防尘螨药物的实验室药效测试方法

防尘螨药物的实验室药效测试方法

张洪杰

1*

张金桐1 商成杰

2

(1 军事医学科学院微生物流行病研究所 北京 100071;2 北京洁尔爽高科技有限公司 北京 100088)

Methodology of efficacy tests for mite -repellent chem icals in laboratory .ZHANG Hong -Jie 1,Z HANG Jin -Tong 1,SHANG Cheng -Jie 2(1 Institute o f Microbiology and Epidemiology ,AMMS ,Beijing 100071;2 Beijing JLSUN High -Tech Co .,Ltd .Beijing 100088,Chi na)

Abstract Dust mites,Dermatop ha goides farinae Hughes,and Eu rogiyp hus ma y nei Cooreman,are i mportant anaphylactogen causing allergic asthma and allergic rhini tis.Served as the laboratorial materials,they are very difficult to handle and treat the dust mites for their tiny body size.Based on the long -term practices and experiences,a set of devices and methods established in our laboratory for the efficacy tests of mite -repellent chemicals and mi ticides is introduced.It has been proved to be practicable and convenient.Key words dust mites,mite -repellent chemicals,bioassay method

摘 要 建立防螨药物的药效测试装置与操作方法很有必要。由于尘螨形体微小,给防螨药效测试的操作带来诸多困难,作者利用螨虫的生物习性及特点,建立了布块集螨法、成螨自动分离与净化法、标定计数法,布块浸水计数法以及螨虫的驱避和杀灭效果的测试装置与测试方法。结果表明,采用成螨自动分离与净化法获得的成螨比例为(94 0 1 7)%;采用标定计数的精度(成螨数 刻度)为(204 6 6)只。标定计数1000只螨的实际回收率平均为(75 9 14 6)%,与手工计数无显著性差别(P >0 05)。实践表明,此技术与方法操作简便,结果可靠,使测试的速度及效果有明显提高。关键词 防尘螨,防尘螨药物,测试方法

*通讯作者,E -mail:zhanghj@ 收稿日期:2003-07-09,修回日期:2003-09-30

尘螨通常包括户尘螨Dermatophagoides pteronyssinus 和粉尘螨D .farinae 两大类,户尘螨主要存在于卧室的地面灰尘、地毯、沙发坐垫以及床垫、枕头、被褥等处。粉尘螨除存在于居室地面外,也孳生于面粉厂,棉纺车间,食品仓库等处[1]

。尘螨与人关系密切,不仅能引起皮肤过敏,而且是尘螨过敏性哮喘和尘螨过敏性鼻炎的重要致敏原,因此对尘螨的防治逐渐引起人们的重视。近年来,国内已有多家单位研制、开发出若干杀螨、防螨产品(驱螨布料、纤维、杀螨药剂等),这些产品在进入市场之前,必须先在实验室中对其杀螨和 防螨作用进行科学的测试和鉴定。由于尘螨的个体微小(170~500 m)

[2],扩散较快,尤其试虫的数量难以控制,

给测试的操作和计数带来很多困难。作者在长期实践中建立了一套方便可行的测试方法,兹记述如下以供同行参考。

1 驱螨织物的测试方法

1 1 驱螨织物驱螨作用的测试方法

1 1 1 驱螨测试装置 取7只直径4 0c m 的小平皿,其中1只为中心皿,余6只平皿围绕中

心皿,在7只平皿底面及器皿上沿的各接触点用透明胶带粘连为一整体,摆放到直径12 5c m 的大平皿内(见图1)。

1 1

2 测试方法 在中心皿中放入试虫1000只左右,在周围6只培皿中间隔放置经过药物处理和未经药物处理(对照)的待测面料或纤维,其面积应与培皿底面积一致并与平皿底部紧密接触(图1)。在待测面料的上面各放试虫饲料0 05g 。驱螨纤维的测试:将待测纤维剪

成2~3mm 长,均匀平铺于小平皿底部,厚度约1~2mm,在待测纤维中心点上放1块直径22mm 深色无污染的面料放置试虫饲料0 05g(图2),将试验装置放入盛有氯化钠过饱和溶液的干燥器中(RH75%左右),(25 1) 条件下培养24h,在解剖镜下计数螨量,螨的驱避率(R )按以下公式计算:

R (%

)=

1-处理组试虫数

对照组试虫数

100。

图1 驱螨装置(面料测试)

图2 驱螨装置(纤维测试)

1 1 3 操作方法 (1)布块集螨法或平皿集螨法 在测试之前将养螨容器置于高湿环境下(RH85%)促使螨虫快速繁殖,也可在养殖容器的封口布上放一块湿海绵或湿棉花,可得到相同效果。 布块集螨:在养殖杯中放入数块纹理较粗的黑色布块,快速繁殖的螨喜欢聚集并附着在黑布面上。经螨虫对蓝、白、黑3种布色诱集数量的比较表明,黑布诱集的螨数是白布

的3 7倍,是蓝布的6 3倍。用镊子将布块取出,在容器内轻轻磕打数次,除去表层的饲料、碎屑以及螨卵和幼虫,用毛笔收集布面上的螨于陶瓷酒盅内进行成螨的进一步分离与净化。 平皿集螨:将养殖容器的饲料与螨虫混合体部分取出放入平皿内,在日光灯下数分钟,螨虫自然沉积于玻璃底面上,用毛笔扫取上层饲料及杂物,将螨收集于陶瓷酒盅内进行成螨的净化。

(2)成螨自动分离与净化法 试虫中含成螨及杂质的多少直接影响到标定计数的准确性、稳定性和测试中螨虫的扩散速度与螨虫的回收率。作者通过大量观察,找到一种螨虫自动分离成、幼和净化的方法。根据螨虫具有畏光的习性,将布块集螨法或平皿集螨法收集到的含有一定杂质的成幼混合体盛于小陶瓷酒盅,并置酒盅于白炽灯泡或日光灯管下片刻,成螨为避光而迅速向下移动,由于酒盅底部的斜坡形状使得全部成螨连续不断地向中心运动,结果形成个体较小的幼、若虫及饲料碎屑滞留在成螨虫体的上表层及外缘部位,此时用毛笔在解剖镜下重复分离数次,获得成螨比例平均达(94 1 7)%,并使螨虫得到高度净化。

(3)标定管计数法 标定管(图3)为100 L 的微量进样器管,去除针头部分,用石蜡堵塞针孔,标定芯为50 L 微量进样器芯,去污棒为长12cm,直径1mm 的细铁丝,在一端5cm 的长度用浆糊粘着1层棉纤维,在标定过程中如发现标定管不光滑时,可用去污棒蘸无水酒精作清污处理。在计数螨之前先对收集到的螨虫进行

体积标定,每次采用布块浸水计数法标定试虫3~5格,计算标定管的1刻度内所含螨数并换算1000只螨所需的刻度数,用细毛笔尖将螨虫移至标定管并通过磕打的方法使管内螨虫落到实处,再用标定芯自由滑落至所标定的刻度处。采用标定法6次重复标计的精度,平均每个刻度(2 L)含成螨数为(204 6 6)只。对采用标定计数法与手工计数法计数1000只螨的实际回收率进行了10次重复比较,结果表明标定计数的实际回收率平均为(75 9 14 6)%;手工