细胞培养技术视频文本
《细胞培养基本知识》PPT课件
净化工作区内不存放物品，保持洁净气流流型不 受干扰
3-6个月更换初效无纺布，3年更换高效过滤器 使用完毕，清理台面上的物品，75%酒精擦洗台
面
定期进行功能测试，检查净化台各项工作指标是 否达标
细胞培养的实验用品
细胞培养瓶
25平方厘米，正方斜颈 25平方厘米，三角斜颈 75平方厘米，正方斜颈 75平方厘米，三角斜颈 150平方厘米，正方斜颈
SKOv3 （卵巢癌细胞）
1.细胞种类：SKOv3（卵巢癌细胞） 2.培养的天数：传代后3d； 3.放大倍速：倒置显微镜 X10； 4.培养基种类：DMEM+5%胎牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞贴壁生
长，生长速度较快。
CCL-149
1.细胞种类：大鼠肺泡上皮细胞； 2.培养的天数：1d（种在48孔板中）； 3.放大倍速：倒置显微镜 X20； 4.培养基种类：F12K+10%胎牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞呈梭形，透 亮贴壁生长，3－4天传代一次，Giemsa染 色。
1. 细胞种类：HL-60； 2. 培养的天数：ATRA 1微摩尔作用5天； 3. 放大倍速：倒置显微镜 X10； 4. 培养基种类：1640+8％胎牛血清； 5. 细胞状态与特征简述：悬浮细胞，分化的细胞核浆比例减小，核仁减少或
消失，胞核呈杆状或分叶状。
KU812
1.细胞种类：人嗜碱细胞性白血病细胞系； 2.培养的天数：5d； 3.放大倍速：倒置显微镜 X20； 4.培养基种类：RPMI1640+10%新生牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞呈圆形，悬浮生长。
授课 6次理论课+2次实验课
细胞培养
细胞培养(cell culture): 动植物细胞在体外培养的条 件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。
细胞培养的个人体会
2、“养成独立思考、独立解决问题得习惯” 全面提高自己得能力,力求能独挡一面。遇到问题,首 先自己想办法去解决。
3、“养成良好得心态” “雄心” : 有抱负和理想,做好文章。 “恒心” :坚持。 “平常心” :从容淡定,慢而不拖,快而不乱、
4、 “苦干 + 巧干” 苦干:多练习,熟能生巧。“做” 巧干:多总结,掌握规律。“思”
传代得标准方法
1. 细胞铺满瓶底80%,吸除瓶内旧培养液,向瓶内加入少量约1 ～2mL消化液(一般含胰蛋白酶、EDTA),轻轻摇动培养瓶, 使消化液流遍所有细胞表面;
2. 在37℃环境下孵育1-2min,把培养瓶放置显微镜下进行观察 ,发现胞质回缩、细胞间隙增大。
3. 加入含血清培养基,终止消化,用弯头吸管吸取瓶内培养液, 反复吹打瓶壁细胞,使之脱落,吹打成细胞悬液。
内容提要
1、细胞培养简介 2、细胞得复苏和冻存
细胞得复苏 细胞得冻存
3、细胞得换液与传代
个人方法 无菌操作技术 细胞计数和接种
体外培养
体外培养(in vitro culture):就是将活体成分或其寄 生体内取出,放在类似于体内生存环境得体外 环境 中,让其生长和发育得方法。 可分为器官培养、组织培养、细胞培养三种类型。 细胞培养分为原代培养和传代培养。
普通细胞可用: 7份: 2份: 1份 细胞脆弱可用: 5份: 4、2份: 0、8份
细胞得换液和传代
贴壁生长细胞得生长过程
新鲜培养基 (红)
(淡红
对数期 略黄)
停止期 (黄)
贴壁期:0、5-4h 潜伏期:5-24h 对数生长期:24-96h 停止期(衰老期):96h以上
贴壁生长细胞得换液
换液时机:
《细胞培养培训》课件
结
1 细胞培养中的安全问题
在进行细胞培养操作时需要注意一些安全问题，如在安全柜操作，穿戴实验外套和化、功能化和量化方向发展，国内企业正加紧提升技术水 平和产业化水平。
细胞培养培训
细胞培养是生物技术和医学研究中不可或缺的重要技术之一。在本次培训中， 我们将全面介绍细胞培养的基本概念、操作流程和常见问题解决方法。欢迎 大家踊跃参与！
介绍
1 定义
2 重要性
细胞培养是指通过在无菌 环境下加入合适的营养液， 使人类或动物细胞在体外 的人工环境中生长和繁殖 的技术。
细胞培养是研究生命科学 和药物研发不可缺少的技 术。它能够帮助我们理解 细胞的生长、分化、凋亡 和信号传导等基本生理过 程。
2
殖，以获得足够的细胞数量用于实验。 细胞传代技术可以使细胞连续繁殖多代
细胞凋亡是指由一系列信号调控的正常
并保持生物学特性。
细胞死亡程序。在细胞培养中凋亡的部
分或全部细胞可能会影响实验结果。因
此，细胞凋亡检测技术成为了细胞培养
3
细胞培养蛋白表达技术
的重要技术方法。
细胞培养蛋白表达技术是指通过转染外
源性质粒或病毒载体进入细胞，使细胞
3 应用场景
细胞培养技术广泛应用于 基础研究、药物筛选、生 物材料研究、环境毒理学 等领域。
细胞培养的基本概念
细胞种类
主要包括原代细胞、细胞株、酶处理细胞等。不 同种类的细胞具有不同的生长要求，因此对于细 胞的选择要根据科学研究的需要作出选择。
细胞培养的条件
温度、CO2浓度和通气等条件对于细胞培养的影 响非常大。合理的培养条件是保证细胞生长和繁 殖的前提。
细胞培养技术 第一章 绪论和基本理论
第二节 生存环境、条件
一、无污染环境：首要条件
二、温度 36.5℃±0.5℃（36℃~37℃）
三、气体环境和氢离子溶度
95 % 空气+5 % CO2 四、生存所需基本物质
pH值为7.2~7.4
（一）糖；（二）氨基酸； （三）促生长因 子；（四）其它物质
五、渗透压：260 ~320 mOsm/kg （等渗）
和庆大霉素
第四章 清洗与消毒
一、玻璃器皿的清洗 （一）浸泡 （二）刷洗 （三）浸酸 : 24h
12
不同的强度清洗液
类 型 重铬酸钾 （g ）
强 液 63 次强液 120 弱 液 100
浓硫酸 （ml） 1000 200 100
蒸馏水 （ml）
200 1000 100
（四）冲洗
13
二、胶塞的清洗
三、塑料器皿的清洗
10
（二）培养液的种类
生长培养液 维持液
基本培养基 80~90 % 95 %
血清 10~20 %
2~5 %
第四节 其它溶液
一、消化液 ：胰蛋白酶溶液 0.25%或 0.125%； 0.02% EDTA（Versene）溶液
11
二、pH调整液 1.NaCO3液：7.4%、5.6%、3.7% 2.HEPES（分子量238.31）液 三、抗生素液：青霉素、链霉素、卡那霉素
4. 病毒污染：
27
参考文献
1．薛庆善 主编.体外培养的原理与 技术.北京：科学出版社，2001.2
2．鄂征. 主编.组织培养和分子细胞 学技术. 北京：北京出版社， 1994.12
3．司徒镇强.细胞培养.西安：世界 图书出版社公司西安分公司.1996.
《培养技术》课件
总结词
通过计算机技术创建的虚拟环境，用户可以与之进行交互，产生身临其境的感觉 。
详细描述
虚拟现实技术利用计算机生成一个三维的虚拟环境，用户可以通过特殊的输入设 备与之进行交互，如头戴式显示器、数据手套等。用户可以在这个虚拟环境中自 由移动、观察和探索，感受到与现实世界非常相似的体验。
增强现实技术
总结词
游戏领域的应用案例
总ห้องสมุดไป่ตู้词
游戏领域是培养技术应用的又一重要领域， 通过将培养技术与游戏结合，可以创造出更 加丰富、更加有趣的互动游戏体验。
详细描述
在游戏领域中，培养技术的应用案例包括虚 拟现实游戏、角色扮演游戏、策略游戏等。 这些游戏通过模拟真实场景或情境，提供更 加丰富、更加有趣的互动游戏体验。例如， 虚拟现实游戏可以模拟各种现实环境和情境 ，让玩家身临其境地体验游戏世界，提高游 戏的互动性和趣味性。
详细描述
混合现实技术是虚拟现实和增强现实的结合，它既能够提供 沉浸式的虚拟环境，又能够在真实世界中添加虚拟信息。用 户可以在混合现实的世界中自由探索、学习和交流，获得更 为丰富和真实的体验。
人工智能技术
总结词
模拟人类智能的技术，能够自主地完成复杂任务。
详细描述
人工智能技术通过模拟人类的感知、认知、学习和决策等能力，使计算机能够自主地完成复杂任务。人工智能技 术的应用范围广泛，包括语音识别、图像识别、自然语言处理、智能推荐等。它能够提高生产效率、改善生活品 质，是当前信息技术领域的重要发展方向。
人工智能技术的实践与操作
人工智能技术
通过机器学习和深度学习算法，使计算机能够模 拟人类的智能行为和思维过程。
实践操作
使用人工智能工具和应用，如语音助手、智能客 服、自动驾驶等。
细胞培养技术培训ppt课件版
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下 生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。
细胞在生长期常有1-2个核仁，在细胞机能 状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。
若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等， 表明细胞代谢不良。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
倒 置 显 微 镜
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
液 氮 罐
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
《动物细胞培养技术及其应用》 说课稿
《动物细胞培养技术及其应用》说课稿尊敬的各位评委、老师：大家好！今天我说课的题目是《动物细胞培养技术及其应用》。
下面我将从教材分析、学情分析、教学目标、教学重难点、教法与学法、教学过程、教学反思这几个方面来展开我的说课。
一、教材分析本节课是高中生物选修三《现代生物科技专题》中的重要内容。
动物细胞培养技术是细胞工程的基础，也是现代生物技术的重要组成部分。
通过学习这一内容，学生能够深入了解细胞工程的基本原理和方法，为后续学习其他细胞工程技术如动物体细胞核移植、单克隆抗体的制备等打下坚实的基础。
教材首先介绍了动物细胞培养的概念和发展历程，让学生对这一技术有一个初步的认识。
然后详细阐述了动物细胞培养的过程，包括取材、原代培养、传代培养等环节，并强调了培养条件的重要性，如无菌、无毒的环境，适宜的温度、pH、气体环境等。
最后，教材介绍了动物细胞培养技术的应用，如生物制品的生产、基因工程药物的开发、器官移植等，让学生体会到这一技术在实际生产和生活中的重要价值。
二、学情分析学生在之前的学习中已经掌握了细胞的结构和功能、细胞的增殖等基础知识，对细胞有了一定的了解。
但对于动物细胞培养这一较为复杂的技术，学生可能会感到陌生和抽象。
因此，在教学过程中，需要通过直观的图片、视频等资料，帮助学生理解和掌握相关知识。
此外，高二的学生已经具备了一定的自主学习能力和探究能力，但在实验设计和分析方面还需要进一步的引导和培养。
三、教学目标1、知识目标（1）简述动物细胞培养的概念和过程。
（2）说出动物细胞培养的条件。
（3）举例说明动物细胞培养技术的应用。
2、能力目标（1）通过阅读教材和分析资料，培养学生获取信息和归纳总结的能力。
（2）通过小组讨论和实验设计，培养学生的合作探究和创新思维能力。
3、情感目标（1）体验科学研究的严谨性和科学性，培养学生的科学态度。
（2）关注动物细胞培养技术在生物医学领域的应用，增强学生对生物技术的兴趣和责任感。
细胞培养记录
细胞培养记录1.细胞房的打扫a.擦拭房间内所有物体的表面，地板（配巴士消毒液：将巴士消毒液滴到自来水中然后用干净的抹布擦拭操作台然后用其他抹布擦拭地板和冰箱，桌子的外表面）以及清洗拖鞋，拖鞋洗过后用酒精杀毒。
b.无菌操作台用大量的酒精喷洗然后用无屑纸巾擦拭，培养箱(电源关掉)拆卸用酒精喷洒清洗，并用无屑纸擦拭（注不能用抹布和卫生纸），然后将架子放在进擦拭赶紧的操作台面上（注意架子要正反用紫外杀菌45min）。
c.将培养箱的门打开，开始紫外杀菌1h。
d.一切就绪后关掉紫外，工作台送风30mine.培养箱中的加湿器要用高压灭菌过的超纯水，然后打开培养箱（T=37℃，CO2=5.5%）2.原代细胞的培养前期准备：原代细胞取回来后不要急于换液（因为细胞在取回来的途中受到外界干扰要待它生长稳定后在开始换液。
时间上的掌握是：取回来的第一天不用换，第二天一定要换液。
）开始换培养液：a.开始操作前要开紫外30min，然后送风15min，进入细胞房里后全身喷洒酒精。
b.取4个离心管标记为A,B,C,D（进入工作台面前卷起衣袖，带上手套开始喷洒酒精杀毒，手臂也要喷）用酒精喷杀毒然后进入工作台，原代培养瓶杀毒平放在工作台上（在取培养基的过程中可以将培养基竖起来取完后再横放），用5ml的枪头从原代培养瓶中移取5ml的培养基分别放到4个离心管中，然后再向这4个离心管中各加5ml的新完全培养基（即加有双抗和牛血清）-在加的过程中有气泡不会有影响的-{加旧的培养基的目的是：买回的细胞所处培养基和我们自己的培养基型号可能不一样，为了防止细胞不能快速适应新的环境}-------注在转移的过程中如果培养基滴到工作台上要迅速擦干净，不然快速用酒精喷洒再用无屑纸擦净：因为培养基会快速滋生细菌。
PBS,MTT就无所谓但还是要擦净。
c.将原代培养基倒掉，然后将其平放在桌面上(注：有细胞的一面在下面)盖上瓶盖。
d.开始消化。
用5ml的枪头移取（取枪头时用灭过菌的镊子取，并按上，然后稍微用手按紧，移液枪可以不用酒精杀毒）5ml的PBS，轻轻喷入瓶中，切务使很大的劲防止伤到细胞（枪头可以伸进去但最好不要碰到壁），紧接着轻轻摇晃，再将PBS倒掉，然后重复上述操作（即PBS洗两次，主要是洗培养基）e.加胰酶。
细胞培养(hela, 293,239T等细胞的培养)
Hela细胞传代培养操作步骤1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。
观察时拧紧盖子。
2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。
3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。
不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。
取小离心管一个，置于架子上。
4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。
放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。
5．取待传代的细胞。
打开versene，用酒精灯外焰烧。
烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。
把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。
6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。
（加versene 主要是为了将旧培养基洗去）。
在离心管中间部分将液体加入。
吸液体和加液体时都不要对着细胞。
7．打开胰酶，然后将versene弃掉。
换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。
加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。
8．将细胞放入37度孵箱。
放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。
使用二次消化法，去除容器中残余的细胞。
别忘了用旧培养基中和。
9．取细胞，镜下观察消化情况。
消化程度合适之后（细胞变圆，但不漂起），用尖吸管弃去胰酶，取离心管中的培养基加入细胞，吹打，至所有细胞从培养皿底部脱落下来。
用PBS洗细胞，versene对细胞有毒性，且不能被血清中和。
然后吸取至离心管中，800 rpm离心5分钟。
10．吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。
11．细胞离心毕，用吸新培养基的管弃去上清，先把泡沫吸走。
换吸量管吸取培养皿中培养基适量，加入离心管，小体积混匀，将细胞重悬，尖吸管吹匀。
12．擦计数板，用枪吸10ul的液体，计数。
不要把枪伸到离心管内。
13．吸量管吸取细胞悬液，加入新的培养皿中。
8讲第2节-动物细胞大规模培养技术
由于动物细胞生长的特殊性，如贴壁、脆弱等， 与微生物细胞培养不同，需要特别注意反应器结构 设计以及特物细胞培养的剪切力损伤？ 2.如何满足细胞贴壁要求又能充 分利用反应器空间体积？
1.动物细胞培养的生物反应器
机械搅拌式：浆叶改造
充气搅拌式：需要改造
一次性培养袋
在线分析技术
中空纤维生物反应器
中空纤维是一种细微的管状结 构，管壁为极薄的半透膜。 主体是由微孔中空纤维管束制成 的中空丝，纤维束由外壳包裹， 因此可分为中空内腔与中空外腔 两部分，每部分各有其进出口。 新鲜培养液从中空内腔导入。气 体在管体部分通过，其中一部分 则均匀地扩散至壳体内部。
3.良好的传质性能
4.强的机械性能：重复利用、保护细胞 5.好的热稳定性：高压灭菌
制备微载体的材料
1.人工合成聚合物 聚甲基丙烯酸-2 羟乙酯（PHEMA）、聚苯乙烯（PS）、聚丙烯酰 胺、聚氨酯泡沫、葡聚糖、低聚合度聚乙烯醇等。 2.天然聚合物及其衍生物 明胶、胶原、纤维素、甲壳质及其衍生物、海藻酸盐
一种微载体产品（Fibra-Cel）
人胚肾细胞HEK293
人上皮细胞—— SoloHill微载体上的生长
微载体对细胞生长具有显著的影响
问题：
微载体培养如何收获细胞？接 种细胞传代呢？
胰蛋白酶消化
球传球(bead to bead)技术
将贴满细胞的微载体与新鲜微载体混合，实现细 胞因随机碰撞而实现转移贴附在新载体表面的技 术。
转化细胞一般具有永生性，但是永生性不一定成瘤。 一般转化细胞并不致瘤。 致瘤性评价：接种到动物体内，发展形成肿瘤结 节，为生瘤阳性。 随着对肿瘤发生机制等研究的深入，转化细胞于20 世纪80年代获得批准用于生产。
细胞培养标准操作程序（SOP）
细胞培养标准操作程序（SOP）细胞培养标准操作程序（SOP）1．⽬的：为了保证培养细胞的正常⽣长，实验技术⼈员必须明确并正确执⾏细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。
2．适⽤范围：适⽤于来我院细胞室进⾏细胞培养⼯作的⼈员。
3．操作规程：3.1 培养液、PBS、胰蛋⽩酶的配制3.1.1 1000ml培养液的配制1、准备⽤品：培养粉、1000ml烧杯、玻棒、量筒、电⼦分析天平、PH仪、2～3天内的新鲜三蒸⽔（或新鲜反渗⽔）、NaHCO3粉、1000ml⽆菌玻璃瓶（100ml×10个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3个过滤器、注射器。
紫外线照台30min。
2、将培养粉⽤900ml新鲜三蒸⽔（或新鲜反渗⽔）溶解，并冲洗袋内残留粉末。
3、充分搅拌，按说明添加成分（如Invitrogen公司的RPMI-1640配制1000ml需加NaHCO3粉2.0g，Invitrogen 公司的DMEM 需加NaHCO3粉3.7g等），再充分搅拌。
⽆需加⾕氨酰胺，因该培养基⾥已含有。
4、⽤1M（1mol/L）HCl 调PH⾄7.0左右（细胞适宜在PH7.2～7.4⽣长，配制好后PH值会升⾼0.2～0.3，故配时调PH⾄7.0左右）。
5、⽤新鲜三蒸⽔（或新鲜反渗⽔）定容到1000ml。
6、配青霉素 80万/瓶 + 4ml 蒸馏⽔溶解配链霉素100万/瓶 + 4ml 蒸馏⽔溶解取0.5ml青霉素和0.4ml链霉素加⼊到1000ml培养液中，使其终浓度均为100U/ml，充分搅拌混匀。
7、在⽆菌操作台⾥⽤0.22um的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到100ml玻璃瓶中，玻璃瓶⼝⽤薄膜封⼝，盖上橡⽪塞，放-20℃保存备⽤。
注意：（1）配制培养液及调节培养液PH值所使⽤的HCl和（或）NaOH均需新鲜三蒸⽔（或新鲜反渗⽔）配制。
⼀般于配制当天制备，以保证⽔的纯度和质量。
（2）准备的100ml×10个玻璃瓶必须事先⾼压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸⽔（或新鲜反渗⽔）的容器均不需⾼压灭菌，⼲净即可。
《植物细胞培养技术的应用》 说课稿
《植物细胞培养技术的应用》说课稿尊敬的各位评委老师：大家好！今天我说课的题目是《植物细胞培养技术的应用》。
下面我将从说教材、说学情、说教法、说学法、说教学过程和说教学反思这六个方面来展开我的说课。
一、说教材（一）教材地位和作用《植物细胞培养技术的应用》是生物学领域中的一个重要课题。
植物细胞培养技术作为现代生物技术的重要组成部分，不仅在基础研究中具有重要意义，而且在农业、医药、食品等多个领域有着广泛的应用。
通过对这一内容的学习，能够让学生了解植物细胞培养的基本原理和方法，认识到生物技术在解决实际问题中的作用，培养学生的科学思维和创新能力。
（二）教学目标1、知识目标（1）学生能够理解植物细胞培养的概念和基本原理。
（2）掌握植物细胞培养的基本技术流程，包括培养基的制备、外植体的选择与处理、培养条件的控制等。
（3）了解植物细胞培养技术在农业、医药、食品等领域的应用实例。
2、能力目标（1）通过实验操作和观察，培养学生的动手能力和实验观察能力。
（2）通过对应用实例的分析和讨论，提高学生的逻辑思维能力和解决实际问题的能力。
3、情感目标（1）激发学生对生物技术的兴趣，培养学生的创新意识和探索精神。
（2）让学生认识到生物技术对人类社会发展的重要意义，增强学生的社会责任感。
（三）教学重难点1、教学重点（1）植物细胞培养的基本原理和技术流程。
（2）植物细胞培养技术在农业、医药、食品等领域的应用。
2、教学难点（1）植物细胞培养过程中培养基的成分和作用。
（2）植物细胞培养技术在实际应用中的关键问题和解决方法。
二、说学情本次授课的对象是_____年级的学生，他们已经具备了一定的生物学基础知识，但对于植物细胞培养技术这一较为前沿的生物技术，可能了解较少。
学生在学习过程中可能会遇到一些困难，如对抽象概念的理解、实验操作的掌握等。
但是，这个年龄段的学生思维活跃，好奇心强，具有较强的求知欲和探索精神，只要教师能够合理引导，激发学生的学习兴趣，就能够帮助学生克服困难，完成教学目标。
《细胞培养技术》课件
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，通过将细胞生长在适宜的培养基中， 实现细胞的体外培养和繁殖，为研究细胞和开发生物制品提供了重要手段。
什么是细胞培养技术
1 定义
2 历史
细胞培养技术指的是将细胞从生物体中取出， 在适宜的培养基中进行体外培养的技术。
细胞培养技术起源于20世纪初，随着科学技 术的进步，逐渐成为生物学和医学领域的重 要工具。
常用的细胞培养方法
传统细胞培养方法
通过将细胞放置在培养皿中，利用培养基中的营 养物质供养细胞并促进其生长和繁殖。
三维细胞培养技术
通过构建具有三维结构的培养环境，模拟生物体 内的细胞生长环境，促进细胞在体外的功能表达。
动物细胞培养技术
主要应用于医学研究和生物制药领域，常用于人 类或动物细胞的培养和研究。
环保领域
细胞培养技术有助于环境修复和污染物降解，如 污水处理等。
细胞培养技术的挑战和发展趋势
1 挑战
细胞培养技术面临着细胞变异、细胞老化、 污染等问题，需要不断解决和改进。
2 发展趋势
随着科技的不断发展，细胞培养技术将越来 越趋向自动化、高通量和个性化。
结语
1 总结
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，推 动了许多领域的发展和进步。
2 展望
未来，细胞培养技术将继续发展，为人类的 健康和社会发展做出更大贡献。
细胞培养基础知识
1 细胞的分类
2 培养基的种类
3 细胞培养条件
细胞可以根据形态、功能、 组织来源等进行分类，不 同类型的细胞需要不同的 培养条件。
培养基可以根据成分和用 途进行分类，常见的有无 血清培养基、无动物成分 培养基等。
细胞的培养需要一定的温 度、湿度、二氧化碳浓度 等环境条件，以及适当的 营养物质供给。
细胞培养技术17577PPT课件
精品ppt
6
整个细胞周期可划分为G1 → S → G2 → M → G1，如下图所示：
精品ppt
7
细胞生长曲线
体外培养的细胞生长达到一定密度后，都需传 代。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细 胞数量和细胞增殖速度等有关。接种细胞数量大、 细胞基数大、相同增殖速度条件下，细胞数量增 加与饱和速度相对要快。连续细胞系和肿瘤细胞 系比初代培养细胞增殖快，培养液中血清含量多 时细胞增殖比少时快。细胞增殖一代，一般要经 过以下三个阶段：
凋亡发生的过程表现（细胞缩小→致密染色质 边集→核碎片→凋亡小体） 1、丧失了特殊的表面结构（微绒毛等）和接触 区，形成光滑的轮廓，从周围活细胞中分离出来 2、细胞缩小：①胞浆细胞器集中
②胞膜出芽或起泡 ③细胞皱缩；
精品ppt
14
3、保持胞浆细胞器完整性
扫描电镜下，细胞表面呈奇特火山口样外观，① 线粒体不肿胀，内膜不破裂；②短暂滑面内质网 （SEN）扩张，扩张间隙与细胞表面融合；③有 时有聚积排例的半结晶状核糖体；④可有与细胞 表面平行的微丝束。
取材 无菌环境中，从机体取出某种组织（视实验目的
而定），经过一定的处理（如消毒、消化分散等） 后接入培养器血中，这一过程称为取材。取材后 应尽快培养，因故不能马上培养时，置4℃的培养 液中保存，但时间不能超过24h。取组织时应严 格保持无菌，同时也要避免接触其他有害物质。 取病理组织、皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌， 为减少污染，可用500～1000单位/ml青、链霉素 的PBS液漂洗5～10min。 （无论是传代培养还是原代，对细胞进行操作切 记：细心，专心，动作要轻）
精品ppt
8
细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏
细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏1实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。
目前细胞冻存多采用甘油或DMSO作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
2实验方法一：材料小鼠，生理盐水，100ml灭菌烧杯，15ml离心管，培养皿，滴管，无菌镊子、剪刀，筛网，泡沫板，大头针，酒精灯，培养瓶，培养液，PBS，0.25%胰酶，超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜，显微镜，计数板，离心机，恒温水浴箱，冰箱（4℃、-20℃、-70℃），液氮罐，冻存管，冻存液，废液缸等。
二：方法（1）原代培养：1.取出小鼠后沥干酒精，放入超净台内，固定在泡沫板上。
2.用镊子提起皮肤，用解剖剪剪开皮肤一个横切口，将皮肤向上撕开，然后剪开肌肉等，暴露出腹腔，在左侧找到脾脏，用弯头眼科镊取出脾脏，置于无菌培养皿中。
3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次，并剔除多余无用的组织。
4.将筛网置于平皿中，脾脏置于筛网上，用弯头镊镊住，轻轻在筛网上进行碾磨，同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。
5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中，离心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培养液，吹打混匀，取样计数。
7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中，轻轻摇晃混匀，在培养瓶上。
面做好标志，注明细胞、组别及日期。
《细胞培养技术》课件
contents
目录
• 细胞培养技术简介 • 细胞培养的基本原理 • 细胞培养的实验操作 • 细胞培养技术的应用实例 • 细胞培养技术的发展前景与挑战
01
细胞培养技术简介
细胞培养技术的定义
细胞培养技术是指在体外模拟体 内环境，用于培养细胞的技术。
该技术通过提供适宜的营养、气 体和生长因子等条件，使细胞在
目前细胞培养技术面临的挑战
细胞来源
目前细胞培养的细胞来源有限，主要来源于肿瘤细胞和胚 胎干细胞，需要寻找更为安全、可靠的细胞来源。
培养环境
细胞在体外培养过程中需要模拟体内的生理环境，如温度 、湿度、pH值等，如何维持这些环境参数的稳定是当前 面临的重要挑战。
免疫排斥
在组织工程和器官移植等领域，免疫排斥反应是影响治疗 效果的重要因素之一，如何降低免疫排斥反应也是当前研 究的重点。
将细胞从旧的培养液中分 离出来，并接种到新的培 养液中。
细胞冻存
将细胞保存于低温或冷冻 状态，以便长期保存或未 来使用。
细胞培养中的注意事项
严格无菌操作
避免微生物污染，保证细胞的 健康生长。
适宜的细胞密度
确保细胞获得足够的营养和空 间，促进其生长和分裂。
定期更换培养液
清除代谢废物，提供新鲜的营 养物质。
01
02
03
04
生物医学研究
用于研究细胞的生长、发育、 分化、凋亡等过程，以及探索 疾病的发生机制和治疗方法。
药物研发
用于筛选和验证药物的有效性 和安全性，以及研究药物的细
胞作用机制。
再生医学
用于组织工程和干细胞治疗等 领域，为损伤修复和疾病治疗
提供新的手段。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一．物品准备培养室的灭菌：1.定期打扫培养室：每周打扫一次，先用自来水拖地，擦桌面，超净工作台等，然后用3‰的来苏或新洁尔灭擦拭。
2.二氧化碳培养箱的灭菌：先用3‰的新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精或0.5%过氧乙酸擦拭，用紫外灯照射。
3.实验前打开紫外灯照射30分钟。
4.试验后用75%酒精3‰的新洁尔灭擦拭超净工作台，边台，倒置显微镜的载物台，打开紫外灯照射30分钟。
5.实验人员的实验准备：肥皂洗手，穿上隔离衣，戴好帽子，口罩，换上入室拖鞋。
戴上手套，用75%酒精棉球擦拭双手。
无菌操作演示：1.凡带入超净工作台的酒精，PBS，培养基，胰蛋白酶的瓶子均要用75%的酒精擦拭瓶子外面。
2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌。
4.继续使用的器皿（如瓶盖，滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻，准确，如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的液体时，要注意更换吸管，防止交叉污染。
常用物品准备：1.玻璃吸管：实验室常用的玻璃吸管，粗的一端要用棉花盖上，防止吸液时液体进入吸头而造成污染。
再将其装入吸管筒。
2.培养皿：要用专用的器皿装好或用牛皮纸包好再进行消毒。
3.离心管：有盖离心管要用盖子盖好。
无盖离心管要用铝箔纸盖好，防止灰尘掉入管内。
放入饭盒，用报纸包好，写上日期。
4.盐水瓶：可用铝箔纸或者牛皮纸封口，牛皮纸封口把长约20cm×宽3cm左右的牛皮纸一张反折叠1/3，包裹瓶口，用报纸包好，写上日期。
5.将所有要消毒的物品放入烤箱，注意不耐热的和塑胶类的物品不能干烤。
打开开关，调节温度至160℃，消毒两小时。
温度上升到160°C时大概需要40分钟，因此要算上这部分时间。
消毒完毕，关掉开关，当温度降至50度左右时方可取出物品。
物品使用的有效期为7-14天。
二．细胞培养常用耗材介绍1. 培养板：6孔板：多用于原代培养或免疫组化等实验12孔板：用于细胞分离培养24孔板：用于记录细胞生长曲线48孔板：用于流式细胞数等96孔板：多用于NTT或克隆等实验，也可以用来测蛋白浓度2. 培养瓶：1）25cm2的培养瓶：注意此种培养瓶有透气盖，放入培养箱时无需松盖；另外一种培养瓶：无透气孔，放入培养箱时需要松盖半圈。
．2）50cm2的培养瓶：也无透气孔，放入培养箱时需要松盖半圈。
同一型号的培养瓶，有透气盖的价格较贵。
3．培养皿：直径为35mm，60mm，90mm。
盛取，分离，重离组织或测细胞毒性，集落形成，单细胞分离，同位素参入，细胞繁殖等实验使用。
4. 离心管：分别有50ml，15ml，10ml。
5. 冻存管：用于细胞和组织的冻存。
三．培养基的配制1.滤器的准备：（1）检查超滤装置有无裂缝，拧开上层滤器，取滤膜一张，光滑面朝上，放在滤器的滤盘上。
盖好滤器，拧紧滤器。
（2）在滤器两侧的小孔塞上棉花，上盖的三个小孔也塞上棉花。
（3）一侧小孔套上接头，另一侧小孔套上小盖帽。
分别用小包布包好。
最后用大包布将整个滤器包裹好。
2.盐水瓶的准备取铝箔纸封住瓶口，注意要防止灰尘落入瓶内。
再用报纸或牛皮纸包好。
并写上日期。
3.盐水胶塞的准备用盒子将盐水胶塞装好，再用报纸包好，最后写上日期。
4.高压蒸汽灭菌法处理：（1）打开电源开关，推锁，开盖。
拿起载物篮，检查水位。
当水位低于底部铁皮时需补加蒸馏水。
（2）放回载物篮后，把物品放入载物篮内。
盖上盖子，上锁。
设置温度为121度，消毒时间为20分钟。
（3）高压完毕后，待温度降至90度以下方可打开高压锅，取出物品。
放入37-56度的烤箱烤干物品，消毒物品在干燥的环境下可保存2周。
5.培养基的种类实验室常用的培养基有：1）DMEM培养基，每盒培养基有10小包×1L。
含有其他成分，如各种氨基酸，糖类及蛋白等。
黑体字特别注明，每升培养基需加碳酸氢钠克数。
（3.7g）2）RPMI 1640培养基：每盒10小包×1L。
黑体字特别注明每升培养基需加碳酸氢钠2.0g。
这两种培养基广泛应用于各种初代病毒宿主细胞的细胞培养及单一细胞培养；如A9，3T6等细胞系的培养。
6.培养基的溶解：以RPMI 1640培养基为例：（1）按要求称量碳酸氢钠2g，还要称取HEPES 2g 。
（HEPES是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的PH范围，细胞培养常用10mmol/L，对细胞无毒性作用。
）分别将碳酸氢钠，HEPES，培养基倒入锥形瓶内。
（2）先取900ml超纯水（因为最后还要定容）。
往锥形瓶倒入一部分超纯水，反复将包装袋里的培养基冲洗干净。
（3）加入已经分装的青霉素和链霉素各10万单位。
（即青霉素80万单位加超纯水4ml，溶解后取0.5ml。
链霉素100万单位加超纯水5ml溶解后取0.5ml）。
（4）沿着瓶壁放入搅拌子，用铝箔纸封口。
把培养基放在搅拌器的磁盘上。
打开电源开关，调节转速至缓慢搅拌。
注意不要打）5（．开加热开关。
因为加热会导致培养基的营养成分消失。
（6）搅拌器缓慢搅拌一小时。
7．调节PH值，定容（1）关掉磁力搅拌器。
PH计使用前先用这三种标定液表情后才可使用。
用蒸馏水冲洗电极，再用吸水性强的纸擦干水分。
（2）将电极放入培养基内，按压读数键。
用碳酸氢钠和稀盐酸调节培养基的PH值为7.2-7.4之间。
使用完后，用蒸馏水冲洗电极。
用吸水纸吸干水分。
套上电极保护套，放回原位。
（3）最后定容，补加超纯水至1000ml。
8．培养基的过滤与分装。
（1）培养室及超净台用紫外线照射30分钟。
（2）在培养室内打开包布。
取出滤器，打开上层盖子。
倒入培养基。
（3）解开包裹接头的包布。
接上负压泵。
按压负压泵手柄。
注意压力不能超过-15kpa。
注意观察过滤情况。
如果滤液太慢，可能是培养基还未完全溶解，颗粒堵塞滤孔所致。
如果太快，要注意滤膜有无穿孔。
（4）穿戴手套，用75%的酒精消毒双手。
培养基接近滤完时，要及时分离负压泵，防止液体滤干后，负压过大而把滤膜孔的微粒吸入。
（5）关超净台的紫外灯，打开抽风和日光灯。
将培养基放入超净台，拧紧上层滤器盖。
点燃酒精灯。
（6）取下接头，打开另一端的包布，取下小盖帽。
注意保持这边小孔无菌，因为液体要从这边小孔倒出，用火焰烧灼镊子，取下棉花。
（7）打开报纸，用镊子取下瓶口的牛皮纸，用火焰烧灼瓶口，倒入培养基。
每个盐水瓶大概加入90ml的培养基，因为使用时还要加入10%的血清。
用镊子取盐水胶塞，拿住胶塞，一边旋转一边压进去。
用火焰再次烧灼边沿和瓶口外围。
注意：抽滤装置的出口千万不要用火焰烧灼，否则会使其变形。
（8）最后用油性笔在盐水瓶上写上培养基的名称和日期。
放入冰箱-20度保存。
培养基使用前，要吸取少量培养基放在培养箱培养24h。
确定没有污染后才可使用。
四．PBS的配制（1）配备1L的PBS需要氯化钠8g，氯化钾0.2g，12水磷酸氢二钠3.489g，磷酸二氢钾0.2g。
（2）将称好的试剂倒入三角烧瓶内。
加入蒸馏水900ml。
放入搅拌子（3）置搅拌器上溶解。
（4）调节PH值。
PH计使用前先用三种标定液调试。
最后调节PH值在7.2-7.4之间。
（5）定容，加蒸馏水至1000ml。
（6）用定性滤纸过滤缓冲液，分装到盐水瓶中。
注意液体不能装得太满，封口签瓶口与胶塞之间放一条棉线，以防高压时瓶内气压将胶塞顶出。
将分装后的缓冲液封好，写上名称和日期。
（7）放入高压锅，121℃20min灭菌。
（8）取出放室温冷却后放入4度冰箱保存。
五．小鼠细胞取材骨髓间充质干细胞的原代培养：的方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞在MSC目前常用的分离低血清培养基中有贴壁优势特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化及扩增MSC的目的。
密度梯度离心法即根据骨髓中各细胞成分比重的不同，分离单核细胞进行贴壁培养。
二者本质上无多大区别。
下面以全骨髓法为例：1.实验用品的准备：器械盒（内装：大剪刀一把，小剪刀2把，镊子4把，止血钳2把，200目滤器1个），培养皿3个，培养瓶1个，5ml注射器2个，含10?S的培养基，PBS液，吸管，吸头，离心管，离心架，取材木板，大头针4个，白瓷缸一个（内装75%酒精）2.实验前将实验要用物品一一摆放在超净工作台里，照射紫外灯。
3.在培养室的试验台上铺上报纸，放上取材板和大头钉，照射紫外灯。
4.PBS和培养基放入水浴箱中37℃预热30分钟。
实验过程：1.紫外灯照射培养室30分钟。
关闭超净工作台紫外灯。
2.戴上帽子和口罩。
戴上手套，75%酒精洗手。
3.在超净台内准备取材用品，在火焰旁打开PBS。
烧灼瓶口和盖子，放在瓶架上。
在火焰旁边打开培养基，烧灼瓶口和盖子，放在瓶架上。
4.取出吸管，套上吸头，过火烧灼，放入PBS和培养基内。
5.取培养皿两个，吸取适量PBS放入培养皿内。
取大剪刀一把，眼科镊两把，眼科剪一把，止血钳两把。
6.断颈处死小鼠，放入75%的酒精内浸泡5分钟，用大头钉固定四肢。
在一侧大腿处尽量剪大一些范围，注意避开股动脉，暴露股骨，用大剪刀在关节处剪断股骨。
7.离体的股骨放入培养皿的PBS缓冲液中，拿到超净台里，点燃酒精灯，取两个眼科镊过火烧灼，用眼科镊分离股骨上的肌肉。
8.取另一个培养皿，吸取PBS，将股骨转移到另一个干净的培养皿内彻底将肌肉清楚干净。
9.再将干净的股骨转移到另一干净培养皿内，取眼科剪，过火烧灼，将股骨两端头端剪断，暴露骨髓腔。
10.取培养皿一个，吸取5ml培养基放入培养皿内，将股骨放入培养基中，取5ml注射器，去掉针头盖，吸取培养基。
左手用镊子夹起股骨，右手持注射器将针头插入骨髓腔，缓慢按压注射器，将骨髓腔内的骨髓冲出，用培养基反复冲洗，直至骨髓腔内的骨髓冲净。
11.取出离心管，过火烧灼，取出吸管，套上吸头，过火烧灼，放入离心管内。
取出200目的滤网放入一新的培养皿内。
吸取含有骨髓的培养基，经目滤器过滤肌肉血块等杂物。
12.用镊子取走滤网，取培养瓶一个，瓶口和盖子过火烧灼，吸取含骨髓的培养基入培养瓶内。
过火烧灼瓶口和盖子，盖上培养瓶。
用油性笔在培养瓶上写上培养细胞名称和培养日期。
13.收拾超净台上的物品，方可盖上盖子。
14.在显微镜下观察细胞的密度，形态，通常一个股骨的骨髓接种一个25cm2的培养瓶，显微镜下可见有大量悬浮细胞，主要为悬浮的红细胞。
15.松开半圈培养瓶盖，放入37度，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。
16.24小时候后行首次半量换液，72小时后行全量换液，漂浮的不贴壁细胞大部分随换液除去。
可见较多的贴壁细胞散在生长，分布不均，少部分呈集落性状或单个细胞存在。
胞体呈长梭形，两端有长凸起，胞质内有颗粒较多，折光性差，核不清楚。
在第七天时，形成明显克隆，经传代纯化的MSC细胞在形态上更趋于一致，围成纤维细胞样。
六．胰蛋白酶的配制1.溶解：胰蛋白酶的作用是：使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。