分光光度法快速检测奶粉中三聚氰胺
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2. College of Food Science,South China Agricultural University ,Guangzhou 510642,China)
Abstract: In this paper,milk powder was used as raw material and the rapid detection method to melamine in milk powder had been studied.The results showed that there were color reaction between alizarin red and melamine, the best concentration of reagent was 0.01% The best volume ratio of milk powder supernatant and alizarin red was 5 ∶1.The maximum absorption wavelength of the reagent was 426 nm. The linear range of the method was 1~5 mg/kg and the recovery range was 94%～98%.
参考文献:
[1] 王会串.三聚氰胺的生产技术和应用前景[J].精细与专用化学品, 2007,15(11):33-36.
[2] GB/T22400-2008,原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法[S]. [3] 吴小华,郭航鸣, 缪吉根,等.硼砂存在下茜素红 S 作 为络 合 滴定
锌 指 示 剂 的 研 究 [J].浙 江 师 范 大 学 学 报 ，2006,9(1):70-73.
在 426 nm 波长下，测定三聚氰胺含量分别为 1、2、3、 4、5 mg/kg 的 奶 粉 上 清 液 与 茜 素 红 反 应 后 的 络 合 物 的 吸 光度所得工作直线（图 4）。 由图 4 可知，在测量范围 1~5 mg/kg 内， 工作直线方程为 y=0.0095x+0.1085，R2=0.9918， 可见，吸光度和浓度之间线性关系良好。
nm 下分别测定吸光度，利用工作直线方程算得三 聚氰胺 浓度，计算加标回收率。
2 结果及分析
2.1 显色反应络合物最佳吸收波长的确定 在 400~800 nm 范围内分别扫描样品 1、样品 2、样品
3，所得吸收光谱见图 1、图 2 和图 3。 由图 1 可知，茜素红的最大吸收波长在 500~600 nm 之
Key words：spectrophotometry; milk powder; melamine
三 聚 氰 胺 （Melamine）化 学 式 为 C3H6N6，俗 称 蛋 白 精 ， IUPAC 命名为 1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基，是一种三嗪类含 氮杂环有机化合物，通常被用作化工原料[1]。 由于食品和 饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，三聚氰胺常被不法 商人用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指 标。 2008 年的“三鹿奶粉”事件引起了全国范围乃至世界 范围对乳剂乳制品中添加三聚氰胺的重视，因此对奶粉中 三聚氰胺进行快速检测研究具有非常重要的意义。
间。 由图 2 可知，三聚氰胺在扫描波长范围内基本无吸收。 由图 3 可知，茜素红和三聚氰胺反应后，吸光度急剧降低， 且最大吸收峰发生了紫移， 证明茜素红和三聚氰胺发生了 络合反应，由图 3 可知，络合物最大吸收波长为 426 nm。
175
表 1 茜素红浓度对吸光度的影响
浓度梯度 序号 1
2
3
4
wenku.baidu.com
茜素红 浓度(%) 吸光度
吸光度
0.003 0.002 0.003 0.000 0.001 0.001 0.000 0.000 0.000
吸光度
吸光度
吸光度
波 长 （nm） 图 1 0.05%茜素红水溶液吸收光谱
波 长 （nm） 图 2 奶粉上清液吸收光谱
y=0.0095x+0.1085 R2=0.9918
三 聚 氰 胺 浓 度 （mg/kg ） 图4
Rapid determine melamine in milk powder by spectrophotometric method
NAN Hai-juan1, WANG Wei-hua2, GAO Han1, JIA Lei-lei1 (1.College of Food Science,Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003 ,China；
0.005 0.294 0.005 0.293 0.005 0.293 0.01 0.359 0.01 0.383 0.01 0.383 0.05 0.299 0.05 0.296 0.05 0.119 0.100 0.024 0.100 0.033 0.100 0.030
浓度梯度 序号 5
6
7
茜素红 浓 度 /% 0.150 0.150 0.150 0.020 0.020 0.020 0.250 0.250 0.250
吸光度
波 长 （nm） 图 3 三聚氰胺与茜素红的络合物吸收光谱
2.2 茜素红最佳反应浓度选择 加入不同浓度茜素红水溶液后，在 426 nm 处测得溶
液 的吸光度值 （表 1）。 由表 1 可知 ， 当 茜 素 红 浓 度 为 0.01%时 ，吸 光 度 最 大 ，随 后 浓 度 增 大 ，吸 光 度 反 而 降 低 。 因此，将茜素红的最适浓度确定为 0.01%。 2.3 工作直线的制定
表 2 样品的加标回收试验结果
三 聚 氰 胺 浓 度 （mg/kg ）
2.5 3.5 4.5
测 定 值 （mg/kg ）
2.4 3.3 4.4
回 收 率 （% ）
96 94 98
3 结语
茜素红与三聚氰胺反应的最佳显色浓度是 0.01%。 三 聚氰胺奶粉上清液与茜素红的最佳反应体积 比例为 5∶1； 反应物的最大吸收波长为 426 nm； 反应体系工作直线为 y=0.0095x+0.1085， 在 1～5 mg/kg 三聚氰胺浓度范围内测 定，加标回收率为 94%~98%。
2.4 加标回收率的测定 经 测 定 2.5、3.5、4.5 mg/kg 三 聚 氰 胺 奶 粉 上 清 液 与
0.01% 茜 素 红 的 反 应 物 的 吸 光 度 值 ， 带 入 标 准 方 程 中 计 算 三聚氰胺的浓度，结果见表 2。 由表 2 可知，样品的加标回 收率为 94%~98%，说明该方法的准确度较高，可以用来测 定奶粉中的三聚氰胺含量。
174
广东农业科学 2010 年第 5 期
分光光度法快速检测奶粉中三聚氰胺
南海娟1， 王伟华2， 高 晗1， 贾蕾蕾1 （1.河南科技学院食品学院，河南 新乡 453003；2.华南农业大学食品学院，广东 广州 510642）
摘 要:研究了奶粉中三聚氰胺的快速检测方法。 结果表明：茜素红与三聚氰胺有颜色反应，最佳显色浓度为 0.01%。 奶粉上清
目前，国内外检验三聚氰胺的方法主要有高效液相色 谱 法 （HPLC）、液 相 色 谱-质 谱/质 谱 法 （LC-MS/MS）、气 相 色 谱-质 谱 法 （GC-MS）、气 相 色 谱-质 谱/质 谱 法 （GC-MS/ MS）、 免 疫 反 应 等 方 法 ， 这 些 方 法 具 有 检 测 极 限 低 、 测 量 结 果准确等优点，但缺点也相当突出，如仪器昂贵、不易普 及、试剂不易保存等，特别是样品的前处理十分复杂，需要 专业人员操作，耗时较长，检测费用高昂。本研究根据茜素 红与三聚氰胺的显色反应，利用分光光度计测定吸光度值 从而快速检测出奶粉中三聚氰胺含量，此方法尚未见有报 道。由于原料易得、仪器造价低，所以该法容易在实验室及 基层普及，具有一定的实际应用价值。 同时对其他食品中 三聚氰胺的检测具有重要的参考价值。
液与茜素红的最佳反应体积比例为 5∶1；最大吸收波长为 426 nm；该方法线性范围为 1～5 mg/kg，样品加标回收率在 94%～98%之间
关键词: 分光光度法； 奶粉； 三聚氰胺
中图分类号： R155.57
文 献 标 识 码 ：A
文 章 编 号 ：1004-874X （2010 ）05-0174-02
1 材料与方法
1.1 试验材料 供试奶粉为飞鹤学生高钙奶粉（黑龙江飞鹤乳业有限
公司产品）。 供试试剂为乙腈、三聚氰胺、茜素红等，均为分析纯。
收 稿 日 期 ：2009-12-01 作者简介：南海娟（1974-），女，硕士，实验师， E-mail：nanhaijuan 1@163.com
供试仪器为 TU-1810 型紫外可见分光光度计 （北京 普析通用仪器有限责任公司产品）、MD100-2 型分析天平 （上海天平仪器厂产品）。 1.2 试验方法 1.2.1 显色剂的配制 0.1%茜素红溶液： 称取 0.1 g 茜素 红溶于水，定容至 100 mL，混匀备用。 1.2.2 样品前处理 取 2.0 g 奶粉，加 20 mL 水溶解后，加 50 mL 乙腈沉淀蛋 白质，振荡提取 6 min，静 置 10 min，过 滤 后 取 上 清 液 作 为 提 取 液 待 用 [2]。 1.2.3 显色反应络合物最佳吸收波长的确定 试验 选 取 3 个样品：样品 1 为 0.05%茜素红水溶液，对照为水。 样品 2 为三聚氰胺含量为 2.0 mg/kg 的奶粉上清液，对照为无三聚 氰胺的奶粉上清液。 样品 3 为三聚氰胺含量为 2.0 mg/kg 的 奶粉上清液 5 mL，加 1 mL 茜素红后，反应 10 min；对照为 无三聚氰胺奶粉上清液 5 mL， 加 1 mL 茜素红， 反应 10 min。 分别在 400~800 nm 范围对样品 1、样品 2 和样品 3 进 行吸收光谱扫描，寻找显色反应络合物的最佳吸收波长。 1.2.4 显色剂最佳反应浓度的选择 采用吴小华等[3]的方 法：配制 0.25%茜素红水溶液，经稀释得 0.005%、0.010%、 0.050%、0.100%、0.150%、0.200%、0.250%7 个浓度梯度。 取 三聚氰胺含量为 2 mg/kg 的奶粉上清液 5 mL，分别添加不 同浓度茜素红溶液 1 mL， 摇匀后在最大吸收波长处测吸 光度值，每组 3 个平行。 1.2.5 工作直线的制定 取三聚氰胺含量分别为 1、2、3、4、 5 mg/kg 的奶粉上清液各 5 mL， 加 0.01%茜素红 1 mL 反 应 10 min，在最大吸收波长下测定吸光度值，得工作直线。 1.2.6 加 标 回 收 率 的 测 定 配 制 三 聚 氰 胺 浓 度 分 别 是 2.5、3.5、4.5 mg/kg 的 奶 粉 上 清 液 。 取 每 种 浓 度 上 清 液 5 mL，分别加入 0.01%茜素红 1 mL，反应 10 min 后，在 426
Abstract: In this paper,milk powder was used as raw material and the rapid detection method to melamine in milk powder had been studied.The results showed that there were color reaction between alizarin red and melamine, the best concentration of reagent was 0.01% The best volume ratio of milk powder supernatant and alizarin red was 5 ∶1.The maximum absorption wavelength of the reagent was 426 nm. The linear range of the method was 1~5 mg/kg and the recovery range was 94%～98%.
参考文献:
[1] 王会串.三聚氰胺的生产技术和应用前景[J].精细与专用化学品, 2007,15(11):33-36.
[2] GB/T22400-2008,原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法[S]. [3] 吴小华,郭航鸣, 缪吉根,等.硼砂存在下茜素红 S 作 为络 合 滴定
锌 指 示 剂 的 研 究 [J].浙 江 师 范 大 学 学 报 ，2006,9(1):70-73.
在 426 nm 波长下，测定三聚氰胺含量分别为 1、2、3、 4、5 mg/kg 的 奶 粉 上 清 液 与 茜 素 红 反 应 后 的 络 合 物 的 吸 光度所得工作直线（图 4）。 由图 4 可知，在测量范围 1~5 mg/kg 内， 工作直线方程为 y=0.0095x+0.1085，R2=0.9918， 可见，吸光度和浓度之间线性关系良好。
nm 下分别测定吸光度，利用工作直线方程算得三 聚氰胺 浓度，计算加标回收率。
2 结果及分析
2.1 显色反应络合物最佳吸收波长的确定 在 400~800 nm 范围内分别扫描样品 1、样品 2、样品
3，所得吸收光谱见图 1、图 2 和图 3。 由图 1 可知，茜素红的最大吸收波长在 500~600 nm 之
Key words：spectrophotometry; milk powder; melamine
三 聚 氰 胺 （Melamine）化 学 式 为 C3H6N6，俗 称 蛋 白 精 ， IUPAC 命名为 1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基，是一种三嗪类含 氮杂环有机化合物，通常被用作化工原料[1]。 由于食品和 饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，三聚氰胺常被不法 商人用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指 标。 2008 年的“三鹿奶粉”事件引起了全国范围乃至世界 范围对乳剂乳制品中添加三聚氰胺的重视，因此对奶粉中 三聚氰胺进行快速检测研究具有非常重要的意义。
间。 由图 2 可知，三聚氰胺在扫描波长范围内基本无吸收。 由图 3 可知，茜素红和三聚氰胺反应后，吸光度急剧降低， 且最大吸收峰发生了紫移， 证明茜素红和三聚氰胺发生了 络合反应，由图 3 可知，络合物最大吸收波长为 426 nm。
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表 1 茜素红浓度对吸光度的影响
浓度梯度 序号 1
2
3
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wenku.baidu.com
茜素红 浓度(%) 吸光度
吸光度
0.003 0.002 0.003 0.000 0.001 0.001 0.000 0.000 0.000
吸光度
吸光度
吸光度
波 长 （nm） 图 1 0.05%茜素红水溶液吸收光谱
波 长 （nm） 图 2 奶粉上清液吸收光谱
y=0.0095x+0.1085 R2=0.9918
三 聚 氰 胺 浓 度 （mg/kg ） 图4
Rapid determine melamine in milk powder by spectrophotometric method
NAN Hai-juan1, WANG Wei-hua2, GAO Han1, JIA Lei-lei1 (1.College of Food Science,Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003 ,China；
0.005 0.294 0.005 0.293 0.005 0.293 0.01 0.359 0.01 0.383 0.01 0.383 0.05 0.299 0.05 0.296 0.05 0.119 0.100 0.024 0.100 0.033 0.100 0.030
浓度梯度 序号 5
6
7
茜素红 浓 度 /% 0.150 0.150 0.150 0.020 0.020 0.020 0.250 0.250 0.250
吸光度
波 长 （nm） 图 3 三聚氰胺与茜素红的络合物吸收光谱
2.2 茜素红最佳反应浓度选择 加入不同浓度茜素红水溶液后，在 426 nm 处测得溶
液 的吸光度值 （表 1）。 由表 1 可知 ， 当 茜 素 红 浓 度 为 0.01%时 ，吸 光 度 最 大 ，随 后 浓 度 增 大 ，吸 光 度 反 而 降 低 。 因此，将茜素红的最适浓度确定为 0.01%。 2.3 工作直线的制定
表 2 样品的加标回收试验结果
三 聚 氰 胺 浓 度 （mg/kg ）
2.5 3.5 4.5
测 定 值 （mg/kg ）
2.4 3.3 4.4
回 收 率 （% ）
96 94 98
3 结语
茜素红与三聚氰胺反应的最佳显色浓度是 0.01%。 三 聚氰胺奶粉上清液与茜素红的最佳反应体积 比例为 5∶1； 反应物的最大吸收波长为 426 nm； 反应体系工作直线为 y=0.0095x+0.1085， 在 1～5 mg/kg 三聚氰胺浓度范围内测 定，加标回收率为 94%~98%。
2.4 加标回收率的测定 经 测 定 2.5、3.5、4.5 mg/kg 三 聚 氰 胺 奶 粉 上 清 液 与
0.01% 茜 素 红 的 反 应 物 的 吸 光 度 值 ， 带 入 标 准 方 程 中 计 算 三聚氰胺的浓度，结果见表 2。 由表 2 可知，样品的加标回 收率为 94%~98%，说明该方法的准确度较高，可以用来测 定奶粉中的三聚氰胺含量。
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广东农业科学 2010 年第 5 期
分光光度法快速检测奶粉中三聚氰胺
南海娟1， 王伟华2， 高 晗1， 贾蕾蕾1 （1.河南科技学院食品学院，河南 新乡 453003；2.华南农业大学食品学院，广东 广州 510642）
摘 要:研究了奶粉中三聚氰胺的快速检测方法。 结果表明：茜素红与三聚氰胺有颜色反应，最佳显色浓度为 0.01%。 奶粉上清
目前，国内外检验三聚氰胺的方法主要有高效液相色 谱 法 （HPLC）、液 相 色 谱-质 谱/质 谱 法 （LC-MS/MS）、气 相 色 谱-质 谱 法 （GC-MS）、气 相 色 谱-质 谱/质 谱 法 （GC-MS/ MS）、 免 疫 反 应 等 方 法 ， 这 些 方 法 具 有 检 测 极 限 低 、 测 量 结 果准确等优点，但缺点也相当突出，如仪器昂贵、不易普 及、试剂不易保存等，特别是样品的前处理十分复杂，需要 专业人员操作，耗时较长，检测费用高昂。本研究根据茜素 红与三聚氰胺的显色反应，利用分光光度计测定吸光度值 从而快速检测出奶粉中三聚氰胺含量，此方法尚未见有报 道。由于原料易得、仪器造价低，所以该法容易在实验室及 基层普及，具有一定的实际应用价值。 同时对其他食品中 三聚氰胺的检测具有重要的参考价值。
液与茜素红的最佳反应体积比例为 5∶1；最大吸收波长为 426 nm；该方法线性范围为 1～5 mg/kg，样品加标回收率在 94%～98%之间
关键词: 分光光度法； 奶粉； 三聚氰胺
中图分类号： R155.57
文 献 标 识 码 ：A
文 章 编 号 ：1004-874X （2010 ）05-0174-02
1 材料与方法
1.1 试验材料 供试奶粉为飞鹤学生高钙奶粉（黑龙江飞鹤乳业有限
公司产品）。 供试试剂为乙腈、三聚氰胺、茜素红等，均为分析纯。
收 稿 日 期 ：2009-12-01 作者简介：南海娟（1974-），女，硕士，实验师， E-mail：nanhaijuan 1@163.com
供试仪器为 TU-1810 型紫外可见分光光度计 （北京 普析通用仪器有限责任公司产品）、MD100-2 型分析天平 （上海天平仪器厂产品）。 1.2 试验方法 1.2.1 显色剂的配制 0.1%茜素红溶液： 称取 0.1 g 茜素 红溶于水，定容至 100 mL，混匀备用。 1.2.2 样品前处理 取 2.0 g 奶粉，加 20 mL 水溶解后，加 50 mL 乙腈沉淀蛋 白质，振荡提取 6 min，静 置 10 min，过 滤 后 取 上 清 液 作 为 提 取 液 待 用 [2]。 1.2.3 显色反应络合物最佳吸收波长的确定 试验 选 取 3 个样品：样品 1 为 0.05%茜素红水溶液，对照为水。 样品 2 为三聚氰胺含量为 2.0 mg/kg 的奶粉上清液，对照为无三聚 氰胺的奶粉上清液。 样品 3 为三聚氰胺含量为 2.0 mg/kg 的 奶粉上清液 5 mL，加 1 mL 茜素红后，反应 10 min；对照为 无三聚氰胺奶粉上清液 5 mL， 加 1 mL 茜素红， 反应 10 min。 分别在 400~800 nm 范围对样品 1、样品 2 和样品 3 进 行吸收光谱扫描，寻找显色反应络合物的最佳吸收波长。 1.2.4 显色剂最佳反应浓度的选择 采用吴小华等[3]的方 法：配制 0.25%茜素红水溶液，经稀释得 0.005%、0.010%、 0.050%、0.100%、0.150%、0.200%、0.250%7 个浓度梯度。 取 三聚氰胺含量为 2 mg/kg 的奶粉上清液 5 mL，分别添加不 同浓度茜素红溶液 1 mL， 摇匀后在最大吸收波长处测吸 光度值，每组 3 个平行。 1.2.5 工作直线的制定 取三聚氰胺含量分别为 1、2、3、4、 5 mg/kg 的奶粉上清液各 5 mL， 加 0.01%茜素红 1 mL 反 应 10 min，在最大吸收波长下测定吸光度值，得工作直线。 1.2.6 加 标 回 收 率 的 测 定 配 制 三 聚 氰 胺 浓 度 分 别 是 2.5、3.5、4.5 mg/kg 的 奶 粉 上 清 液 。 取 每 种 浓 度 上 清 液 5 mL，分别加入 0.01%茜素红 1 mL，反应 10 min 后，在 426