AKTA 实验室层析柱装柱技术介绍

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akta层析系统参数

AKTA层析系统参数1. 介绍AKTA层析系统是一种高效且可靠的分离技术，用于生物分子的层析纯化。

层析系统参数是指在使用AKTA层析系统时需要设定的一系列参数，包括流速、洗脱梯度、柱温等。

正确设置这些参数能够保证分离效果和纯化纯度。

在本文中，我们将详细探讨AKTA层析系统参数的选择和优化，帮助您合理使用该系统并取得最佳的分离效果。

2. 流速参数流速是指液相在层析柱中的通过速率。

流速参数的选择对于分离效果和纯化纯度有很大的影响。

2.1 比线速度比线速度是流速参数的常用表示方法，其定义为单位时间内液相通过层析柱截面积的体积。

一般来说，比线速度越大，分离效果越好，但可能会降低纯化纯度。

建议在初始实验阶段采用较低的比线速度，然后根据样品的性质和分离需求逐步调整。

2.2 线速度线速度是流速参数的另一种表示方法，其定义为单位时间内液相通过层析柱的线性距离。

线速度与比线速度之间存在线性关系，可以相互转换。

3. 洗脱梯度参数洗脱梯度是指在层析过程中逐渐改变洗脱缓冲液的成分，以实现分离目标。

洗脱梯度参数的选择对分离效果和纯化纯度起着至关重要的作用。

3.1 起始缓冲液起始缓冲液是指开始层析时的溶液组成。

一般来说，起始缓冲液的性质应与待纯化物质相似，以提高分离效果。

如果待纯化物质溶解在缓冲液中，可以选择与之相同或类似的缓冲溶液。

3.2 洗脱缓冲液洗脱缓冲液是指在层析过程中使用的溶液，通过改变洗脱缓冲液的成分来实现分离目标。

选择合适的洗脱缓冲液需要考虑待纯化物质的亲和性和纯化纯度要求。

3.3 洗脱梯度洗脱梯度是指在层析过程中逐渐改变洗脱缓冲液的组成。

一般来说，采用线性梯度或者非线性梯度都可以实现分离效果。

线性梯度容易操作，但纯化纯度可能相对较低；非线性梯度可以提高纯化纯度，但操作难度较大。

根据实验要求和待纯化物质的特性选择合适的洗脱梯度。

4. 柱温参数柱温是指在层析过程中控制的柱子温度。

柱温参数的选择对于柱子的稳定性和分离效果有一定影响。

层析柱原理和使用方法

层析柱原理和使用方法层析柱是一种常用的分离技术，它基于化合物在不同相（固相和液相）之间的分配系数不同而实现分离。

层析柱广泛应用于化学、生物、药物等领域，是一种非常有效的分离和纯化方法。

本文将介绍层析柱的原理和使用方法，帮助读者更好地了解和掌握这一技术。

层析柱的原理主要是利用化合物在固相和液相之间的分配系数不同而实现分离。

当混合物通过固定在柱子中的吸附剂时，不同成分因其在吸附剂上的亲和力不同而在柱子中以不同速度移动，从而实现了混合物的分离。

在层析柱中，固相是固定在柱子中的吸附剂，液相是混合物溶解在的溶剂。

使用层析柱的第一步是选择合适的固相。

固相的选择应根据待分离化合物的特性来确定，例如极性、分子大小等。

选择合适的固相可以提高分离效率和纯度。

常见的固相包括硅胶、氨基硅胶、C18等。

第二步是装填柱子。

在装填柱子时，需要先将柱子底部封闭，然后依次加入固相和液相，确保固相均匀分布在柱子中。

装填后，需要进行适当的压缩，以确保固相不会因为柱子振动而移动。

第三步是样品加载。

将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，然后通过柱子，让混合物在固相上分配。

不同成分会根据其在固相和液相之间的分配系数不同而以不同速度通过柱子，从而实现分离。

第四步是洗脱和收集。

洗脱是指用洗脱剂将化合物从固相中洗出，收集不同时间点洗出的溶液，可以得到不同成分的纯度较高的化合物。

层析柱是一种非常有效的分离和纯化方法，它可以根据不同的固相和液相组合，实现对不同化合物的分离。

在实际应用中，需要根据待分离化合物的特性和需要纯度来选择合适的固相和液相，并严格按照操作步骤来进行操作，以确保分离效果和纯度。

总之，层析柱是一种重要的分离技术，它基于化合物在不同相之间的分配系数不同而实现分离。

掌握层析柱的原理和使用方法，对于化学、生物、药物等领域的研究和生产都具有重要意义。

希望本文能够帮助读者更好地了解和掌握层析柱技术，促进科研和生产的进步和发展。

层析柱干法装柱步骤

层析柱干法装柱步骤层析柱干法装柱，这事儿就像搭积木，得有个章法。

咱先得把层析柱给准备好。

这层析柱就好比是一个特殊的小房子，要装东西进去的。

得保证这个小房子干净又干燥，要是里面脏兮兮或者湿漉漉的，那后面装进去的东西可就“住”得不舒服了。

就像你自己的家，如果到处是灰尘和水，你能乐意吗？再来说说填料。

填料是这个柱子里的关键角色，就像是小房子里的家具。

把填料从容器里取出来的时候，动作要轻，可不能像个莽撞的大汉似的。

为啥呢？因为填料如果被弄得乱七八糟，它在柱子里就没法好好排列了。

这就好比你整理衣柜，要是把衣服都胡乱扔进去，找衣服的时候可就麻烦了。

现在开始往柱子里装填料。

把柱子一端封闭好，就像给小房子关上门，只留一个入口。

然后慢慢地把填料倒进去，这个过程要均匀，就像往杯子里倒水，要是一股脑儿全倒进去，水就会溅得到处都是。

填料倒的时候，得时不时晃一晃柱子，让填料在里面铺得更均匀。

这就像你铺床的时候，要把被子铺平展，要是有褶皱，睡起来就不得劲儿。

可不能心急，要是填料倒得太快或者不均匀，那柱子里就会有缝隙或者空洞，这可不行，就像房子的墙有了漏洞，那还怎么住人呢？填料倒得差不多的时候，要轻轻敲打柱子的管壁。

这就像是在给填料做按摩，让它们在柱子里更紧实。

不过敲打的力度得掌握好，不能太用力，不然就把填料给敲坏了。

这就好比你敲鸡蛋，太用力鸡蛋就破了，填料要是破了，那整个柱子的功能可就受影响了。

等填料装得差不多了，再把柱子顶端多余的填料弄平。

这就像是给房子的屋顶做最后的修整，要弄得平平整整的。

要是不平，那后面使用的时候就会有问题。

装完柱之后，可别忘了检查一下。

看看柱子里的填料是不是均匀，有没有什么地方看起来不太对劲。

这就像是做完一件手工品，得检查检查有没有瑕疵。

要是发现有问题，就得重新调整，总不能让一个有毛病的柱子就这么开始工作吧，那肯定会出乱子的。

干这个层析柱干法装柱啊，就得像照顾自己的小宝贝一样细心。

每个步骤都不能马虎，每个细节都很重要。

蛋白纯化AKTA操作说明(二)

蛋白纯化AKTA操作说明（二）引言概述：本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。

蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一，能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。

AKTA操作是常用的蛋白纯化系统，本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项，帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。

正文：一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源，并打开主机电源开关。

2. 检查液氮罐中的液氮是否充足，并确保液位高于所需运行温度。

3. 打开冰盒，准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。

二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料，并正确装配到AKTA系统中。

2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝，将填料注入色谱柱中，确保填料均匀。

3. 同时，注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封，以免液体泄漏。

三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面，并选择“新建方法”。

2. 在方法设置界面中，设定蛋白纯化的各个步骤，如进样、洗脱等流程参数。

3. 根据实验需求，选择合适的梯度洗脱方案，并输入相应的洗脱液体浓度。

四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质。

2. 根据纯化需求，可进行某些特定试剂的添加，如酶切剂、亲和标记剂等。

3. 根据方法设置，将样品装入进样器中，并调整进样量和进样流速。

五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法，确保参数设定正确。

2. 启动AKTA系统，开始实验运行，并监控过程中的各项参数指标。

3. 及时记录实验数据，并根据需要进行样品采样、保存等操作。

总结：通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明，用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。

合理而正确的操作，将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。

同时，用户还需根据实际操作中的具体情况，进一步优化实验参数，以满足各自的研究需求。

AKTApure层析系统

流速：
0.5 ml/min
系统：
ÄKTA pure
选配的进样阀是为了与样品泵一起使用。它允许多达 7 个不同样品的快速、自动进样。整合的空气传感器确保安全和完整的上样，无需预先设定样品体积。阀门有 7 个进样位置和一个专门的缓冲液进口，用于在样品上样前利用缓冲溶充满样品泵，以及用于两个样品上样之间冲洗阀门和泵。在进样过程中，当样品完全上样时空气感应器开始检测，
图 1. ÄKTA pure 是一种用于蛋白质、肽和核酸在实验室规模的可靠纯化的灵活层析系统。
用于层析柱夹和设备连接的多轨道位于仪器的前部和一侧。仪器顶部的缓冲液托盘提供容器和收集瓶的存放区域。仪器的控制面板显示系统的状态，并且可以通过触摸按钮进行运行操作（暂停 / 继续）。
基本配置的系统仅重 48 kg，选择所有选配组件时重 53 kg。相对低的重量使它能够更简单地被放置在实验台上，系统尺寸使它可以更方便地安装在标准的层析冷柜中，用于不稳定样品的纯化。
多柱位阀整合两个压力传感器；第一个传感器检测层析柱前压力，能够保护层析柱的硬件，而第二个传感器检测层析柱后的压力。通过测量两个压力读数之间的差值可以计算层析填料上的压差（Δp），保护装填好的柱床（图 5）。
ဣཥԭუ૰ Pre-
0.6 MPa
CP
֫ဆዹ‫ۥ‬և ᆘॲუ૰
0.5 MPa
֫ဆዹ གଙუ૰ (∆p)
于使用不同大小的流动器以同时检测低浓度和高浓度蛋白。入口选择阀 V9-IAB 在单个阀门中含有 4 个进口位置，可为
电导检测器
缓冲液自动化选择和进行基本层析时层析柱和系统运行后
的清洗提供便利。电导检测器用于监测缓冲液和样品的电导率，在线检测真

AKTA 实验室层析柱装柱技术介绍

3. 3-5mm blow the settled bed was made
13
Column packing
• Sepharcyl S HR
Flow rates given below. Pack the gel in STEP 1 for 2 hours or until the gel has reached a constant height, then increase the flow rate to the value listed for STEP 2 and pack for 60 minutes.
0
30.0 40.0
50.0
60.0
70.0
80.0
ml
3
Column packing
mAU 8.0
Sr4FF01:1_UV 36.27
mAU
Sr4FF02:1_UV 36.14
15.0
6.0 10.0
4.0
5.0
2.0 118.24
0.0
0
20
40
60
每米塔板数：N=1600
No
Ret
ml
1 36.27
Column packing
Sepharose FF based gel: Sepharose Q, DEAE, SP, Phenyl
1. the 75 % slurry just before packing. 2. Ideally, Fast Flow media are packed at a con stant pressure not
• 检测装柱效果一般用<0.5% (30um介质)或<1% (90um介质) 柱体积的1%丙酮测柱效和峰形

层析柱装柱流程

层析柱装柱流程层析柱是一种用于分离、纯化化合物的重要工具，它具有操作简单、分离效果好、适用范围广等优点，因此在化学、生物等领域得到了广泛的应用。

在进行层析柱操作时，正确的装柱流程是非常重要的，它直接影响到实验结果的准确性和重现性。

下面将介绍层析柱的装柱流程。

首先，准备好所需的层析柱和填料。

层析柱通常由玻璃或塑料制成，填料的选择根据需要分离的化合物而定，可以是硅胶、纸浆、聚合物凝胶等。

填料的粒径和填充量也需要根据具体实验要求进行调整。

接着，将层析柱放置在支架上，并用适当的溶剂进行预洗。

预洗的目的是去除填料中的杂质和空隙中的气体，为样品的装柱做好准备。

预洗的溶剂通常是与样品相似的极性溶剂，如甲醇、乙醇等。

然后，将填料均匀地装入层析柱中。

填料的均匀性对于分离效果至关重要，因此在装填填料时需要轻轻振动层析柱，使填料能够均匀分布，并避免出现空隙或局部堆积的情况。

接下来，将样品溶液缓慢地加入层析柱中。

在加样的过程中，需要注意控制流速，避免填料被冲洗出来或样品在填料中发生混合。

通常情况下，可以使用移液枪或注射器来进行加样，以确保流速的均匀和稳定。

装柱完成后，可以开始进行层析操作。

根据需要，可以选择使用不同的洗脱溶剂来进行洗脱，以实现对样品的分离和纯化。

在洗脱的过程中，需要注意收集不同洗脱峰的组分，并记录下各个组分的出现时间和洗脱溶剂的类型，以便后续的分析和鉴定。

最后，对层析柱进行清洗和保存。

清洗时，可以用适当的溶剂将填料中残留的样品和杂质洗净，然后用干燥剂将层析柱中的水分去除干净。

清洗完成后，将层析柱放置在干燥通风的地方保存，避免受潮和受到污染。

总之，层析柱的装柱流程是一个关键的操作步骤，它直接影响到后续层析操作的效果和实验结果的准确性。

正确的装柱流程应该包括层析柱的预洗、填料的均匀装填、样品的缓慢加样、洗脱组分的收集和记录、以及层析柱的清洗和保存等步骤。

只有严格按照流程进行操作，才能保证层析柱操作的顺利进行和实验结果的准确可靠。

AKTA操作流程

在某种高浓度的盐的存在下，它们可能由于增强的疏水相互作用而沉淀下来
离子强度的改变，有机溶剂的存在，温度和pH（尤其在等电点，没有表面净电荷时）都能影响蛋白质结构和溶解度
盐浓度逐步的降低，样品组分根据疏水性的依次洗脱
层析柱料平衡及上样
分步洗脱及清洗
反相层析
反相色谱(reverse phase chromatography ，RPC)
所提供的标准混合器大小为 1.4 ml 也可选择 0.6 ml 和 5 ml 混合器对于更高流速或难以混合的缓冲液需要更大的混合器
A B管混合混合池
混合池滤膜的换置
样品环或 Superloop ™的各种上样技术也可以使用选配的样品泵或系统泵直接把样品上样到层析柱上
进样管（4）
柱位阀（柱阀口上A下B）
调整积分处理窗口
可对峰命名
实验前后注意事项
实验前准备：系统管道水清洗
实验前准备：缓冲液清洗
实验前准备：pH校准
实验前准备：收集器准备
放置对应盘架，齿轮条码对外
实验前准备：水清洗、缓冲液润洗上样管道
实验前准备：接层析柱并设定相应参数
实验后维护：管道去离子水泵洗
试验后准备：20%乙醇泵洗并保存
电导检测器，pH计
电导检测器用于监测缓冲液和样品的电导率，在线检测真实的梯度电导检测器整合温度传感器，可以校正由温度引起的电导率的变化
在安装有pH电极的阀上直接注射校正液，可以轻松地进行 pH 计校正限流器连接在 pH 阀上，在管路中产生反压，防止在紫外流动池中形成气泡
单出口控制阀 V9-Os 可以连接收集器并具有一个额外出口，可用于流穿组分的收集多出口收集阀V9-O 能够连接多个收集器，而且有 10 个出口可以进行大体积组分的收集

AKTA使用方法

AKTA使用方法：阴/阳离子交换柱（1）buffer都要进行超声除气10min（母液需要用0.45μm过滤膜过滤）。

（2）洗泵。

点击Pumps→Start pumpA wash 和Start pump B wash。

用Q A buffer 冲洗pump A，用Q B buffer冲洗pump B。

（3）洗系统（管道）。

将Conc%B改为100%，点击Start system wash。

（4）改流速，平衡柱子。

将System flow的流速改为合适的流速（4mL/min, 2mL/min,0.4mL/min），点击Set flow rate。

然后选择柱位。

用Q B buffer平衡Q柱4-5个柱体积，再用Q A buffer平衡Q柱4-5个柱体积。

（5）准备收集盘，设置运行程序。

准备烧杯收集outlet。

（6）上样，选择A pump上样，当电导上升时waste改为outlet。

上样不要进气泡，上样结束后将A pump放入Buffer A。

电导下降到约1时，outlet改为waste，停止程序。

（7）Elution, 运行洗脱程序。

（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（8）及时将outlet取出并保存好。

（9）收集收集管，并将buffer放回。

Superdex(分子筛、凝胶过滤层析)（1）浓缩。

将蛋白样品溶液用30K的浓缩管在4℃浓缩。

（2）洗泵。

用Superdex buffer冲洗pump A。

（3）用Superdex buffer冲洗整个系统（整个系统体系6-8mL）两个柱体积（约10mL左右）。

（4）平衡。

用Superdex buffer平衡两个柱体积（柱体积23.65mL）。

（5）准备收集盘，用Superdex buffer冲洗Loop环，设置运行程序。

（6）上样，运行程序。

（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（7）根据分子筛图谱对收集的样品取样进行SDS-PAGE电泳。

AKTA 简要操作说明

AKTApurifier简要操作说明打开仪器的主电源，打开电脑电源。

待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。

双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。

Unicorn Manager文件管理、Method Edit方法编辑、System Control系统控制、Evalution结果处理，4个窗口同时打开，同时关闭。

Unicorn Manager中Manual运行的结果自动保存在Manualruns的文件夹中，文件名从Manualrun1~Manualrun10，第11个结果会覆盖第1个文件（最多保存10个默认的文件名）。

如果手动结果需要长期保存，可以remove到指定文件夹或者rename。

可以利用Manual-other-record-on（off）来选择文件夹，制定文件名保存手动结果。

手动命令(Manual)见《ÄKTA系统手动命令指南》利用脱盐实验熟悉手动操作(System Control→Manual)脱盐试验原理：凝胶过滤 (或称分子筛) 层析是一种由限制分子通过多孔基质，按分子大小分离混合分子的技术。

蛋白质是生物大分子，分子量比盐等小分子大许多倍，用凝胶过滤方法为生物产品脱盐十分简单、可靠。

由于层析方法可透过紫外和电导检测器监控整个层析脱盐的过程。

Sephadex G-25 介质用带3- 氯-1 ，2- 环氧丙烷(epichlorohydrin) 交联葡聚糖加工成珠状的介质。

适合分子量在5000 以下的生物分子的脱盐及缓冲液置换工作。

在该实验中，蛋白质是大分子，盐离子是小分子，因此蛋白质先出来（280nm有特征吸收），盐离子后出来（电导值显示）o 样品：5mg/mLBSA，0.5M NaCl溶液 10mLo binding buffer缓冲液：去离子水o 层析柱：HiTrap Desalting 5 mLo 流速：5mL/min,o 样品体积：200ul/0.5mL/1mL。

AKTA操作流程 PPT

出口阀
收集器
可以根据时间、体积或自动峰识别进行组分收集峰识别可以最大限度减少交叉污染，把不需要的组分直接排为废液
组分收集器 F9-C 含有一个收集盘架，可以容纳从 3 到 50 ml 的各种试管以及 24、48 和 96 孔深孔板
软件介绍
Unicorn6 4个窗口
Administration
电导检测器，pH计
电导检测器用于监测缓冲液和样品的电导率，在线检测真实的梯度电导检测器整合温度传感器，可以校正由温度引起的电导率的变化
在安装有pH电极的阀上直接注射校正液，可以轻松地进行 pH 计校正限流器连接在 pH 阀上，在管路中产生反压，防止在紫外流动池中形成气泡
单出口控制阀 V9-Os 可以连接收集器并具有一个额外出口，可用于流穿组分的收集多出口收集阀V9-O 能够连接多个收集器，而且有 10 个出口可以进行大体积组分的收集
New 创建新用户
给定权限
数据注销及激活
手动备份系统备份
备份还原
System control
Run Data 模块
Chromatogram 模块
Flow scheme 模块
Run Log 模块
Method editor
Evaluation
积分区域限定峰参数
在某种高浓度的盐的存在下，它们可能由于增强的疏水相互作用而沉淀下来
离子强度的改变，有机溶剂的存在，பைடு நூலகம்度和pH（尤其在等电点，没有表面净电荷时）都能影响蛋白质结构和溶解度
盐浓度逐步的降低，样品组分根据疏水性的依次洗脱
层析柱料平衡及上样
分步洗脱及清洗
反相层析
反相色谱(reverse phase chromatography ，RPC)

层析柱装柱操作规范

层析柱装柱操作规范(总2页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除层析柱装柱流程装柱材料层析柱：BXK层析柱装柱仪器：ÄKTA装柱器装柱溶液20%乙醇匀浆的准备精确计算所需介质的量（这对固定柱高的层析柱尤其重要）。

1L填充柱所需的介质量大约是1.15L自然沉淀匀浆的量，于干净烧杯中，取 100%沉降胶（静止放置一天以上，倾去20%乙醇后的胶为100%沉降胶）与等体积20%乙醇混合备用。

安装层析柱1.检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后将层析柱垂直固定在铁架台上。

2.将装柱器安装在层析柱上端。

3.往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气泡，在液面低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。

装柱1.用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡的产生。

迅速用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到ÄKTA上。

2.打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳。

停止装柱。

3.打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用20%乙醇封满柱子剩余部分。

4.将上端转接头一端连上ÄKTA，打开机器，以装柱流速用装柱液排出转接头管路中及筛板中残留的气泡，然后将转接头另一端装到层析柱上，使转接头下端刚好接触胶界面。

(装柱流速约为70-100%的最大流速）5.拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，在界面处做上记号。

6.关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开的），略拧松膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。

7. 检测柱效3。

层析柱原理和使用方法

层析柱原理和使用方法层析柱是一种常见的分离技术，它通过物质在固定相和移动相之间的分配来实现分离和提纯。

层析柱广泛应用于化学、生物化学、制药等领域，是一种非常重要的实验技术。

本文将介绍层析柱的原理和使用方法，帮助读者更好地理解和应用这一技术。

首先，让我们来了解一下层析柱的原理。

层析柱的分离原理基于不同物质在固定相和移动相之间的分配系数不同。

固定相通常是一种多孔的固体材料，如硅胶、纤维素等，而移动相则是一种液体溶剂，如甲醇、乙醇等。

当混合物通过层析柱时，不同成分会根据其在固定相和移动相中的分配系数而被分离开来。

这样，我们就可以通过适当选择固定相和移动相的性质，来实现对混合物中目标成分的选择性提取和纯化。

接下来，我们将介绍层析柱的使用方法。

首先，选择合适的层析柱和填料。

根据待分离物质的性质和分离要求，选择合适的层析柱规格和固定相填料。

其次，装填层析柱。

将固定相填料均匀地装填到层析柱中，并确保填充密实，避免出现空隙。

然后，平衡层析柱。

用适当的移动相预先平衡层析柱，使固定相充分吸附移动相。

接着，样品进样。

将待分离的混合物样品缓慢地加入层析柱顶部，并逐步加入移动相。

最后，收集分离物。

根据不同成分在层析柱中的分配情况，逐步收集分离出的目标成分。

在使用层析柱的过程中，需要注意一些常见的问题和注意事项。

首先，要注意层析柱的操作流程和条件，避免操作失误导致分离效果不佳。

其次，要选择合适的移动相和流速，以确保分离效果和纯度。

另外，要注意层析柱的维护和保养，定期清洗和更换固定相填料，确保层析柱的分离效果和使用寿命。

总之，层析柱作为一种重要的分离技术，在化学、生物化学和制药等领域有着广泛的应用。

通过本文的介绍，相信读者对层析柱的原理和使用方法有了更清晰的认识，希望能够帮助读者更好地应用这一技术，提高实验效率和成果质量。

AKTA蛋白纯化系统操作

AKTA蛋白纯化系统操作1.设定纯化方法：首先，根据目标蛋白质的特性和要求，选择合适的纯化方法。

一般而言，常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶层析和离子交换层析等。

在AKTA蛋白纯化系统上，可以预设不同的纯化方法并保存为方案。

2.准备蛋白样品：准备待纯化的蛋白样品。

在纯化前，需要将样品进行预处理，例如，去除杂质、去盐、浓缩等。

此外，一些特殊的样品也需要添加辅助试剂，如DTT、EDTA等。

3.配置层析柱：根据之前设定的纯化方法，选择合适的柱子。

AKTA系统支持多种柱径和材质的柱子，可以根据需要更换。

4.连接管路：将柱子与系统的蛋白吸附和洗脱缓冲液的管路相连接，确保连接处无泄漏。

5.调整流速：设置蛋白吸附和洗脱缓冲液的流速。

一般而言，根据柱子的大小和纯化方法的要求，设置合适的流速可以提高纯化效果。

6.均衡柱子：在进行纯化前，需要将柱子进行均衡操作。

均衡柱子可以提高吸附剂（如亲和树脂）和蛋白样品之间的接触效果，提高纯化效率。

7.加样和洗脱：将经过均衡的柱子连接到AKTA系统，将样品通过自动加样器加入。

在加样后，可以通过设定的方法进行洗脱和冲洗，以去除非目标蛋白质和杂质。

8.收集纯化的目标蛋白：通过设置最终洗脱步骤，将目标蛋白质从纯化方法中洗脱出来。

同时，系统可以将纯化的目标蛋白自动收集到相应的管子或容器中。

9.检测纯化后的蛋白质：对纯化后的蛋白质进行检测，如SDS-、Western blot等方法，以验证纯化效果。

10.清洗设备：在纯化完成后，要对设备进行清洗。

根据实验室的规范和设备说明书，进行相应的操作，以确保设备的使用寿命和实验结果的准确性。

总之，AKTA蛋白纯化系统是一种功能强大、操作灵活的蛋白质纯化设备。

通过合理的设定纯化方法、处理样品和操作设备，可以高效地纯化目标蛋白质，并得到高质量的纯化产物。

akta层析系统操作入门

AKTAbasic层析系统操作入门为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。

若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。

一系统组件及系统功能介绍1 系统组件(1) 泵 Pump系统泵：(system pump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。

上样泵：(sample pump)样品输送。

(2) 阀 Valve七通阀：(INV-907)两个。

1. 上样阀(sample valve)，用于上样环切换 (load/inject) 和系统泵清洗时废液管 (waste) 切换；2. 流向切换阀(flow direction valve)，用于层析柱流向切换(downflow/upflow)。

(4) 其它组件梯度混合器(mixer)、紫外检测仪(UV-900) 。

2 系统功能系统功能由上述各组件相互配合，协同工作。

(1) 缓冲液pH及梯度配制(a)梯度制备 (Gradient)A、B泵分别放置A、B液，由A、B泵的流速变化产生梯度。

(2) 层析柱柱顶连接进样（七通）阀1号口，柱后连接紫外流通池。

(3) 上样上样阀上样：将样品储存在样品环(Sample loop)，再由阀门切换将样品带入层析柱；系统泵上样：由系统泵将样品泵入层析柱。

(4) 收集 (选购)收集器收集：设置收集体积(Frac size)，可自动按条件收集。

二开机程序1 开启电脑；2打开AKTAbasic电源；3启动UNICORN软件，输入用户名( User name) 和密码(Password)，默认用户(default) 密码为 default，待AKTA自检结束后，在system control窗口中显示系统准备就绪（Instruments are ready) 。

三 UUNICORN 软件简介Unicorn软件启动后共有四个窗口，其主要功能分别如下：Main: 1. 系统关闭(Quit Program)和退出、登陆(Log on/off)；2. 系统管理的设定，如用户名、密码、文件和使用权限等设定，系统日志等；3. 文件管理，如文件拷贝、移动、删除及压缩拷贝到磁盘等；4. 方法组编辑(MethodQueues)，将几个方法组合在一起，依次运行。

层析柱装柱流程

层析柱装柱流程介绍层析柱是一种常用于分离和纯化化合物的技术，其基本原理是利用化合物在不同介质中的亲和力差异而实现分离。

层析柱分为填充柱和装柱两种，本文将主要介绍装柱流程。

装柱前准备工作确定分离目标在装柱前，需要明确分离目标，以选择合适的载体和介质，如离子交换色谱柱、逆相色谱柱、凝胶过滤柱等。

准备层析柱和配件根据选择的层析柱类型，选购适当的层析柱、压力计、样品瓶、钝化剂等必要配件。

准备介质根据选择的柱类型和实验需求，选择合适的介质。

在使用新柱前，需要进行开柱处理，以去除杂质和预处理柱体。

装柱流程1. 柱体预处理将新柱体安装在装置中，流通适当的缓冲溶液经过柱体，洗涤不溶于溶液中的杂质和微生物。

2. 样品准备用适当的缓冲液将样品准备妥当，剔除其中的微粒和杂质。

3. 柱体装填将预处理后的柱体安装在柱体装填器上，逐层添加介质和样品，并用特殊方法将介质压实，尽可能减小柱体和样品的空隙。

4. 柱体检测装填完成后，用压力计检测柱体的漏气和密封情况，确保柱子健康并正常工作。

5. 样品装柱用希望分离的样品样品注入装好介质的分离柱，并应用压力调节器，并通过仪器程序使样品流过柱体。

在这个过程中，样品将在介质上进行分离。

6. 分离结果分析在对样品通过柱体后，将流出的溶液进行采集和处理，并用相应的分析方法对化合物进行测定。

后续处理1. 柱子的清理在完成实验后，需要将层析柱进行清洗以去除残留的样品和介质，防止柱体污染和结晶，降低柱子的使用寿命。

2. 柱子的储藏对于长期不使用的柱体，需要将柱子放置在特定的保护剂中，以保持干燥和清洁状态，防止介质变质或者柱子老化。

装柱流程是层析柱实验的重要步骤之一，其良好的实施关系到实验结果。

在实验前，需要仔细做好准备工作，掌握每一个环节的操作细节，并进行严格的柱子检测和后续处理工作。

层析设备akta工作原理

层析设备akta工作原理
层析设备AKTA主要利用层析柱系统进行工作。

其工作原理主要包括以下几个步骤：
1. 利用树脂的多孔性形成巨大的比表面积，提供足够的吸附表面。

2. 利用树脂材料分子与目标分子之间的氢键吸附或离子交换，实现目标分子的特征性吸附或交换。

3. 对溶液中的多种物质进行选择性分离。

4. 使用极性接近的溶剂冲洗层析柱，将吸附或交换的目标分子、离子溶解在溶剂中，随之流出。

5. 收集得到的含目标物质的溶液。

通过以上步骤，层析设备AKTA实现了对溶液中多种物质的选择性分离。

如需了解更多关于层析设备的工作原理，建议咨询专业人士。

AKTA层析系统

在使用AKTA前，请先阅读本规程，并了解所需层析方法的原理。初次使用请在有经验
的人指导下进行。
1. 缓冲液和层析的样品的准备：
1. 溶液需用去离子水、超纯水或注射用水配制，除NaOH和乙醇外，所有用于层析的缓冲液需经0.45μm孔径的滤膜过滤，并盛装于用0.45μm孔径滤膜过滤的水至少荡洗4次的容器中。
⑸使用NaOH以及盐浓度较高的缓冲液清洗管道或柱子时尽量减少漏液，如漏到仪器上时请及时擦拭干净，避免腐蚀AKTA。柱子使用完后要及时拆卸，以便他人使用。注意柱子拆卸后要在相应接口连接一条管道，避免污染杂质，染菌或检测探头由于缓冲液干涸盐析造成损坏。
⑹当发现压力检测器或pH计不准时，及时通知管理员进行校正。
XK 16/100
0.5M Pa
2.5mL/min
2mL/min
通常装分子筛介质
XK 26/20 0.3M Pa 12mL/min
8mL/min
XK 26/60 0.3M Pa 25mL/min
20mL/min
XK 26/100
0.3M Pa
12mL/min
8mL/min
通常装分子筛介质
有夹套的进口柱子，XK A/B表示内径为A（mm），高为 B（cm）
⑸分子筛类介质应倒装层析柱。
2．层析柱和介质使用注意事项
⑴TSK的高压预装柱也可以在AKTA上使用，但要注意流速和压力（详见附表）
⑵在装柱和卸柱时要将柱头上的液体充满，再连上连接头或堵头。装柱时要先用1/2流速倒冲柱子，赶出气泡，再连上接头，以免气泡进入介质内。
⑶实验过程中应保持柱子竖直，特别是分子筛。整个实验操作过程中都要防止气泡进入介质内。常压层析柱使用较久后，柱压可能会上升，应适当降低流速。若层析柱在实验过程中出现泵压急剧升高，超过限度的情况，请联系管理员。