克伦特罗说明书
克伦特罗说明书一步法
盐酸克伦特罗酶联免疫检测试剂盒使用说明书一、概要克伦特罗（clenbμterol，CLE）是一种 －肾上腺受体激动剂，此类药品在临床上用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。
因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。
人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。
我国农业部第235号文件规定不得检出。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。
二、测定原理本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗体。
检测时，加入标准品或样品溶液及克伦特罗酶结合物，他们竞争性地与克伦特罗抗体结合，形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。
三、试剂盒组成酶标板1块(包被抗克伦特罗抗体)标准液6瓶（1ml/瓶）：0、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb。
酶结合物…………………………7ml显色剂A …………………………7ml显色剂B …………………………7ml终止液…………………………7ml10×浓缩洗涤液…………………50ml说明书……………………………1份四、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂（1）设备……微孔板酶标仪(450nm)……振荡器……离心机……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl……容量瓶：100ml，500ml，1000ml（2）试剂……三氯乙酸……氢氧化钠……叔丁基甲醚色谱级……浓HCl……氯仿……磷酸……Tris……乙酸乙酯……乙腈五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都须注意：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
AccuDip TM 克伦特罗快速检测试纸卡使用说明书 (尿样检测)
传真：001-408-944-9665公司网址：公司邮箱：contact@AccuDip TM克伦特罗快速检测试纸卡使用说明书(尿样检测)产品编号：AAF-111111.产品概述:克伦特罗，又名瘦肉精，属于β-兴奋剂类药物，是一种肾上腺类神经兴奋剂。
当添加到动物饲料中后，可以增加动物的瘦肉量，同时减少饲料使用。
然而瘦肉精为增加瘦肉率所需用量大，在动物体内代谢缓慢，在肉类尤其是内脏中会有大量残留，如果食用进入人体会直接危害人体健康，出现晕厥、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐、肌肉振颤等中毒症状，特别是对高血压、心脏病等疾病患者危害更大，严重的可导致死亡。
瘦肉精是国家明令禁止使用的饲料添加剂。
本产品将胶体金免疫层析原理应用于克伦特罗含量的快速测定。
可以直接检测动物尿样，样品不需要稀释和前处理，使用简便。
反应灵敏，检测灵敏度为3纳克/毫升（3ppb)。
检测迅速，结果在5-10分钟内显示。
2.用途及灵敏度：本产品适用于尿样中克伦特罗（Clenbuterol)含量的快速检测。
检测灵敏度：3纳克/毫升(3ppb)3.检测原理：本产品将胶体金免疫层析原理应用于克伦特罗含量的快速测定。
在试纸卡中，抗克伦特罗抗体偶联到胶体金颗粒上，克伦特罗测试抗原固定在纤维素滤膜上。
如果样品不含有克伦特罗，胶体金抗体偶联物与固定抗原结合，在膜上显示检测线，检测结果为阴性。
如果样品中含有克伦特罗，克伦特罗结合在胶体金抗体偶联物上，抑制了胶体金抗体偶联物与固定抗原的结合，不显示检测线，检测结果为阳性。
4.试纸卡产品组成：试纸卡（1块）；一次性吸管（1支）；干燥剂（1块）传真：001-408-944-9665公司网址：公司邮箱：contact@ 5. 样本收集:尿样标本必须收集在洁净、干燥、不含有防腐剂的塑料杯或玻璃容器内。
若不能及时送检，尿样可在2-8℃冷藏保存24 小时。
长期保存需冷冻于-20℃，样品需避免反复冻融。
6. 检测步骤：（1）测试前将未开封的检测卡和尿样恢复至室温,从铝箔袋中取出检测卡后尽快使用（2）将检测卡平放,用一次性吸管吸取待检尿样,在加样孔内滴加样品3滴（3）加样后计时，5-10分钟判定结果7. 结果判定：阴性（-）：检测线（T）和控制线（C）都显色，表明样品中的克伦特罗浓度低于3纳克/毫升阳性（+）：检测线（T）无色，控制线（C）显色，表明样品中的克伦特罗浓度高于3纳克/毫升无效：控制线（C）无色，表示使用方法不正确或试纸卡失效，结果无效。
盐酸克伦特罗快速检测卡说明书（尿液）
北京百泰克生物技术有限公司百泰克生物电话：400-678-8982 传真：************BioTeke Corporation网址：E-mail：****************盐酸克伦特罗快速检测卡使用说明书（尿液）一、试剂盒组成产品编号产品规格检测卡滴管TC1001 20次 20份 20份TC1002 40次 40份 40份保存和稳定性4-30℃阴凉干燥处保存，不可冷冻，避免阳光直晒，生产日期起12个月内有效。
二、原理盐酸克伦特罗(Clen)快速检测试纸基于竞争法胶体金免疫层析技术，通过检测样品中的Clen与固定在检测线上的Clen-BSA偶联物竞争标记胶体金颗粒的Clen抗体，达到抑制检测线显色的效果。
因此，当样品中的Clen浓度超过一定量后，检测线将不显色；而当样品中Clen浓度低于一定量或者不含Clen时，检测线将显色。
由于质控线由二抗组成，识别并结合Clen抗体，因此无论样本中是否含有Clen，质控线都将显色，以示检测产品有效。
三、灵敏度3ppb四、所需容器塑料尿杯或玻璃容器五、注意事项1.如果购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请在购买处进行更换。
2.所有试纸启封后1小时内使用。
3.本品为一次性产品，请勿重复使用。
4.样品不需要放入冰箱冷藏，避光室温保存即可。
六、检测步骤1.取尿液直接进行测试，如有浑浊请先离心取上清液。
﹡注：尿液必须收集在洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
2.取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
3.3-5分钟判断结果，10分钟后的结果无效。
七、结果解释阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
表示样品中盐酸克伦特罗浓度高于3ppb。
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3ppb。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
未出现C线，表明不正确的操作过程或试剂卡已变质失效。
克伦特罗说明书
克伦特罗酶联免疫检测试剂盒(产品编号：CB1418)使用说明书一、试剂盒简介本试剂盒适用于组织、饲料及尿样内所含克伦特罗的定量测试。
试剂盒性能稳定，操作便捷，灵敏度高。
试剂盒包括以下内容：注：所有浓缩液均需稀释后使用，稀释方法见试剂制备及使用检测下限二、CB1418 克伦特罗试剂盒检测原理1、在可拆解成条状的酶标板上，已包被了克伦特罗特异性抗体。
2、标准液或样品中的克伦特罗会和酶标记物争夺酶标板上抗体的结合位点，形成抗体/抗原复合物或抗体/酶标抗原复合物。
3、洗涤酶标板，除去游离的酶标记物。
加上底物/发色剂。
在一定的温度范围内，抗体/酶标抗原复合物催化底物/发色剂发生显色（蓝色）反应。
加入酸后，反应终止，同时反应物的颜色由蓝色转为黄色。
4、颜色的深度与克伦特罗含量成反比。
在450纳米（nm）波长的酶标仪上，可读出相应的吸光度值。
三、样品制备（一）尿液样品制备尿样不用处理，清亮尿样直接测定（如果尿样有比较严重的浑浊，要过滤或离心直至得到清亮尿样）（二）组织样品制备（肝、肾、肌肉、视网膜）所需要的试剂：50mmol/L 盐酸：一般购买的浓盐酸为10mol/L，所以用蒸馏水按体积比1（浓盐酸）：199（蒸馏水）进行稀释即可500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：例如用6.8g磷酸二氢钾固体溶于100mL蒸馏水中，再用强酸调pH值到3.050mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：用500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释十倍，再检查pH值是否为3.01 mol/L氢氧化钠：例如用4.0g氢氧化钠固体溶于100mL蒸馏水甲醇(100%)：一般市场上购买的产品达到分析纯即可所需要的仪器：冷冻离心机：要有50mL的离心管和相应的转子均质器：要求转数在4000转以上样品前处理步骤：1.5g 粉碎的样品与25mL 50mmol/L HCL混合，振荡1.5小时，以达到均质的目的。
2.称6g均质物（相当于1g肝脏），加入离心瓶中3.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉）4.转移上清液到另一个离心瓶中，加300uL 1 mol/L氢氧化钠混合15分钟.5.加入4mL 500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液pH 3.0，简单的混合并在4O℃保存至少1. 5小时或过夜6.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉），分离全部上清液（应该是清亮的，非常重要），使其升至室温（20-25℃），然后用以下方法进行C-18柱纯化C-18 柱纯化方法：（1）用3mL甲醇（100%）洗涤柱子，流速为1滴/每秒（2）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒（3）样品进柱（肝，肉，或组织的全部上清液），流速为1滴/4每秒（4）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒（5）用正压去除残留的流体并且用空气或氮气吹2分钟干燥柱子（6）用1mL甲醇（100%）洗脱样品，流速为1滴/4每秒（7）在50-60℃并且在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇（8）用1mL蒸馏水溶解干燥的残留物进行分析注意:A.所有试剂和样品处理必须在室温条件下（20-25℃）并严格控制过柱时的流速B.在第（7）步中如果很难蒸发干甲醇，说明含有一定的水分，原因主要出在第（5）步中没有吹干柱子或甲醇本身有质量问题C.最后处理完的样品可能有黄色，属于正常现象，不影响以后的实验D.未处理的样品冷冻保存E.HCL均质后的样品在2-8℃稳定3天F.以磷酸二氢钾缓冲液提取后的样品（C18 柱纯化之前）在2-8℃稳定2天,使用前离心G.C-18 柱纯化步骤6所获得的甲醇洗脱物可以冷冻保存数周, 在2-8℃稳定2周视网膜样品应该采用以下方法快速抽提：1)称取0.1g视网膜，加入贴有标签的聚苯乙烯容器中或玻璃试管中。
盐酸克伦特罗检测卡说明书(完整版)
盐酸克伦特罗胶体金法检测卡使用说明书克伦特罗属于β—兴奋剂，是一种人和兽医作为治疗哮喘的药物。
在牲畜中超剂量使用可以使脂肪组织转化为肌肉组织，由于能够显著改善脂肪率和生产效率，β兴奋剂往往被滥用于畜牧养殖生产中。
近来又有一些非法使用克伦特罗作为饲料添加，并存在滥用现象。
国家已经明令禁止克伦特罗在动物饲养中使用。
本品是一种不需要任何仪器设备的尿样及组织检测法，应用单克隆抗体技术从而特异性地定性检测尿样及组织中的克伦特罗。
本品阈值为3ng/ml。
【测定原理】本试剂运用抗原抗体的特异性反应以及侧向层析和胶体金技术进行样本中克伦特罗分子的快速定性检测。
用BSA偶联的克伦特罗分子与胶体金颗粒结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将克伦特罗BSA偶联抗原和羊抗鼠二抗分别包被在检测区（T）和质控区(C)。
当尿样或组织样本加样后，样本中的克伦特罗分子与克伦特罗-BSA-胶体金偶联物一起层析泳动到检测区竞争与克伦特罗抗体结合，剩余的克伦特罗-BSA-胶体金继续泳动到质控区与抗体结合。
因此，当样本中的克伦特罗浓度超过一定量后，胶体金偶联物就不能与克伦特罗抗体结合，此时检测区不出现紫红色线条；当样本中克伦特罗浓度低于一定值或样本中没有克伦特罗时，胶体金偶联物就与克伦特罗抗体结合，从而在检测区显示出一条紫红色线条；而无论样本中是否含有克伦特罗分子，质控区都会出现紫红色线条，以示检测有效。
【包装组成】●克伦特罗胶体金检测卡（40份）●组织提取液（40支）●一次性塑料滴管（40支）●使用说明书（1份）【检测所需设备】●离心机●电炉、烧杯或者水浴锅或其它加热设备【一、尿样收集】尿液标本必须收集在洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
若不能及时送检，尿样标本在2ºC-8ºC冷藏可保存48小时。
长期保存需冷冻于-20ºC，忌反复冻融。
【二、组织样本收集】组织样本（包括精肉、肝脏、肺脏和肾脏）立即检测或收集在塑料袋中送检。
ProRapiTTM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡 说明书
R-protagenTM0507 Page 1 of 6ProRapiT TM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡使用说明书(TM0507 For Cat. No. FS0002)产品明细产品名称包装Cat. No.ProRapiT TM Clenbuterol Rapid Test 40 assays FS0002产品概述盐酸克伦特罗（Clenbuterol, CLE）是一种肾上腺受体激动剂，俗称瘦肉精。
因该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
食用饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所生产的禽畜产品后，残留的盐酸克伦特罗可对消费者的健康构成极大危害，由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在多个国家均有报道，牲畜产品中盐酸克伦特罗残留已成为社会各界关注的公众问题。
因此，世界许多国家禁止在饲料中使用克伦特罗来增加动物的瘦肉率。
R‐Protagen Company Tel:512‐62956169 Fax:512‐62956180‐832 www.r‐ email:sales@r‐FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR HUMAN OR DIAGNOSTIC USE.R-Protagen克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡，系采用免疫胶体金技术，能够快速、半定量、特异的检测尿液、组织样品中的克伦特罗，可通过肉眼直接判读结果，检出定量值为3ppb（3ng/ml），且检测结果精确，与其它Beta受体激动剂等无交叉。
适用于现场、快速、大量样本的筛查，检测成本低，适合基层和非专业人士及家庭使用。
检测原理R-Protagen盐酸克伦特罗快速检测试纸卡采用竞争抑制免疫层析的原理设计，当样本中含有克伦特罗时，待测物将和金标垫上的金标克伦特罗抗体结合并一同向上层析迁移，到达固定有抗原的检测线（T）时，抗原将和样本中的克伦特罗竞争结合金标克伦特罗抗体上有限的抗原结合位点。
克伦特罗检测试剂盒使用说明书 Kit CatalogNo BC-3003
克伦特罗检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3003一、概要:克伦特罗(Clenbuterol)，俗称瘦肉精，是一种β2兴奋剂。
能提高动物体内的瘦肉的比例，并加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，然而其会残留在动物体内，人类食用后会产生严重的副作用，轻则导致心跳及心率不正常，重则可引发心脏病。
目前，许多国家政府已明令禁止其使用于动物饲料中。
本公司研发生产的克伦特罗检测试剂盒的检测结果准确、稳定，可检测存在于动物的尿液、血清、血浆、组织(肌肉、心脏、肝脏等)、及动物饲料樣本中的克伦特罗。
样品前处理方式简单、方便，适用于各级政府食品安全检测机构、各类屠宰企业、肉类食品加工及饲料生产企业等。
二、检测原理:本试剂盒利用竞争酶联免疫方法，预先在微孔中包被羊抗兔抗体，实验时先后加入克伦特罗标准品，或待测样本，克伦特罗酶标抗原和兔抗克伦特罗抗体。
经过室温温育，反应液中的兔抗克伦特罗抗体与微孔板上的羊抗兔抗体结合，待测样品中的克伦特罗与克伦特罗酶标抗原竞争微孔板上的兔抗克伦特罗抗体。
洗涤后，没有与抗体结合的待测样品中的克伦特罗或酶标抗原被洗去，再加入反应底物，结合的酶标抗原的酶将底物转化为蓝色产物，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色。
反应完成后，样品中克伦特罗含量越多，反应呈色就越浅；反之，样品中克伦特罗含量越少，则呈色越深。
利用标准曲线可计算出样品中克伦特罗含量。
三、试剂盒提供试剂:1.羊抗兔抗体包被的微孔板:96孔。
2.克伦特罗参考标准品:0，0.05，0.25，1.00，2.50，5.00ppb (ng/ml);1.5ml/瓶，一套共6瓶。
3.克伦特罗酶标抗原试剂(1X):7ml/瓶。
4.兔抗克伦特罗抗体:7ml/瓶。
5.样品稀释液：100ml/瓶。
6.显色剂/底物：11ml/瓶。
7.反应终止液：11ml/瓶。
8.洗涤液(20X)：50ml/瓶，使用前稀释20倍。
四、其它试剂和仪器:1.试剂∙盐酸(5mM,10mM )∙氢氧化钠溶液(2.0M )2.仪器∙均质机(Ultra-turrax)∙微孔板酶标仪∙振荡器∙离心机∙氮气吹干仪或旋转蒸发器∙超声波破碎仪∙20µl,50µl,100µl,200µl,及1ml 移液器五、待测样品处理方法:1.尿液将样品在室温(18-25ºC)以4,000转离心10分钟后取上清液或者过滤后取滤液100克伦特罗检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3003μl,加入样品稀释液400μl （5倍稀释），用于下一步检测。
克伦特罗酶免疫定量检测试剂盒 说明书
ELISA kit for quantitative detection of Clenbuterol概述：克伦特罗(Clenbuterol)属于一类β-兴奋剂，具有改进脂肪型动物体内肉与脂肪的比例的作用，亦可促进动物生长。
但同时，此药物还会使非横纹肌松弛，人体摄入后可引起心跳、心率不正常等副反应，甚至可导致心脏病。
因此在我国，克伦特罗在畜牧业上的使用是被严格禁止的。
本试剂盒利用竞争酶联免疫法对生物样品中的克伦特罗进行定量分析。
适用于动物尿液、血清、内脏等物质中克伦特罗的快速检测。
由于ELISA法的高通量与简便快速，适合大量样本的定量筛查，自样本加入至结果读出，不超过60分钟，检测灵敏度为0.1ppb。
一、简要原理试剂盒所提供的微孔板上包被有抗体，然后将校准品或样本中的克伦特罗与酶标记的克伦特罗加入微孔中后，两者可竞争结合克伦特罗抗体，洗去未结合的酶标记克伦特罗。
加入底物后，在酶作用下，底物溶液会显蓝色，加入终止剂后，溶液由蓝转为金黄色。
在450nm波长光下测吸光度，吸光度高低与校准品或样品中克伦特罗的含量呈反比，根据校准品的读数作出校准曲线，并利用校准曲线计算出样品中克伦特罗的含量。
二、试剂盒组成1.酶标96孔易折板(抗体已包被)……………………………………………………………………… 96孔2.克伦特罗校准品(0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb)…………………………… 1 套3.11×浓缩酶标记物…………………………………………………………………………1瓶4.底物溶液…………………………………………………………………………1瓶5.酶标稀释液………………………………………………………………………1瓶6.50×浓缩洗涤液……………………………………………………………………1瓶7.终止剂……………………………………………………………………………1瓶8.其他（说明书、自封袋、封板膜）…………………………………………………………………1套2-8℃贮存，有效期一年三、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器1.试剂…………50mM盐酸溶液…………氯化钠…………50mM PH7.0 PBS (配制:9g NaCl；4.65g Na2HPO4·12H2O；0.56g NaH2PO4·2H2O 溶解于1000ml 蒸馏水中)…………2M 氢氧化钠溶液…………异丙醇和乙酸乙酯2.仪器…………微孔板酶标仪…………涡旋振荡器或超声波粉碎仪或摇床…………离心机及离心管…………20μl、200μl、1ml移液器…………氮吹仪或旋转蒸发仪ELISA kit for quantitative detection of Clenbuterol四、待测样品处理方法1.尿液新鲜尿液可直接测定，如尿液混浊，则离心取上清进行检测。
克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书
克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书一、概要克伦特罗（Clenbuterol）属于β-兴奋剂，因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。
人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。
因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。
HPLC或GC-MS一直用作检测β兴奋剂的方法，但是其前处理步骤费用昂贵；而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测尿，肌肉，肝脏及饲料中的CLE。
本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被克伦特罗抗原，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物克伦特罗负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。
三、适用范围可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液等样本中克伦特罗的残留量。
四、交叉反应率克伦特罗………………………………………………100%特普他林……………………………………………小于1%非诺特罗……………………………………………小于1%马布特罗……………………………………………小于1% 西马特罗…………………………………………小于1%溴布特罗……………………………………………小于1% 塞曼特罗……………………………………………小于1% 五、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml┅┅微量移液器：单道20μl～200μl、200μl～1000μl多道250μl试剂：┅┅甲醇(分析纯) ┅┅氢氧化钠(分析纯)┅┅浓盐酸----去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块2、标准品×6瓶：(1ml/瓶）0ppb, 0.05ppb, 0.15ppb,0.45ppb, 1.35ppb,4.05ppb3、高浓度标准品：100ppb （1ml/瓶）4、克伦特罗酶标物…………………………………………7ml5、克伦特罗抗试剂…………………………………………9ml6、底物液A液………………………………………7ml7、底物液B液………………………………………7ml8、终止液…………………………………………7ml9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml10、克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)…………………………40ml七、溶液的配制配液1: 样品稀释液用去离子水将克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)按1:1体积比进行稀释，即：1份克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)+1份去离子水；用于提取样本的稀释，样品稀释液在4℃环境可保存一个月。
克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡使用说明书(组织)(新)
克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡使用说明书（组织）（新）克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡使用手册（纸巾、饲料）简介克伦特罗是一种克伦特罗受体。
由于该药能提高瘦肉率，减少脂肪沉积，促进动物生长，因此被一些畜牧业农民和养殖企业用作养殖促进剂。
人们食用以盐酸克仑特罗为添加剂的动物生产的畜产品后，残留的盐酸克仑特罗会对消费者的健康造成极大危害。
由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在许多国家都有报道。
畜产品中盐酸克伦特罗的残留已成为社会各界关注的公共问题。
因此，世界上许多国家禁止使用克伦特罗来提高动物的瘦肉率。
结果检测原理安迪斯克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测尿液样品中的克伦特罗。
具有简单快速，无需仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。
检测结果准确，灵敏度为5ppb，准确率在95%以上。
阴性阳性无效试剂盒组成：40次/盒。
1、检测试卡：40个。
2.样品提取物：0.5ml×40瓶。
3.样品稀释液：0.5ml×40瓶。
4.一次性取样滴管：40支。
5.一次性塑料手套：5副。
6.说明：1份。
a：阴性：对照线(c)和样品测试线(t)同时出现，表尿液样本中克伦特罗的浓度小于5ng/ml。
b:阳性：只有对照线(c)，无样品测试线(t)。
表明尿液样本中克伦特罗的浓度大于5ng/ml。
c：无效：对照线(c)和测试线(t)都不出现。
储存条件和保质期1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存，忌冷冻。
2、环境温度在4-30℃下使用。
3、有效期见包装盒上。
4.储存期间避免光线、湿度和过热。
样品处理1.称取1g切碎或均质的组织、肉样本、肝脏和制剂合饲料样品，置于含0.5ml样品抽提液管，扭紧管盖，振摇样品１分钟后，100℃水浴10分钟。
2、冷却至室温，取20滴（0.5ml）清亮上清加入含0.5ml样品稀释管，充分混合，取上清液进行检测。
上海快灵生物盐酸克伦特罗检测卡说明书
上海快灵生物盐酸克伦特罗检测卡说明书
检测样品：尿液、动物组织、饲料等
灵敏度：尿液（3ppb、5ppb）、动物组织（5ppb）、饲料（10ppb）
检测时间：5分钟
特异性：盐酸克伦特罗检测卡检测100ug/ml莱克多巴胺、群勃龙醋酸酯、磺胺类、氯霉素类、大环内酯类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类和四环素类等药物，结果均呈阴性。
使用本品检测1ug/ml沙丁胺醇，结果显示均呈阴性。
产品用途：盐酸克伦特罗检测卡基于竞争法胶体金免疫层析技术，用于快速筛查盐酸克伦特罗(瘦肉精)超标的样品。
结果解释：
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
盐酸克伦特罗酶联检测试剂盒使用说明书
2. 测定原理
本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在微孔条上预包被恩诺沙星卵清蛋白的偶联物。检测时，加入恩诺沙星标准 品或待测样品溶液及特异性的抗恩诺沙星抗体，包被在微孔板上的恩诺沙星蛋白偶联物和标准品或样品中的恩诺沙星 竞争性地与抗体结合。再加入酶标二抗, 形成抗原抗体复合物；洗涤后加入显色剂，结合的酶将无色的显色剂转化为蓝 色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在 450nm 波长进行检测，样品中的恩诺沙星浓度与吸收光强度 成反比，与标准曲线比较即可得出相应残留物恩诺沙星的含量。
11. 灵敏度
恩诺沙星检测试剂盒的检测限： 鸡肉、鱼、虾：0.6ng/g
3
深圳市易瑞生物技术有限公司 Tel：0755-29744527
Fax：0755-27948417
%Maximum Absorbance
100
80
60
40
20
0
0
0.5 1.5 4.5 13.5 40.5
ENR(ng/ml)
Calibration Curve of ENR ELISA Kit
4. 需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
（1）设备 …均质器 …天平，精度 1mg …15ml、50ml 塑料离心管 …5、10ml 刻度移液管 …振荡器 …恒温水浴锅 …离心机 …氮吹仪或旋转蒸发仪 …恒温箱
1
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8. 免疫分析时试剂的准备
注意事项
a) 使用之前将所需试剂在室温放置至少半小时, 让温度回升至室温，特别是测试板孔、稀释抗体的洗涤液、
鼠抗克伦特罗单克隆抗体说明书
R-protagen
1 1
鼠抗克伦特罗单克隆抗体说明书
产品名称：鼠抗克伦特罗单克隆抗体
英文名称：Mouse anti- Clenbuterol Monoclonal Antibody
产品编号：MC0026
免疫原：盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白偶联物（CL-BSA）
克隆号：4H8、5A3、1C6、3G2
抗体类型：未鉴定
亲和常数：
特异性：IC50分别为2.28ng/ml，5.02ng/ml，6.82ng/ml，27.75ng/ml，与β-激动剂沙丁胺醇（Salbuterol）、肾上腺素（Epinephine）、去甲肾上腺素
（Norepinephrine）、异丙肾上腺素（Isoprenaline）和莱克多巴胺
（Ractopamine）的交叉反应率均低于0.5％。
纯化方法：Protein A亲和层析
抗体浓度：
产品规格：1ml
储存体系：0.01M PBS pH7.4
储存条件：-20℃
2 2 应用情况：ELISA、快速诊断。
注意：如使用频繁，请分装冻存。
不可反复冻融。
瘦肉精（克伦特罗）：一种强大的兴奋剂和减脂药物
瘦肉精（克伦特罗）：一种强大的兴奋剂和减脂药物瘦肉精(克伦特罗):一种强大的兴奋剂和减脂药物瘦肉精(克伦特罗):一种强大的兴奋剂和减脂药物由1. 声明本文只是从科学角度为大家解释瘦肉精(克伦特罗)的原理、作用及适用范围，作者不推荐大家使用这种药物。
首先这种药物有明显的副作用，其次这种药物已经被我国及大部分国家禁止提供给人及食用动物使用，而且这也是国际反兴奋剂组织规定的违禁药物，最后通过非正规渠道获取的药物存在风险，甚至可能不是瘦肉精。
如果有减肥、减脂、增加功率体重比等需求，请尽量尝试通过调整食谱和进行有氧运动的方式来完成。
2. 简介克伦特罗(Clenbuterol)，中国人常称之为瘦肉精。
它并不是激素，而是一种beta-2兴奋剂。
经过实验发现，瘦肉精具有能够降低体脂，并且不损失肌肉的效果，因此它是一种被广泛使用的兴奋剂。
据称，健身运动员、健美运动员、自行车运动员和好莱坞演员中都有人使用该种药物。
在美国的大量健身论坛中也可见到有为数众多的健身爱好者尝试使用该药物。
该药物在女性健身者中更为普及，因为瘦肉精没有类固醇药物带来的性特征方面的副作用。
3. 原理瘦肉精能降低体脂，被认为是因为如下三个原因：首先，它能够增加人体的体温；其次，它能够增加人体的心率；最后，它能够促进糖原的分解。
据研究，每1摄氏度的体温提升能够带来8%的卡路里消耗。
而心率增加能够带来更多的卡路里消耗则是众所周知的事情。
而更多糖原的分解会导致人体得不到足够的糖原来供给能量，因此只好使用脂肪。
有研究表明，瘦肉精还有降低蛋白质代谢和促进骨骼肌生长的作用，这些作用会使得身体的蛋白质不被消耗，从而达到不损失肌肉的效果。
但进一步的研究显示这些作用在家畜上表现明显，因此瘦肉精被无良饲养者用于家畜的养殖中；然而，并不适用于人体。
需要达到该效果所需要的服用量超过了人体承受的范围。
尽管如此，配合适当的饮食，少量的瘦肉精还是可以达到不损失肌肉的效果的。
跟瘦肉精类似的药物还有ECA(麻黄碱-咖啡因-阿司匹林的混合物)，这一药物也被部分健美爱好者使用。
肉类及饲料中克伦特罗快速检测ELISA试剂盒 使用说明书(中文版)
致所有样品的 ＯＤ 值偏低。使用之后立即将所有试剂放回 ２—８℃冰箱。 ３． 严格控制反应温度和时间 ，并尽量使用移液器加样； 结果判定以酶标仪读数为准 。 ４． 试剂混合要均匀 ，否则会出现重复性不好的现象。 ５． 在所有恒温孵育过程中， 避免光线照射，用封板膜封住微孔板 。 ６． 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。 所
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美国信合免疫诊断公司 AccuAffinity, Inc.
【注意事项】 １． 保存试剂盒于 ２—８℃，不要冷冻；将不用的微孔板放进自封袋重新密封；无色的显色液对光敏感，因
此要避免直接暴露在光线下。 ２． 使用之前将所有试剂温度回升至室温（２０—２５℃）。室温低于 ２０℃或试剂及样本没有回到室温可能导
-3-
美国信合免疫诊断公司 AccuAffinity, Inc.
２． 定量测定 ａ）计算 Ｂ／Ｂ０ 所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（Ｂ）除以第一个标准品 Ａ（零标准品）的吸光度值（ Ｂ０） 再乘以 １００％，即百分吸光度值。 百分吸光度值（％）＝Ｂ／Ｂ０×１００％ Ｂ — 标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 Ｂ０ — ０ ｎｇ／ｍＬ 标准溶液的平均吸光度值 ｂ）绘制标准曲线，计算样本中瘦肉精浓度 以克伦特罗标准品浓度为 Ｘ 轴，对应的百分吸光度值为 Ｙ 轴，在半对数坐标纸上绘制标准曲线图。相对应 每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出 。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度 。利用计算机专业 软件，更便于大量样品的快速分析。 【产品技术指标】 标准曲线范围：０ – ８．１ ｎｇ／ｍＬ 试剂盒定量区间：０．１ – ８．１ ｎｇ／ｍＬ 检测时间：４０ 分钟 样本最低检测限： 肉类…………………………… １ ｐｐｂ 饲料 ………………………… ０．２ ｐｐｂ 尿样…………………………… ０．５ ｐｐｂ 回收率 ……………………… ７０－１３０％ 交叉反应： 沙丁胺醇……………………… ３．８％ 莱克多巴胺…………………… ＜０．２％ 灵敏度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，定义为 ６ 个零标准品吸光度值的平均值减去 ３ 倍标准方差所对应的浓度）： ０．１ ｎｇ／ｍＬ （０．１ ｐｐｂ） 精密度（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）： 板内变差系数（ Ｉｎｔｒａ －ａｓｓａｙ ＣＶ）＜１２％ 板间变差系数（Ｉｎｔｅｒ－ａｓｓａｙ ＣＶ）＜１５％
WB02 胶体金法快速检测瘦肉精说明书概要
瘦肉精快速检测法-盐酸克仑特罗快速检测卡【简介】盐酸克仑特罗（Clenbuterol Hydrochloride，简写Clen）俗称瘦肉精，为一种人工合成的β-肾上腺素能兴奋剂，具有扩张支气管的作用。
当人食用含有盐酸克仑特罗（瘦肉精）残留的产品后的中毒症状为心动过速，低血钾，低磷酸盐血症，肌肉震颤，头晕，口干，失眠甚至瘫痪等。
国家已经明令禁止盐酸克仑特罗在动物饲养中使用。
本试纸用于猪和牛尿液、肉、酱肉及其食用饲料中的盐酸克仑特罗残留的快速筛选检测。
【检测原理】本试纸采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克仑特罗。
试剂含有被预先固定于膜上检测带（T）的盐酸克仑特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。
检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。
检测限为3ng/ml（3ppb）。
【样品制备】1.尿液：样本必须用洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器收集。
可直接检测，如有浑浊请先离心（3000rpm,5min）取上清。
若不能及时检测送检，尿样样本在2-8℃冷藏可以保存48小时。
长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。
2.肉：装入大约4克碎的肉样本（肉泥）于离心管中（酱猪牛肉加2ml水或PBS），盖紧管盖，在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟；吸取煮出的溶液到1.5ml的离心管中。
如有明显黄色浑浊请离心（3000rpm,5min），取上清检测。
如果检测牛肉请吸出肉汤离心(3000rpm,5min)，取上清检测。
3.饲料：取1g样品粉末于离心管中，加入5ml水，混匀，置于超声波水浴中超声30min（每10min取出混匀1次），超声提取后冷却至室温，于3000rpm离心5min，取上清液进行测试。
【操作步骤】1.在进行测试前先仔细阅读使用说明书，使用前将本品和待检样本溶液恢复至室温。
2.从原包装中取出试剂，打开后平放在桌面上，请在1小时内尽快使用。
3.吸取待检样品溶液，缓慢滴加80~100μl(约2~3滴）于加样孔中，加样后开始计时。
克仑特罗
的中毒
中毒的治疗
中毒的诊断
注意事项
1．有过量食用含瘦肉精残留的动物内脏或肉类的病史。 2．临床出现β-受体兴奋，以心血管为特征性中毒表现，可有心悸、心动过速、多汗、肌颤、肌无力；头痛、 恶心、呼吸困难等；严重者可发生惊厥、高血压危象。 3．实验室检查 （1）低钾、低镁等电解质紊乱。 （2）血糖和心肌酶升高。 （3）心电图：心动过速、房颤，严重者可出现ST-T改变。
一般治疗 防止药物继续吸收，中毒者应尽早催吐，必要时予以洗胃。 对症治疗 （1）维持水、电解质及酸碱平衡。 （2）高血压者可应用降压药物。 （3）轻症者可应用镇静剂减轻症状。 解毒剂的应用 快速心律失常可应用β-受体阻断剂。 （1）普萘洛尔：口服10～30mg，一日3～4次，酌情调整。 （2）美托洛尔：口服25mg，一日2～3次，酌情加至治疗量，最大不超过一日300mg。 （3）阿替洛尔：口服12.5～25mg，一日1次，酌情加至一日50～100mg。
1.片剂：每片20μg，40μg； 2.膜剂：60μg，120μg； 3.气雾剂：含克仑特罗1.96mg；
克仑特罗为强效β2受体激动药。特点为有效剂量小而作用时间持久，其支气管扩张作用为沙丁胺醇的100倍。 哮喘患者口服克仑特罗每次30μg，每天3次，与口服特布他林每次5mg，每天3次相比较。它们对增加FEV1和最大 呼气流速（FEF）和降低呼吸道阻力的疗效相近。可见，口服克仑特罗平喘作用较特布他林强170倍。
1．心功能不全者慎用β-受体阻断剂。 2．支气管哮喘和慢性肺疾病者慎用β-受体阻断剂。 3．β-受体阻断剂从小剂量开始，逐增逐减。
谢谢观看
口服吸收快而完全，15min起效，血浆药物浓度达峰值时间为2～3h，作用持续6～8h。药物分布符合带有周 边室的二室开放模型。自血浆中的消除可分两相，血浆分布半衰期为1h，血浆代谢半衰期为34h，主要通过肾脏 排泄，168h后排泄87%。给药间隔12h足以维持血药浓度。在人体中已发现5种代谢物。气雾吸入后5～10min起效， 作用维持2～4h。直肠给药（栓剂）后10～30min起效，作用维持8～24h。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡说明书
盐酸克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡说明书【产品名称】产品名称：盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金法）英文名称：Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold)【产品简介】盐酸克伦特罗（瘦肉精主要成分）是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物，在动物可食性组织中蓄积，危害食用者的健康，我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。
本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留，检测过程只需20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。
【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡（5条）；200μL刻度吸管（5支）；提取瓶（内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL，5瓶）；小勺（1个）。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。
【使用方法】1、取一小块瘦肉，用刀切成碎肉，用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内，高度与瓶盖相平（约2.0g）。
2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内，盖紧瓶盖后振荡，使碎肉与提取液充分混匀，放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出，冷却至室温。
3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液，垂直滴加2-3滴于加样孔（S孔）中。
4、室温环境计时5分钟，对照结果判断示意图判定检测结果，其他时间判定无效。
【结果判断】阴性（-）：C线和T线都显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。
阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。
无效：C线未出现，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。
【注意事项】1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡恢复至室温。
2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。
3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。
(组织)RS克仑特罗
广州瑞森生物科技有限公司盐酸克伦特罗快速检测卡使用说明书(组织样)本产品是一种不需要任何仪器设备的快速检测卡，用于检测组织样中盐酸克伦特罗含量，本品检测阈值为3ng/ml。
【原理】盐酸克伦特罗快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA偶联物的结合。
如果样本中盐酸克伦特罗含量大于3ng/ml，检测线（T）无红色条带出现，结果为阳性；反之，检测线（T）显示红色条带，结果为阴性。
【试剂组份】盐酸克伦特罗快速检测卡（40份）；一次性塑料吸管；一次性塑料手套；产品使用说明书；每卡铝箔袋单独包装。
【标本收集】组织样标本必须收集在洁净、干燥、不含有任何防腐剂的塑料杯内。
样品收集：无脂肪组织肉样剪碎，取约4g于离心管中，将离心管放入微沸水中水浴10min。
待冷却至室温后用塑料吸管吸取2滴（约60ul）清亮液体进行检测，如有明显黄色混浊，则需离心处理。
若不能及时送检，组织样标本在2～8℃冷藏可保存24小时。
长期保存需冷冻-20℃，忌反复冻融；【检测程序】⑴测试前将未开封的检测卡和样本恢复至室温。
⑵从原包装铝箔袋中取出的检测卡，在一小时内使用。
⑶将检测卡平放，用塑料吸管垂直滴加2滴无气泡样品液(约60ul)于加样孔。
⑷反应3-5min，根据示意图判定结果。
【结果判定】⑴阴性：质控线（C）显示红色条带，检测线（T）也出现红色条带；阳性：质控线（C）显示红色条带，而检测线（T）无红色条带出现。
⑵无效：若质控线（C）不显色或只有检测线（T）显色，说明操作过程不正确或检测卡失效。
【贮藏及有效期】4～30℃阴凉干燥处避光保存；有效期为18个月(生产日期及批号见包装盒)【注意事项】⑴检测卡在室温下一次性使用。
⑵检测时避免阳光直射和风扇直吹。
⑶自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
⑷由于组织样的差异，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要出现条带，即可判定为阴性结果。
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克伦特罗酶联免疫检测试剂盒
(产品编号：CB1418)
使用说明书
一、试剂盒简介
本试剂盒适用于组织、饲料及尿样内所含克伦特罗的定量测试。
试剂盒性能稳定，操作便捷，灵敏度高。
试剂盒包括以下内容：
注：所有浓缩液均需稀释后使用，稀释方法见试剂制备及使用
检测下限
二、CB1418 克伦特罗试剂盒检测原理
1、在可拆解成条状的酶标板上，已包被了克伦特罗特异性抗体。
2、标准液或样品中的克伦特罗会和酶标记物争夺酶标板上抗体的结合位点，形成抗体/抗原复合物或抗体/酶标抗原复
合物。
3、洗涤酶标板，除去游离的酶标记物。
加上底物/发色剂。
在一定的温度范围内，抗体/酶标抗原复合物催化底物/发
色剂发生显色（蓝色）反应。
加入酸后，反应终止，同时反应物的颜色由蓝色转为黄色。
4、颜色的深度与克伦特罗含量成反比。
在450纳米（nm）波长的酶标仪上，可读出相应的吸光度值。
三、样品制备
（一）尿液样品制备
尿样不用处理，清亮尿样直接测定（如果尿样有比较严重的浑浊，要过滤或离心直至得到清亮尿样）
（二）组织样品制备（肝、肾、肌肉、视网膜）
所需要的试剂：
50mmol/L 盐酸：一般购买的浓盐酸为10mol/L，所以用蒸馏水按体积比1（浓盐酸）：199（蒸馏水）进行稀释即可
500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：例如用6.8g磷酸二氢钾固体溶于100mL蒸馏水中，再用强酸调pH值到3.0
50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：用500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释十倍，再检查pH值是否为3.0
1 mol/L氢氧化钠：例如用4.0g氢氧化钠固体溶于100mL蒸馏水
甲醇(100%)：一般市场上购买的产品达到分析纯即可
所需要的仪器：
冷冻离心机：要有50mL的离心管和相应的转子
均质器：要求转数在4000转以上
样品前处理步骤：
1.5g 粉碎的样品与25mL 50mmol/L HCL混合，振荡1.5小时，以达到均质的目的。
2.称6g均质物（相当于1g肝脏），加入离心瓶中
3.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉）
4.转移上清液到另一个离心瓶中，加300uL 1 mol/L氢氧化钠混合15分钟.
5.加入4mL 500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液pH 3.0，简单的混合并在4O℃保存至少1. 5小时或过夜
6.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉），分离全部上清液（应该是清亮的，非常重要），使
其升至室温（20-25℃），然后用以下方法进行C-18柱纯化
C-18 柱纯化方法：
（1）用3mL甲醇（100%）洗涤柱子，流速为1滴/每秒
（2）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒
（3）样品进柱（肝，肉，或组织的全部上清液），流速为1滴/4每秒
（4）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒
（5）用正压去除残留的流体并且用空气或氮气吹2分钟干燥柱子
（6）用1mL甲醇（100%）洗脱样品，流速为1滴/4每秒
（7）在50-60℃并且在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇
（8）用1mL蒸馏水溶解干燥的残留物进行分析
注意:
A.所有试剂和样品处理必须在室温条件下（20-25℃）并严格控制过柱时的流速
B.在第（7）步中如果很难蒸发干甲醇，说明含有一定的水分，原因主要出在第（5）步中没有吹干柱子或甲醇本
身有质量问题
C.最后处理完的样品可能有黄色，属于正常现象，不影响以后的实验
D.未处理的样品冷冻保存
E.HCL均质后的样品在2-8℃稳定3天
F.以磷酸二氢钾缓冲液提取后的样品（C18 柱纯化之前）在2-8℃稳定2天,使用前离心
G.C-18 柱纯化步骤6所获得的甲醇洗脱物可以冷冻保存数周, 在2-8℃稳定2周
视网膜样品应该采用以下方法快速抽提：
1)称取0.1g视网膜，加入贴有标签的聚苯乙烯容器中或玻璃试管中。
2)加入1.25mL用双蒸馏水配制的0.1﹪十二烷基磺酸钠溶液。
3)涡旋振荡至少30秒钟。
4)加入5mL 叔丁基亚甲基醚（TBME）和100μL饱和氯化钠溶液。
5)涡旋振荡3分钟。
6) 2000rpm离心分离10分钟。
7)在TBME层移取4mL样到干净的玻璃试管中，50℃温度下，用空气流蒸发干燥。
8)用0.25mL已稀释的ELISA 稀释剂 / 洗涤缓冲剂，复溶干燥物，涡旋振荡3分钟。
制备好样品可用于ELISA
检测。
（三）饲料样品制备
1.用研钵将饲料样品研碎。
2.称取2.0克研碎的饲料。
3.加入2.0mL 1M盐酸。
4.加入18mL双蒸馏水。
5.均匀混合。
6.涡旋振荡3分钟。
7.将样品放入振荡器中振荡15分钟。
8.2000rpm离心20分钟。
9.将上清液缓缓移入另外的容器，再向上清液中加入1.0mL 1M氢氧化钠溶液。
10.确保pH值在7—9。
11.2000rpm离心20分钟。
12.样品便可用于ELISA检测。
四、试剂准备及其稳定性
（一）酶标板（12 X 8孔可拆式）
可以直接使用。
在2℃至8℃储存下，可保持稳定至有效日期。
如只使用部分酶标板，把余下的放回原来的锡纸袋中，尽量挤出空气后重新密封。
（二）稀释剂/洗涤缓冲剂（浓缩）
用970mL的双蒸水（Double Distilled H2O），把稀释剂/洗涤缓冲剂稀释。
储存在2℃至8℃下，可保持稳定至30天。
（三）酶标记物稀释剂
储存在2℃至8℃下，可保持稳定性至有效期。
（四）酶标记抗原（浓缩）
本试剂盒提供浓缩酶标记物，稀释方法见附录。
（五）单组分底物/发色剂
提供备用，储存在2℃至8℃下，可保持稳定性至有效日期。
不含有害有机化学溶剂，避免酶标记抗原接触光线。
（六）标准液
（见英文说明CHLORAMPHENICOL STANDARDS中Concentration 提供备用，储存在2℃至8℃下,可保持稳定性至有效日期。
项下所示浓度）
（七）反应终止液
提供备用，储存在2℃至8℃下,可保持稳定性至有效日期。
（八）需要自备的器材
ELISA检测用：
酶标仪（450nm波长）
洗板机
可调移液枪（10μL—125μL）
酶标板密封胶带
硫酸（0.2 M）
五、检测步骤
待所有试剂的温度回复至室温（约19℃至25℃）方可使用。
为了减低边缘效应，建议在反应过程中用酶标板密封胶片将酶标板密封。
每个标准、质控或样品要做两份平行试验，并做好加样位置的记录。
以下图表为酶标板的建议格式。
每一格代表2个孔。
S=标准 QC=质控 T=测试样品
以上表格仅供参考，可以根据实际情况自行安排。
注：如果实验条件不允许，可以不做质控。
（一）组织/尿液/饲料测试
1、用移液枪吸取标准或样品25uL，分别加入到指定的微孔中，然后加入100uL酶标记物到每一个微孔中，用酶标
板密封胶纸把酶标板盖住。
2、左右轻敲酶标板边缘数秒，将其置于室温下（19℃～25℃）培养1小时。
3、翻转酶标板，使孔内所有液体倾出。
4、用已稀释的稀释/洗涤缓冲剂250uL手洗酶标板3次（或将孔注满机洗最多6次）。
最后一次洗涤完毕后，将酶标
板倒置于吸水纸上拍干。
（将液体甩出后不用翻转——避免各空中液体交叉污染，直接扣于吸水纸上拍干即可）
5、立刻用8通道移液管移取125μL单组分底物/发色剂到每一孔里。
完毕后，左右轻敲酶标板，将其放在避光的恒
温箱内（约20℃至25℃）20±2分钟。
6、加入100μL 反应终止液终止反应，反应物的颜色会由蓝色转为黄色。
7、于10分钟内，用450nm的酶标仪测定吸光度值。
（二）标准曲线及结果分析
1、分别计算标准、质控和样品的平均吸光值。
2、以吸光度值为纵坐标，标准浓度的对数值为横坐标建立标准曲线。
3、从标准曲线上读取质控和样品的吸光度值。
4、结果的计算和单位的转换
尿液样品和组织样品：计算出的结果既为实际结果。
视网膜样品（快速提取法）：将结果乘以3.1便可。
饲料样品：将结果乘以11便可。
（三）如呈阳性反应，应该从其它方法得以证实(例如色谱/质谱分析)。
六、试剂盒的技术参数
特异性
与克伦特罗抗血清交叉反应的化合物如图表：
注意事项：
1、稀释/洗涤缓冲剂含有防腐剂，避免进食及与皮肤或粘膜接触。
2、如有需要, 可提供健康与安全数据表（MSDS）。
中文译件仅供参考，以试剂盒内附的英文原件为准。