克伦特罗说明书

克伦特罗酶联免疫检测试剂盒

(产品编号：CB1418)

使用说明书

一、试剂盒简介

本试剂盒适用于组织、饲料及尿样内所含克伦特罗的定量测试。试剂盒性能稳定，操作便捷，灵敏度高。

试剂盒包括以下内容：

注：所有浓缩液均需稀释后使用，稀释方法见试剂制备及使用

检测下限

二、CB1418 克伦特罗试剂盒检测原理

1、在可拆解成条状的酶标板上，已包被了克伦特罗特异性抗体。

2、标准液或样品中的克伦特罗会和酶标记物争夺酶标板上抗体的结合位点，形成抗体/抗原复合物或抗体/酶标抗原复

合物。

3、洗涤酶标板，除去游离的酶标记物。加上底物/发色剂。在一定的温度范围内，抗体/酶标抗原复合物催化底物/发

色剂发生显色（蓝色）反应。加入酸后，反应终止，同时反应物的颜色由蓝色转为黄色。

4、颜色的深度与克伦特罗含量成反比。在450纳米（nm）波长的酶标仪上，可读出相应的吸光度值。

三、样品制备

（一）尿液样品制备

尿样不用处理，清亮尿样直接测定（如果尿样有比较严重的浑浊，要过滤或离心直至得到清亮尿样）

（二）组织样品制备（肝、肾、肌肉、视网膜）

所需要的试剂：

50mmol/L 盐酸：一般购买的浓盐酸为10mol/L，所以用蒸馏水按体积比1（浓盐酸）：199（蒸馏水）进行稀释即可

500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：例如用6.8g磷酸二氢钾固体溶于100mL蒸馏水中，再用强酸调pH值到3.0

50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：用500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释十倍，再检查pH值是否为3.0

1 mol/L氢氧化钠：例如用4.0g氢氧化钠固体溶于100mL蒸馏水

甲醇(100%)：一般市场上购买的产品达到分析纯即可

所需要的仪器：

冷冻离心机：要有50mL的离心管和相应的转子

均质器：要求转数在4000转以上

样品前处理步骤：

1.5g 粉碎的样品与25mL 50mmol/L HCL混合，振荡1.5小时，以达到均质的目的。

2.称6g均质物（相当于1g肝脏），加入离心瓶中

3.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉）

4.转移上清液到另一个离心瓶中，加300uL 1 mol/L氢氧化钠混合15分钟.

5.加入4mL 500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液pH 3.0，简单的混合并在4O℃保存至少1. 5小时或过夜

6.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉），分离全部上清液（应该是清亮的，非常重要），使

其升至室温（20-25℃），然后用以下方法进行C-18柱纯化

C-18 柱纯化方法：

（1）用3mL甲醇（100%）洗涤柱子，流速为1滴/每秒

（2）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒

（3）样品进柱（肝，肉，或组织的全部上清液），流速为1滴/4每秒

（4）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒

（5）用正压去除残留的流体并且用空气或氮气吹2分钟干燥柱子

（6）用1mL甲醇（100%）洗脱样品，流速为1滴/4每秒

（7）在50-60℃并且在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇

（8）用1mL蒸馏水溶解干燥的残留物进行分析

注意:

A.所有试剂和样品处理必须在室温条件下（20-25℃）并严格控制过柱时的流速

B.在第（7）步中如果很难蒸发干甲醇，说明含有一定的水分，原因主要出在第（5）步中没有吹干柱子或甲醇本

身有质量问题

C.最后处理完的样品可能有黄色，属于正常现象，不影响以后的实验

D.未处理的样品冷冻保存

E.HCL均质后的样品在2-8℃稳定3天

F.以磷酸二氢钾缓冲液提取后的样品（C18 柱纯化之前）在2-8℃稳定2天,使用前离心

G.C-18 柱纯化步骤6所获得的甲醇洗脱物可以冷冻保存数周, 在2-8℃稳定2周

视网膜样品应该采用以下方法快速抽提：

1)称取0.1g视网膜，加入贴有标签的聚苯乙烯容器中或玻璃试管中。

2)加入1.25mL用双蒸馏水配制的0.1﹪十二烷基磺酸钠溶液。

3)涡旋振荡至少30秒钟。

4)加入5mL 叔丁基亚甲基醚（TBME）和100μL饱和氯化钠溶液。

5)涡旋振荡3分钟。

6) 2000rpm离心分离10分钟。

7)在TBME层移取4mL样到干净的玻璃试管中，50℃温度下，用空气流蒸发干燥。

8)用0.25mL已稀释的ELISA 稀释剂 / 洗涤缓冲剂，复溶干燥物，涡旋振荡3分钟。制备好样品可用于ELISA

检测。

（三）饲料样品制备

1.用研钵将饲料样品研碎。

2.称取2.0克研碎的饲料。

3.加入2.0mL 1M盐酸。

4.加入18mL双蒸馏水。

5.均匀混合。

6.涡旋振荡3分钟。

7.将样品放入振荡器中振荡15分钟。

8.2000rpm离心20分钟。

9.将上清液缓缓移入另外的容器，再向上清液中加入1.0mL 1M氢氧化钠溶液。

10.确保pH值在7—9。

11.2000rpm离心20分钟。

12.样品便可用于ELISA检测。

四、试剂准备及其稳定性

（一）酶标板（12 X 8孔可拆式）

可以直接使用。在2℃至8℃储存下，可保持稳定至有效日期。如只使用部分酶标板，把余下的放回原来的锡纸袋中，尽量挤出空气后重新密封。

（二）稀释剂/洗涤缓冲剂（浓缩）

用970mL的双蒸水（Double Distilled H2O），把稀释剂/洗涤缓冲剂稀释。储存在2℃至8℃下，可保持稳定至30天。

（三）酶标记物稀释剂

储存在2℃至8℃下，可保持稳定性至有效期。

（四）酶标记抗原（浓缩）

本试剂盒提供浓缩酶标记物，稀释方法见附录。

（五）单组分底物/发色剂

提供备用，储存在2℃至8℃下，可保持稳定性至有效日期。不含有害有机化学溶剂，避免酶标记抗原接触光线。（六）标准液