微生物实验室操作指导

微生物实验室操作指导

微生物实验室操作指导书目录

（一）安全守则

（二）检验总则

（三）基本技术要求

（四）食品平板菌落计数

（五）食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法

（六）沙门氏菌检验

（七）金黄色葡萄球菌检验

（八）霉菌计数

（九）革兰氏染色

（十）空气中微生物的检验

（十一）水中微生物的检验

（十二）食品接触面的微生物检验

（十三）蔬菜农残的快速检测

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（一）安全守则

1进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。

2在进行高压、干燥、消毒等工作时，工作人员不得擅自离开现场，认真观察温度、时间，蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行。

3严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液、病原体溅出容器外时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方能离开现场。

4工作完毕，两手用清水肥皂洗净，必要时可用（杀菌剂）新洁尔灭、过氧乙酸液浸泡手，然后用水冲洗，工作服应经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。

5实验完毕，及时清理现场和实验用具，对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理，并填写日常工作记录。

6每日下班，认真检查水、相关电源是否关闭和正在使用的设备运转是否正常，并认真记录。下班前关好门窗，方可离去。

（二）检验总则

1主题内容与适用范围

本文规定了微生物检验一般规则。

本文适用于食品中微生物学检验的采样、检验及结果报告。

2样品的采集

2.1采样目的

确保采集的样品能代表全部被检验的物质，使检验分析更具代表性。

2.2采样原则

2.2.1采集的样品要有代表性，采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查，检查是否有污染源存在，同时能反映全部被检食品的组成、质量和卫生状况。

2.2.2应设法保持样品原有微生物状况，在进行检验前不得污染，不发生变化。

2.2.3采样必须遵循无菌操作程，容器必须灭菌，避免环境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，新洁尔灭、酒精等消毒物灭菌，更不能含有此类消毒药物，以避免杀掉样品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需灭菌方可使用。

2.3采样数量

取样数量的确定，应考虑分析项目的要求、分析方法的要求及被检物的均匀程度三个因素。样品应一式三份，分别供检验、复检及备查使用，每份样品数量一般不少于200g。

根据不同种类采样数量略有不同，实验室检验样品一般为25克。

2.4采样方法

2.4.1采取随机抽样的方式。

2.4.2直接食用的小包装食品，尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。

2.4.3如为非冷藏易腐食品，应迅速将所采样品冷却至0－4℃。

2.4.4不要使样品过度潮湿，以防食品中固有的细菌增殖。

2.4.5在将冷冻食品送到实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态。样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。

2.5样品的保存和运送

2.5.1样品采集完后，应迅速送往实验室检验，送检过程中一般不超过3h，如路程较远，可保存在1－5℃环境中，如需冷冻者，则在冷冻状态下送检。

2.5.2冷冻样品应存放在－15℃以下冰箱内；冷却和易腐食品应存放在0－5℃冰箱或冷却库内；其它食品可放在常温冷暗处。

2.5.3运送冷冻和易腐食品应在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂。保证途中样品不升温或不融化。

2.5.4待检样品存放时间一般不应超过36小时。

3检验样品的制备

3.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。

3.2检验冷冻样品前应先使其融化。可在0－4℃融化，时间不超过18小时，也可在温度不超过45℃的环境中融化，时间不超过15分钟。

3.3检验液体或半固体样品前应先将其充分摇匀。如容器已装满，可迅速翻转25次；如未装满，可于7s内以30cm的幅度摇动25次。从混样到检验间隔时间不应超过3分钟。

3.4开启样品包装前，先将表面擦干净，然后用75％乙醇消毒开启部位及其周围。

3.5非粘性液体样品可用吸管吸取一定量，然后加入适量的稀释液或培养基内，吸管插入样品内的深度不应超过2.5cm,也不得将吸有样品的吸管浸入稀释液或培养基内。

3.6粘性液体样品可用灭菌容器称取一定量，然后加入适量的稀释液或培养基。

3.7固体或半固体样品可用灭菌的均质杯称取一定量，再加适量的稀释液或培养基进行均质，从样品的均质到稀释和接种，相隔时间不应超过15分钟。

4检验

4.1实验室收到样品后，首先进行外观检验，及时按照国家标准检验方法进行检验，检验过程中要认真、负责，严格进行无菌操作，避免环境中微生物污染。

4.2检验所使用的稀释液、试剂、培养基接触的一切器皿必须经过有效的灭菌。

4.3实验室所用仪器、设备的性能应定期检查和校正。

4.4制备试剂和培养基所用的水，应为无离子水或用玻璃器皿蒸馏的蒸馏水。

4.5检验结束后，所有带菌的培养基、试剂、稀释液和器皿必须尽快灭菌和洗刷。清洗过的器皿不应残留洗涤剂的痕迹。

5检验记录和结果的报告

5.1经检验的每份样品都应有完整的检验记录。样品检验过程中所用方法、出现的现象和结果等均要用文字写出试验记录，以作为对结果分析、判定的依据，记录要求详细、清楚、真实、客观、不得涂改和伪造。

5.2检验结束后，根据检验结果，及时填写检验报告书，签字并经负责人审核签字后发出。

（三）基本技术要求

1无菌操作要求

微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多实验要求在无菌的条件下进行，主要原因，一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。要求如下：

1.1接种细菌时必须穿工作服、带工作帽；

1.2进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用；

1.3接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用酒精棉球将手擦干净；

1.4进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用酒精点燃烧灼三次后使用；

1.5从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及试管或平皿边；

1.6接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌活样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；

1.7接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到针和环与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼；

1.8吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

2无菌间使用要求

2.1无菌间应密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及门，另尽量设有的小窗，以备进入无菌间后传递物品。