硝苯地平降压作用及机制分析

兰州大学医学机能学实验
硝苯地平降压作用及机制分析
实
验
计
划
书
设计人：李笑杨颖陆政日郭云凯
第一临床医学院2010级医学临床医学四班
2013年3月5日星期二
一、实验名称：
硝苯地平降压作用及机制分析
二、实验目的：
1.学习肾上腺素诱发家兔高血压和心律失常模型的方法和生物信号采集系统记录钙通道阻断药物对血压和心律的变化数据。

2.学习离体器官组织灌流的方法，掌握兔主动脉环制备技术
3.通过在体实验观察硝苯地平的降压作用；观察硝苯地平对去甲肾上腺素和 KCl诱导的离体血管平滑肌收缩作用影响，从而分析其降压作用机制。

三、实验原理：
1.当大剂量动脉注射，血管平滑肌a1受体激动使舒张压和收缩压均上升（参考《药理学》p79~80），采用耳缘静脉滴注可使血压维持长时期的升高，可用于高血压模型的复制。

2.目前应用于临床的钙通道阻滞药主要是选择性作用于电位依赖性Ca2+通道L亚型的药物。

硝苯地平又名心痛定，属于第一类双氢吡啶类钙通道阻断剂，可在通道水平上选择性地抑制Ca2+能经细胞膜上的Ca2+通道进入细胞内，减少细胞内Ca2+浓度，抑制肌细胞收缩，扩张阻力血管，使心排出量增加，明显降低血压。

3.维拉帕米通过降低窦房结自律性使窦房结冲动发放频率降低，心律减慢。

舒张冠状动脉，增加缺血心脏冠脉流量和冠脉侧支循环。

对外周血压也有舒张作用。

降低外周阻力，使血压下降。

4.高浓度的氯化钾液（60～100mmo1）可使血管平滑肌细胞去极
化，促使电压门控钙通道开放，引起胞外Ca2+内流，导致血管平滑肌收缩。

能阻断高钾液此作用的药物则为电压门控钙通道阻断药。

5.NE与血管平滑肌细胞α受体结合，可导致血管平滑肌收缩；与ß受体结合则导致血管平滑肌舒张。

NE与α受体结合能力较与ß受体结合的能力强，故NE具有很强的血管收缩作用。

能阻断NE此作用的药物则为受体依耐性钙通道阻断药。

四、实验对象：
家兔
五、药品与器材
生理盐水，25%氨基甲酸乙酯，0.5%肝素，1:10000的肾上腺素，0.1g/L米贝地尔，0.1g/L硝苯地平溶液0.2ml，克氏液，去甲肾上腺素，KCl，10-5mo1／L硝苯地平，兔手术器械，BL-410生物信号采集与处理系统，张力和压力传感器，灌流肌槽，丝线，氧气袋。

六、实验方法：
（一）在体实验
1.选取9只正常成年健康重相近的家兔作为实验对象（若条件允许，可以选择24只，本实验以9只为例。

依据为：中等动物（豚鼠、家兔）每组8-20例：计量资料每组不少于8例，计数资料每组不少于20例《实验动物方法学》孙敬方,人民卫生出版社）；
2.固定和麻醉：
取家兔称重后，耳缘静脉注射耳乌拉坦4ml/kg麻醉，仰卧位固定于手术台上。

留置头皮针，通过耳缘静脉输入生理盐水。

3.颈动脉插管：
钝性分离一侧颈总动脉，靠动物头侧的部分尽可能多分离些，并在其远心端穿线结扎，用动脉夹夹住动脉的近端。

在此段血管下穿一条线以备套管插入后结扎用。

用眼科剪在尽可能靠远心端处作一斜形切口，约剪开管径的一半，然后把动脉插管经切口向心脏方向插入动脉，用已穿好的丝线固定插管，以防插管从插入处滑出。

三通管的一侧与连接第一通道的压力换能器相连接，打开动脉夹，进入BL-40生物信号采集与处理系统，记录血压曲线。

其另一侧连接预先含有适量肝素生理盐水的50ml注射器，并暂时夹闭导管，以备放血用。

4.复制高血压模型：
耳缘静脉滴注的生理盐水换为1:10000的肾上腺素（13滴/min），观察血压变化，待血压维持在一定高血压状态一定时间后即可开始试验。

5.分组：
采用随机数字表法将9只家兔随机分为三组（A模型组、B阳性对照组、C硝苯地平组），每组3只，并用记号笔做好标记（A1~3；B1~3；C1~3）；
6.给药：
A组家兔耳缘静脉注射生理盐水0.2ml
B组家兔耳缘静脉注射0.1g/L米贝地尔溶液0.2ml
C组家兔耳缘静脉注射0.1g/L硝苯地平溶液0.2ml
观察血压变化一段时间，稳定维持一段时间后，保存数据，做好记录。

7.【观察项目和记录】
表一：硝苯地平降压作用实验结果记录表
组别编号正常血压高血压模型给药后
A组1 2 3
B组1 2 3
C组1 2 3
8.数据处理：
计量资料以（x±s）表示，各组对各项指标求得三只家兔平均值，给药前后的比较采用配对t检验，组间比较采用单因素方差分析。

（二）离体实验
1.标本的制备：
取4只兔击头致昏后，颈动脉放血，立即开胸取出胸主动脉，仔细剥离血管周围的结缔组织，制成3 mm ×30 mm的主动脉螺旋条，悬挂于盛有20 ml Krebs液的灌流肌槽中，两端分别连在肌力换能器
和肌槽底部的钩上，恒温于(37±0．5)℃，通入纯氧，静息负荷约2 g，每15 min换液1次，用BL-410系统记录肌张力变化，稳定2 h后开始实验。

（每只家兔制作2个主动脉螺旋条，共有样本量8）
图1 离体主动脉环实验装置示意图
2.分组：
采用随机数字表法将8个胸主动脉条随机分为两组，并用信封分配隐藏的方法确定去甲肾上腺素组（E）和KCl（F）组。

3.E组：
加入3mo1／L氯化钾100μ1，观察并记录第5分钟动脉环的收缩的最大张力。

Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值。

加入10-5mo1／L硝苯地平200μ1，15min后再加入3mo1/L氯化钾200μl。

记录动脉环收第5分钟收缩的最大张力，之后用Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值。

4.F组：
加入10-3mo1/L肾上腺素100μ1，记录第5分钟动脉环的收缩的最大张力，用Krebs液反复脱洗标本使其张力回复初始值。

加入10-5mo1／L硝苯地平200μ1，15min后再加入10-3mo1/L肾上腺素100μ1。

记录动脉环收第5分钟收缩的最大张力，之后用Krebs 液反复脱洗标本使其张力回复初始值。

5.【观察项目和记录】
表二：硝苯地平降压机制分析实验结果记录表组别编号正常肌张力高K+/NA 给药后
E组1 2 3 4
F组1 2 3 4
（4）数据处理：
ａ计算抑制率：(给药前张力-给药后张力)/给药前张力×100% ｂ所有实验结果均采用t检验，P<0.05为有统计学显著性，数据以（x±s）表示
七、预期结果：
（一）在体实验
1.若正常血压和高血压建模后的平均血压有统计学差异（P<0.05），证明建模成功。

2.若实验组（B组）给药前后血压有统计学差异（P<0.05），证明硝苯地平溶液有降压作用。

3.若实验组（B组）和空白对照组（A组）之间给药后血压有统计学差异（P<0.05），排除了溶液降压的因素。

4.实验组（B组）和阳性对照组（C组）之间给药后血压进行比较，再次验证降压作用。

（二）离体实验
1.E组给药前后有统计学差异，F组给药前后无统计学差异，即位电压依赖性钙通道阻断药。

八、参考文献
1.桂郁金水提液对家兔主动脉的影响及机制初探
2.苦丁茶皂苷类物质对家兔离体胸主动脉条影响实验研究
3.前列安通片对去甲肾上腺素诱导家兔离体膀胱三角肌收缩的影响
4.硝苯地平注射液的实验动物药效学和临床验证。