细胞毒性试验MTT比色法及改进方法
细胞毒理学实验技术-MTT
DMSO需要避光加入，加入前将孔内液体吸除干 净，注意不要把结晶吸除
铺细胞一定要均匀，减小实验误差
③ MTT实验应用
大规模抗肿瘤 药物及其适宜 浓度的筛选
体外肿瘤细胞 的临床药物敏 感性实验
检测细胞活 性、细胞增殖 力和细胞毒性
生物活性因子 的活性检测、 肿瘤放射敏感 性测定等
因死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原，故成为验材料
MTT溶液 (PBS溶解，5mg/ml。小剂量分装，4℃避光保存，两周内有效。或-20 摄氏度冻存，避免反复冻融)、DMSO
需测定的细胞、中 高 低浓度药物 酶标仪、超净台、显微镜 培养皿、离心管、96孔板、细胞计数板、移液枪等
② 实验方法
接种细胞
培养细胞
呈色
比色
消化细胞，用细胞计数板计数， 调整细胞浓度至104个/ml，接种 至96孔板100μl/孔
A
培养24h后，吸除孔内原培养液， 加入培养液配置的不同浓度药物， 每孔100μl(空白组不做处理)
B
药物反应完成后，配制MTT(培养 液:MTT=5:1)并加入，反应4h
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细胞毒理学实验技术
MTT法检测细胞活性
报告人：
CONTENTS
1 实验原理 2 实验材料与方法 3 实验结果与分析 4 实验应用
① 实验原理
• MTT是一种黄色粉末状化学试剂 • 商品名为：噻唑蓝 • 全称为：3-(4，5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3，5-di-phenytetrazoliumromide
MTT是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥 珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下被还原，生成蓝色的甲瓒(formazan)结晶，结 晶的生成量仅与活细胞数目成正比。还原生成的结晶可在二甲基亚砜(DMSO) 中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。 OD值越大细胞活性越强(或药物毒性越小)。
mtt数据处理
mtt数据处理第一篇：mtt数据处理实验一急性毒性试验（改进寇氏法）一、目的与要求1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。
2、观察马钱子的毒性反应。
二、实验原理急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反应和死亡情况。
药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为动物生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。
致死量的测定也较准确。
在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、大小便失禁等不良反应。
致死量的测定常以半数致死量为标准。
半数致死量是指能够引起试验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值，用符号LD50表示。
由于LD50的测定较简便、可靠，而且稳定，现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。
LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。
以上方法虽各有特点，但都有共同的要求：（1）动物：均选用体重17～22克健康小鼠（同次试验体重相差不得超过4克），或选用体重120～150克（同次试验体重相差不得超过10克）健康大鼠作实验动物。
性别相同或雌雄各半。
（2）给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临床所采用的相同。
溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。
值得提出的是，临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹腔注射给药方便，吸收迅速，颇为常用。
若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性病变等），那么啮齿类动物腹腔注射的LD50，参数很接近于静脉给药的LD50。
口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。
(3)试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。
观察期间应逐日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。
（4）正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大致测出受试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然后安排正式试验。
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项一、MTT原理MTT全称为3—(4，5）-dimethylthiahiazo(-2)—3,5—diphenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5—二甲基噻唑-2）—2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名:噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,须被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
二、MTT溶液的配制方法通常，此法中的MTT浓度为5 mg/mL。
因此，可以称取MTT 0。
5 g,溶于100 mL的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中,用0.22 μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住.实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数.在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0。
7范围内.MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效,或配制成5 mg/mL保存在—20ºC 长期保存,避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
MTT比色法评价医用一次性输血器的细胞毒性
MTT比色法评价医用一次性输血器的细胞毒性摘要】目的:为研究医用一次性输血器的细胞毒性。
方法:参照中华人民共和国关于输血器具生物学试验的标准，采用能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的比色分析方法-MTT比色法，检测医用一次性输血器对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增殖率的影响，评价其细胞毒性。
结果:根据细胞毒性反应的评价标准，该次检测的医用一次性输血器呈现高的细胞相对增殖率，其细胞毒性为1级，即无细胞毒性。
结论一次性输血器采用MTT法检测表明，其无细胞毒性，具有良好的安全性。
【关键词】MTT；比色法；一次性输血器；细胞毒性Evaluation on the Cytotoxicity of Disposable blood transfusion device for Medical Useby MTT assayZHOU YixinPU Xiangke【Abstract】Objective To explore the cell toxicity of a kind of medical disposableblood transfusion apparatus. Methods MTT colorimetric analysis, a method which can quickly assess the cell proliferation rate and the cell toxicity, was used to detect the impact on the cell proliferation rate of L929(a mouse fibroblast cell line) caused by the medical disposable transfusion device. The experiment was carried out to evaluate the cell toxicity of the transfusion set according to the biological tests standard of the People's Republic of China(RPC). Results According to cell toxicity evaluation criteria, cells cocultured with the disposable transfusion apparatus still showed high relative growth rate and the cytotoxicity is grade 1 with the reference to the national stands. Conclusion There is no obvious toxicity to cells by using the disposable transfusion device and it will be safe to patients.【Key words】MTT; colorimetric analysis; disposable blood transfusion device;cells toxicity【中图分类号】R385【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)07-0023-02 医用一次性输血器是医疗行业中常用的一类医疗器械，使用量极大，由于一次性输血器直接应用于人体，其材料的安全性直接关系到患者的生命安全。
MTT方法总结详解
MTT方法总结详解第一篇：MTT方法总结详解MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。
formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm和570nm处进行比色。
所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。
MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT 溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。
终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。
(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。
MTT比色法在细胞生物学实验教学中的实验安排与效果分析_薛雅蓉
安排
考虑 到 本 实验 的 重 要 性 计了
一
上 述 操作 中
，
，
与 常 规方 法 有 两 点 不 同
。
①加
ＭＴ Ｔ
我 们 经 过反 复 考 虑
“
，
设 前 的 细 胞 浓 度 不 确 定
”
② 学 生 调 节 细胞 浓 度 及 加 样 期
细 胞处 于 室 温 条 件
，
种可用 于
。
用 于 基 础 细 胞 生 物 学 实 验 教 学是 可 行 的
，
能够
同 雌 的 ＭＴ Ｔ
达
有 的 教学 效 果
。
４６
薛雅蓉 等
：
Ｍ ＴＴ 比 色法 在 细 胞 生 物学 实 验教 学 中 的 实验安 排与 效 果分析
（
Ａ
）
（
Ｂ） （ Ｃ）
Ｉ
ｎｔ ｅｒ ｃ ｅ
［
复制 的
、
掺 人 法 结果 平 行
，
２］
，
并
且无 同 位 素 污 染
操作 简 单
、
快速
因 而 得 到 广 泛 的 １
常 规 ＭＴＴ 比 色法应 用 在 实 验教学 中 的 不 足
Ｔ
收稿 日 期
基金 项 目
通讯 作 者
：
期
－
０４
－
２０
；
修回
日
期
：
２０ １ ５
－
０７
－
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Ｓ ｌｏ
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Ａ ｄｊ Ｒ
MTT法测定药物Z2对HepG2的细胞毒性
[4]9 Heuff G，Steenbergen JJ，Van de Loosdrecht AA，et al.Isoiation of cytotoxi Kupffer cells by a modified enzymatic assay：a methodological study .J Immunol Methods，1993，159：115-123 .28（4）：
参考文献：
[1]吴海燕. MTT法评价羧甲基葡甘露聚糖的体外细胞毒性[J].食品安全与检测，2008，4：173-174
[2]Hussain RF，Nouri AM，Oliver RT .A new approach for measurement of cytotoxicity using colometric assay .J Immunol Methods，1993，160：89-96 .
2实验方法
2.1 HepG2细胞培养
将水浴锅的温度设定为37℃，从低温冰箱中取出冻存好的HepG2细胞，将其放入水浴锅内进行水浴，同时缓缓摇动，加速其融化，待冻存管内成液体状态后，将其取出并用酒精对其消毒，防止污染。将消毒好的冻存管放到超净工作台上，取出离心管加入适量培养液，反复吹打后，将冻存管内的HepG2细胞悬浮液加入到离心管内，吹匀后放入离心机（1500r/min，10min），待离心结束后，在超净工作台上操作，倒掉离心管内的上层清液，并再次加入适量的培养液后，将其装入中型培养瓶中并放入37℃，5%CO2培养箱内培养。
（2）而结合图一、图二、图三，从两组间实验结果进行比较，两组平行试验结果得到的IC50值有明显的区别，说明药物Z2的抗肿瘤活性可能会受到外界条件的干预，这也为今后研究其抗肿瘤活性的影响条件提供了一定的依据。
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项MTT原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项
MTT 原理、步骤、结果分析方法及注意事项一、MTT 原理MTT 全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-2)-3,5-diphenytetrazoliumromide ，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan ）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO ）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT 经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，须被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，也会对实验结果的准确性产生影响，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
二、MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5 mg/mL 。
因此，可以称取MTT 0.5 g ，溶于，溶于100 mL 的磷酸缓冲液（PBS ）或无酚红的培养基中，用0.22 μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
觉得这样比较好。
觉得这样比较好。
需需要注意的是，MTT 法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7范围内。
【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全[修改版]
![【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全[修改版]](https://img.taocdn.com/s3/m/39392e61dcccda38376baf1ffc4ffe473368fd4a.png)
第一篇：【整理总结】关于MTT实验总结--心血啊!大全【整理总结】关于MTT实验总结－－心血啊！MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
MTT步骤如下：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。
（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。
Mtt说明说和使用方法
产品简介：1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。
由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。
在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。
然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。
细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
2. 本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。
从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。
3. 本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。
4. 本产品为500 次（5个96孔细胞培养板）操作。
产品内容：MTT染色液5ml Formazan溶解液55ml 说明书1份保存条件：MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室温保存。
注意事项：1. 由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32 个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
3. MTT一般最好4ºC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
5. 孵育时，须避光6. MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。
MTT法原理、步骤以及注意事项
MTT法原理、步骤以及注意事项MTT法原理、步骤以及注意事项MTT原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处（也有用570nm波长的，我目前用的都是570nm)测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml 的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml 保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
MTT使用讨论总结(附MTS测定方法)
/dxymurong > 复制 > 收藏 | 手机看个人门户登录 | 注册 | 和讯博客 | 和讯首页樱桃红了欢迎来到樱桃园个人门户博客微博相册音乐转帖邮箱朋友圈好友留言进入我的家联系主人发送私信 | 给主人留言 | 送小礼物 | 关注主人 | 加为好友 | 进入Ta的家主人：dxymurong [发送私信] [加为好友] [关注]快速链接[和讯博客][发表文章][博客设置][文章管理]搜索分类友情链接MTT使用讨论总结（附MTS测定方法） [转贴 2005-04-09 16:17:59]字号：大 中 小文章来源: 丁香园一、关于眙盼蓝、MTT、H3测定细胞增殖程度的问题xuweilai近期看文献发现国外一些文献仅采用眙盼蓝计数法测定细胞增殖程度，多本书上明确说明这是一种很不准确的方法，可是文章照样能发在BLOOD等杂志上，对此本人有些想不通。
本实验室也有人据此而仅采用眙盼蓝计数法测定细胞增殖程度，做药物对细胞株生长的影响时，我想细胞增殖程度应该是比较重要的指标，怎可马虎行事。
请高手指点迷津！bengbu_bli 用普通血球计数板计数增殖细胞的数量， 只要检测的细胞样本数量不是非常大，只要能够数得过来，而且一般来讲，都是熟练者计数的话，应该是比MTT法要准确的多。
据了解，国外许多档次不低的杂志都是认可这种经典或传统计数细胞的方法的。
midas丁香园主任是的，只要idea巧妙有创意，而用于证明他们的方法都是次要的！diandian眙盼蓝、MTT确实不是一个好的方法，国外的许多杂志已不太使用，国内还认可的。
关键是整篇文章的思路和结构，好的idea是很重要的。
我的一个师姐的文章就被提出眙盼蓝、MTT的问题，但最后编委认为整篇文章的思路很好，也就不计较眙盼蓝、MTT的问题了。
实属兴运。
杂志Cancer Research Therapywm_ni丁香园主任国内由于实验条件的问题，应用H3的还是不多，而以MTT为主，以我的经验眙盼蓝计数法误差确实很大，所以不知道bengbu_bli的观点源自何处，另外如果有一个好的idea，如果不能用好的方法去证实，实在是一种遗憾，当然发不发还是要看编辑了。
细胞实验-MTT法原理、操作方法步骤与注意事项
MTT原理、操作方法步骤与注意事项目录MTT原理 (1)简介 (1)MTT 溶液的配制方法 (2)普通MTT法实验步骤： (2)药物MTT法实验步骤 (2)注意事项： (3)简介MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处（也有用570nm波长的，我目前用的都是570nm)测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
MTT方法检测细胞毒性实验案例介绍
MTT方法检测细胞毒性实验案例介绍
原理：MTT 分析法以代谢还原噻唑蓝3-（45-dimethylthiazol-2-yl）-25-diphenyl tetrazolium bromide （MTT）为基础。
活细胞的线粒体中存在与NADP相关的脱氢酶，可将黄色的MTT还原为不溶性的蓝紫色的甲月赞（Formazan）,死细胞此酶消失，MTT不被还原。
用DMSO溶解Formazan后可用酶标仪在570nm（450nm）波长处检测光密度。
操作步骤：在96孔板加入细胞100卩L孔（约1X104），置37C 5%CO2细胞培养箱培养24小时；加入适当浓度的受试化合物；将96孔板在37C,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间；将5X MTT用Dilution Buffer稀释成1X MTT ;每孔加50卩L 1 X M,在37C孵育4小时，使MTT还原为甲月赞；吸出上清液，每孔加150卩L DMSO使甲月赞溶解，用平板摇床摇匀；酶标仪在570nm波长处检测每孔的光密度。
结果分析：细胞存活率% =（加药细胞OD-本地OD/对照细胞OD-本地OD）X00%。
注：本底OD值（完全培养基加MTT，无细胞）
生长曲线。
mtt实验方法
mtt实验方法MTT实验方法引言MTT实验方法是一种常用的细胞代谢活性测定方法，通过测定细胞的还原型三甲基四氮唑盐（MTT）的代谢能力来评估细胞的活力和增殖能力。
本文将介绍MTT实验方法的原理、步骤和注意事项。
一、原理MTT（3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide）是一种黄色化合物，能够被细胞内的还原酶还原为紫色的可溶性晶体。
MTT实验利用细胞的代谢活性将MTT还原为紫色产物，通过测量产物的光密度来评估细胞的活力和增殖能力。
二、步骤1. 培养细胞将待测细胞种植在适当的培养基中，并在37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中培养至细胞密度达到要求。
2. 处理样本根据实验需要，给予细胞不同的处理，如药物处理、基因沉默、过表达等。
3. 添加MTT试剂将培养基中的MTT试剂按照一定比例（一般为0.5mg/mL）加入到培养皿中，使细胞与MTT试剂充分接触。
4. 孵育细胞将培养皿放回培养箱中，孵育一定时间（一般为2-4小时），使细胞内的还原酶将MTT还原为可溶性晶体。
5. 溶解晶体将培养皿中的培养基倒掉，加入适量的溶解剂（如DMSO）将晶体溶解，形成紫色液体。
6. 测量光密度将溶解后的液体转移到96孔板中，使用酶标仪或分光光度计测量其光密度（一般在570nm波长下），光密度值越高，代表细胞活力越高。
三、注意事项1. MTT试剂需避光保存，使用前需保持干燥。
2. 实验过程中需严格遵守无菌操作，避免细胞污染。
3. 孵育时间需根据实验需要进行调整，过短的时间可能导致MTT 还原不完全，过长的时间可能导致背景干扰增加。
4. 为减少实验误差，建议设置空白对照组和阴性对照组。
5. 在测量光密度前，需确保晶体完全溶解，否则会出现误差。
结论MTT实验方法是一种简便、可靠的细胞代谢活性测定方法。
通过测量细胞对MTT试剂的还原能力，可以评估细胞的活力和增殖能力。
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purple color
主要步骤
制备细胞悬液，接种、培养细胞 MTT染色：培养一段时间后，向细胞中加入 MTT溶液，继续在37℃孵育4 h。然后除去培 养液，加二甲基亚砜(DMSO)或盐酸-异丙醇溶 解细胞中的紫色结晶物。 比色：酶联免疫监测仪在490或570nm处测 定溶液的吸光值OD(optical density)。
开始 预实验
细胞接种浓 度
药物浓度
时间控制
污染产生蓝 黑色
离心操作
浓度梯度
5%CO2, 37℃
血清干扰
调零孔与对 照孔
灭菌操作
细胞代数 <30
优质培养板
药品刺激性 大小
悬液均匀度
枪头注细胞 速度
上清液含结 晶物
影响评价结 果
。。。。。。
。。。。。。
翻板
贴壁牢固程 度
MTT改进
XTT
MTS
CCK-8/ WST-8
96孔板
酶标仪
优点
▪灵敏度较传统计数法高 ▪经济
缺点
▪甲臜产物不溶于水，需溶解检测 ▪MTT反应需至少3小时，不适用急性反应
选择适当的细胞接种浓度、药物浓度 设调零孔和对照孔
注事 意项
MTT对菌敏感，应尽量无菌操作 避免血清干扰 现配现用，低温避光，以免分解
需要进一步查阅的操作细节 ---多看文献
优点
缺点
1、使用方便，省去了洗 涤细胞，不需要放射性同 位素和有机溶剂； 2、检测快速； 3、灵敏度高，甚至可以 测定较低细胞密度； 4、重复性优于MTT； 5、对细胞毒性小； 6、为1瓶溶液，毋需预制， 即开即用。
1、价格比较贵。 2、CCK-8试剂的颜色为 淡红色，与含酚红的培养 基颜色接近，不注意的话 容易产生漏加或多加。
XTT:与MTT类似，一种四唑氮的衍生物。化学名：2,3- bis(2methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2Htetrazolium hydroxide[3]
作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的 橙黄色甲臜产物。当XTT与电子偶合剂（例如phenazine methosulfate，PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的甲 臢产物的吸光度与活细胞的数量成正比。
参考文献
[1] 郝和平. 医疗器械生物评价标准实施指南[M] . 北京: 中国标准出版社, 2000: 10. [2]郑旭,王莉芳,陈芳,孙发展,罗晶.MTT法评价4 种医用材料的细胞毒性[J]. 西北药学杂志,2011,26(5):363-364. [3]范能全,彭兰.MTT法和XTT-PMS法测定细胞毒性的探讨[J].药物研 究,2005,14(7):28-29. [4]李红艳,夏启胜,徐梅,房青,徐波,陈志华,向青.MTT、MTS、WST-1在细 胞增殖检测中最佳实验条件的研究[J].中国康复医学杂 志,2005,20(11):824-826. [5]盛新华,卿三华,李镏洋.MTT、WST-8法测定细胞生长抑制率的结果比 较[J].山东医药,2006,46(6):20-21.
利用体外细胞培养方法来评价生物材 料和医疗器材或浸提液可滤出成分中 潜在的细胞毒性
生物学评价体系中最重要的检测指标 之一, 几乎是各种医疗器械和医用材 料临床应用前的必选项目.[1]
染料排除法（台盼蓝、伊红Y、苯胺黑） 克隆形成试验 四唑盐（MTT）和Alamar Blue比色试验 三磷酸腺苷（ATP）发光试验 细胞蛋白质含量测定法
MTT比色试验
----四甲基偶氮唑盐微量酶反应色法
MTT：为黄色化合物,是一种能接收氢原子的染料，其化学名 为3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐，商品名噻唑 蓝。[2]
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为 难溶性的蓝紫色结晶物甲臜(Formazan)，并沉积在细胞中， 而死细胞无此功能。 在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正 比。
原 理
优点
1、使用方便， 省去了洗涤细 胞 2、检测快速 3、灵敏度高， 甚至可以测定 较低细胞密度 4、重复性优于 MTT。
缺点
XTT水溶液不 稳定，需要低 温保存或现配 现用。
MTS
：3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)2H-tetrazolium [4]
基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。[5]
原理
它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS） 的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜 产物。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测 仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
新合成的四唑氮衍生物，与MTT属于同类物质
原理
其原理与XTT类似，能被活细胞中线粒体脱氢酶降解而产 生棕黄色水溶性的甲臜，能直接通过光谱吸收测定OD值， 进而推测细胞的增殖情况，当与电子偶合剂PMS联用是， 能增强MTS的还原反应，提高反应的灵敏性。
优 CCK-8/WST-8:CCK-8试剂中含有WST–8：化学名：2-(2-甲氧基-4-硝