2018-蛋白质化学2
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3 茚三酮反应
三、肽键与多肽链
(一)成肽反应
什么时候发生?
几个小名词
• 肽键
HOHH
•肽
H2N C C N C COOH
• 二肽
R
R
• 氨基酸残基
• N-末端
• C-末端
(二) 生物活性肽
谷胱甘肽 催产素(分娩,泌乳,信任,亲密)-自闭症治疗? 加压素 抗利尿激素 胰高血糖素 缓激肽 促甲状腺激素释放因子 胃泌素 血管紧张素II P物质 脑啡肽
茚三酮反应 (蓝紫色) 双缩脲反应(紫红色络合物) 酚试剂反应: 磷钼酸-磷钨酸(蓝色)
亲和层析
Western Blot原理
ELISA法检测微量抗原
蛋白质组学-proteomics
一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质
(1)蛋白质表达谱 (2)蛋白质翻译后修饰 (3)细胞定位 (4)蛋白质相互作用 (5)蛋白质生物信息学研究 (6)蛋白质结构解析
O2
协同效应: 蛋白质的一个亚基与其配体结合后,影响另一个亚 基与配体结合能力。
抑制与氧结合(1) BPG( 2,3-二磷酸甘油酸)促进成T构象,氧亲和力低
有BPG左移
无BPG右移
BPG与胎儿HbF结合力弱,致HbF与氧亲和力高, 利于氧从母亲外周血向胎儿外周血转运.
母体与胎儿
血液贮存
•贮存时BPG丢失。 •因此血液贮存时加葡萄糖、丙酮酸、二羟丙 酮,腺嘌呤等。
假如不同加压素受体基因型,表达水平
会不同。是否要知道某男生基因型?
------Nature Neuroscience, 2013; doi:10.1038/nn.3420
不同国家的相互信任水平
Zak, Scientific American, 2008,306(6), 88
蛋白质糖基化-不可逆
糖尿病患者:糖化血红蛋白沉积 于小动脉管壁,引起微血管病 变.
小结:结构是功能的基础
蛋白质一级结构 决定
一级结构是空间构象基础,关键氨 基酸变化可致空间构象、功能改变。
蛋白质一级结构不是决定空间构象 的唯一因素。
蛋白质空间构象
决定 蛋白质功能
牛核糖核酸酶实验 镰刀形红细胞贫血症 血红蛋白的变构效应 朊病毒
第五节 理化性质和分离纯化
一、两性电离及分离方法
• 血红蛋白串联,形成 不溶纤维束,使细胞 扭成镰刀形。
突变携带者对疟疾有抗性
疟原虫感染后,pH降低,HbS 凝集,细胞变形,在脾脏被吞 噬,利于清除感染细胞。
分子病
基因突变引起蛋白质发生变异导致疾病。
白虎:神兽还是怪物
SLC45A2的突变(A477V),丙氨酸变为缬氨酸。影响黄和红色素 的合成,对黑色影响弱,未影响其它功能。Cell,2013,23:1031
水烟更高。 3. 汽车废气、炭炉自杀,或火灾引起CO急性中
毒。 4. 20%-50%血红素与CO结合,有头痛、头晕、
恶心、晕厥;超过70%致命。
三、蛋白质修饰可调节功能
酶的共价修饰 组蛋白的修饰
2. 组蛋白修饰
组蛋白带正电荷,与带负电的DNA结合,遮蔽DNA,妨碍转录。
去乙酰化
乙酰化
73
乙酰化: 负电荷增加, 与DNA排斥增加, 结合疏松, 利于转录
在某一pH时,氨基酸呈电中性。此pH为该氨基酸等电点。
R CH COOH
NH2
R CH COOH +OH-
NH3+
+H+
K1
pH<pI
R CH COO- +OH- R CH COO-
NH3+
+H+
NH2
K2
pH=pI
pH>pI
阳离子
氨基酸的兼性离子
阴离子
2 紫外吸收性质 酪氨酸、色氨酸在280nm最大吸收峰
镰刀形红细胞贫血病
HbA β 肽 链
N-val ·his ·leu ·thr ·pro ·glu ·glu ·····C(146)
HbS β 肽链
N-val ·his ·leu ·thr ·pro ·val ·glu ·····C(146)
谷A(极性)
缬A(非极性)
• 非氧合β链有疏水口袋
• 突变产生缬氨酸与口 袋相配。
抑制与氧结合(2)
代谢活跃(pH和CO2)-促进O2释放,给组织供氧 (Bohr效应)
血红蛋白变构在氧从肺运到组织时的作用
肺部高氧利于形成R结构,BPG一般不结合;在组织,氧浓度降 低及玻尔效应利于形成T结构,而BPG利于稳定T结构。
CO中毒
1. CO与血红蛋白亲和力高,但可逆。 2. 每天1包烟,使CO结合血红蛋白提高2.5%,
1960年 Peter Nowell发现慢性骨髓性白血 病(CML)患者,22号染色体短。 1973年,Janet Rowley发现9号与22号染色体易位。
1983年,发现基因融合。9号上C-abl移至22号断 裂点区(bcr),形成bcr/abl融合基因,编码P210, 增强酪氨酸激酶活性,改变了多种蛋白酪氨酸磷 酸化水平,扰乱信号途径,抑制凋亡。
第二节 蛋白质的分子结构
一、一级结构
氨基酸的排列顺序,及二硫键的位置。 化学键: 肽键(主要); 二硫键(次要)
牛胰岛素一级结构
肽链在空间中如何?
为何会折叠? 非共价键相互作用
二、二级结构
肽平面
一段肽链的局部结构,即主链原子的相对位置。不涉及侧链 。
1. -螺旋/-helix
2. -折叠
4.亨丁顿舞蹈病
hd基因上(CAG)重复数增多,谷氨酰胺增多,不 易溶,损坏脑细胞,特别与肌肉控制有关的细胞, 导致神经系统退化,动作失调,颤搐,能发展成 痴呆,甚至死亡。
2. 构象变化调节功能—血红蛋白
氧促进与氧的结合
Hb:“S”形曲线
血红蛋白结合氧, 空间结构改变影响结合
Hb结合O2的别构效应
蛋白质有布朗运动不会沉降 超速离心可产生强大离心力,使蛋白质克服布朗运动沉降
超速离心
4. 分子筛(凝胶过滤)
三 沉淀(盐析,重金属,酸碱,有机溶剂)
水化膜
+++
酸
+
+碱
++
带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质
碱
--
-
-
酸
- --
-
带负电荷的蛋白质
脱水作用
++ +
+
+
+ ++
带正电荷的蛋白质
脱水作用
脱水作用
--
碱
酸-
- -
-- -
不稳定的蛋白质颗粒
带负电荷的蛋白质
四 变性
变性:某些因素作用下,其天然构象破坏 ,理化性质改变,生物学活性丧失。
蛋 尿素,
白 β-巯基
质 乙醇 复性:变性蛋白质恢复天然构象,恢复
变
生物学活性。
性
蛋白质复性
去除尿素, β巯基乙醇
卷发的生化原理
五 紫外吸收: 280nm 六 呈色反应:
2001年格列卫上市,CML 5年生存率从30%提高到89%。
https://en.wikipedia.org/wiki/Bcr-Abl_tyrosine-kinase_inhibitor
蛋白质
由 许 多 氨 基 酸 (amino acids) 通 过 肽 键 (peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。
交配影响基因表达
背景: 草原田鼠交配后形成一夫一妻,与催产 素、加压素、多巴胺和受体结合有关.
• 交配:使催产素、加压素受体基因组蛋白乙酰化, 表达上调,促进伙伴关系形成。
• 促进乙酰化药物:使田鼠没有交配也形成伙伴偏 好。
讨论:
金风玉露一相逢,便胜却人间无数! 用此类药物,促进家庭和谐? “爱情药水”--- 催产素香水
同向排列
反向排列
几个蛋白质包含的二级结构
肌红蛋白
细菌孔蛋白
脂肪酶
酪氨酸激酶部分
蚕丝
胶原蛋白
5. 模体(motif) /超二级结构
2-3个二级结构组合, 与功能有关.
螺旋-环-螺旋 发卡
基元 希腊钥匙
结合DNA的模体
6. 结构域(domain)
大蛋白质可分割成几个球状区域,分别有功能。
三、三级结构
酸性
HOHH
+H32N C C N C COOH
R
R
HOHH
PI(等电点)+H32N C C N C COO-
R
R
碱性
HOHH
H2N C C N C COO-
R
R
1. 等电点沉淀法
水化膜
+++
酸
+
+碱
++
带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质
碱
--
-
-
酸
- --
-
带负电荷的蛋白质
脱水作用
ຫໍສະໝຸດ Baidu
++ +
+
+
+ ++
二 空间结构改变与功能
1.蛋白质构象疾病:一级结构不变,构象改变,影 响功能,严重时致病。
1. 构象病可传染---朊病毒病
朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起神经退行性病变 。
富α-螺旋变成富β-折叠,水溶性变差,聚集形成淀粉状 纤维,沉淀在脑组织, 造成损伤
正常
异常
传染
朊病毒病
肽链中所有原子在三维空间的排布位置。
肌红蛋白
C端 N端
• 维持三级结构的化学键
二硫键
疏水作用 氢键 离子键 范德华力
四、四级结构
有蛋白质有>=2条肽链,叫亚基 (subunit)。经非共价键形 成的空间排布。
通常单亚基没有功能 氢键和离子键。
血红蛋白亚基间盐键
血红蛋白的一、二、三、四级结构
第一章 蛋白质的结构与功能
• 概述 • 组成 • 结构 • 结构与功能的关系 • 理化性质和分离纯化
功能
信号传递
第二节 分子组成
一、元素:
主要C、H、O、N和S, 少量P, Fe, Cu, Zn, Mn, I, … 。
N含量:16%
三聚氰胺
二、基本单位--氨基酸
(一)通式
COO-
CHRH3
双向电泳图
3.离子交换层析
二 高分子性质
1. 稳定的胶体溶液
水化膜
+++
酸
+
+碱
++
带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质
碱
--
-
-
酸
- --
-
带负电荷的蛋白质
2. 透析与超滤
人工肾
血液透析图
超滤(ultrafiltration)
待超滤的蛋白质溶液 磁力搅拌器
加压的氮气 超滤膜
3. 沉降与超速离心
第四节 结构与功能的关系
一 一级结构与功能 二 空间结构与功能 三 修饰可调节功能
第四节 蛋白质结构与功能的关系
一 一级结构与功能
(一)一级结构决定空间构象
牛核糖核酸酶
去除尿素、 β-巯基乙醇
天然状态, 有催化活性
尿素、 -破坏氢键 β-巯基乙醇 -破坏二硫键
非折叠状态,无活性
(二) 一级结构与分子病
人:库鲁病,脑软化病,克-雅病(CJD),变异
型CJD(人类疯牛病),致死性家族性失眠症。
动物:牛海绵状脑病(疯牛病),羊瘙痒症,貂
传染性脑病,猫海绵状脑病
1986-2014年,177英国人和55其它国人食用感染牛肉感染变异型CJD
2. 阿尔茨海默症
β-淀粉样蛋 白
3. 帕金森病
α突触核蛋白(α-synuclein)聚集于多巴胺神经元,形成路易 小体(Lewy bodies )
C +NH3
H
L-氨基酸的丙甘通氨氨式酸酸
(二)分类
1.非极性
2.极性不带电荷
3.碱性
• 含2个氨基;等电点高;在pH7.0时,碱性
4.酸性
• 含有2个羧基;等电点低;在pH7.0时,酸性
水分子及与离子间的结合
蛋白质和DNA中的氢键
物质的引入改变水分子间的氢键网
非极性和极性的分布
折叠的多肽链 水层 非极性 极性
(三) 特殊氨基酸 1. 编码
20种 + 硒半胱氨酸(UGA有义表达),吡咯赖氨酸(UAG有义表达)
2. 非编码
1. 游离:瓜氨酸,鸟氨酸,同型半胱氨酸、D-氨基酸等。 2. Pr中氨基酸的修饰:-OH, -CH3, -COCH3, -P, -COOH…..
(四)氨基酸理化性质
1 等电点 (isoelectric point, pI) :
带正电荷的蛋白质
脱水作用
脱水作用
--
碱
酸-
-
-
-- -
不稳定的蛋白质颗粒
带负电荷的蛋白质
2. 电泳 (electrophoresis)
带电粒子在电场中移动
不同的蛋白质电荷量不同,分子大小不同,速度也不同。
SDS-PAGE
等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)
利用pH梯度介质分离等电点不同的蛋白质。
三、肽键与多肽链
(一)成肽反应
什么时候发生?
几个小名词
• 肽键
HOHH
•肽
H2N C C N C COOH
• 二肽
R
R
• 氨基酸残基
• N-末端
• C-末端
(二) 生物活性肽
谷胱甘肽 催产素(分娩,泌乳,信任,亲密)-自闭症治疗? 加压素 抗利尿激素 胰高血糖素 缓激肽 促甲状腺激素释放因子 胃泌素 血管紧张素II P物质 脑啡肽
茚三酮反应 (蓝紫色) 双缩脲反应(紫红色络合物) 酚试剂反应: 磷钼酸-磷钨酸(蓝色)
亲和层析
Western Blot原理
ELISA法检测微量抗原
蛋白质组学-proteomics
一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质
(1)蛋白质表达谱 (2)蛋白质翻译后修饰 (3)细胞定位 (4)蛋白质相互作用 (5)蛋白质生物信息学研究 (6)蛋白质结构解析
O2
协同效应: 蛋白质的一个亚基与其配体结合后,影响另一个亚 基与配体结合能力。
抑制与氧结合(1) BPG( 2,3-二磷酸甘油酸)促进成T构象,氧亲和力低
有BPG左移
无BPG右移
BPG与胎儿HbF结合力弱,致HbF与氧亲和力高, 利于氧从母亲外周血向胎儿外周血转运.
母体与胎儿
血液贮存
•贮存时BPG丢失。 •因此血液贮存时加葡萄糖、丙酮酸、二羟丙 酮,腺嘌呤等。
假如不同加压素受体基因型,表达水平
会不同。是否要知道某男生基因型?
------Nature Neuroscience, 2013; doi:10.1038/nn.3420
不同国家的相互信任水平
Zak, Scientific American, 2008,306(6), 88
蛋白质糖基化-不可逆
糖尿病患者:糖化血红蛋白沉积 于小动脉管壁,引起微血管病 变.
小结:结构是功能的基础
蛋白质一级结构 决定
一级结构是空间构象基础,关键氨 基酸变化可致空间构象、功能改变。
蛋白质一级结构不是决定空间构象 的唯一因素。
蛋白质空间构象
决定 蛋白质功能
牛核糖核酸酶实验 镰刀形红细胞贫血症 血红蛋白的变构效应 朊病毒
第五节 理化性质和分离纯化
一、两性电离及分离方法
• 血红蛋白串联,形成 不溶纤维束,使细胞 扭成镰刀形。
突变携带者对疟疾有抗性
疟原虫感染后,pH降低,HbS 凝集,细胞变形,在脾脏被吞 噬,利于清除感染细胞。
分子病
基因突变引起蛋白质发生变异导致疾病。
白虎:神兽还是怪物
SLC45A2的突变(A477V),丙氨酸变为缬氨酸。影响黄和红色素 的合成,对黑色影响弱,未影响其它功能。Cell,2013,23:1031
水烟更高。 3. 汽车废气、炭炉自杀,或火灾引起CO急性中
毒。 4. 20%-50%血红素与CO结合,有头痛、头晕、
恶心、晕厥;超过70%致命。
三、蛋白质修饰可调节功能
酶的共价修饰 组蛋白的修饰
2. 组蛋白修饰
组蛋白带正电荷,与带负电的DNA结合,遮蔽DNA,妨碍转录。
去乙酰化
乙酰化
73
乙酰化: 负电荷增加, 与DNA排斥增加, 结合疏松, 利于转录
在某一pH时,氨基酸呈电中性。此pH为该氨基酸等电点。
R CH COOH
NH2
R CH COOH +OH-
NH3+
+H+
K1
pH<pI
R CH COO- +OH- R CH COO-
NH3+
+H+
NH2
K2
pH=pI
pH>pI
阳离子
氨基酸的兼性离子
阴离子
2 紫外吸收性质 酪氨酸、色氨酸在280nm最大吸收峰
镰刀形红细胞贫血病
HbA β 肽 链
N-val ·his ·leu ·thr ·pro ·glu ·glu ·····C(146)
HbS β 肽链
N-val ·his ·leu ·thr ·pro ·val ·glu ·····C(146)
谷A(极性)
缬A(非极性)
• 非氧合β链有疏水口袋
• 突变产生缬氨酸与口 袋相配。
抑制与氧结合(2)
代谢活跃(pH和CO2)-促进O2释放,给组织供氧 (Bohr效应)
血红蛋白变构在氧从肺运到组织时的作用
肺部高氧利于形成R结构,BPG一般不结合;在组织,氧浓度降 低及玻尔效应利于形成T结构,而BPG利于稳定T结构。
CO中毒
1. CO与血红蛋白亲和力高,但可逆。 2. 每天1包烟,使CO结合血红蛋白提高2.5%,
1960年 Peter Nowell发现慢性骨髓性白血 病(CML)患者,22号染色体短。 1973年,Janet Rowley发现9号与22号染色体易位。
1983年,发现基因融合。9号上C-abl移至22号断 裂点区(bcr),形成bcr/abl融合基因,编码P210, 增强酪氨酸激酶活性,改变了多种蛋白酪氨酸磷 酸化水平,扰乱信号途径,抑制凋亡。
第二节 蛋白质的分子结构
一、一级结构
氨基酸的排列顺序,及二硫键的位置。 化学键: 肽键(主要); 二硫键(次要)
牛胰岛素一级结构
肽链在空间中如何?
为何会折叠? 非共价键相互作用
二、二级结构
肽平面
一段肽链的局部结构,即主链原子的相对位置。不涉及侧链 。
1. -螺旋/-helix
2. -折叠
4.亨丁顿舞蹈病
hd基因上(CAG)重复数增多,谷氨酰胺增多,不 易溶,损坏脑细胞,特别与肌肉控制有关的细胞, 导致神经系统退化,动作失调,颤搐,能发展成 痴呆,甚至死亡。
2. 构象变化调节功能—血红蛋白
氧促进与氧的结合
Hb:“S”形曲线
血红蛋白结合氧, 空间结构改变影响结合
Hb结合O2的别构效应
蛋白质有布朗运动不会沉降 超速离心可产生强大离心力,使蛋白质克服布朗运动沉降
超速离心
4. 分子筛(凝胶过滤)
三 沉淀(盐析,重金属,酸碱,有机溶剂)
水化膜
+++
酸
+
+碱
++
带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质
碱
--
-
-
酸
- --
-
带负电荷的蛋白质
脱水作用
++ +
+
+
+ ++
带正电荷的蛋白质
脱水作用
脱水作用
--
碱
酸-
- -
-- -
不稳定的蛋白质颗粒
带负电荷的蛋白质
四 变性
变性:某些因素作用下,其天然构象破坏 ,理化性质改变,生物学活性丧失。
蛋 尿素,
白 β-巯基
质 乙醇 复性:变性蛋白质恢复天然构象,恢复
变
生物学活性。
性
蛋白质复性
去除尿素, β巯基乙醇
卷发的生化原理
五 紫外吸收: 280nm 六 呈色反应:
2001年格列卫上市,CML 5年生存率从30%提高到89%。
https://en.wikipedia.org/wiki/Bcr-Abl_tyrosine-kinase_inhibitor
蛋白质
由 许 多 氨 基 酸 (amino acids) 通 过 肽 键 (peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。
交配影响基因表达
背景: 草原田鼠交配后形成一夫一妻,与催产 素、加压素、多巴胺和受体结合有关.
• 交配:使催产素、加压素受体基因组蛋白乙酰化, 表达上调,促进伙伴关系形成。
• 促进乙酰化药物:使田鼠没有交配也形成伙伴偏 好。
讨论:
金风玉露一相逢,便胜却人间无数! 用此类药物,促进家庭和谐? “爱情药水”--- 催产素香水
同向排列
反向排列
几个蛋白质包含的二级结构
肌红蛋白
细菌孔蛋白
脂肪酶
酪氨酸激酶部分
蚕丝
胶原蛋白
5. 模体(motif) /超二级结构
2-3个二级结构组合, 与功能有关.
螺旋-环-螺旋 发卡
基元 希腊钥匙
结合DNA的模体
6. 结构域(domain)
大蛋白质可分割成几个球状区域,分别有功能。
三、三级结构
酸性
HOHH
+H32N C C N C COOH
R
R
HOHH
PI(等电点)+H32N C C N C COO-
R
R
碱性
HOHH
H2N C C N C COO-
R
R
1. 等电点沉淀法
水化膜
+++
酸
+
+碱
++
带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质
碱
--
-
-
酸
- --
-
带负电荷的蛋白质
脱水作用
ຫໍສະໝຸດ Baidu
++ +
+
+
+ ++
二 空间结构改变与功能
1.蛋白质构象疾病:一级结构不变,构象改变,影 响功能,严重时致病。
1. 构象病可传染---朊病毒病
朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起神经退行性病变 。
富α-螺旋变成富β-折叠,水溶性变差,聚集形成淀粉状 纤维,沉淀在脑组织, 造成损伤
正常
异常
传染
朊病毒病
肽链中所有原子在三维空间的排布位置。
肌红蛋白
C端 N端
• 维持三级结构的化学键
二硫键
疏水作用 氢键 离子键 范德华力
四、四级结构
有蛋白质有>=2条肽链,叫亚基 (subunit)。经非共价键形 成的空间排布。
通常单亚基没有功能 氢键和离子键。
血红蛋白亚基间盐键
血红蛋白的一、二、三、四级结构
第一章 蛋白质的结构与功能
• 概述 • 组成 • 结构 • 结构与功能的关系 • 理化性质和分离纯化
功能
信号传递
第二节 分子组成
一、元素:
主要C、H、O、N和S, 少量P, Fe, Cu, Zn, Mn, I, … 。
N含量:16%
三聚氰胺
二、基本单位--氨基酸
(一)通式
COO-
CHRH3
双向电泳图
3.离子交换层析
二 高分子性质
1. 稳定的胶体溶液
水化膜
+++
酸
+
+碱
++
带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质
碱
--
-
-
酸
- --
-
带负电荷的蛋白质
2. 透析与超滤
人工肾
血液透析图
超滤(ultrafiltration)
待超滤的蛋白质溶液 磁力搅拌器
加压的氮气 超滤膜
3. 沉降与超速离心
第四节 结构与功能的关系
一 一级结构与功能 二 空间结构与功能 三 修饰可调节功能
第四节 蛋白质结构与功能的关系
一 一级结构与功能
(一)一级结构决定空间构象
牛核糖核酸酶
去除尿素、 β-巯基乙醇
天然状态, 有催化活性
尿素、 -破坏氢键 β-巯基乙醇 -破坏二硫键
非折叠状态,无活性
(二) 一级结构与分子病
人:库鲁病,脑软化病,克-雅病(CJD),变异
型CJD(人类疯牛病),致死性家族性失眠症。
动物:牛海绵状脑病(疯牛病),羊瘙痒症,貂
传染性脑病,猫海绵状脑病
1986-2014年,177英国人和55其它国人食用感染牛肉感染变异型CJD
2. 阿尔茨海默症
β-淀粉样蛋 白
3. 帕金森病
α突触核蛋白(α-synuclein)聚集于多巴胺神经元,形成路易 小体(Lewy bodies )
C +NH3
H
L-氨基酸的丙甘通氨氨式酸酸
(二)分类
1.非极性
2.极性不带电荷
3.碱性
• 含2个氨基;等电点高;在pH7.0时,碱性
4.酸性
• 含有2个羧基;等电点低;在pH7.0时,酸性
水分子及与离子间的结合
蛋白质和DNA中的氢键
物质的引入改变水分子间的氢键网
非极性和极性的分布
折叠的多肽链 水层 非极性 极性
(三) 特殊氨基酸 1. 编码
20种 + 硒半胱氨酸(UGA有义表达),吡咯赖氨酸(UAG有义表达)
2. 非编码
1. 游离:瓜氨酸,鸟氨酸,同型半胱氨酸、D-氨基酸等。 2. Pr中氨基酸的修饰:-OH, -CH3, -COCH3, -P, -COOH…..
(四)氨基酸理化性质
1 等电点 (isoelectric point, pI) :
带正电荷的蛋白质
脱水作用
脱水作用
--
碱
酸-
-
-
-- -
不稳定的蛋白质颗粒
带负电荷的蛋白质
2. 电泳 (electrophoresis)
带电粒子在电场中移动
不同的蛋白质电荷量不同,分子大小不同,速度也不同。
SDS-PAGE
等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)
利用pH梯度介质分离等电点不同的蛋白质。