革兰氏染色步骤
革兰氏染色技术关键操作步骤
革兰氏染色技术关键操作步骤革兰氏染色技术（Gram staining）是微生物学中常用的染色方法，利用这种方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
它是由丹麦细菌学家Christian Gram于1884年发明的，被广泛应用于细菌的鉴定和分类。
革兰氏染色技术的关键操作步骤包括以下几个方面：一、准备细菌培养物在进行革兰氏染色之前，首先需要准备细菌培养物。
通常使用处于对数生长期的细菌培养物，用无菌技术从培养物中取一小滴液体，均匀涂抹在玻璃片上，制备细菌涂片。
二、固定细菌涂片细菌涂片需要进行固定，以保持细菌的形态特征。
常用的固定剂是甲醇或乙醇，将涂片逐渐浸入固定剂中，浸泡数分钟至数十分钟，然后取出晾干。
三、染色1. 注碘液处理在固定的细菌涂片上滴加碘液，覆盖整个涂片。
碘液可以使细菌细胞内的格拉氏阳性菌染成紫色。
2. 酒精洗涤用酒精溶液冲洗细菌涂片，直至涂片上的紫色不再出现，一般持续几秒至十几秒钟。
这一步是关键的洗涤步骤，通过酒精的洗涤，可以去除革兰氏阴性菌的多余染色。
3. 闪碱洗涤用闪碱洗涤涂片，一般可以持续几秒至十几秒钟。
闪碱的作用是去除细菌涂片上的酒精和碘溶液，同时使革兰氏阳性菌继续保持紫色。
4. 洗涤与干燥最后用清水冲洗细菌涂片，使其干燥。
四、观察与解读完成染色步骤后，可以使用显微镜观察细菌涂片。
革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色。
观察细菌的形态、大小、排列方式等特征，进一步判断和鉴定细菌。
总结与回顾：革兰氏染色技术是微生物学中常用的染色方法，它可以通过染色结果将细菌分为两大类：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色的关键操作步骤包括准备细菌培养物、固定细菌涂片、染色、观察与解读。
其中，注碘液处理、酒精洗涤和闪碱洗涤是整个染色过程中的核心步骤，通过这些步骤的操作，可以使革兰氏阳性菌保持紫色，革兰氏阴性菌去除多余染色。
对于细菌的鉴定和分类来说，革兰氏染色技术是一个简单、快速且有效的方法。
简述革兰氏染色方法的步骤及原理。
简要方法步骤:涂片→干燥→冷却→结晶初染→碘液媒染→酒精脱色→番红复染→干燥→镜检。
原理:与两类细菌的细胞壁成分笔结构有密切关系。
革兰氏阴性菌的细胞壁中含较多的类脂质，而肽聚糖含量较少。
当用酒精脱色时，类脂质被溶解，从而增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后则呈现复染剂的颜色。
而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少,经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，因而细胞仍保留初染时的颜色。
简述革兰氏染色方法
简述革兰氏染色方法革兰氏染色方法是一种常用的细菌染色方法，它能够将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
本文将从原理、步骤、应用以及优缺点等方面进行简述。
一、原理革兰氏染色方法是根据细菌细胞壁的化学组成差异而设计的。
细菌细胞壁是由多层薄而紧密的多糖和脂蛋白组成的，其中革兰氏阳性菌的细胞壁含有大量的胞内酶和胞外酶，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，胞内酶和胞外酶含量较少。
二、步骤1. 准备细菌涂片：将待染菌液滴于玻璃片上，用铅笔或曲别针将菌液均匀地涂开，然后用火焰烘烤片面，使其固定。
2. 染色：将涂片放在染色架上，先用蔗糖水浸润片面，然后滴加革兰氏紫液，静置1分钟。
3. 洗涤：用自来水冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
4. 酒精分解：滴加碘酒，静置1分钟，使细菌细胞壁与染色剂形成络合物。
5. 洗涤：用95%乙醇冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
6. 染色：滴加伊红，静置1分钟，使细菌细胞壁和胞质染成红色。
7. 洗涤：用自来水冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
8. 干燥：将片面用吹风机吹干，然后用显微镜观察。
三、应用革兰氏染色方法广泛应用于细菌学和临床微生物学领域。
通过革兰氏染色，可以快速区分细菌的类型，对于细菌感染的诊断和治疗具有重要意义。
革兰氏阳性菌常见于致病菌中，如葡萄球菌、链球菌等；而革兰氏阴性菌常见于肠道菌群中，如大肠杆菌、沙门氏菌等。
四、优缺点1. 优点：革兰氏染色方法操作简单、快速，可以在短时间内对细菌进行初步分类。
此外，染色结果直观明确，易于观察和分析。
2. 缺点：革兰氏染色方法对于某些细菌可能存在染色困难或染色效果不明显的情况，这可能会导致结果的不准确。
另外，染色后的细菌仅能观察细胞形态和分布情况，无法提供更详细的细胞结构信息。
总结：革兰氏染色方法是一种简单、快速的细菌染色方法，通过染色结果可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
该方法在细菌学和临床微生物学中有着广泛的应用，对于细菌感染的诊断和治疗具有重要意义。
简述革兰染色法的操作步骤
简述革兰染色法的操作步骤革兰氏染色法：也称革兰氏阴性染色法。
属于活细胞染色法，也是初中阶段接触的细菌学基本技术之一。
此法特别适合观察病毒的形态，故常作为临床微生物实验中重要的染色方法。
简述革兰氏染色法的操作步骤一般方法如下：(1)检查试管，将所需的培养基配制好并检查是否均匀。
(2)液体试剂的制备：取无菌的结晶紫注射液0。
5ml，精氨酸0。
5ml， 0。
01%升汞液2。
5ml，蒸馏水150ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。
(3)固体试剂的制备：取无菌的结晶紫指示液0。
5ml，精氨酸0。
5ml，蒸馏水50ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。
(4)稀释：在试管内分别加入精氨酸0。
5ml，无菌水20ml，再加蒸馏水至9ml，摇匀，用结晶紫指示液染色20分钟，并随时注意结晶紫是否变蓝，必要时可轻轻摇动或加热。
(5)加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。
(6)加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。
(1)检查试管，吸出液体试剂，吸干，检查。
(2)准确量取需用量(或先倒在烧杯中，再用量筒量)，检查药液浓度。
(3)用酒精灯火焰点燃试管内的培养基，分别在每管中加入1。
0ml培养基，将试管放回37 ℃温箱中培养。
(4)观察并记录细菌生长情况。
第一，培养时间应足够，以获得足够的细菌数量；第二，以提高对细菌生长曲线的观察能力；第三，缩短细菌培养时间有利于分离、纯化细菌。
(5)取出试管，观察染色的结果。
如果菌落周围染色较浅，表明染料被细菌分泌物包绕，菌体呈现模糊状态；反之，菌落周围染色较深，则表明细菌染色质集中，结构明显。
①加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。
②加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。
革兰氏染色法的过程及原理
革兰氏染色法的过程及原理革兰氏染色法是一种用于细菌分类和鉴定的重要染色方法。
该方法由丹麦细菌学家克里斯汀·革兰发现并发展起来，于1884年首次发布。
革兰氏染色法能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，具有重要的临床和实验室应用价值。
染色：将待检测的细菌接种于玻璃片上，用火焰烘烤杀灭细菌并固定在玻璃片上。
接着，将玻璃片放入甲醇中，用火焰加热将甲醇蒸发。
然后，将玻璃片浸泡在革兰之前的染色液中，染色液由紫色的亚甲基紫和碘化钾组成。
这一步骤的目的是通过紫色染料使细菌固定在玻璃片上。
洗涤：将玻璃片放入碘化钾溶液中洗涤。
碘化钾能与细菌细胞壁上的一些成分形成复合物，使细菌呈现蓝色。
固定：将玻璃片放入醇中洗涤。
醇有助于将紫色染料从革兰阴性菌的细胞壁中洗去。
显微观察：将玻璃片放入显微镜下观察。
在显微镜下，革兰阳性菌呈现紫色，而革兰阴性菌呈现红色。
根据这一特征，可以进行细菌的初步分类和鉴定。
革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的差异。
革兰氏阳性菌具有较厚的细菌细胞壁，由于其壁中含有较多的肽聚糖和穿过壁的肽聚糖横向支链，革兰阳性菌在染色过程中能够较好地固定紫色染料，显示为紫色。
而革兰氏阴性菌则具有较薄的细菌细胞壁，壁中的肽聚糖和肽聚糖支链较少，使得革兰阴性菌无法固定紫色染料，而显示为红色。
革兰氏染色法的原理还与染色液中紫色染料的结构有关。
紫色染料中的亚甲基紫分子带有正电荷，而革兰阳性菌细胞壁中的较多的负电荷物质使其对亚甲基紫具有亲和力，从而固定了紫色染料。
而革兰阴性菌细胞壁中的负电荷物质相对较少，因此无法固定紫色染料，而被酒精洗去，再经过后续的红色染料染色，显示为红色。
然而，革兰氏染色法也存在一些局限性，比如一些细菌可能失去一些特性，导致染色结果不准确。
此外，一些细菌在真菌的单位时间染色效果不佳，也需要进行其他进一步的鉴定方法。
因此，在细菌分类和鉴定中，革兰氏染色法常常与其他染色方法和生化试验相结合使用，以提高鉴定的准确性和可靠性。
革兰氏染色的原理
革兰氏染色的原理
革兰氏染色是细菌学中最为常用的染色方法之一，其原理是利用革兰氏染色技术来将细菌区分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
具体原理如下：
在进行革兰氏染色时，首先将待检测的细菌样本涂在玻片上，然后通过以下几个步骤进行染色：
1. 涂以革兰染色剂（紫色）：首先将革兰染色剂（紫色）涂抹在玻片上，待其充分渗透。
2. 洗涤：用蒸馏水或生理盐水冲洗玻片，以洗去多余的革兰染色剂。
3. 涂以碘液：再将碘液涂抹在玻片上，待其充分渗透。
4. 洗涤：用蒸馏水或生理盐水冲洗玻片，以洗去多余的碘液。
5. 涂以解染剂（酒精/乙醇）：将解染剂（酒精/乙醇）涂抹在玻片上进行漂洗，革兰氏阳性菌的细胞壁不易被漂掉，
表现为紫色或紫黑色，而革兰氏阴性菌的细胞壁被漂洗掉，表现为无色或浅红色。
6. 涂以对比染色剂（红色）：最后将对比染色剂（红色）涂抹在玻片上，革兰氏阴性菌会被染成红色。
通过以上步骤，革兰氏染色技术可将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌显色为紫色或紫黑色，而革兰氏阴性菌显色为红色。
该技术的原理基于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构不同，可用于细菌的初步鉴定和分类。
革兰氏染色关键步骤
革兰氏染色关键步骤革兰氏染色是一种广泛应用于微生物学研究中的染色方法，通过染色使细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类，这对于鉴定和分类细菌非常重要。
下面将详细介绍革兰氏染色的关键步骤。
一、准备工作1.1 培养基选择首先需要选择适合的培养基进行培养。
不同种类的细菌需要不同的培养基，例如大肠杆菌需要在LB培养基上生长。
1.2 细菌培养将选好的培养基加入试管中，接种适量的细菌，在恒温摇床上进行培养。
通常情况下，需要在24小时内达到足够数量的细菌。
二、制备干片2.1 净化玻璃片用肥皂水或其他清洁剂清洗玻璃片，并用去离子水冲洗干净。
然后用96%乙醇消毒玻璃片。
2.2 制备干片取出消毒好的玻璃片，在干燥无尘环境下放置至少30分钟。
然后用铅笔在玻璃片上标记编号。
三、染色步骤3.1 固定细菌将培养好的细菌取出，滴在制备好的玻璃片上。
然后用火焰将玻璃片加热，使细菌固定在玻璃片上。
3.2 染色将固定好的细菌涂上革兰紫染料，静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.3 醋酸洗涤将涂有革兰紫染料的细菌加入醋酸中浸泡30秒钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.4 染色再次涂上碘化钾溶液，静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.5 酒精洗涤将涂有碘化钾溶液的细菌加入95%乙醇中浸泡30秒钟，直到颜色变浅。
然后立即用去离子水冲洗干净。
3.6 洗涤和对比染色最后将细菌涂上对比染料（如苏丹红），静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净，并将玻璃片倒立在滤纸上晾干。
四、观察结果4.1 革兰阳性细菌革兰阳性细菌在染色后呈紫色或紫红色，因为它们的细胞壁含有大量的多糖和类脂质。
4.2 革兰阴性细菌革兰阴性细菌在染色后呈粉红色或红色，因为它们的细胞壁只含有一层较薄的多聚肽和脂质。
总结革兰氏染色是一种简单而有效的方法，用于鉴定和分类微生物。
通过以上步骤可以得到清晰可见的结果，从而为微生物学研究提供了重要依据。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
1.涂片。
首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。
2.固定。
将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次，以载玻片的加热面接触手背皮肤，不觉过烫为佳，待冷却后再在火焰上方来回通过一两次，再冷却，这样重复操作直到薄层干了为止。
3.染色。
在制好的片上滴一滴草酸铵结晶紫，染色1 min后用水洗，注意水流不要直接对准薄层。
4.媒染。
加路哥式碘液大概一滴，作用1 min后用水冲洗，注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。
5.脱色。
用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。
这一步是革兰氏染色的关键，必须严格掌握好，如果脱色时间过长则会把阳性菌误认为阴性菌；如果脱色不够则容易被误认为是阳性菌。
6.水洗后用过滤纸吸干。
7.复染。
滴加0.5%的番红染色一滴，液染色10～30 s后，用自来水冲洗。
8.观察。
9.干燥后，用油镜镜检观察，并做好记录。
实验细菌的革兰氏染色
结果判断的注意事项
观察时需注意染色结果是否清晰、准确，避免因操作不当或染色时间过长导致颜色 过深或过浅。
对于某些特殊细菌，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等，革兰氏染色结果可能与其他 细菌不同，需结合其他实验结果进行鉴别。
学习革兰氏染色的操作步骤
结晶紫染色
涂片上滴加结晶紫染液，染色 1-2分钟，水洗去多余染液。
复染
涂片上滴加复染液，染色30秒 左右，水洗去多余复染液。
涂片
将待测细菌均匀涂布在载玻片 上。
脱色
涂片上滴加脱色液，脱色30秒 左右，水洗去多余脱色液。
干燥
将涂片自然干燥或用吸水纸吸 干。
掌握革兰氏染色的结果判断
据。
实验中遇到的问题及解决方案
问题
染色过程中出现颜色不均 的现象。
问题
部分细菌在染色后形态不 清晰。
问题
部分细菌在染色过程中脱 落。
解决方案
调整染色时间或染色液的 浓度，确保染色均匀。
解决方案
优化制片步骤，确保细菌 均匀分布在载玻片上，以
便观察。
解决方案
增加固定步骤，使用更好 的固定剂，以保持细菌在
在观察革兰氏染色结果时，需注意区分污染菌和实验菌，避免误判。
06
实验结论
实验总结
实验过程顺利，染色效果明显， 成功地进行了细菌的革兰氏染色。
通过实验，我们掌握了革兰氏染 色的基本原理和操作方法，了解 了不同细菌在染色后的形态特征。
实验中，我们观察到了革兰氏阳 性菌和阴性菌在染色后的明显差 异，为后续的细菌鉴定提供了依
革兰氏染色的重要性
简述革兰染色法的步骤结果及临床意义
简述革兰染色法的步骤结果及临床意义
革兰染色法是一种常用的细菌学检查方法，用于鉴别细菌的阴性和阳性性质。
其步骤包括初染、媒染、脱色和复染等四个步骤。
具体实验流程如下:
1. 取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用 marker 笔画一个小圈 (用来大致确定菌液滴的位置)。
涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2. 涂片：液体培养基:左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近 5cm 左右打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径 2mm 左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3. 晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4. 固定：让菌膜朝上，通过火焰 2-3 次固定 (以不烫手为宜)。
5. 染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6. 水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7. 媒染：滴加 1 滴碘液，染 1min，水洗。
8. 脱色：吸去残留水，连续滴加 95% 乙醇脱色 20-30s 至流出液无紫色，立即水洗。
9. 复染：滴加蕃红复染 3-5min，水洗。
至此，革兰氏染色结束。
结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
革兰染色法的临床意义在于:1. 鉴别细菌;2. 选择药物;3. 与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素;而内毒素是细菌感染性休克的一个重要因素。
革兰氏染色原理
革兰氏染色原理
革兰氏染色原理是一种被用来鉴定细菌的技术，由古斯塔夫·革兰（Gustaf Jahannesso ）于1884年提出，被公认为是系统微生物学的创始人。
一、染色原理
革兰氏染色原理是指，细菌和一些真菌有一种特殊的结构——外护壳，称为外护壳或质壳。
外护壳内含有许多有机质或无机质，表面有特异性结构抗原，可被某些特异抗体识别。
细菌在染色时，一些染料会和其表面抗原结合，从而呈现出不同的
颜色，从而可以正确识别的细菌属种类。
二、染色过程
革兰氏染色有六个步骤：
（1）培养物采集：将细菌培养物采集，置于培养皿中细菌的膜上，可以获得足够
的菌柄。
（2）抗原稀释：将有效抗原配制一定浓度的培养水稀释，以稀释抗原液供染色使用。
（3）添加染料：将配好的抗原液加入染料中，进行充分混合，以便使染色完全结合。
（4）染色：用混合液将细菌培养物染色，将细菌培养物采用不同的抗原，从而得
到不同的染色结果。
（5）分析：分析含有抗原的细菌抗体的染色图谱，并结合伴生抗原进行比较分析，辨别它们中耳变型装配度信息。
（6）记录：根据分析结果对培养物中细胞特性进行归类，将具体染色结果以记录
形式保存下来。
三、优点
革兰氏染色原理是一种速度快、简单、准确的技术，可用来测定各种细菌的属种，能够实现自动化的生物学分类，多用于细菌的鉴定性检验。
它精确地提取细菌的抗
原凝集特性，减少决策的不确定性，可以更快更准确地识别细菌属种，是鉴定细菌的最有效方法之一。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1、涂片固定。
2、草酸铵结晶紫染1分钟。
3、自来水冲洗。
4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5、水洗，用吸水纸吸去水分。
6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7、蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
染色后，革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
细菌分类：
革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、
链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌
革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫
拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
革兰氏染色步骤和原理
革兰氏染色步骤和原理革兰氏染色是微生物检测和分类中最常用的染色方法之一、它是由丹麦细菌学家洛尔德·克里斯廷·革兰于1884年发明的。
革兰氏染色通过染色的方式将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，从而有助于快速诊断和鉴定细菌。
1.取一块无菌玻璃片，将其浸泡在80%酒精中，用火鉴或酒精灯将其加热烘干。
3.用无菌棉签取适量菌液，涂抹在玻璃片上，并尽量保持均匀。
4.用火鉴或酒精灯加热玻璃片，使细菌在玻璃片上固定。
5.将固定的玻璃片浸泡在革兰碘液中，浸泡2分钟，使细菌固定。
6.将玻璃片从革兰碘液中取出，用蒸馏水冲洗干净。
7.将玻璃片放在洗涤盘中，滴入革兰染色剂，染色剂液体覆盖玻璃片。
8.把玻璃片放在盛有革兰染色剂的洗涤盘上，静置30秒钟。
9.将玻璃片从革兰染色剂中取出，用蒸馏水冲洗干净。
10.用酒精清洗涤盘中的染色剂，直到洗涤盘中的染色剂变为浅紫色。
11.用蒸馏水冲洗玻璃片，直到从玻璃片上冲洗下的清水不在有颜色。
12.用滴状水用于玻璃片上，除去上面的残余水分。
13.用显微镜观察玻璃片上的细菌，根据染色后细菌的颜色和形状，判断细菌是否革兰阳性或革兰阴性。
革兰阳性菌的细胞壁主要由多层厚厚的胞壁肽聚糖复合物组成，细胞壁对革兰染色剂有高度的亲和力，因此在染色后能保持染色剂的颜色，呈现紫色或深紫色。
革兰阴性菌的细胞壁则相对较薄，同时细胞壁外还有一层脂质结构，染色剂难以渗透进入细胞壁内部，因此在酒精处理过程中，会溶解掉染色剂，导致细胞失去染色，最后用对比性染色（如用红色染料）重新染色，呈现红色。
通过上述步骤和原理，我们可以将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类，辅助进行细菌鉴定和分类。
革兰氏染色的速度快、操作简单，因此在临床医学和实验室中得到广泛应用。
革兰氏染色试验步骤
革兰氏染色试验步骤所需试剂和设备：1.菲尔水2.结晶紫3. Lugol液4.酒精5.活菌片6.显微镜7.显微制片玻片8.火焰消毒器实验步骤：1.取一枚无菌的显微制片玻片，并用菲尔水清洗干净，以保证玻片无污染。
2.取一滴无菌的水滴在玻片上，将一枚均匀悬浮的细菌样品加入水滴中。
细菌样品可以是培养物中的细菌液体培养物，也可以是细菌单克隆的菌落。
3.用火焰消毒器将显微镜取出并消毒。
将显微镜调整为100倍放大倍数，并将显微镜使用菲尔水沾湿。
4.用火焰消毒器将显微镜片摆放在火焰上加热，待其冷却后再用纸巾擦拭干净。
确保显微镜片无污染。
5.用取有活菌片的设备，在细菌悬液上取片，使细菌均匀分布于显微片的表面上。
待片上的细菌液体干燥后，将片置于火焰中加热数秒，以固定细菌在片上。
6.将固定后的细菌片依次按如下顺序进行染色:用菲尔水冲洗干净玻片上的细菌，倒入1-2滴的结晶紫液，静置1分钟。
7.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下结晶紫。
8. 倒入1-2滴的Lugol液，静置1分钟。
9. 用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下Lugol液。
10.迅速地将细菌片倒入酒精中，进行脱色。
脱色的时间应控制在10-20秒之间，直到从细菌片上冲洗下少量酒精。
11.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下酒精。
12.将细菌片放在火焰上加热数秒，使其干燥。
13.将细菌片挂在显微镜上，通过100倍的放大倍数观察细菌的形态和染色性质。
在革兰氏染色中，革兰氏阳性细菌呈紫色或紫黑色，而革兰氏阴性细菌呈红色或粉红色。
观察细菌形态和染色性质可以帮助确定细菌的分类。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
革兰氏染色法的步骤包含涂片、干燥、固定、初染、水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥观察共11步，应注意把握涂片的薄厚、加热温度，脱色时间及各染液质量。
1.涂片：在灭菌后的载玻片中央滴一滴待检样品，用烧红冷却后的接种环将液体铺匀。
2.干燥：载玻片置于酒精灯上加热至水分蒸发。
3.固定：载玻片在酒精灯火焰上快速过2至3次，用2至3秒后待冷却。
4.初染：滴加1至2滴草酸氨结晶紫染液，染色时间约一分钟。
5.水洗：用小水流冲洗载玻片，冲洗至水呈无色。
6.媒染：滴适量革兰氏染液，染色时间约一分钟。
7.水洗：同步骤5。
8.脱色：在载玻片上滴加95％乙醇，至流下乙醇不呈紫色，大约用时半分钟后水洗。
9.复染：滴加1至2滴沙黄染液，染色时间约一分钟。
10.水洗：同步骤5。
11.干燥、观察：待标本片干燥后观察，紫色为革兰氏阳性菌，红色为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色原理的主要步骤
革兰氏染色原理的主要步骤革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，用于区分细菌是否为革兰氏阳性或革兰氏阴性。
革兰氏染色的主要步骤包括悬浮细菌、热固定、染色和洗涤。
以下将详细介绍每个步骤的原理及操作过程。
1. 悬浮细菌首先，将待染色的细菌悬浮在一滴水中，然后涂抹在载玻片上，形成细菌涂片。
在这一步骤中，水可以使细菌在载玻片上均匀分布，便于后续的染色和观察。
2. 热固定将涂片置于火焰上进行热固定，使细菌固定在载玻片上。
热固定的目的是杀死细菌、定着细菌在载玻片上，并使细菌细胞的结构更易于染色液的穿透。
3. 染色革兰氏染色的染色液一般包括紫晶染液、碘液、脱色剂和粉红色染液。
首先，将紫晶染液滴在涂片表面，静置一段时间后，用碘液固定染色。
然后使用脱色剂将多余的染色去除。
最后，用粉红色染液染色。
在这一步骤中，革兰氏阳性细菌会在第一次染色后呈现紫色，而革兰氏阴性细菌则在最后一步染色后呈现粉红色。
4. 洗涤最后，用水轻轻冲洗载玻片，使多余的染色剂和脱色剂去除干净。
然后晾干涂片，即可进行观察。
革兰氏染色的主要原理是根据细菌细胞壁的化学成分差异，革兰氏阳性细菌的细胞壁富含乙醇胺胶原蛋白及束缚力多糖，而革兰氏阴性细菌的细胞壁则富含脂多糖。
其中，乙醇胺胶原蛋白和束缚力多糖具有亲和力，可以吸附紫色的染色剂，使革兰氏阳性细菌呈现紫色；而脂多糖则具有亲和力，可以吸附粉红色的染色剂，使革兰氏阴性细菌呈现粉红色。
革兰氏染色的用途非常广泛，不仅可以帮助区分细菌的类型，还可以对细菌的形态与结构特点进行观察。
通过革兰氏染色，可以快速、简便地鉴别和分类细菌，有助于对感染性疾病的诊断和治疗。
因此，革兰氏染色在临床医学、生物学研究以及食品和水质检测等领域具有重要的应用价值。
总之，革兰氏染色是一种简单易行、快速有效的细菌染色方法，通过染色剂对细菌细胞壁成分的选择性亲和性染色，帮助鉴别革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。
掌握革兰氏染色的原理及操作技巧，对于细菌学研究和临床诊断具有重要的意义。
革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色一．实验流程：1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置)。
涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌,等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基:先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、固定:让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）.5、染色:将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、脱色：吸去残留水，连续滴加95％乙醇脱色20—30s至流出液无紫色，立即水洗。
9、复染:滴加蕃红复染3—5min，水洗.至此,革兰氏染色结束。
二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
备注：1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等)、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。
2.革兰氏阴性菌:埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等)、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
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革兰氏染色法
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）蒸馏水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。
干燥，镜检。
扩展资料
革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）：大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，可以选择青霉素族，头孢曲松钠等。
革兰氏阴性菌，大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。
而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感，可以选择氟喹诺酮类药物如诺氟沙星，左氧氟沙星等，也可以选择大环内酯类比如克拉霉素、罗红霉素等。
所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。