流式细胞术免疫标记简介(完整)精品PPT课件
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（6）浆细胞（plasma cell）：激活B细胞进 一步分化成为产生抗体的浆细胞，这时获得 PC-1、PCA-1和CD138浆细胞特异抗原，CD85表 达增加，CD38抗原再出现。而SIg和上述B抗原 消失。CD79仍可存在于胞质中。
16
（5）活化B细胞（activated B cell）：成熟 B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞， 继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激 活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相 关 抗 原 如 CD25 、 CD26 、 CD30 、 CD69 、 CD70 、 CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少，分泌型 Ig逐渐增加。
流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光 标记技术
4
FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧 光（Fluorescence）信号
n FL1 （第一荧光） -FITC(异硫氰酸荧光素） n FL2 （第二荧光） -PE（藻红蛋白） n FL3 （第三荧光） -PerCP, PeCy5等 n PL4 （第四荧光） -APC（藻青蛋白）
9
CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-
CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR（即CD4、CD8双阴性）
CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+ （即CD4、CD8双阳性）
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4+、 CD8-、TCR+
13
末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类 白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期 T细胞白血病的诊断有重要价值。
80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16 和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK 细胞。
14
B细胞标记
B细胞 B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细 胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细 胞6个阶段。
15
（ 3 ） 未 成 熟 （ 早 期 ） B 细 胞 （ immature B cell）：CD9、CD10消失，出现 SIgM、CD22。 CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79 表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、 CDw76相继出现。
（4 ）成熟B 细 胞（mature B cell）：SIgM 和 IgD同时表达，并出现CR、FcR和丝裂原受体，上 述B细胞抗原继续存在。
细胞功能 = 细胞表面蛋白抗原 = 细胞胞浆内蛋白性
抗原 = 细胞内细胞因子 = 细胞增殖 = 细胞内钙离子浓度
3
免疫标记技术
免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位 素、酶、发光剂或电子致密物质等作为 示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗 体反应。
（1）B祖细胞（pro-B）：此期最早表达的B细胞 特异性抗原是CD19，同时表达CD34、细胞核TdT、 HLA-DR、CD40、CyCD22。
（2）前B细胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出现 CyCD79 、 CD10 、 CD20 、 CD9 、 CDw78 、 CD74 ， cμ+ （胞浆IgM重链）。
双色直接染色
5
流式细胞术免疫荧光标记的应用
检测细胞表面蛋白抗原 检测细胞胞浆内蛋白性抗原 检测细胞内细胞因子 优势：在同一细胞上同时检测
多种标志
6
血液系统各型细胞免疫标志
7
造祖/干细胞
CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着 细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。
CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一， 并随一定的分化过程表达上调
流式细胞术系列讲座之——免疫标记
流式细胞术免疫标记应用简介
1
上次流式细胞术讲座内容（概述）
= 流式细胞术的一般介绍 = 流式细胞术在临床检测和科研中的应用
2
流式细胞仪可检测的细胞参数
细胞结构 = 细胞大小 = 细胞颗粒性程度 = 细胞表面面积 = 核浆比例 = DNA含量与细胞周
期 = RNA含量
CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细 胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定 T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期 和普通型T细胞白血病的主要分型标记。
Leabharlann Baidu12
CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记， 也是髓系白血病时最常见的伴随标记。 CD45则是白细胞的共同标记抗体
CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表 面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静 止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表 达。
最近发现CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖细胞 标志
结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育 阶段的标志。 如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标 志； CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。 CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向 的祖细胞。
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4-、 CD8+、TCR+
进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能
10
正常外周血中通常存在的T细胞亚群
CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），
占T细胞总数的60%~70%；
CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc） ，
20%~30%； CD3+ CD4+ CD8+ ： 1%~3%； CD3+ CD4- CD8-：1%~10%。
前 三 种 表 型 细 胞 的 TCR 主 要 为 TCRαβ ， 而 CD4CD8- T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免 疫功能。
11
CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相 关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、 50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞 （LGL／NK）的表面。
8
T细胞标志
T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、
CD7+ 未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。 在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，
且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。 胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞
表面标志需经历一定的变化过程。
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（5）活化B细胞（activated B cell）：成熟 B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞， 继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激 活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相 关 抗 原 如 CD25 、 CD26 、 CD30 、 CD69 、 CD70 、 CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少，分泌型 Ig逐渐增加。
流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光 标记技术
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FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧 光（Fluorescence）信号
n FL1 （第一荧光） -FITC(异硫氰酸荧光素） n FL2 （第二荧光） -PE（藻红蛋白） n FL3 （第三荧光） -PerCP, PeCy5等 n PL4 （第四荧光） -APC（藻青蛋白）
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CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-
CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR（即CD4、CD8双阴性）
CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+ （即CD4、CD8双阳性）
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4+、 CD8-、TCR+
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末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类 白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期 T细胞白血病的诊断有重要价值。
80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16 和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK 细胞。
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B细胞标记
B细胞 B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细 胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细 胞6个阶段。
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（ 3 ） 未 成 熟 （ 早 期 ） B 细 胞 （ immature B cell）：CD9、CD10消失，出现 SIgM、CD22。 CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79 表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、 CDw76相继出现。
（4 ）成熟B 细 胞（mature B cell）：SIgM 和 IgD同时表达，并出现CR、FcR和丝裂原受体，上 述B细胞抗原继续存在。
细胞功能 = 细胞表面蛋白抗原 = 细胞胞浆内蛋白性
抗原 = 细胞内细胞因子 = 细胞增殖 = 细胞内钙离子浓度
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免疫标记技术
免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位 素、酶、发光剂或电子致密物质等作为 示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗 体反应。
（1）B祖细胞（pro-B）：此期最早表达的B细胞 特异性抗原是CD19，同时表达CD34、细胞核TdT、 HLA-DR、CD40、CyCD22。
（2）前B细胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出现 CyCD79 、 CD10 、 CD20 、 CD9 、 CDw78 、 CD74 ， cμ+ （胞浆IgM重链）。
双色直接染色
5
流式细胞术免疫荧光标记的应用
检测细胞表面蛋白抗原 检测细胞胞浆内蛋白性抗原 检测细胞内细胞因子 优势：在同一细胞上同时检测
多种标志
6
血液系统各型细胞免疫标志
7
造祖/干细胞
CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着 细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。
CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一， 并随一定的分化过程表达上调
流式细胞术系列讲座之——免疫标记
流式细胞术免疫标记应用简介
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上次流式细胞术讲座内容（概述）
= 流式细胞术的一般介绍 = 流式细胞术在临床检测和科研中的应用
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流式细胞仪可检测的细胞参数
细胞结构 = 细胞大小 = 细胞颗粒性程度 = 细胞表面面积 = 核浆比例 = DNA含量与细胞周
期 = RNA含量
CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细 胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定 T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期 和普通型T细胞白血病的主要分型标记。
Leabharlann Baidu12
CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记， 也是髓系白血病时最常见的伴随标记。 CD45则是白细胞的共同标记抗体
CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表 面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静 止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表 达。
最近发现CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖细胞 标志
结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育 阶段的标志。 如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标 志； CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。 CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向 的祖细胞。
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4-、 CD8+、TCR+
进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能
10
正常外周血中通常存在的T细胞亚群
CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），
占T细胞总数的60%~70%；
CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc） ，
20%~30%； CD3+ CD4+ CD8+ ： 1%~3%； CD3+ CD4- CD8-：1%~10%。
前 三 种 表 型 细 胞 的 TCR 主 要 为 TCRαβ ， 而 CD4CD8- T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免 疫功能。
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CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相 关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、 50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞 （LGL／NK）的表面。
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T细胞标志
T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、
CD7+ 未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。 在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，
且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。 胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞
表面标志需经历一定的变化过程。