水中大肠菌群的测定

水中大肠菌群的测定

生物学实验教学中心

目录

引言 (2)

1 实验材料 (2)

2 实验步骤 (2)

2.1 (2)

2.2 (4)

2.3 (4)

2.4 (4)

2.5数据分析与结果处理 ...................................... 错误！未定义书签。

3 结果与分析 (5)

3.1图片................................................................... 错误！未定义书签。

3.2 ............................................................................ 错误！未定义书签。总结 (6)

参考文献 (8)

水中大肠菌群的测定

（指导老师：）

（湖北师范学院生命科学学院生物技术1104班湖北黄石435002）

摘要：测定青山湖水中的大肠菌群的含量。将待测水分别稀释10倍、100倍、1000倍3种梯度在三倍浓缩培养基 37℃培养24h后挑选出产酸或产气的菌画线

接种到伊红美蓝平板中37℃培养24h，将培养基中表现为阳性的菌落做革

兰氏染色镜检为阴性的菌种接种到乳糖蛋白胨培养基中37℃培养24h,挑

选大肠杆菌阳性菌。结果稀释10倍的水有3管大肠杆菌阳性菌，稀释100

倍的水有3管，稀释1000倍的有2管，即青山湖水中大肠杆菌的含量为

MPN=11000.

关键词：大肠杆菌、多管发酵法青山湖水

水中大肠菌群的测定

（指导老师：）

（湖北师范学院生命科学学院生物技术1104班湖北黄石435002）

引言

水对我们的生命起着重要的作用，它是生命的源泉，是人类赖以生存与发展的不可缺少的最重要的物质资源之一。人的生命一刻也离不开水，水是人生命需要最主要的物质。水也是大肠菌群的天然环境，一般地面水比地下水含菌数量多，并易被病原菌污染。人饮用后引发疾病。水质细菌学检验是培水与污水水质分析工作中的一项重要指标。

水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。

1 实验材料

药品：蛋白胨，牛肉膏，乳糖，蒸馏水，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，2%伊红（曙红）水溶液，0.5%美蓝（亚甲蓝）水溶液，氢氧化钠水溶液。工业酒精、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液，番红复染液，香柏油，二甲苯。

仪器(生产厂家)：显微镜，天平，培养箱，水浴锅，平皿，德氏管，刻度吸管，洗耳球，无菌涂布棒，量筒，灭菌锅，酒精灯，接种环，棉花，棉线，报纸。

菌种：青山湖水中大肠杆菌

2实验步骤（参照实验书）：

2.1 配制培养基及灭菌

1.乳糖蛋白胨培养基的配制（供多管发酵法的复发酵用）

（1）

2、三倍浓缩乳糖培养基

（1）

3.灭菌

●移液管的包装：将移液管的尖端，放在4-5cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约

成30°夹角，折叠包装纸包住移液管尖端，用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下的纸折叠打结。多支包装，待灭菌。

●培养皿的包装：培养皿由一底一盖组成一套，用报纸将10套培养皿（皿底朝里，皿

盖朝外，5套、5套相对而放）包好。

●棉塞的制作：按试管口或锥形瓶口大小估计用棉量，将棉花铺成中间厚、周围逐渐

变薄的近正方形，折一个角后（成五角形）卷成卷，一手握粗端，将细端塞入试管或锥形瓶的口内，棉塞不宜过紧或过松用手提棉塞，以管、瓶不掉下为宜。棉塞四周应紧贴管壁或瓶壁不能有褶皱，以防空气微生物沿棉塞皱折侵入。棉塞的直径和长度视试管和锥形瓶的大小而定，一般约3/5塞入管内。必须做到松紧合适，紧贴管壁，拔出时不松散、不变形。

●将所有准备待灭菌物品，包扎好后置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃高压蒸汽灭菌

20min。

将上述灭菌物品贮存于冷暗处备用。

1.2初发酵实验。

配制350ml三倍的乳糖蛋白胨培养液（每组取45ml），分装到9支试管中，每支试管内加入一个倒放的布氏小管，保证小管内无气泡。取水样并作梯度稀释，分别稀释出10倍，100倍，1000倍，在培养基中加入3中浓度的菌液10ml，每个稀释浓度各重复3个，混匀37度培养24h。

2.3平板分离。

培养后产酸，产气或仅产酸的发酵管为阳性反应，否则为阴性。配制伊红美蓝培养液1200ml（每组取200ml），然后倒12个平板，分别将9支试管中的菌用画线法接种到培养基上，。再随机从3种浓度的菌液中随机取一管进行接种。37度培养24h。将培养基中的菌种挑取少许进行革兰氏染色，再做镜检。

革兰氏染色：将带有上述典型特征的菌落（在伊红美蓝平板上大肠杆菌群的典型菌落为深紫黑色，具有金属光泽；或者为紫黑色，不带或略带金属光泽；或者为紫红色、中心较深的菌落）做革兰氏镜检：将大肠杆菌菌落涂片，干燥，固定。然后加草酸铵结晶紫一滴，染色1分钟后倾去染液，水洗至流出水为无色。用卢戈氏碘液覆盖1分钟，倾去碘液，水洗至流出水为无色。再用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，并衬以白纸背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，25S，然后立即用水冲去乙醇。将玻片上残留的水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2分钟，水洗，吸去残水，晾干。干燥后，油镜观察。以分开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色。阴性菌呈红色。

2.4 复发酵。

配制100ml乳糖蛋白胨培养基，分装10管（每管均加入布氏小管），高温灭菌。将镜检结果为阴性的菌种对应的培养基上的菌种接种到乳糖蛋白胨培养基上，37度培养24h，仍产酸，产气的是大肠菌群阳性。

2.5结果计算。

根据三个稀释度中的阳性管数组成的一个数量指标，查表计算结果。