B 纤维素C 炭粒D 硅藻土11.细胞破碎的方法可分为机械法和非机械法两大类，下列不属于机械法的是（）A 加入金属螯合剂B 高压匀浆法C 超声破碎法D 珠磨法12.萃取操作是利用原料液中各组分（）的差异实现分离的操作。
A 溶剂中的溶解度B 沸点C 挥发度D 密度13.两相溶剂萃取法的原理为：A 根据物质在两相溶剂中的分配系数不同B 根据物质的熔点不同C 根据物质的沸点不同D 根据物质的类型不同14.下列溶液不是双水相的是（）。
A PEG/葡聚糖B PEG/磷酸盐C PEG/硫酸铵D 磷酸盐/硫酸铵15.在萃取操作中，分离系数越小，组分（）分离。
凝胶层析
原理简单说就是分子量不同通过凝胶柱的速度也不同凝胶是一种具有多孔,网状结构的分子筛.利用这种凝胶分子筛对大小,形状不同的分子进行层析分离,称凝胶层析 .凝胶层析的应用范围:凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质,酶,多肽,激素,多糖,核酸类等物质.分子大小彼此相差25%的样品,只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开.利用凝胶的分子筛特性,可对这些物质的溶液进行脱盐,浓缩,去热源和脱色.凝胶层析的优点凝胶层析具有设备简单,操作方便,分离迅速及不影响分子生物学活性等优点.目前已被广泛应用于各种生化产品的分离和纯化.-,凝胶层析的基本原理凝胶层析的原理l 分子大小不同混合物上柱; 2 洗脱开始,小分子扩散进人凝胶颗粒内,大分子被排阻于颗粒之外;3 大小分子分开: 4大分子行程较短,已洗脱出层析柱,小分子尚在进行中凝胶是一类多孔性高分子聚合物,每个颗粒犹如一个筛子.当样品溶液通过凝胶柱时,相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的孔隙,随着溶剂流动,因此流程较短,向前移动速度快而首先流出层析柱;反之,相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔,可自由地进出凝胶颗粒的网孔,在向下移动过程中,它们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入与逸出,使流量增长,移动速率慢而最后流出层析柱.而中等大小的分子,它们也能在凝胶颗粒内外分布,部分进入颗粒,从而在大分子物质与小分子物质之间被洗脱.这样,经过层析柱,使混合物中的各物质按其分子大小不同而被分离.1.凝胶的预处理交联葡聚糖凝胶的市售商品多为干燥颗粒，使用前必须充分溶胀。
方法是将欲使用的干凝胶缓慢地倾倒入5～10倍的去离子水中，参照相关资料中凝胶溶胀所需时间，进行充分浸泡，然后用倾倒法除去表面悬浮的小颗粒，并减压抽气排除凝胶悬液中的气泡，准备装柱。
在许多情况下，也可采用加热煮沸方法进行凝胶溶胀，此法不仅能加快溶胀速率，而且能除去凝胶中污染的细菌，同时排除气泡。
凝胶层析习题.
凝胶层析习题1.凝胶层析法的基本原理？答：凝胶层析法的基本原理是不同相对分子质量的物质通过凝胶床(柱)时，相对分子质量低的物质由于可以在凝胶内扩散，因此移动速度较慢，而相对分子质量高的物质则容易通过，从而达到分离的目的。
2.凝胶层析法常用凝胶的种类和特点答：凝胶层析法常用的凝胶有天然凝胶（如琼脂凝胶）和人工合成凝胶（如交联葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶）。
特点：①琼脂凝胶有较大的孔隙，允许较大的分子渗入，因而其工作范围远大于交联葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶，琼脂凝胶的最大弱点是它带有大量电荷（主要是磺酸基，也带有一定量的羧基），层析时常需使用较高离子强度的洗脱液，这使得洗脱物中含有一定量的盐分而影响产品纯度。
②聚丙烯酰胺凝胶由于全有碳——碳骨架构成，因而它是完全惰性的，适宜作为凝胶层析的载体，缺点是不耐酸，遇酸时酰胺键会水解成羟基，使凝胶带有一定的离子交换基团，一般只在PH2～11的范围内使用。
③交联葡聚糖凝胶化学性质比较稳定，不溶于水、弱酸、碱和盐溶液。
3.不同性质的物料（热敏性、高粘度、易结垢或易析出晶体、发泡性、腐蚀性）如何蒸发浓缩设备？答：1.对于热敏性的发酵产品；蒸发温度要低、滞留时间要短；选用薄膜式蒸发器。
2.对于高粘度的溶液；溶液流速要高，不停搅动；选用强制循环型、刮板式、降膜式薄膜蒸发器。
3.对于易结垢或易结晶的溶液；垢层和结晶不易粘附在管壁；强制循环蒸发器。
4.对于发泡性的溶液；使泡沫破裂，添加消泡剂。
选用强制循环型、长管膜式蒸发器；5.对于腐蚀性的物料；设备材料抗腐蚀，使用不锈钢、石墨、玻璃、搪瓷、防腐涂层等。
4.简述强制循环蒸发浓缩和薄膜式蒸发浓缩过程的特点及适用范围？答：强制循环蒸发浓缩的优点为料液流速大，达3.5m/s，传热系数较高，可防止料液结垢；缺点：动力消耗大。
适宜于浓缩粘度大、易结晶析出与易结垢的发酵和发酵产品的物料。
薄膜式蒸发浓缩的优点：占地少，传热效率较高，料液受热时间短，在加热管内停留几秒到几十秒。
制药工艺学简答题(有答案)
名词解释1.药物：用于预防、治疗或诊断疾病或调节机体生理机能、促进机体康复保健的物质，有4大类：预防药、治疗药、诊断药和康复保健药。
2.药品：指用于预防、治疗、诊断人的疾病，有目的的调节人的生理机能，并规定有适应症、用法和用量的物质。
3.生物药物：是利用生物体、生物组织、细胞或其成分，综合应用生物学、物理化学和现代药学的原理与方法加工制造而成的一大类用于预防、诊断、治疗和康复保健的药物。
4.DNA重组药物：指应用基因工程和蛋白质工程技术制造的重组活性多肽、蛋白质及其修饰物。
5.基因药物：以遗传物质DNA、RNA为物质基础制造的药物，包括基因治疗用的重组目的DNA片段、基因疫苗、反义药物和核酶等。
6.生化药物：具体运用生物化学研究方法，从生物体中经提取、分离、纯化获得天然活性物质或结构改造创造出自然界没有的新活性物质，通称生化药物。
7.微生物药物：微生物在其生命活动过程中产生的生理活性物质及其衍生物，包括抗生素、酶抑制剂、免疫调节剂等一类化学物质的总称。
8.生物制品：生物制品是应用基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
9.中试放大：中试放大是在实验室小规模生产工艺路线打通后，采用该工艺在模拟工业化生产的条件下所进行的工艺研究，以验证放大生产时原工艺的可行性，保证研发和生产时工艺的一致性。
10.超滤：一种流体切向流动和压力驱动的过滤过程，并按照分子量大小来分离水中颗粒。
11.切向流：指液体流动方向与过滤方向呈垂直方向的过滤形式。
12.干燥：使物质从固体或半固体状态经除去存在的水分或其他溶剂，从而获得干燥物品的过程，分为低温真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥。
13.冷冻干燥：（1）在低温、低压条件下，利用水的升华性能而进行的一种干燥方法。
（2）把含有大量水分物质，预先进行降温冻结成固体，然后在真空的条件下使水蒸气直接升华出来，而物质本身剩留在冻结的冰架中。
生物制药工艺学复习总结全解
《生物制药工艺学》第四章萃取分离法（答案）一、填空题1、常用的萃取方法有：单级萃取、多级错流萃取、多级逆流萃取。
2、影响溶剂萃取的因素：乳化和破乳化、PH的影响、温度和萃取时间的影响、盐析作用的影响、溶剂种类、用量及萃取方式的影响。
3、破乳方法有：加入表面活性剂、离心、加电解质、加热、吸附法破乳、高压电破乳、稀释法、超滤、反应萃取。
4、常用的破乳剂有：阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂。
二、名词解释1、液-液萃取：是指用一种溶剂将物质从另一种溶剂（如发酵液）中提取出来的方法，根据所用溶剂的性质不同或萃取机制不同，可将液-液萃取分为多种类型。
2、萃取：在溶剂萃取中，被提取的溶液称为料液，其中与提取的物质称溶质，而用以进行萃取的溶剂称为萃取剂。
料液与萃取剂接触后，料液中的溶质向萃取剂转移的过程称为萃取，达到萃取平衡后，大部分溶质转移到萃取剂中，这种含有溶质的萃取剂溶液称为萃取液，而被萃取出溶质以后的料液称为萃余液。
3、反萃取（stripping）：是将萃取液与反萃取剂（含无机酸或碱的水溶液，有时也可以是水）相接触，使某种被萃入有机相的溶质转入水相，可把这种过程看作萃取的逆过程。
4、分配定律：即在一定温度，一定压力下，某一溶质在互不能相溶的两种溶剂间分配时，达到平衡后，在两相中的活度之比为一常数。
5、萃取因素：也称萃取比，其定义为被萃取溶质进入萃取相的总量与该溶质在萃余相中总量之比，通常以E表示。
6、萃取率（percentage extraction）：生产上常用萃取率来表示一种萃取剂对某种溶质的萃取能力，计算萃取效果，其公式为：7、分离因素：在同一萃取体系内两种溶质在同样条件下分配系数的比值。
三、问答1、简述溶剂萃取法的优点。
答：①操作可连续化，反应速度快，生产周期短；②对热敏物质破坏少；③采用多级萃取时，溶质浓缩倍数大、纯化度高。
2、简述选择萃取溶剂应遵守的原则。
答：①分配系数愈大愈好，若分配系数未知，则可根据“相似相容”的原则，选择与药物结构相近的溶剂；②选择分离因数大于1的溶剂；③料液与萃取溶剂的互溶度愈小愈好；④尽量选择毒性低的溶剂；⑤溶剂的化学稳定性要高，腐蚀性低，沸点不宜太高，挥发性要小，价格便宜，来源方便，便于回收。
生化实验试题参考
生化实验试题参考生物化学实验二、填空题：1. 测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚试剂法（或Lowry法） )和（考马斯亮蓝G-250染色法）。
2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以（以一定时间内分解的H2O2量）来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用（碘量法）测定未分解的H2O2。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以（聚丙烯酰胺凝胶）作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由（Acr）和交联剂（Bis）在催化剂作用下聚合而成。
化学聚合法一般用来制备（分离）胶，其自由基的引发剂是（Ap），催化剂是（TEMED）；光聚合法适于制备大孔径的（浓缩）胶，催化剂是（核黄素）。
4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：（吸附层析），（分配层析），（离子交换层析），（凝胶层析）和（亲和层析）。
5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管（等重）且对称放入离心机。
6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S 的亲合力愈（大），Km愈大，表示E对S的亲合力愈（小）。
7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须__（打开）____（打开、合上）样品池翻盖。
8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的（抗逆性）密切相关。
9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。
10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。
引发产生自由基的方法有两种：（化学法）和（光聚合法）。
11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：（柱层析），（纸层析），（薄层层析）和（薄膜层析）。
参考答案：生物化学实验一、名词解释：1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。
2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。
凝胶层析的原理是什么
凝胶层析的原理是什么
凝胶层析是一种常见的生物分离技术，它利用凝胶作为分离介质，根据生物分子的大小、电荷、亲和性等特性进行分离。
其原理
主要包括凝胶选择性分离、分子迁移速度差异和分子间相互作用三
个方面。
首先，凝胶选择性分离是凝胶层析的基本原理之一。
凝胶是一
种由交联聚合物构成的三维网络结构，其孔隙大小可以根据需要进
行调控。
当混合物通过凝胶时，分子会根据自身大小和形状被不同
大小的孔隙所排斥或者通过，从而实现分子的选择性分离。
大分子
通常会被排斥在较小的孔隙中，而小分子则可以更容易地通过凝胶，这样就实现了分子的大小选择性分离。
其次，分子迁移速度差异也是凝胶层析的原理之一。
在电泳过
程中，分子会在电场的作用下向相反方向迁移。
由于不同分子的大小、形状、电荷等特性不同，它们在电场下的迁移速度也会有所差异。
因此，通过在凝胶中进行电泳，可以实现分子的迁移速度差异，从而实现分子的分离。
最后，分子间的相互作用也是影响凝胶层析分离效果的重要因
素。
生物分子之间存在着各种相互作用，如静电作用、亲和作用、
疏水作用等。
这些相互作用会影响分子在凝胶中的迁移速度和分布，进而影响分子的分离效果。
因此，在进行凝胶层析时，需要考虑分
子间相互作用的影响，选择合适的凝胶和实验条件，以实现有效的
分离。
综上所述，凝胶层析的原理主要包括凝胶选择性分离、分子迁
移速度差异和分子间相互作用三个方面。
通过合理利用这些原理，
可以实现对生物分子的有效分离，为生物学研究和生物制药工业提
供了重要的分离技术支持。
蛋白质化学试题及答案
蛋白质化学试题及答案蛋白质化学试题及答案蛋白质化学篇一：蛋白质化学作业-答案蛋白质化学作业一：名词解释：等电点：在某一种特定PH的溶液中，某物质以两性离子形式存在，所带的正负电荷总数相等，静电荷数为零，在电场中它即不向正极移动也不向负极移动，此时的PH值为该物质的等电点。
盐析和盐溶：蛋白质溶液中加入中性盐后，因盐的浓度不同可产生不同的反应。
低盐浓度时，随盐浓度的增加，蛋白质溶解度增加的现象，称为盐溶。
而高浓度中性盐可使蛋白质分子脱水并中和其电荷，从而使蛋白质从溶液中沉淀出来，称为盐析。
蛋白质变性：天然蛋白质分子由于受到物理或化学因素的影响使次级键断裂，引起天然构象的改变，导致其生物活性的丧失及一些理化性质的改变，但未引起肽键的断裂，这种现象称为蛋白质的变性。
结合蛋白：由简单蛋白质即只有氨基酸成分的蛋白质与非蛋白质组分结合而成，其非蛋白质组分通常称为辅基。
蛋白质亚基：是组成蛋白质四级结构最小的共价单位。
在具有四级机构的蛋白质中有三级机构的球蛋白称为亚基。
它可由一条肽链组成，也可由几条肽链通过二硫键和次级键连接在一起组成。
酰胺平面：肽键中C-N具有双键的性质，因而C-N不能自由旋转，这样使得与它相连的原子都固定在一个平面，这个平面就称为酰胺平面。
诱导契合：酶分子活性中心的结构原来并非和底物的结构互相吻合，但酶的活性中心是亲性的而非刚性的，当底物与酶相遇时，可诱导酶活性中心的构象发生相应的变化，其上有关的各个集团达到正确的排列和定向，因而使酶和底物契合而结合成中间络合物，并引起底物发生反应。
反应结束当产物从原酶上脱落下来后，酶的活性中心有恢复了原来的构象。
二：判断题：2题对，其余错三：填空题：1. 色氨酸、酪氨酸2. ①二硫键②疏水键③范得华力3. ①协同②变构4. ①α--氨基②α-羧基③侧链可解离基团四：选择题：（1）：1；（2）：3；（3）：2五：问答题：1，叫蛋白质的一级、二级、三级、四级结构？维持以上各层次结构的作用力有哪些？蛋白质一级结构：由氨基酸在多肽链中的数目、类型和顺序所描述的多肽链的基本结构。
生物制药工艺学习题选择填空
第一章生物药物概述一、填空：1、我国药物的三大药源指的是化学药物、生物药物、中药2、现代生物药物已形成四大类型，包括基因重组多肽和蛋白质、基因药物、天然生化药物、合成与部分合成的生物药物二、选择题：1、以下能用重组DNA技术生产的药物为（B）A、维生素B、生长素C、肝素D、链霉素2、下面哪一种药物属于多糖类生物药物（C）A、洛伐他汀B、干扰素C、肝素D、细胞色素C3、能用于防治血栓的酶类药物有（D）A、SODB、胰岛素C、L-天冬酰胺酶D、尿激酶4、环孢菌素是微生物产生的（A）A、免疫抑制剂B、酶类药物C、酶抑制剂D、大环内酯类抗生素5、下列属于多肽激素类生物药物的是（D）A、ATPB、四氢叶酸C、透明质酸D、降钙素6、蛋白质工程技术改造的速效胰岛素机理是（D）A. 将猪胰岛素B30位改造为丙氨酸，使之和人胰岛素序列一致B. 将A21位替换成甘氨酸，B链末端增加两个精氨酸，使之在pH4溶液中可溶C. 将B29位赖氨酸用长链脂肪酸修饰，改变其皮下扩散和吸收速度D. 将人胰岛素B28位与B29位氨基酸互换，使之不易形成六聚体第二章生物制药工艺技术基础一、填空题1、从生物材料中提取天然大分子药物时，常采用的措施有采用缓冲系统、添加保护剂、抑制水解酶作用等。
2、生化活性物质浓缩可采用的方法有盐析浓缩、有机溶剂沉淀浓缩、超滤浓缩、真空减压浓缩或薄膜浓缩、用葡聚糖凝胶浓缩、用聚乙二醇浓缩3、生化活性物质常用的干燥方法有减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥4、冷冻干燥是在低温、低压条件下，利用水的升华性能而进行的一种干燥方法。
5、微生物菌种的分离和纯化可以用的方法有平板划线法、稀释后涂布平板法。
6、微生物菌种的自然选育是指利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理，通过分离、筛选排除衰变型菌落，选择维持原有生产水平的菌株。
7、诱变时选择出发菌株时应考虑出发菌株的稳定性、选用具备某种优良特性、对诱变剂敏感、菌种的生理状态及生长发育时间等问题。
凝胶层析法的基本原理
1.凝胶层析法的基本原理？答：层析须在两相系统间进行。
一相是固定相，需支持物，是固体或液体。
另一相为流动相，是液体或气体。
当流动相流经固定相时，被分离物质在两相间的分配，由平衡状态到失去平衡到又恢复平衡，即不断经历吸附和解吸的过程。
2.凝胶层析法常用凝胶的种类和特点？聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，凝胶色谱法经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。
交联剂越多，孔隙越小。
聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶—P ( Bio-Gel P),由日本tosoh的TSKGE啲pw系列，适合蛋白和多糖的纯化。
交联葡聚糖凝胶⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephadex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。
例如，G-25 为每克凝胶膨胀时吸水 2.5克，同样G-200克每克干胶吸水20克。
交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15, G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。
因此，“G'反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。
⑵Sephadex LH-20，是一Sephadex G -25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。
琼脂糖凝胶商品名很多，常见的有，Sepharose (瑞典，pharmacia )，Bio-Gel-A （美国Bio-Rad ）等。
琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢 键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。
一般情况下，它 的结构是稳定的，可以在许多条件下使用 （如水，pH4-9范围内的盐溶液） 琼脂糖凝胶在40C 以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构， 可用于分离分子量 1600到40,000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级， 凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。
凝胶层析分离混合物的基本原理是
凝胶层析分离混合物的基本原理是什么？凝胶层析分离是一种常用的分离混合物的方法，其基本原理是利用凝胶的孔隙大小和化学性质对混合物进行分离。
凝胶层析分离可应用于蛋白质、核酸、多肽等生物大分子的纯化和分离，也可用于有机化合物、药物等小分子的纯化和分离。
一、凝胶层析分离的基本原理1. 凝胶凝胶是一种高度交联的聚合物网络，具有孔隙结构。
根据其孔隙大小，可将其分为大孔径凝胶和小孔径凝胶。
大孔径凝胶适用于较大的蛋白质或核酸等生物大分子的纯化；小孔径凝胶适用于较小的有机化合物或药物等小分子的纯化。
2. 分子大小在混合物中，不同成分之间存在着不同大小和形状差异。
在经过凝胶层析时，由于不同成分之间存在着不同大小和形状差异，因此会在不同程度上进入到凝胶孔隙中，并被凝胶网格所捕获，从而实现分离。
3. 化学特性凝胶的化学特性也是影响凝胶层析分离的重要因素。
例如，具有亲水性的凝胶可用于纯化水溶性蛋白质；具有亲油性的凝胶可用于纯化非极性有机化合物等。
二、凝胶层析分离的操作步骤1. 准备样品将待分离的混合物进行适当处理，如去除杂质、调整pH值等。
2. 准备凝胶根据需要选择适当孔径和化学特性的凝胶，并进行预处理，如膨胀、均匀化等。
3. 充填柱子将处理好的凝胶充填到柱子中，并进行均匀压实。
4. 样品加入将待分离样品加入到柱子中，并缓慢通入缓冲液。
5. 分离过程在缓慢通入缓冲液的过程中，不同成分会在不同程度上进入到凝胶孔隙中，并被捕获。
从而实现分离。
此时，需要根据需要调整缓冲液pH 值、离子强度等条件，以促进分离。
6. 收集分离物根据需要收集分离出的不同成分，并进行后续处理或分析。
三、凝胶层析分离的优缺点1. 优点凝胶层析分离方法具有操作简单、易于掌握、对样品无损伤等优点。
同时，由于凝胶的孔隙大小和化学性质可根据需要进行选择，因此可适用于不同类型混合物的纯化和分离。
2. 缺点凝胶层析分离方法也存在一些缺点，如操作时间较长、对样品量要求较高等。
凝胶层析的原理是什么
凝胶层析的原理是什么凝胶层析是一种分离和纯化生物大分子的方法，它利用了生物大分子在凝胶中的迁移速度差异来实现分离的目的。
凝胶层析的原理主要包括凝胶的选择、凝胶的制备、样品的加载和电泳条件的选择。
首先，凝胶的选择是凝胶层析方法的关键。
凝胶通常分为聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶两种。
聚丙烯酰胺凝胶适用于分离较小的生物大分子，如蛋白质和核酸，而琼脂糖凝胶适用于分离较大的生物大分子，如蛋白质复合物和细胞器。
其次，凝胶的制备对凝胶层析的分离效果也有重要影响。
凝胶的制备需要考虑凝胶的浓度、孔隙大小和凝胶的稳定性。
通常情况下，凝胶的浓度越高，孔隙越小，分离效果越好，但迁移速度越慢。
因此，需要根据样品的大小和分离的需求来选择合适的凝胶浓度和孔隙大小。
接着，样品的加载也是影响凝胶层析分离效果的重要因素。
样品的加载需要均匀地加载在凝胶的起始位置，避免样品在加载过程中产生扩散。
此外，还需要注意加载量的控制，过多或过少的加载量都会影响分离的效果。
最后，电泳条件的选择也是影响凝胶层析分离效果的关键因素。
电泳条件包括电场强度、电泳时间和电解质浓度等。
合适的电场强度和电泳时间可以使样品在凝胶中迁移到合适的位置，而合适的电解质浓度可以维持凝胶的稳定性和样品的电泳迁移。
总之，凝胶层析的原理是利用凝胶中生物大分子的迁移速度差异来实现分离和纯化的方法。
通过选择合适的凝胶、制备优质的凝胶、均匀地加载样品和选择合适的电泳条件，可以实现高效的凝胶层析分离。
这种方法在生物大分子的研究和应用中具有重要的意义。
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第七章凝胶层析
一、填空题
1、凝胶层析的分离原理有、、。
这三种分离原理是互相补充的，在通常情况下起主导作用；的作用随流速增加而加强；只有在流速很高时才起作用。
2、琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大，其分离范围随着凝胶浓度上升而，颗粒强度随浓度上升而。
3、凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响。
一般来说，细粒凝胶柱流速低，洗脱峰窄，分辨率，多用于等。
粗粒凝胶柱流速高，洗脱峰平坦，分辨率，多用于等。
4、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大倍以上的柱体积，
以上的柱比，较吸液量、较粒的凝胶固定相。
5、溶质通过色谱柱时造成的峰加宽效应包括、、
、。
6、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于，其越小，凝胶孔径越；而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于。
二、选择题
1、凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是（）
A.凝胶排斥
B.凝胶吸附
C.柱床过长
D.流速过低
2、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<1，其原因是（）
A.水合作用
B.凝胶吸附
C.柱床过长
D.流速过低
3、在凝胶层析中样品各组分最先淋出的是（）
A.分子量最大的
B.体积最大的
C.分子量最小的
D.体积最小的
4、为了进一步检查凝胶柱的质量，通常用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是（）
A.观察柱床有无沟流
B.观察色带是否平整
C.测量流速
D.测量层析柱的外水体积
5、在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是（）
A.粗且长的
B.粗且短的
C.细且长的
D.细且短的
三、名词解释
1、全排阻：
2、类分离：
3、分级分离：
4、柱比：
5、操作压：
6、全渗入：
7、分离度R s：
四、问答题
1、试述公式V e=V0+K d V i 各字母的物理意义。
2、利用凝胶层析如何测定蛋白质的分子量？
3、凝胶层析的应用主要有哪些？并说明其原理。
第七章凝胶层析（答案）
一、填空题
1、凝胶层析的分离原理有平衡排除理论、扩散分离理论、流动分离理论。
这三种分离原理是互相补充的，在通常情况下平衡排除理论起主导作用；扩散分离理论的作用随流速增加而加强；只有在流速很高时流动分离理论才起作用。
2、琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大，其分离范围随着凝胶浓度上升而下降，颗粒强度随浓度上升而提高。
3、凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响。
一般来说，细粒凝胶柱流速低，洗脱峰窄，分辨率高，多用于精制分离等。
粗粒凝胶柱流速高，洗脱峰平坦，分辨率低，多用于脱盐等。
4、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大25 倍以上的柱体积，25 以上的柱比，较大吸液量、较细粒的凝胶固定相。
5、溶质通过色谱柱时造成的峰加宽效应包括分子扩散、涡流扩散、流动相中传质阻力、固定相中传质阻力。
6、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于交联度，其越小，凝胶孔径越大；而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于琼脂糖浓度。
二、选择题
1、凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是（B ）
A.凝胶排斥
B.凝胶吸附
C.柱床过长
D.流速过低
2、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<1，其原因是（A）
A.水合作用
B.凝胶吸附
C.柱床过长
D.流速过低
3、在凝胶层析中样品各组分最先淋出的是（B）
A.分子量最大的
B.体积最大的
C.分子量最小的
D.体积最小的
4、为了进一步检查凝胶柱的质量，通常用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是（C）A.观察柱床有无沟流 B.观察色带是否平整
C.测量流速
D.测量层析柱的外水体积
5、在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是（A）
A.粗且长的
B.粗且短的
C.细且长的
D.细且短的
三、名词解释
1、全排阻：
当具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时，较大的分子完全不能进入颗粒内部，只能从颗粒间隙流过，称“全排阻”。
其流经体积最小，等于外水体积V0。
2、类分离：
将分子量极为悬殊的两类物质分开，如蛋白质与盐类，称作类分离或组分离.选择凝胶时，应使样品中大分子组的分子量大于其排阻限，而小分子组的分子量小于渗入限。
大分子的分配系数Kd=0，小分子的Kd=1。
3、分级分离：将分子量相差不大的大分子物质加以分离，如分离血清球蛋白与白蛋白，分级分离应尽量使待分离各物质的Kd值相差大些，并使分子量分布不在凝胶分离范围的一侧。
4、柱比：层析柱的长度与直径的比值一般称作“柱比”。
5、操作压：凝胶层析柱由于进出口之间液位压力差形成的对凝胶颗粒的压力称作“操作压”。
6、全渗入：被分离组分的分子量小于该种凝胶的渗入限，其分子可以自由进出凝胶颗粒，这叫做“全渗入”。
其流经体积最大，等于外水体积与内水体积之和，V0 ＋Vi。
7、分离度Rs：
式中Ve1、Ve2——对应于两个峰的淋出体积；W1、W2和σ1、σ2——两个峰宽度和标准偏差。
四、问答题
1、试述公式Ve=V0+KdVi 各字母的物理意义。
答：公式Ve=V0+KdVi中Ve代表被分离组分的流经体积，V0代表外水体积，Vi代表内水体积。
Kd称作“排阻系数”或“分配系数”，它反映了物质分子进入凝胶颗粒的程度。
对一定种类规格的凝胶，物质的Kd值为该物质的特征常数。
排阻系数：
当Kd=1时，洗脱体积Ve=V0+Vi，为全渗入。
当Kd=0时，洗脱体积Ve=V0，为全排阻。
0＜Kd＜1时，洗脱体积V e=V o+KdVi，为部分渗入。
2、利用凝胶层析如何测定蛋白质的分子量？
答：当具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中停留时间比大分子停留的时间要长，于是样品各组分即按分子大小顺序而分开，最先淋出的是最大的分子（2分）。
对于一个特定体系（凝胶柱），待测定物质的洗脱体积与分子量的关系符合公式
Ve=-KlogM +C
先以3个以上（最好更多些）的已知分子量的标准蛋白过柱，测取各自的Ve值。
以Ve作纵坐标，logM作横坐标制作标准曲线（2分）。
在同一测定系统中测取未知物质的Ve值便可由标准曲线求得分子量（2分）。
3、凝胶层析的应用主要有哪些？并说明其原理。
当具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中停留时间比大分子停留的时间要长，于是样品各组分即按分子大小顺序而分开，最先淋出的是最大的分子（2分）。
应用：
一、脱盐：脱盐用的凝胶多为大粒度的，高交联度的凝胶。
此时溶液中蛋白质等大分子的Kd=0，盐类的Kd=1。
由于交联度大，凝胶颗粒的强度较好，加之凝胶粒度大，柱层操作比较便利，流速也高。
二、分子量测定：对于一个特定体系（凝胶柱），待测定物质的洗脱体积与分子量的关系符合公式
Ve=-KlogM+C
先以3个以上（最好更多些）的已知分子量的标准蛋白过柱，测取各自的Ve值。
以Ve作纵坐标，logM作横坐标制作标准曲线。
在同一测定系统中测取未知物质的Ve值便可由标准曲线求得分子量。
三、分离纯化：根据分子量不同流出先后顺序不同，收集单一洗脱峰的物质，得以纯化。