星点设计-响应面法优化近江牡蛎粗多糖提取工艺

。试
料液 比（： ） ｇｍＬ 图２ 提取料液比对样 品多糖得率的影响
一 醑 葵 咯婪 邑
Ｏ ９ ８ ７ ６ ５ ４ ３ ２ １ ０
２ ２ ３ 水浴温度对样 品多糖得率的影 响 固定提取次数 、 ．． 料 液 比、 提取时间等因素 ， 研究水浴温度对样品多糖 提取得率 的 影响， 结果见 图 ３ 。表明随着水浴温度的升高样 品多糖溶 出量 增加 ， ８ ９ 在 Ｏ一 ｏ℃间趋于稳定 ， ９ １０ｏ 在 ０— ０ Ｃ间有所下降。考
匀， 迅速加入浓硫酸 １ｍ ， 摇后室温放 置 ５ｍｎ 沸水浴 １ Ｌ振 ｉ， ５ ｍｎ 取 出后置于冰水中冷却 ２ ｉ， ｉ， ０ｍｎ 加水至 １ Ｌ刻度摇匀 ， ０ｍ 以加入标准液 ００ｍＬ管作 为空 白， 取 ２ｍ ． 各 Ｌ用 紫外 可见分 光光度 计测定 其在 ４ ０ｎ ９ ｍ处 吸光值 ， 以吸光值 Ｄ对浓 度 ｃ
作者简介 ： 张 硕（ ９ ０ ） 男 ， １９ 一 ， 山东济南 人 ， 本科 ， 事药用 动植物 从 功能食 品开发利用及新药研究 。Ｅ—ｍａ ：ｓ３ ０ ｏ ｉ ｃｒ。 ｉ ｚ７ ５ ＠ｈｔ ｌ ｏ ｌ ｍａ ． ｎ
摇匀得粗多糖 浓度为 １０ ／ Ｌ的供 试液 。精 确移取供 试 ０ ｇ ｍ 液 １ｍ 稀释至 ２ｍ ， （ ） Ｌ， Ｌ 按 ２ 方法测定吸光值（ 平行 ５组） 对 ，
法 。本研究探讨对 近江 牡蛎可 溶性 多糖 提取过 程 中的显 著影响因素 ， 采用苯酚 一硫酸 比色法并经 星点设计试验 最终 确定 了牡蛎 多糖 的最优提取工艺 ， 以期获得高得 率、 稳定性强 的牡蛎多糖 ， 为牡蛎多糖有效 开发利用提供理论 基础。
１ 材 料与 方 法
试管中 ， 各加水补至 ４ ０ｍ ， ． Ｌ 分别加入 ５ ％苯 酚溶液 １ｍ 摇 Ｌ，
供试 液稀 释倍数 ， ｍ为牡蛎粗多糖质 量 。
一
２ ４一 ６
江苏农业科学
２１ ０ ２年第 ４ ０卷第 ７期 温度 、 提取 时间等 因素 ， 分多次提取 ， 结果表 明提取次数 以 １
次样品多糖得率 占总多糖得 率的 ９ ． ０ ， ２ ６ ％ 而第 ２ ３次 提取 、 仅 占４ ４ ％ 、 ．７
７ ０目筛 ， 得牡蛎 干粉
。加入 ０ ２ｍ ｌＬｐ ． ｏ Ｈ值 ６ ８磷酸缓 ／ ．
冲液 （ 标准见 Ｃ Ｐ ０ ０ ， ｈ ２ １ ） 离心 取上 清液 ， 加入 ３倍体 积 ８ ％ ０ 乙醇过夜 ， 过滤取沉淀 即为牡蛎粗多糖 ， 置于干燥 器内备用 。
１３ ２ 牡 蛎 粗 多 糖 含 量 的测 定 ．． 使 用 苯 酚 一硫 酸 比 色 法 测
抗肿瘤和增强免疫功能 ， 与对 蛋 白质 和核 酸的研究 还有 但
很 大 的 差 距 ， 糖 的 天 然 含 量 低 ， 离 提 取 的质 控 方 法 不 完 多 分 善 。 目前 广 泛 应 用 的 多 糖 含 量 测 定 方 法 是 苯 酚 一硫 酸 比色
定牡蛎多糖含量 。（ ） １ 苯酚溶液 的配制 。称取苯 酚 ２０ｇ 加 ０ ， 入 ０ ２ｇ ． 铝粉和 ０ １ｇ ． 碳酸氢钠 ， 置于 圆底烧瓶中常压加热蒸 馏， 收集 １０℃ 馏分 。精 确称 取 该馏 分 １． ８ ２ ５ ｇ定 容 至 ２ ０ ５ ｍ ， Ｌ 摇匀 即得 ５ ％苯 酚溶 液 ， 置 棕色 瓶 放入 冰箱 中备用 。 转 （） ２ 葡萄糖 标准 曲线 的绘 制。精确 称取 １５ ｏ ０ Ｃ干燥 至恒 重 （ 减失重量 ≤０ ５ ） ． ％ 的葡萄糖 ５ｍ ， ｇ 加水定 容至２ ０ｍ ， ５ Ｌ 摇匀 得 ２ ｇ ｍ Ｏ ／ Ｌ的葡萄糖标 准液 ， 精确移取 标准液 ０ ０ ０ ４ ０ ．．． 、． ８ １２ １６ ２ ０ ２ ４ ２ ８３ ２ ３ ６ｍ ， 、． 、 ． 、． 、． 、． 、 ． 、 ． Ｌ 分别 置于 １ Ｌ刻度 ０ｍ
（ 杭州汇尔仪器设备有 限公司生产 ） ８ ２恒温 磁力搅拌 器 ，５— （ 江苏省金坛市环宇科学仪器 厂生产 ） Ｒ ， Ｅ一５ Ａ ２ Ａ旋 转蒸 发
仪（ 海亚荣生化仪器厂生产 ） Ｄ 上 ， Ｋ一８ Ｄ电热 恒温水槽 （ Ａ 上 海精密仪器仪表有限公 司生产 ） ７ ２ ，５ Ｓ紫外可见 分光光度 计 （ 上海棱光技术 有 限公 司生产 ） ７ ３ Ｃ扫描分 光光 度计 （ ，２ Ｐ 上
组织捣碎机匀浆 ， 用足量等量的丙酮、 无水乙醇分别浸泡 １ ２ｈ
和 ４ｈ 滤除有机相后置于干燥箱 中 ６ ， ０℃烘 干 ２ｈ 粉 碎后 过 ，
物质成分。我国牡蛎产品的研发往往 只关注牡蛎 中牛磺酸的 生理功能及 营养价值或牡蛎 的全营养 功能 ， 略了其他 成分 忽
的独特功能 ， 目前国 内外 已有对牡 蛎其他成分 的生理功 能进 行研究的报道 。多糖是牡 蛎 中主要 的有效成分 ， 对多糖 和多 糖类的研究 已取得 了较大 的进展 ， 王俊等发 现牡蛎多糖 具有
海 现科 仪 器 有 限公 司 生 产 ） 。
１ ３ 试 验 方 法 ．
类 之一。我 国古 代 《 农本 草经》《 医别 录》 本 草纲 目》 神 名 《 《 海药本草》 等医疗史籍中已经有对于牡蛎药用价值 的记载 。
中医理论认 为 ， 蛎 肉味甘 、 ， 牡 成 微寒 ， 性平 ， 肝 、 。 。 归 胆、 肾经 牡蛎壳味咸 、 ， 涩 性凉 ， 有镇静 、 阴、 阳、 敛 潜 止汗 、 涩精 、 化痰 、
定牡蛎 总糖含量 （ 平行 ５组） 比较料液 比对牡蛎多糖提取得 ，
２ ９ ％ 。考虑实际操作 中的方便及 节约成本 ， ．３ 牡蛎多 糖提取
次 数 以 １次为 宜 。
对样 品多糖 得 率 的影 响。准 确 称取 牡 蛎 干粉 ５ ｇ 分别 按 ２ ２ ２ 料液 比对样品多糖得率 的影响 固定提取次数、 ， ．． 水浴
江苏农业科学
张
２１ ０２年第 ４ ０卷第 ７期
－ ６ － － — ３・ —２ — —
硕， 张崇禧．星点设计 一响应面法优化近江牡蛎粗 多糖提取工艺［ ］ Ｊ ．江苏农业科学，０ ２，０ ７ ：６ ２ １ ４ （ ）２ ３—２６ ６
星点设计 一响应面法优 化近江牡蛎粗 多糖提取工艺
张 硕 ，张 崇禧
１２ 试 验 仪 器 ．
Ｄ １高速组织捣碎机 （ Ｓ一 上海标本模 型厂生产 ） 精 密天 ，
（ 、 值根据实验确定） 。（ ） 品总糖含量 的测定 。精确 ｏｂ ３样 称量试验制得 的牡蛎粗多糖 １ ｇ 用蒸馏水定容至 １０ｍＬ ０ｍ ， ０ ，
收稿 Ｅ期 ： １ — ３ ２ ｔ ２ ２ ０ —８ ０
最佳 。
率 的影 响。（ ） ３ 水浴温度对样 品多糖 得率的影响 。准确称取
牡 蛎干粉 ５ｇ按 １ｇ： ０ｍ ， ８ Ｌ的料液 比， 分别在 ５ 、ｏ７ 、０ ０６ 、Ｏ ８ 、
９ 、０ ０ １０℃下水浴 ３ｈ 离心取 上清液 ， “ ． ． ” ３ 方 法 ， 按 １ ３ １ 中（ ）
１ｇ： ０ｍ 水浴温度 ８ ８ Ｌ， １℃ ， 提取时 间 ２ ９ｈ 实 际多糖提取率为 ８ ４ ％ 。该方法优于现有的提取方法 ， ． ， ．５ 得到 的工艺条
件具有实 际应用价值 。 关键词 ：近江牡 蛎 ； 多糖提取率 ；星点设计 ； 苯酚 一硫酸 比色法
中图分类号 ：￥８ ． ； ９ １７ ９ ６ ２ Ｒ ３ ．７ 文献标志码 ： Ａ 文章编 号 ： ０ １ ２—１０ （０ ２ ０ ０ ６ ０ ３ ２ ２ １ ）７— ２ ３一ｏ ３
照标准曲线按下列公式换算 得出样 品的多糖含量 ： 多糖含量
＝
通信作者 ： 张崇禧 ， 博士 ， 主要研究 方向为药用 动植物功 能食 品开发
利用及新药研究。Ｅ—ｍ ｉ ＺＸ １ ＠１ ６ ｃｒ。 ａ ：Ｃ一 １ ２ ．ｏ ｌ ｎ
［ Ｃ・ ／ （ Ｄ） ｍ］×１０ 。式 中 ： ０％ Ｃ为供试 液多 糖浓度 ， Ｄ为
温度 、 提取 时间等因素 ， 研究 料液 比对 多糖 提取得率的影响 ，
结果见图 ２ 。表明随着 提取液体积不 断增加 ， 品多糖 溶 出 样 量也不断增加 ， 出速率在料液 比为 １ｇ： ６ ７ ）ｍ 溶 （ ０— ０ Ｌ时达
到最大 ， 当料液 比增至 １ ８ Ｌ后溶 出量趋于平缓 。考虑 ｇ： ０ｍ 到试验成本以及样品浓缩的方便 ， 选定料 液 比为 １ｇ： ０ｍ ８ Ｌ
素试验结果 ， 选取料液 比、 水浴温度 、 提取时 间 ３个因素 ， 根据 Ｂ ｘ ｅｈ ｋｎ的中心组 合试验设 计原 理 ， ｏ —Ｂ ｎ ｎ ｅ 采用 响应面法 在 三因素三水平上对 牡蛎粗 多糖提 取工艺 进行 优化
验因素和水平见表 １ 。
表 Ｉ 响 应 面 试 验 因素 及 水 平
１３ ３ 牡蛎 多糖提取得 率的单 因素试验 ．．
（） １ 提取次数对
样 品多糖得率的影响。准确称取牡蛎干粉 ５ｇ按 １ｇ： ０ｍ ， ８ Ｌ
的料液 比， ８ 在 ０℃下水浴 ， 分别提取 １２ ３次 ， 、． 每次 ３ｈ 离心 ，
取上清液 ， “ ． ． ” （ ） 按 １３ １ 中 ３ 方法测 定牡蛎 总糖 含量 （ 平行 ５ 组 ） 比较提 比 １： ０ １： ０ １： ０ １： ０ １： ０ １： ０ （ ｍ ） ５ 、 ６ 、 ７ 、 ８ 、 ９ 、 １０ ｇ： Ｌ 的料液 比， 在８ Ｏ℃下水浴 ３ｈ 离心取上清液 ， “ ． ． ” ３ 方法测 ， 按 １３ １ 中（ ）
测 定牡蛎 总糖含量（ 平行 ５组） 比较 水浴 温度对牡蛎多糖提 ，
取得率 的影 响。（ ） ４ 提取时间对样品多糖得率 的影 响。准确 称取牡蛎干粉 ５ｇ按 １： ｏ ｇ： Ｌ 的料 液 比， ８ ， ８（ ｍ ） 在 ０℃下分
别水浴 ０ ５ １ ２３ ４ｈ 离心取上清液 ， １３ １ 中（ ） ． 、、 ． 、 ， 按“ ． ． ” ３ 方法 测定牡蛎总糖含量（ 平行 ５组） 比较 提取时间对牡蛎 多糖 提 ， 取得率的影 响。 １３ ４ 响应 面法对牡蛎多糖 提取条件进行优 化 ．． 综合 单因
（ 山东大学威海分校海洋学 院， 山东威海 ２４ ０ ） ６２ ９
摘要 ： 探究并优 化近江牡蛎粗 多糖 提取工艺 ， 在单 因素试验 的基础上 ， 采用苯酚 一硫酸比色法并经 星点设计 一响 应面法设计试 验 最 终 确定 了牡 蛎 多 糖 的最 优 提 取 工 艺 。回 归分 析 和试 验 结 果 表 明 ， 佳 提 取 工 艺 为 ： 液 比 最 料
近江牡蛎 （ ｒｓ ｓｅ ｉ ｌｒ ） 是莺蛤 目牡蛎科 巨牡蛎 Ｃａｓ ｔａｒ ｕａｉ ， ｏｒ ｖ ｓ 属的 １种 ， 要 分 布于 中 国大陆 ， 主 常栖 息在 潮 间带 至 潮 下 带… 。牡蛎是世 界性 的贝类 ， 也是 我 国著名 四大养殖经 济贝
平（ 上海楚 柏 实验 室设备 有 限公 司生产 ） 电热 鼓风 干燥 箱 ，
软坚等功效 ， 能治疗 惊痫 、 眩晕、 盗汗 、 自汗 、 遗精 、 淋浊 、 崩漏 、
带下等症 Ｊ 。牡蛎 味道 鲜 美 ， 营养 丰 富。牡蛎 肉含有 蛋 白 质、 多肽 、 氨基酸 、 多糖 、 多不饱和脂肪酸 、 维生素等 多种 活性
１３ １ 牡蛎粗多糖的制备 ．．
取新鲜近 江牡蛎全脏器 用高速
绘制 标 准 曲线 ， 行 线 性 回归 ， 标 准 曲线 方 程 ： 进 得 Ｄ＝ｏ・ Ｃ＋ｂ
１ １ 材 料 与 试 剂 ．
新鲜牡蛎 ， 购于威海市水 产批发市场 。试剂包括丙酮 、 无 水 乙醇 、 磷酸氢二钠 、 磷酸二氢钠、 浓硫酸 、 苯酚、 铝粉 、 碳酸氢
钠、 标准葡聚糖 、 浓硫酸 、 氢氧化钠 、 盐酸 ， 分析纯。