附子二萜生物碱成分研究

科类农学学号2011311854本科生毕业论文附子二萜生物碱成分研究Composition of Diterpenoid Alkaloids from Aconitumcarmichaeli Debx谢成指导教师：张丽梅职称副教授云南农业大学昆明黑龙潭 650201学院：农学与生物技术学院专业：中草药栽培与鉴定年级： 2011论文提交日期： 2015年5月10日答辩日期： 2015年5月17日答辩委员会主任：郭华春云南农业大学2015年5月附子二萜生物碱成分研究谢成云南农业大学农学与生物技术学院，昆明 650201摘要【研究目的】对毛茛科乌头属植物附子（Aconitum carmichaeli Debx.）根进行化学成分研究。

【方法】采用不同的色谱技术进行分离,根据化合物的理化性质和光谱数据分析（1H-NMR，13C-NMR，MS）鉴定化合物的结构。

【结果】从总碱中分离鉴定了11个二萜生物碱类化合物，分别为：江油附子碱甲（jiangyoufuzine A，1），江油附子碱乙（jiangyoufuzine B，2），苯甲酰下乌头原碱（benzoylhypaconine，3），下乌头碱（hypaconitine，4），中乌头碱（mesaconitine，5），苯甲酰中乌头原碱( benzoylmesaconine，6)，乌头碱（aconitine，7），附子灵（fuziline，8），卡拉可林（karakoline，9），尼奥灵（neoline，10），松果灵(songorine,11)。

【结论】化合物1～2为首次从附子中分离得到。

关键词：附子；毛茛科；二萜生物碱Composition of Diterpenoid Alkaloids from Aconitum carmichaeliDebxXIE ChengCollege of Agronomy and Biotechnology, Yunnan Agricultural University Kunming 650201ChinaABSTRACT【OBJECTIVE】To study the chemical constituents of Aconitum carmichaeli Debx. 【METHOD】Were separated by using different chromatographic techniques,according to the analysis of physical and chemical properties and identified based on spectral analyses (MS, 1H-NMR, 13C-NMR). 【RESULTS】11 compounds were isolated from Aconitum carmichaeli Debx,and were characterized as jiangyoufuzine A (1), jiangyoufuzine B (2), benzoylhypaconine (3), hypaconitine (4), mesaconitine (5), benzoylmesaconine (6), aconitine (7), fuziline (8), karakoline (9), neoline (10), songorine (11). 【CONCLUSION】compounds 1, 2 were obtained from Aconitum carmichaeli Debx for the first time.Key words：Aconitum carmichaeli Debx; Ranunculaceae; Diterpenoid Alkaloids.附子二萜生物碱成分研究1 前言附子（Aconitum carmichaeli Debx.）为毛茛科（Ranunculaceae）乌头属（Aconitum）植物乌头子根的加工品，始载于《神农本草经》[1]，为回阳救逆之要药。

在我国有文字记载的种植历史最早的当推唐代杨天惠所著《彰明附子记》，该文献记载了四川江油等地当时所生产的附子远销福建、浙江一带，从而奠定了四川江油附子的药用地位。

附子的功能主治：回阳救逆、补火助阳，散寒止痛。

治阴盛格阳，大汗亡阳，吐利厥逆，心腹冷痛，脾泄冷痢，脚气水肿小儿慢惊，风寒湿痹，踒躄拘挛，阳萎宫冷，阴疽疮漏及一切沉寒痼冷之疾。

近代药理研究表明附子具有强心、抗心律失常、抗炎、提高免疫力、抗肿瘤等药理活性，其中二萜生物碱类成分被认为是其特征性的活性成分。

附子的化学成分国内外已有报道，主要为C19和C20骨架的二萜生物碱。

为了寻找其活性成分及提高附子的质量标准，我们对产于四川江油的附子进行了系统化学成分研究，从其90%乙醇提取物中共分离得到11个二萜生物碱，分别为江油附子碱甲（jiangyoufuzine A，1），江油附子碱乙（jiangyoufuzine B，2），苯甲酰下乌头原碱（benzoylhypaconine，3），下乌头碱（hypaconitine，4），中乌头碱（mesaconitine，5），苯甲酰中乌头原碱( benzoylmesaconine，6)，乌头碱（aconitine，7），附子灵（fuziline，8），卡拉可林（karakoline，9），尼奥灵（neoline，10），松果灵(songorine,11)。

其中化合物1～10为C19二萜生物碱，化合物11为C20二萜生物碱，化合物1～2为首次从附子中分离得到。

2 材料与方法2.1实验仪器质谱(MS)用VGAutopec-3000 型质谱仪测定；核磁共振谱{1H-、13C-NMR (DEPT)}用Bruker AM-400型和DRX-500型超导核磁共振波谱仪测定，以TMS(四甲基硅烷)为内标；柱色谱硅胶(200～300目)和薄层色谱硅胶GF254均为青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品。

2.2 实验材料附子于2002年10月采自四川省江油市，经中国科学院昆明植物所雷立功副研究员鉴定为Aconitum carmichaeli Debx，标本存放中国科学院昆明植物研究所(N0.2002-11-02)。

2.3 提取与分离附子干燥块根30 kg经粉碎后，用90%乙醇回流提取3次，每次2小时，提取液合并减压浓缩得浸膏2.8 kg。

浸膏用1.5%盐酸溶解并过滤，滤液用25%的氨水碱化至pH 为9，用CHCl3萃取3次，回收溶剂至干，得总生物碱粗提物280 g。

粗提物经硅胶柱色谱，用石油醚-丙酮-二乙胺（15：1：1～5：1：1）进行梯度洗脱，共得到6个流份（Fr1～Fr6），其中Fr2经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮-二乙胺，10：1：1），得化合物4（2.0 g）。

Fr3经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮-二乙胺，8：1：1），再用丙酮重结晶，得化合物9（0.5 g），11（3.8 g）。

Fr4经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮-二乙胺，15：3：1）和氧化铝柱色谱（CHCl3-EtOAc，7：3），再用丙酮和乙醚进行重结晶，得化合物1（0.35 g），2（20 mg），7（10 mg）。

Fr5经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮-二乙胺，6：1：1），再用丙酮和乙醚重结晶，得化合物3（50 mg），5（2.3 g），10（0.3 g）。

Fr6经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮-二乙胺，5：1：1），丙酮重结晶，得化合物6（11.5 g），8（8.2 g）。

3 结果与分析化合物 1 白色粉末，C33H47NO9，mp 115～117℃,[α] 20D= + 9.70 (c = 0.275,CHCl3)。

HR-FAB-MS m/z: 602.3332 ([M+H]+)，FAB-MS m/z (+): 602 ([M+H]+, 100), 586( [M+H]+ -CH3，4)，570 ( [M+H]+ -OCH3，35)，556 ( [M+H]+ - OCH2CH3，15)，105(10)。

IR (νKBrmax, cm-1)：3442，1725，1630，1451，1393，1097，710。

1H-NMR (500 MHz, CDCl3):δ(H) 8.04 (2H, d, J = 7.2 Hz, H -2′, 6′), 7.56 (H, d, J = 7.2 Hz, H -4′), 7.44 (2H, d, J = 7.2 Hz,H -3′, 5′), 4.54 (1H, d, J= 5.2 Hz, βH -14), 3.74 (3H, s, OCH3 -16), 3.66, 3.11 (each 1H, d, J =8.8 Hz, H -18), 3.31 (3H, s, OCH3 -6), 3.30 (3H, s, OCH3 -1), 3.28 (3H, s, OCH3 -18), 3.06 (1H, dd, J = 10.0, 6.5 Hz, H -6), 2.83 (1H, br.s, H-17), 2.75 (1H, br.s, H-7), 2.62, 2.39 (each 1H, d, J = 11.0 Hz, H -19), 2.35 (3H, s, NCH3), 1.66 (1H, dd, J = 11.0, 4.0 Hz, H -3), 0.58 (3H, t, J = 7.0 Hz, OCH2CH3)。

13C-NMR (125 MHz, CDCl3) 数据见表1。

经查文献这是一个新化合物，命名为江油附子碱甲(Jiangyoufuzine A，1 )，是首次从植物中分离得到，日本专利报道[3]已合成此化合物，具有镇痛和抗炎作用。

化合物2 白色粉末，C34H49NO9, mp180～182℃,[α] 20D= 2.25 (с= 0.445, CHCl3)。

HR-FAB-MS m/z: 616.3482（[M+H]+），FAB-MS m/z (+)：616（[M+H]+，100），584（[M+H]+-OCH3，3），105（33），77（43）。

IR（νKBrmax, cm-1）：3440，1724，1635，1451，1394，1098，983，712。

1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ(H) 7.99 (2H, d, J = 7.2 Hz, H -2′, 6′), 7.48 (H, d, J = 7.2 Hz, H -4′), 7.37 (2H, d, J = 7.2 Hz, H -3′, 5′), 4.52 (1H, d, J= 5.0 Hz, βH -14), 3.78 (3H, s, OCH3 -16), 3.64, 3.11 (each 1H, d, J = 8.6 Hz, H -18), 3.30 (3H, s, OCH3 -6), 3.28 (3H, s, OCH3 -1), 3.26 (3H, s, OCH3 -18), 3.06 (1H, dd, J = 10.0, 6.5 Hz, H -6), 2.84 (1H, br.s, H-17), 2.73 (1H, br.s, H-7), 2.68, 2.45 (each 1H, d, J = 11.0 Hz, H -19), 1.12 (3H, t, J= 6.8 Hz, NCH2CH3), 0.58 (3H, t, J = 7.0 Hz, OCH2CH3)。