支原体培养检验操作程序
支原体化验的方法
支原体化验的方法支原体化验的方法有多种，其中包括直接培养法、PCR法、免疫学方法等。
下面将详细介绍这些方法的原理、步骤和应用。
直接培养法是最常用的支原体化验方法之一。
该方法主要通过将患者标本（如呼吸道分泌物、尿液、眼结膜刮片等）接种于富含营养物质的培养基上，培养出支原体，然后通过染色或PCR等方法进行鉴定。
直接培养法的步骤如下：1. 收集标本：根据患者的病情选择合适的标本，如痰液、尿液和血液等。
2. 准备培养基：根据支原体的生长要求选择相应的培养基，可以添加抑菌剂以防止其他细菌的污染。
3. 接种标本：将标本取出涂于培养基表面或混合于培养基中。
4. 培养条件：根据支原体的特性，确定合适的培养条件，如温度、湿度和气体成分等。
通常情况下，支原体需要在35-37摄氏度下进行培养。
5. 鉴定支原体：经过一段时间的培养后，观察培养基上是否有支原体生长的迹象，如颜色变化或菌落形成等。
可以使用染色技术（如吉姆萨染色）来直接观察支原体的形态特征，或者使用抗原检测方法（如免疫荧光法）来检测支原体的特异性抗原。
直接培养法的优点是可以获得活体支原体，可以对其进行进一步的生物学研究；缺点是该方法需要较长的时间来等待支原体的生长，并且对培养条件的控制要求较高。
PCR法（聚合酶链反应法）是一种通过扩增支原体特异性基因来鉴定支原体的方法。
该方法的优点是快速、准确、敏感，并且不需要进行支原体的培养。
PCR法的步骤如下：1. 提取核酸：从支原体的标本中提取核酸，一般使用商业化的核酸提取试剂盒进行提取。
2. PCR试剂的配制：将PCR所需的试剂进行配制，包括引物（特异性扩增支原体基因产物的引物）、核酸模板、酶和缓冲液等。
3. 扩增反应：将提取的核酸样品与PCR试剂混合，通过PCR仪进行扩增反应。
扩增的条件包括温度、时间和环境等。
4. 电泳分析：将扩增产物与DNA分子量标准物一同进行琼脂糖凝胶电泳，通过分析扩增产物的条带大小和强度来判断是否存在支原体。
支原体测试操作方法
支原体测试操作方法
支原体测试操作方法包括以下步骤：
1. 制备标本：向6孔板内滴加待检细胞上清液约1ml，注意设立对照组（已证实的支原体阳性和阴性细胞上清液），培养48h后（VERO细胞汇合前）将细胞爬片从平皿中取出。
2. 漂洗：将细胞爬片置于培养皿中，用不含酚红、NaHCO3的Hanks溶液（或PBS）漂洗3次。
3. 固定：用乙酸：甲醇（1：3）固定液固定10min。
4. 漂洗：待固定液自然风干后用去离子水漂洗3次。
5. 染色：置于Hoechst33258工作液（μg/ml）中染色10min。
6. 漂洗：去离子水中漂洗3次，每次1~2min。
7. 封片，紫外激发，观察。
以上步骤仅供参考，建议咨询专业医生获取准确信息。
PCR方法 支原体检测
PCR检测支原体方法如下：
1、吸取待检细胞的培养液100ul，转移入无菌的1.5ml 离心管中。
请注意：待检
细胞必须换液24小时以上，否则会有假阴性结果。
2、将盛有100ul待检培养液的 1.5ml 离心管用金属浴或空气浴在95℃加热
5min。
请注意：加热过程中，要保持离心管的盖子是盖紧的。
（因为在加热时，盖子会自己崩开，可以在离心管上放置书本之类的物品压住盖子）
3、高速离心，13200rpm，1min。
4、配制PCR反应体系：
1）待检样品数量+1个阳性对照+1个阴性对照=总的样品数量。
2）阳性对照是以往确定被支原体污染的样品，阴性对照是灭菌超纯水。
3）PCR反应体系：
H2O（灭菌超纯水）13 ul
Buffer 10×（必须含Mg2+） 2 ul
dNTP0.8 ul
Primer(+) (10uM)0.5 ul
Primer(-)(10uM)0.5 ul
Polymerase0.2 ul
Sample 3 ul
4)PCR反应程序：
94℃2min
94℃30sec
55℃30sec
72℃20sec
GOTO step 2 , 36 times
72℃7min
5、配制2%的琼脂糖胶，上样量5-10ul。
6、20-30min后观察结果，阳性条带在200-300bp。
引物序列：
Primer(+)：’GGGAGCAAACAGGATTAGATACCCT3’
Primer(-)：5’TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC3’。
支原体培养检验操作程序
支原体培养检验操作程序一、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。
二、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。
1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照；2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。
3、将混有标本的培养液各100μL 加入A排余下及B排各孔中；4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。
第24、48小时分别观察记录结果。
结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。
培养基不变色为阴性。
B1孔阳性为解脲支原体阳性；B2孔阳性为人型支原体阳性。
药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。
当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感；高浓度不变色低浓度变红为该药物中介；高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。
结果一：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。
结果二：第24小时B1孔不变色示解脲支原体阴性；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。
报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。
结果三：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。
结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。
检验技术操作程序
添加标题
02
PEPORT ON WORK
实验操作
1
2
3
4
结果判断 阴性反应（—）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。 弱阳性反应（+～++）：可见较小的黑色凝集物。 阳性反应（+++～++++）：可见中等或较大的黑色凝块，溶液清亮。
注意事项
RPR试剂在使用前应充分摇匀。 血清中加入试剂后充分振荡使其混匀。 定性试验呈弱阳性或阳性者必须做定量试验才能了解患者血清中的抗体滴度，然后对每个稀释度的血清再进行测定并判断结果。 定性试验呈弱阳性或阳性反应者，需结合临床进行综合分析判断，同时再做特异性密螺旋体试验加以确诊。因为此试验是梅毒非特异性反应素试验，麻风等患者可出现生物学假阳性反应。 试剂盒中的专用滴管、针头只能用来吸取RPR试剂，不能用来吸取血清或作他用。
添加标题
如标本中含有大量血液或者脓液，会出现假阳性结果。
02
03
添加标题
本检测结果如有阴性，而临床症状持续存在，可以进行其他方法来进一步明确诊断。
梅毒操作程序 梅毒快速血浆反应素诊断（RPR）
添加标题
01
PEPORT ON WORK
静脉采血
50ul血清+RPR试剂
注意事项 用阳性培养液接种需早期在颜色稍转红时接种为佳，因支原体在碱性环境下易死亡。 若混合孔变红，尿素孔、人型孔均不变色，说明标本中支原体浓度<104，属正常范围，可报阴性。 解脲支原体24小时报结果，人型支原体48小时报结果。
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沙眼衣原体C-C板操作程序
水平旋转8分钟
支原体检验标准操作规程记录
支原体检验标准操作规程记录
支原体是一种细菌，可以引起一些疾病，例如支原体肺炎。
支原体检验通常是通过采集患者的呼吸道分泌物样本进行检测。
下面是支原体检验的标准操作规程记录：
1. 样本采集，首先，医务人员需向患者解释采集支原体样本的过程，并确保患者理解并同意。
然后，使用标本采集棒从患者的咽部或鼻腔采集分泌物样本。
确保采集的样本足够用于后续的检测。
2. 样本保存和运输，采集完样本后，将其置于适当的容器中，并尽快送往实验室进行检测。
在运输过程中，需要确保样本的稳定性和完整性，避免样本污染或损坏。
3. 样本检测，实验室技术人员根据标准操作规程，使用适当的检测方法对支原体样本进行检测。
常见的检测方法包括PCR（聚合酶链反应）和培养法。
在检测过程中，需要严格遵守操作规程，确保结果的准确性和可靠性。
4. 结果记录和报告，一旦检测完成，实验室应当及时记录检测结果，并按照相关规定向医务人员报告。
检测结果应当包括阳性或
阴性的判定，以及可能的数量或浓度信息。
5. 结果解读和处理，医务人员在收到检测结果后，应当结合患
者的临床症状和其他检查结果进行综合分析和判断。
根据检测结果，及时采取相应的治疗措施，并告知患者相关信息。
以上是支原体检验的标准操作规程记录，这些步骤和规程的严
格执行对于确保支原体检验的准确性和可靠性非常重要。
希望这些
信息能够对你有所帮助。
支原体(培养法)检测程序
1.目的指导并规范直接培养法检测小牛血清支原体的操作。
2.适用范围本程序包括初次接种培养、第7天转种培养、结果判定标准及培养基的最终处理。
适用于小牛血清支原体直接培养法检查的全过程。
3.职责3.1 质控部负责本程序的起草3.2 总经理负责本程序的审批3.3 质控检验人员负责本程序的操作4.定义5.引用标准《中华人民共和国药典》四部 2015版6.材料及设备6.1 试剂6.1.1 供试品小牛血清，8ml以上6.1.3 效期内灭活小牛血清，使用前确认批号、有效期，并填写相应记录。
6.1.4 阴性对照：无菌生理盐水（安瓿瓶2ml/瓶）10ml6.2 培养基6.2.1 效期内支原体肉汤培养基8ml /支（中管），4支（初种）和8支（转种）。
记录批号及有效期。
6.2.2 效期内支原体半流体培养基8ml /支（中管），4支（初种）和8支（复种）。
记录批号及有效期。
6.3 用具1ml刻度吸管、10ml 刻度吸管。
清洗、灭菌参《玻璃器皿的清洗灭菌程序》6.4 设备6.4.1 生物安全柜。
6.4.2 35～37℃孵箱。
6.4.3 电磁炉6.5 其它6.5.1 无菌医疗用品无菌帽、无菌口罩和橡胶检查手套。
记录批号。
6.5.2 75%酒精棉，参见《75%酒精棉配制程序》SXRS-SOP 02-1-0-70。
记录批号。
7.流程图无8.内容8.1 初次接种和培养观察8.1.1 操作前准备——支原体半流体培养基融化：8.1.1.1 将支原体半流体培养基放入不锈钢锅内。
8.1.1.2 用电磁炉加热10～15分钟，使其完全融解。
8.1.1.3 冷却至触摸不烫手8.1.1.4 供试品、培养基、小牛血清、灭菌物品、75%酒精棉、记号笔、试管架放在操作间。
8.1.1.5 标记培养基：用记号笔在支原体肉汤培养基和支原体半流体培养基中管外壁注明阴性对照和供试品名称、批号、接种日期。
8.1.1.6 补加灭活小牛血清：8.1.1.6.1 用75%酒精棉擦拭小牛血清瓶。
支原体检测流程
支原体检测流程
支原体检测流程详解
一、准备工作
1. 收集患者的前置分泌物，用于后续的检测分析。
2. 准备必要的实验器材，如试管、移液器、离心机等。
3. 确保实验室环境符合卫生标准，以避免干扰检测结果。
二、样本处理
1. 将收集到的前置分泌物放入无菌试管中，并做好标记。
2. 尽快将样本送至实验室进行检测。
三、实验室检测步骤
1. 样本接种：将样本接种到支原体培养基上，进行培养和观察。
2. 支原体鉴定：通过形态学、分子生物学等方法，对培养出来的支原体进行鉴定。
3. 结果判断：根据支原体生长情况、形态学特征等，结合经验进行结果判断。
四、注意事项
1. 确保实验室环境的卫生标准，以避免干扰检测结果。
2. 注意样本的采集和保存方法，确保样本的质量。
3. 在进行支原体检测时，应注意与其他类似疾病的鉴别，以免误诊。
五、报告出具
根据检测结果，出具支原体检测报告，告知患者是否感染了支原体及相应的治疗建议。
以上就是支原体检测的详细流程，希望对大家有所帮助。
支原体的培养方法
支原体的培养方法
支原体的培养方法如下：
1.支原体的分离与培养：首先，将疑似支原体感染的样本（如呼吸道分泌物、∗∗道分泌物等）进行分离。
常用的分离方法有离心、滤过等。
2.培养基：支原体培养需要特定的培养基，如含抗生素的支原体专用培养基。
培养基的pH值应控制在7.2-7.4，以满足支原体的生长需求。
3.培养条件：将分离后的样本接种到培养基上，置于37℃的恒温培养箱中，培养时间通常为2-6天。
需要注意的是，支原体对湿度有一定要求，培养箱内湿度应保持在50%-70%。
4.观察结果：在培养过程中，如果出现典型的支原体菌落，即可判断为支原体感染。
支原体菌落特征为透明或半透明，中心部位呈颗粒状。
5.鉴定：对于疑似支原体感染的患者，需进行进一步的鉴定，如生化试验、血清学试验等。
此外，分子生物学方法（如PCR）也可用于支原体的鉴定。
需要注意的是，支原体的培养方法因实验室条件、样本来源等因素而异，具体操作需参照相关实验室手册进行。
支原体检测药敏法实验操作流程
支原体检测药敏法实验操作流程1.预先准备所需的支原体培养基和培养皿。
Prepare the required culture medium and culture dishes for Mycoplasma testing.2.将待测样品加入含有支原体培养基的培养皿中。
Add the test sample to the culture dish containing Mycoplasma culture medium.3.将培养皿放入培养箱中，利用恒温箱将温度保持在37摄氏度，以促进支原体的生长。
Place the culture dish in the incubator and maintain the temperature at 37 degrees Celsius to promote the growth of Mycoplasma.4.在培养皿中加入药敏试剂，可以是抗菌药物或抗生素。
Add the sensitivity reagent to the culture dish, which can be an antibiotic or antibacterial drug.5.观察培养皿中是否有支原体的生长。
Observe whether there is growth of Mycoplasma in the culture dish.6.通过显微镜观察支原体的数量和形态。
Observe the quantity and morphology of Mycoplasma under a microscope.7.根据支原体的形态和数量，判断药敏试剂的效果。
Based on the morphology and quantity of Mycoplasma, evaluate the effectiveness of the sensitivity reagent.8.记录实验结果和观察到的支原体生长情况。
支原体检测步骤
支原体检测步骤
支原体检测步骤如下：
采集标本：采集患者标本时，根据其感染部位和具体情况选择合适的标本类型，如痰液、尿液、生殖道分泌物、血液等。
观察症状：支原体感染后，患者可能会出现发热、咳嗽、头痛、乏力等症状。
观察这些症状有助于初步判断是否感染支原体。
血常规检查：通过血常规检查，可以了解患者白细胞计数和分类情况，从而判断是否存在支原体感染。
病原学检查：采集患者标本后，进行支原体培养和鉴定，以确定是否感染支原体。
支原体培养需要在适当的培养基上进行，并观察培养基上是否有支原体生长。
同时，也可采用分子生物学方法，如核酸检测和基因测序等方法进行支原体检测。
血清学检查：通过检测患者血清中支原体抗体水平，可以判断是否感染支原体。
抗体检测方法包括酶联免疫法、凝集试验等。
其他检查：对于疑似患有支原体肺炎的患者，可以进行X线检查和CT检查，以了解肺部病变情况。
诊断与治疗：根据患者症状、体征和检查结果，综合考虑后做出诊断，并选择适当的抗生素进行治疗。
需要注意的是，支原体检测需要采集患者标本进行实验室检查，因此需要前往正规医院就诊，并遵循医生的建议进行检查和治疗。
支原体与支原体药敏培养鉴定标准操作程序
SOP_15-13 支原体与支原体药敏培养鉴定标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：支原体与支原体药敏培养鉴定操作三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 支原体分离鉴别培养1.1标本采集男性：可取尿道分泌物、前列腺液、精液或中段尿培养（中段尿需取尿10ml，经2000r/min 离心10分钟，取沉渣接种）；女性：用扩阴器扩阴后，取宫颈口分泌物培养，也可用羊水培养。
不推荐用尿液。
1.2操作步骤1、从冰柜中取出液体培养基小瓶，复温，登记标本号。
2、打开瓶盖，揭开胶塞，将标本棉签伸入，紧靠培养液上方瓶壁挤压棉签，使标本渗入，丢弃棉签，盖上胶盖，摇匀小瓶；3、将小瓶置35-37℃培养24-48小时，观察结果。
1.3结果判定培养基澄清透明并呈明显得玫瑰红色者为有支原体生长；解脲支原体24小时，人型支原体、混合支原体48小时后培养基无任何变化，可报阴性结果。
培养明显浑浊变红者应判断无支原体生长。
必要时可做支原体固体培养，低倍镜下观察，有油煎蛋样菌落者为支原体阳性。
1.4注意事项1、用后得培养物用高压锅消毒后丢弃；2、本品仅供体外诊断用；3、本品仅供一次性使用。
4、先兆流产、月经期妇女禁用；阴道用药或灌洗后禁用。
2 支原体药敏2.1试剂盒说明本试剂盒集泌尿生殖道支原体UU、MH分离培养，鉴定计数以及10种抗生素的药敏试验于一体。
药敏抗生素：强力霉素（DOX）、美满霉素（MIN）、环丙沙星（CPE）、氧氟沙星（OFL）、司帕沙星（SPA）、罗红霉素（ROX）、阿齐霉素（AZI）、克拉霉素（CLA）、交沙霉素（JOS）、壮观霉素（SPE）、螺旋霉素（AXP）、左旋氧氟（LEV）。
2.2试剂盒组成3.5mlUU-MH 培养液20支，药敏试验板20只，无菌吸咀40个（嵌在试验板底座后面），无菌矿物油2瓶，药敏试验报告签20张，说明书1份。
2.3标本采集男性：可取尿道分泌物、前列腺液、精液或中段尿培养（中段尿需取尿10ml ，经2000r/min离心10分钟，取沉渣接种）；女性：用扩阴器扩阴后，取宫颈口分泌物培养，也可用羊水培养；阳性培养液（普通支原体培养基获得）：用无菌吸咀吸取30ul 。
支原体培养法标准操作规程
支原体培养法标准操作规程支原体培养法呀，这可是个很重要的事儿呢！就好像厨师要做出美味佳肴一样，得有一套靠谱的流程。
咱先说说标本的采集吧，这可不能马虎呀！就跟去果园摘果子似的，得挑那成熟又好的果子，不然摘个半生不熟的，能做出啥好味道呀！采集标本的时候可得仔细了，要保证采集到的是“精华”部分。
然后呢，就是培养基的准备啦！这培养基就像是给支原体准备的“小窝”，得舒舒服服的才行。
各种营养成分都得搭配好，不能多了也不能少了，不然支原体住得不舒服，它能好好长吗？接下来就是接种啦！这一步就像是把种子种到地里，得小心翼翼地放进去，可不能太粗鲁了，不然把支原体给弄伤了可咋办。
接种完了，就把培养皿放进合适的环境里，让支原体在里面好好成长。
在培养的过程中，咱可得时刻关注着呀！就跟照顾小孩子似的，一会儿看看有没有啥变化。
要是发现有异常，那可得赶紧想办法解决，不能任由它发展呀！培养一段时间后，就得观察结果啦！这时候就像是开奖一样，紧张又期待。
看看支原体有没有好好长大呀，有没有出现我们期望的现象呀。
要是一切顺利，那可真是让人开心；要是不顺利，也别灰心，找找原因，下次再来嘛。
支原体培养法可不简单呢，每一个环节都很重要。
少了哪一步都不行，就像盖房子，少了一块砖都不牢固。
大家可千万不能小瞧了它呀！这关系到很多诊断和治疗呢。
想想看，如果因为我们在培养的时候不认真，导致结果不准确，那岂不是会给病人带来很大的麻烦？所以呀，我们在做支原体培养的时候，一定要认真仔细，把每一个细节都做好。
支原体培养法虽然有点复杂，但是只要我们掌握了方法，严格按照要求去做，就一定能做好呀！就像我们学骑自行车，一开始可能会摔倒，但只要坚持练习，总会骑得稳稳当当的。
大家说是不是呀？所以呀，不要害怕支原体培养法，勇敢地去尝试吧！让我们一起把支原体培养这件事儿做好，为医学事业贡献自己的一份力量！。
支原体检测SOP
支原体检测ＳOP目的：制定支原体检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞、病毒收获液、原液的支原体检验操作。
依据:《中国药典》201０年版三部通则330１支原体检测法。
一、培养法１、检测原理：直接培养支原体于培养基中，观察其生长及菌落生成。
2、适用器材：灭菌锅、试管（带盖)、10ｍｌ移液管、１ml移液管、37℃培养箱、3、检测步骤:（1）培养基的制备：【外购培养基】(2)检测培养基的灵敏度:将菌种接于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传两代后,将培养物接种至待检培养基中，做1０倍系列稀释,肺炎支原体稀释至10-7～10-９,接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10－3～1０-５，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。
每个稀释度接种3支试管,置３６℃±1℃培养７～1４天,观察培养基变色结果。
结果判定以接种后培养基管数的２/3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。
液体培养基的灵敏度：肺炎支原体(AＴCC 1５531株)应达到１0－8,口腔支原体（ＡTCC 2371４株)应达到10-4。
（3）培养基前处理:检查支原体采用支原体液体培养基和支原体半流体培养基(或支原体琼脂培养基）。
半流体培养基(或琼脂培养基)在使用前应煮沸1０～１5分钟,冷却至56℃左右,然后加入灭能小牛血清(培养基︰血清为8︰2），并可酌情加入适量青霉素,充分摇匀。
液体培养基除无需煮沸外,使用前亦应同样补加上述成分。
(４)接种培养:取每支装量为１０ml的支原体液体培养基各4支、相应的支原体半流体培养基各2支（已冷却至36℃±1℃）,每支培养基接种供试品0.5~1.0ml，置３6℃±1℃培养21天。
于接种后的第7天从4支支原体液体培养基中各取2支进行代次培养，每支培养基分别转种至相应的支原体半流体培养基及支原体液体培养基各2支，置36℃±1℃培养21天,每隔3天观察1次。
细胞培养支原体检测方法
细胞培养支原体检测方法
细胞培养支原体检测方法是一种常用的病原体检测手段，适用于呼吸道感染等多种疾病的诊断。
支原体是一种细菌样微生物，常常引起上呼吸道或下呼吸道感染，严重的病例还可能引起心脏、肝、肺等多个器官的并发症。
因此，早期的支原体检测十分关键。
细胞培养支原体检测方法的基本原理是，在专门的培养基上，将样本中含有的支原体分离出来，并在细胞培养的条件下进行培养。
支原体培养成功后，可以进行进一步的鉴定和性状分析，以确认是否是病原体，从而确诊疾病。
具体操作步骤如下：
1. 采集样本：一般采用鼻咽分泌物、痰液、气道吸入物等样本。
采样前需要嘱患者停止使用抗生素等药物。
2. 均匀涂布样本：将样本均匀涂布在培养皿内的培养基上。
3. 培养：将培养皿置于恒温箱内，以满足支原体生长所需的条件。
培养周期一般需7~14天。
4. 观察：在培养周期内观察培养皿内是否出现生长典型的支原体菌落或支原体细胞，根据支原体繁殖的丰度和形态特点，进行初步判断。
此外，检测结果也可以通过核酸检测、荧光抗体法、酶联免疫吸附法等方法进行确认。
细胞培养支原体检测方法的优点是，能够在体外成功培养出支原体，从而进行进一步的鉴定和药敏试验，有助于找到最合适的治疗方案，并控制疾病传播。
但这种方法的缺点也很明显，例如需要较长的培养时间，操作难度较高，并且只能够检测到培养条件适宜的支原体菌种。
总之，对于呼吸道感染等疾病的治疗，及时发现和确诊病原体是十分重要的，其中细胞培养支原体检测方法是一种可靠的检测手段之
一，不仅可以促进疾病的早期诊断和治疗，而且还有助于控制疾病的传播。
支原体操作流程及注意事项
支原体操作流程及注意事项
支原体的操作流程主要包括培养、鉴定、检测和灭活等步骤，以下为简要说明：
1. 培养：
- 使用适宜的支原体培养基（如PPLO培养基），并在无菌条件下接种疑似样本。
- 在适宜的温度（如37℃）和含5% CO2的厌氧环境或微需氧环境下进行培养，通常需要7-21天观察生长情况。
2. 鉴定：
- 根据形态学特征、生化特性（如糖发酵试验）、免疫学方法（如ELISA）或分子生物学技术（如PCR）进行种属鉴定。
3. 检测：
- 可采用DNA荧光染色法、培养法、PCR法、酶联免疫吸附法等多种方式进行支原体的筛查与定量检测。
4. 灭活：
- 若需要处理已知携带支原体的细胞或样本，需进行严格的热灭活或化学试剂（如抗生素）处理，确保支原体完全失活。
注意事项：
- 所有操作应在生物安全柜内进行，严格遵守生物安全规定。
- 接触可能含有支原体的样本时应穿戴适当的防护装备，如实验服、手套、口罩、护目镜等。
- 实验废弃物应按照生物危害废弃物处理规定进行处置。
- 支原体感染易导致细胞培养污染，实验室应定期进行支原体检测，并采取预防措施。
- 灭活步骤完成后，需再次通过支原体检测确认其是否已被彻底清除。
支原体鉴定及药敏的检测流程
支原体鉴定及药敏的检测流程一、样本采集。
这可是第一步呢，可重要啦。
一般呢，会根据检测的部位来采集样本。
要是怀疑是呼吸道支原体感染，那就可能会采集痰液或者咽拭子。
这就像在找小怪兽的踪迹一样，从可能藏着支原体的地方找线索。
采集痰液的时候啊，得让患者好好咳一咳，把肺里的痰液吐出来。
咽拭子呢，就用个小棉签在嗓子眼儿那里轻轻擦一擦，这个时候患者可能会有点想呕，不过忍一忍就好啦，就像坐过山车一下子就过去啦。
如果是怀疑泌尿生殖道支原体感染呢，那就得采集尿道或者生殖道的分泌物啦。
这个采集过程就需要更小心一点，毕竟是比较私密的部位嘛。
医生或者护士会很温柔地操作，就像对待娇嫩的小花朵一样，这样才能采到合适的样本又不会让患者太难受。
二、样本运送。
采集好样本之后，就要赶紧把样本送到实验室去啦。
这就好比是给样本安排了一场紧急旅行。
样本得放在合适的容器里，还要保证它在运输过程中的环境条件合适。
不能太热也不能太冷，就像给样本创造一个舒适的小窝一样。
如果这个环节没做好，样本可能就会受到影响，就像小宝贝在旅途中生病了一样，那后面的检测可就不准喽。
三、实验室检测。
1. 支原体鉴定。
- 培养法。
这是一种很传统也很靠谱的方法呢。
把样本放到专门的培养基里面，然后就像等着种子发芽一样，等着支原体在里面生长。
不过支原体这个小调皮啊，它生长得比较慢，得耐心等上几天呢。
在这个过程中，实验室的工作人员就像细心的园丁一样，每天都去看看培养基有没有变化。
如果培养基变浑浊了或者颜色有变化了，那就可能是支原体在里面生长啦。
然后再通过一些特殊的染色或者其他的鉴定方法，来确定是不是支原体。
- 核酸检测法。
这个方法就比较现代啦，像有魔法一样。
它直接检测样本里支原体的核酸。
就像通过一个特殊的放大镜去看支原体的基因密码一样。
这种方法又快又准确，但是呢，设备和技术要求也比较高。
实验室的人员得像熟练的魔法师一样，操作那些复杂的仪器，才能得到准确的结果。
2. 药敏检测。
支原体检测药敏法实验操作流程
支原体检测药敏法实验操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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支原体培养标准操作规程(3篇)
第1篇一、目的为确保支原体培养结果的准确性和可靠性，特制定本操作规程。
本规程适用于所有进行支原体培养的实验室。
二、适用范围本规程适用于所有需要进行支原体培养的实验室，包括但不限于医疗机构、科研机构、高等院校等。
三、职责1. 实验室主任负责组织制定、修订和实施本规程。
2. 实验室技术负责人负责监督本规程的执行，并对执行情况进行检查和评估。
3. 实验室操作人员负责按照本规程进行支原体培养操作。
四、操作流程1. 标本采集与处理（1）采集患者样本，如尿液、生殖道分泌物等。
（2）将采集的样本置于无菌容器中，立即送检。
（3）在2-8℃下运输样本，避免反复冻融。
2. 培养基准备（1）按照产品说明书配制培养基，确保培养基无菌。
（2）将培养基分装至无菌培养皿中，每个培养皿约5mL。
3. 培养过程（1）将处理好的样本接种于培养基中，每个样本接种3个培养皿。
（2）将培养皿放入37℃恒温培养箱中，培养时间为4周。
（3）每周观察培养皿中是否有支原体生长特征，如菌落、颗粒等。
4. 结果判断（1）观察培养皿中是否有支原体生长特征，如菌落、颗粒等。
（2）根据菌落形态、大小、颜色等特征，结合实验室经验进行结果判断。
5. 数据记录与分析（1）详细记录培养过程中的各项数据，包括样本信息、培养基制备、培养条件等。
（2）对培养结果进行分析，确定是否为支原体感染。
五、质量控制1. 培养基、试剂等物品应定期进行质量检测，确保其符合标准。
2. 实验操作人员应经过专业培训，熟悉操作规程。
3. 定期对实验室环境进行消毒，确保无菌操作。
4. 对培养结果进行复核，确保结果的准确性。
六、应急处理1. 如发现培养皿中出现污染，应立即停止培养，对污染源进行查找和处理。
2. 如发现培养结果与预期不符，应重新进行培养，并查找原因。
3. 如发生安全事故，应立即启动应急预案，确保人员安全和实验室环境。
七、附则本规程自发布之日起实施，如遇特殊情况，可由实验室主任组织修订。
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支原体培养检验操作程序
一、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。
二、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。
1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照；2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。
3、将混有标本的培养液各100μL 加入A排余下及B排各孔中；4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。
第24、48小时分别观察记录结果。
结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。
培养基不变色为阴性。
B1孔阳性为解脲支原体阳性；B2孔阳性为人型支原体阳性。
药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。
当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感；高浓度不变色低浓度变红为该药物中介；高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。
结果一：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。
结果二：第24小时B1孔不变色示解脲支原体阴性；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。
报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。
结果三：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。
结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。
结果五：第24、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无支原体生长或浓度极低，报告未培养出解脲及人型支原体。