1%琼脂糖胶的制备

1目的:检验DNA质粒大小或者降解情况。

2范围:适用于DNA质粒性状初步判断。

3责任:检验员对本规程的实施负责.

4内容:

4.1仪器装置:DYCP-31E琼脂糖水平电泳仪,微量移液器,水平电泳槽

4.2试剂:1.电泳缓冲液（TAE）

40 mmol/L Tris-乙酸

1 mol/L EDTA

(配制方法：24.2克Tris碱，5.71ml冰乙酸，10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，定容至5000ml）

2.λDNA/HindIII分子量标准(marker,-20℃保存)

3．Goldview—核酸染料（配置marker 用得上）

4. 1%琼脂糖凝胶溶液

（配制方法：称取琼脂糖1克，加入100ml TAE电泳缓冲液）

4.3制作过程:

1．将100ml的1%琼脂糖凝胶溶液，100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀。

2．取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.

取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在

固定位置放好梳子待琼脂糖凝胶冷却至60℃左右时，加入5μL Goldview，摇

匀，轻轻倒入电泳胶模中，琼脂糖凝胶的厚度在3～5mm。倒胶时要避免产生气

泡，若有气泡可用吸管小心吸去。

3．琼脂糖凝胶凝固后，在室温放置20分钟，小心拔掉点样梳子保持点样孔的完好。

4．取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过凝胶2mm.

4.4加样:在点样板上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于

1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).

4.5 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.

4.6拍照：观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存。

5结果判断

根据marker的大小来初步判断条带的正误，根据条带初步判定质粒是否降解，或者是否单克隆，或者杂带。