液相色谱基础知识分解
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
液相色谱基础知识
关于色谱
色谱是一种分离工具，而不是传统意义上的分析 仪器 常见的分离方式：
蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤 等等
色谱
是其中一种分离工具
色谱法简介
色谱法（Chromatography）溯源 俄国科学加1903年发现色谱的吸附原理，开创 了应用吸附原理分离植物色素的新方法并见诸 于俄文的文献
G
F
泵输液 进样
分离
检测
记录
HPLC的仪器配置
数据处理系统
溶剂 色谱泵 自动进样器 色谱柱及柱温箱 检测器
HPLC的应用
在食品研究中的分析应用 食品中的天然成分
✓ 碳水化合物 ✓ 类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇 ✓ 脂肪酸和有机酸 ✓ 蛋白、肽、氨基酸
食品添加剂
✓ 酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂 ✓ 抗氧化剂、防腐剂 ✓ 颜料和染料（色素〕 ✓ 维生素
是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高 效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以 及高灵敏度的检测器…… 广泛应用于各个领域： 医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业…… 在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
检测器
AB C
DE
液相色谱图相关术语
死时间，t0 － Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需 的时间
保留时间，tR － Retention time 组分从进样到出现峰最大值所需的时间
死体积，V0 － Dead volume 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需 的流动相体积
保留体积，VR － Retention volume 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
HPLC 的应用
在生物化学和生物工程中的应用
氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究 核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究 生物胺的分析研究（儿茶酚胺类)
在精细化工分析中的应用
醇、醛和酮、醚的分离分析 酸和酯的分离分析 表面活性剂的分析 聚合物的分析研究 药物、农药、染料、炸药等工业产品
在无机离子分析中应用
饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析
高效液相色谱基本概念
色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的 曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。
基线 ↓
← 色谱峰 峰宽
保留时间（分）
峰高
液相色谱图相关术语
色谱峰 － Peak 色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分 曲线
HPLC的应用
在公安、刑警破案工作需要
毒品分析等
在环境污染分析中的应用
废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、 酚类和胺类的检测
*************************************
2004年获悉，世界上化合物总数达到4700万，其中绝大
部分是有机化合物，而大约有70％以上是不挥发的。对 HPLC来说，只要被分析物质在流动相溶剂（各种各样〕中 有一定的溶解度便可分析。所以，HPLC在各行各业有着广 泛的应用潜力。
污染物
✓ 霉菌（黄曲霉毒素〕 ✓ 农药和兽药残留 ✓ 多环芳烃（PAHS〕和亚硝酸
HPLC的应用
在兽药研究中分析应用
在医药研究中分析应用
药物分析有USP、BP、CP等标准
常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心 血管药、磺胺类消炎药等。 甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性 激素和孕激素等。 抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素 、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。 中草药研究中的应用：生物碱、甙类(皂甙、强心甙、黄酮甙 等)、萜类 手性药物研究中的应用：光学异构体的拆分(如解毒剂D-青霉 胺毒性小，L-异构体毒性很强) 医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。
液相色谱图相关术语
峰面积 － Peak Area 峰与峰底之间的面积,又称响应值
标准偏差；σ － Leabharlann Baidutandard Error 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半
拖尾峰 － Tailing Peak 后沿较前沿平缓的不对称峰
前伸峰 － Leading Peak 前沿较后沿平缓的不对称峰
鬼峰 － Ghost Peak 并非由试样所产生的峰；亦称假峰
峰底 － Peak Base 峰的起点与终点之间连接的直线
峰高 － Peak Height 峰最大值到峰底的距离
峰宽 － Peak Width 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height 通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相 交两点之间的距离
1906年正式命名（见诸文献） 色谱法；Chromatography
50年代开始广泛研究和应用 主要是气相色谱及薄层色谱
高效液相色谱法的广泛应用始于70年代
色谱的发明人
俄国科学家：M. S. Tswett 正式命名“色谱”的文献
经典液相色谱
一、色谱起源
色素 玻璃柱
石油醚 碳酸钙颗粒
色谱分离的机理
液相色谱图相关术语
基线 － Baseline 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的 曲线
基线飘移 － Baseline Drift 基线随时间定向的缓慢变化
基线噪声；N － Baseline Noise 由各种因素所引起的基线波动
谱带扩展 － Band Broadening 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱 内移动过程中谱带宽度增加的现象
液相色谱应用：制备型液相色谱
分离及纯化样品是液相色谱原理的直接利用 对分离及纯化的要求
化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性
液相色谱应用：分析型液相色谱
分离是一个物理的过程
流动相（Mobile Phase） 固定相（Stationary Phase） 样品（溶解于流动相中的溶质）
什么是液相色谱
色谱
液相色谱
气相色谱
柱色谱 纸色谱 薄层色谱
气相色谱：流动相是气相 液相色谱：流动相是液相
高效液相色谱 HPLC
什么是高效液相色谱
High Performance Liquid Chromatography 高效液相色谱法，简称：HPLC
关于色谱
色谱是一种分离工具，而不是传统意义上的分析 仪器 常见的分离方式：
蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤 等等
色谱
是其中一种分离工具
色谱法简介
色谱法（Chromatography）溯源 俄国科学加1903年发现色谱的吸附原理，开创 了应用吸附原理分离植物色素的新方法并见诸 于俄文的文献
G
F
泵输液 进样
分离
检测
记录
HPLC的仪器配置
数据处理系统
溶剂 色谱泵 自动进样器 色谱柱及柱温箱 检测器
HPLC的应用
在食品研究中的分析应用 食品中的天然成分
✓ 碳水化合物 ✓ 类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇 ✓ 脂肪酸和有机酸 ✓ 蛋白、肽、氨基酸
食品添加剂
✓ 酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂 ✓ 抗氧化剂、防腐剂 ✓ 颜料和染料（色素〕 ✓ 维生素
是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高 效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以 及高灵敏度的检测器…… 广泛应用于各个领域： 医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业…… 在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
检测器
AB C
DE
液相色谱图相关术语
死时间，t0 － Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需 的时间
保留时间，tR － Retention time 组分从进样到出现峰最大值所需的时间
死体积，V0 － Dead volume 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需 的流动相体积
保留体积，VR － Retention volume 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
HPLC 的应用
在生物化学和生物工程中的应用
氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究 核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究 生物胺的分析研究（儿茶酚胺类)
在精细化工分析中的应用
醇、醛和酮、醚的分离分析 酸和酯的分离分析 表面活性剂的分析 聚合物的分析研究 药物、农药、染料、炸药等工业产品
在无机离子分析中应用
饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析
高效液相色谱基本概念
色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的 曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。
基线 ↓
← 色谱峰 峰宽
保留时间（分）
峰高
液相色谱图相关术语
色谱峰 － Peak 色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分 曲线
HPLC的应用
在公安、刑警破案工作需要
毒品分析等
在环境污染分析中的应用
废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、 酚类和胺类的检测
*************************************
2004年获悉，世界上化合物总数达到4700万，其中绝大
部分是有机化合物，而大约有70％以上是不挥发的。对 HPLC来说，只要被分析物质在流动相溶剂（各种各样〕中 有一定的溶解度便可分析。所以，HPLC在各行各业有着广 泛的应用潜力。
污染物
✓ 霉菌（黄曲霉毒素〕 ✓ 农药和兽药残留 ✓ 多环芳烃（PAHS〕和亚硝酸
HPLC的应用
在兽药研究中分析应用
在医药研究中分析应用
药物分析有USP、BP、CP等标准
常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心 血管药、磺胺类消炎药等。 甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性 激素和孕激素等。 抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素 、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。 中草药研究中的应用：生物碱、甙类(皂甙、强心甙、黄酮甙 等)、萜类 手性药物研究中的应用：光学异构体的拆分(如解毒剂D-青霉 胺毒性小，L-异构体毒性很强) 医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。
液相色谱图相关术语
峰面积 － Peak Area 峰与峰底之间的面积,又称响应值
标准偏差；σ － Leabharlann Baidutandard Error 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半
拖尾峰 － Tailing Peak 后沿较前沿平缓的不对称峰
前伸峰 － Leading Peak 前沿较后沿平缓的不对称峰
鬼峰 － Ghost Peak 并非由试样所产生的峰；亦称假峰
峰底 － Peak Base 峰的起点与终点之间连接的直线
峰高 － Peak Height 峰最大值到峰底的距离
峰宽 － Peak Width 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离
半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height 通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相 交两点之间的距离
1906年正式命名（见诸文献） 色谱法；Chromatography
50年代开始广泛研究和应用 主要是气相色谱及薄层色谱
高效液相色谱法的广泛应用始于70年代
色谱的发明人
俄国科学家：M. S. Tswett 正式命名“色谱”的文献
经典液相色谱
一、色谱起源
色素 玻璃柱
石油醚 碳酸钙颗粒
色谱分离的机理
液相色谱图相关术语
基线 － Baseline 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的 曲线
基线飘移 － Baseline Drift 基线随时间定向的缓慢变化
基线噪声；N － Baseline Noise 由各种因素所引起的基线波动
谱带扩展 － Band Broadening 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱 内移动过程中谱带宽度增加的现象
液相色谱应用：制备型液相色谱
分离及纯化样品是液相色谱原理的直接利用 对分离及纯化的要求
化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性
液相色谱应用：分析型液相色谱
分离是一个物理的过程
流动相（Mobile Phase） 固定相（Stationary Phase） 样品（溶解于流动相中的溶质）
什么是液相色谱
色谱
液相色谱
气相色谱
柱色谱 纸色谱 薄层色谱
气相色谱：流动相是气相 液相色谱：流动相是液相
高效液相色谱 HPLC
什么是高效液相色谱
High Performance Liquid Chromatography 高效液相色谱法，简称：HPLC