最新第三章生物_第一节细菌学监测

__________________________________________________

生物第一节细菌学监测

（一）基础知识一、填空题

1. 用于细菌学检测的吸管上端要用普通棉花填塞，并注意松紧适度，使其快速、准确流出所用体积。

2. 测定水中细菌学指标的采样瓶口用牛皮纸等防潮纸包扎后，置于干燥箱中，于160~170℃干热灭菌2h，或用高压蒸汽灭菌器121℃灭菌15min；不能用加热方法灭菌的塑料瓶，应浸泡在0.5%过氧乙酸10min或环氧乙烷气体进行低温灭菌；聚丙烯耐热塑料瓶，可用121℃高压蒸汽灭菌器灭菌15min。

3. 测定自来水水样中细菌学指标时，采水前将水龙头开至最大，放水3~5 min，然后关闭水龙头，用酒精灯火焰灼烧约3 min消毒水龙头或用75%酒精溶液消毒水龙头，再打开水龙头、开足放水1min，以充分去除水管中滞留杂质。

4. 测定水样中细菌学指标时，从取样到检验不宜超过2h，否则应使用10℃以下冷藏设备保存样品，但不得超过 6 h。

5. 分层检测地表水中细菌学指标时，应自上而下进行采样，以免不同层次的搅扰；与理化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品。

6. 配制好的用于细菌学检测的培养基，不宜保存过久，以少量勤配为宜。每批应注明配置日期，已灭菌的培养基可在4~10℃存放一个月，存放时应避免阳光直射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。

二、判断题

1. 检测水中细菌学指标时，每次试验要以无菌水为样品，对培养基、滤膜、稀释水、玻璃器皿和冲洗用水做无菌性检验。（√）

2. 新购置的用于细菌学指标测定的玻璃器皿，因含游离碱，应先在2%盐酸中浸泡数小时，用自来水冲洗干净后，再用蒸馏水冲洗1~2次，沥干备用。（√）

3. 培养细菌的玻璃器皿，应先经灭菌，倒出培养基，用肥皂水或洗涤剂刷洗残渍，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1~2次，沥干备用。（√）

4. 细菌学检测用的高压蒸汽灭菌器，每次使用时，在压力上升之前，必须先用蒸汽将器内的冷空气完全驱尽，并要记录温度、气压和灭菌的时间。（√）

5. 采集细菌学检测的水样时，不需用水清洗已灭菌的采样瓶，一般采样量为采样瓶容量的80%左右，以便接种时充分混匀样品。（√）

6. 制备大量培养基时，除玻璃器皿外，还可以用搪瓷桶或铝锅等容器，但不可以用铜或铁锅，以免金属离子进入培养基中影响细菌生长。（√）

三、选择题

1. 在同一采样点，同时进行细菌学监测项目与理化监测项目采样时，应A.先采集细菌学检验样品。

2. 测定含有高浓度重金属水样中的细菌学指标时，在灭菌前要在采样瓶中加入螯合剂，以减少金属毒性。按500mL采样瓶计，加入螯合剂的浓度和体积为 A. 15%EDTA，1ML 。

3. 为去除水中余氯对细菌学指标检测的干扰，在灭菌前要向采样瓶中加入足量的硫代硫酸钠，按500mL采样瓶计，加入10%硫代硫酸钠的体积为 B. 0.3 mL。

4. 用于测定细菌学指标的培养基，配制好以后不宜保存过久，已灭菌的培养基可在4~10℃保存B. 一个月。

四、问答题

1. 简述细菌学检测实验室的基本要求。答：（1）通风良好，要避免尘埃、过堂风和温度骤变，保持空气清洁和实验用具整洁；（2）室内墙壁要刷漆覆盖，地板要使用

光滑防透水材料；（3）工作台要宽敞，光滑防透水、防腐蚀，表面材料具有最少接缝，室内光照要均匀宜人；（4）有专供培养基制备、各类器皿消毒灭菌用的准备室和供应室，还要有灭菌接种间。

2. 简述细菌学检测实验室应做好哪些供应品的质量控制。答：（1）玻璃器皿的质量控制（2）纯水质量的控制（3）试剂的质量控制（4）染料和着色剂的质量控制（5）

滤膜和吸收垫的质量控制（6）培养基的质量控制。

3. 简述江河湖库等地表水细菌学检测的采样步骤及注意事项。答：（1）已灭菌和封包好的采样瓶，要小心开启包装纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌污染。（2）

要注意使用船只或附加设备采样时可能造成的污染。（3）采集水样时，用手握住瓶子的下部直接将已灭菌的带塞采样瓶插入水中，距水面10~15cm处，拔玻塞，瓶口朝水流方向，使水样灌入瓶内后盖上瓶塞，再将采样瓶从水中取出；如没有水流，可握住瓶子水平前推，直到充满水样为止；采好水样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。（4）采样时不需要水样冲洗采样瓶，一般采样量为采样瓶容量的80%左右，以便充分振摇混合样品。（5）在同一采样点与理化监测项目同时采样时，应先采细菌学检验样品；同一采样点分层采样时，应自上而下进行。（6）采样完毕，应编号并做好采样记录。（7）在危险地点或恶劣气候条件下采样时，必须有防护措施。

4. 测定细菌学指标的水样应如何保存？答：采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学检验。一般从取样到检验不宜超过2h，否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6h。实验室接样后，应将水样立即放入冰箱，并在2h内着手检验。如因路途遥远，送检时间超过6h者，则应考虑现场检验或用延迟培养法。

5. 简述测定自来水中细菌学指标的采样步骤及注意事项。

答：（1）已灭菌和封包好的采样瓶，无论在什么条件下采样，均要小心开启包装纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶颈受杂菌污染。（2）选择不漏水的龙头，采水前先将水龙头打开至最大，放水3~5min，然后关闭水龙头，用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌或用70%酒精溶液消毒水龙头，再打开水龙头，放水1min，以充分除去水管中的滞留杂质。（3）采样时不需用水冲洗已灭菌的采样瓶；采样量为采样瓶容量的80%，以便混匀样品。（4）采样完毕，应做好记录，并将采样瓶编号。

6. 简述如何进行培养基的质量控制。答：（1）每批培养基在使用前，需经无菌检验。可将培养基在37℃温箱内培养24h，证明无菌，同时再用已知菌种检查在此培养基上的生长情况，符合后方可使用。（2）对每批培养基要做阳性和阴性对照培养检查试验。（3）配制每批培养基都要做好记录，包括配置日期和批次，培养基名称、成分、pH值，灭菌条件，配制方法，配制人员等；配好的培养基不宜久放，以少量勤配为宜。

（三）水中总大肠菌群

一、填空题

1. 总大肠菌群多管发酵法测定的复发酵试验，是每一管接种完同一发酵管的最典型菌落1~3个后，将发酵管置于37℃恒温箱中，培养24h，有产酸产气者，证实有大肠菌群存在。

2. 总大肠菌群多管发酵法测定的步骤分为初发酵试验、平板分离和复发酵试验。

3. 总大肠菌群测定的滤膜灭菌是将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水后置于沸水浴中煮沸灭菌 3 次，每次15 min，前两次煮沸后需更换水洗涤2~3次，以除去残留溶

剂；也可用121℃蒸汽灭菌10min。

二、判断题

总大肠菌群测定时，如果不能实现常规的检验步骤，例如水样运输途中不能保证所要求的温度，或采样后不能在允许的时间内进行检验等，都可采用延迟培养法。（√）

三、选择题

1. 我国目前以C.1L 为总大肠菌群的报告单位，MPN值再乘10 即为该体积水样中的总大肠菌群数。

2. 对受污染严重的水体，可选择B. 多管发酵法测定总大肠菌群。

3. 我国目前总大肠菌群以 A. 个/L为报告单位。

四、问答题

1. 简述多管发酵法测定水源水中总大肠菌群的初发酵操作步骤。答：（1）将水样做1:10稀释；（2）在各装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液的5个试管中各加入10mL

水样；在各装有10mL乳糖蛋白陈培养液的5个试管中各加入1mL水样，在各装有10mL乳糖蛋白陈培养液的5个试管中各加入1mL1:10的稀释的水样；（3）将各管充分混匀，置37℃恒温箱培养24h。

2. 简述总大肠菌群革兰氏染色的操作步骤及主要注意事项。答：（1）步骤：涂片、固定、结晶紫染色、水洗、碘液媒染、水洗、酒精脱色、水洗、番红复染、水洗、干燥、镜检（低倍镜—油镜）。（2）注意：涂片时要使菌体薄而且均匀；固定时应自然风干或微热促干，然后在火焰上通过1~2次；酒精脱色时用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止；同时应注意控制各步骤的操作时间。

（四）水中粪大肠菌群一、填空题

粪大肠菌群多管发酵法的初发酵试验，是将水样分别接种到盛有乳糖蛋白月东培养液的发酵管中，在37℃培养24 h，产酸、产气发酵管表明试验阳性。

二、判断题

1. 对受污染严重的水体样品，如果在初发酵中未发现产气，则应将其培养到48h，然后再进一步证实有无大肠菌类细菌。（√）

2. 如果粪大肠菌群测定的接种体积为10mL，则试管内应装有三倍乳糖蛋白陈培养液10mL，如接种量为1mL，则接种于普通浓度的乳糖蛋白陈培养液10mL。（×）

如粪大肠菌群测定的接种体积为10mL，则试管内应装有三倍乳糖蛋白陈培养液5mL，如接种量,≤1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白陈培养液10mL中。

3. 粪大肠菌群多管发酵法的复发酵试验，是将培养物转接到EC培养液中，在35℃下培养24h。（×）应在（4

4.5±0.5）℃温度下培养（24±2）h。

4. 粪大肠杆菌的延迟培养步骤类似于总大肠菌群的延迟培养法。但是只有在不能对粪大肠杆菌进行滤膜试验时，才可使用延迟培养法。（√）

5. 水中总大肠菌群和粪大肠杆菌的快速测定法，适用于医院废水、生活污水、垃圾渗滤液以及其他行业（如餐饮业、食品加工等）排入地表水的污水。（√）

三、选择题

滤膜法测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群时，放置滤膜的操作应为：用已灭菌的镊子夹取灭菌滤膜的边缘，将其B.粗糙面向上贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器四、问答题

如果总大肠菌群和粪大肠菌群测定水样接种量不是10mL、1mL和0.1mL，而是较低或较高三个浓度的水样，应如何计算总大肠菌群数或粪大肠菌群数？试写出计算公式。答：可先查MPN表求出MPN指数，再经过下面的公式换算成100mL的MPN值。MPN值乘以10，即为1L水样中的总大肠菌群数（或粪大肠菌群数）。MPN值=MPN指数×(10（mL）/ 接种量最大的一管（mL）)

收集于网络，如有侵权请联系管理员删除