绿原酸在家兔体内的药动学研究
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[ 3] [ 1- 2]
、 抗病毒、
的物质基 础, 任 何配伍效 应都应有 特定的化 学表 述
[ 7- 9]
、 清除体内自由基
[ 5- 6]
[ 4]
和抗氧化作用。金银
。本文分析了金银花三种注射液 中主要成
花配伍连翘应用已有两千多年的历史 , 且已在许多 经典药物组方中应用 。化学成分是中药作用
分绿原酸在家兔体内的药动学差异 , 从而为更深一 层次地研究金银花与连翘药提供理论依据。
2010, 44( 8): 13~ 16 /陈 敏 , 等
中国兽药杂志
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绿原酸在家兔体内的药动学研究
陈 敏 , 朱焕星 , 熊祝新 , 郑贵超
( 1. 江西康地恩派尼生物药业有限公司 , 南昌 [ 收稿日期 ] 2010- 06 - 03 [ 文献标识码 ] A 1 2 1 1 262204) 330500; 2 . 山东省诸城市贾悦畜牧兽医管理站, 山东诸城 [ 文章编号 ] 1002 - 1280( 2010) 08- 0013- 04 [ 中图分类号 ] R 969 . 1
量瓶中, 配成 161 . 6 g /mL 的标准储备液, 取适量 上述 储备 液 用 甲醇 进 行 稀释 ( 即 稀 释 成浓 度 为 32 . 32、12 . 928 、6 . 464 、3. 232 、1 . 2928、0 . 6464 、 0 . 3232 、 0 . 12928 g /mL 的系列浓度 ) , 备用。 2 . 5 绿原酸血浆样品检测方法评价及检测结果 2 . 5 . 1 色谱条件的特异性 在色谱条件下, 分别 取兔空白 血浆、 兔空白血 浆加入绿 原酸标准 品溶 液、 兔给药后的血浆样品 0 . 3 mL, 按 % 血浆样品处 理 &操作处理, 得到色谱图, 见图 1~ 5。
图 5 肌注金银花 、 连翘 单提合并注射液图谱
由图可见, 绿原酸的保留时间为 16 . 641 m in, 血浆中杂质对测定无干扰 , 能够满足色谱分离和检 测要求。 2 . 5 . 2 绿原酸 标准曲线 的制备 精密吸 取 8 份 0 . 3 mL 兔空白血浆于 1 . 5 mL 塑料离心管中 , 分别 加入 0 . 1 mL 绿 原 酸 对 照 品 溶 液 , 配 成 0 . 043、 0 . 108 、 0 . 215 、 0 . 431 、 1 . 077 、 2 . 155 、 4 . 309 、 10 . 773 g /mL 的血浆样品, 加入 0 . 8 mL 甲醇 , 旋涡混匀 , 放入离心管内 13 000 r /m in 离心 15 m in , 再取上清 液过 0 . 45 m 微孔滤膜 , 取 20 L 进样, 记录色谱 图 , 以血浆中绿原酸浓度 ( x )为横坐标, 绿原酸峰面 积 ( y ) 为纵 坐标 , 求 得三 次平 均回 归方程 为 y = 10259x + 728 . 77 , R = 0 . 999 7 , 表 明血 浆样 品在 0 . 043~ 10 . 773 g /mL 范围内线性关系良好 , 最低 检测限为 0 . 043 g /mL。
2010, 44( 8): 13~ 16 /陈 敏 , 等
中国兽药杂志
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度, 求得方法的精密度 ( RSD )。
表 1 家兔血浆中绿原酸方法回收率 ( n = 3)
实际浓度 / ( g m L- 1 ) 4 . 309 ( 实测浓度 / g mL - 1 ) 4. 501 4. 482 4. 463 1. 100 1 . 077 1. 116 1. 090 0. 195 0 . 215 0. 181 0. 202 回收率 /% 104 . 5 104 . 0 103 . 5 102 . 2 103 . 7 101 . 1 90 . 5 84 . 2 94 . 1 1 .0 1 .3 1 .9 RSD /%
某养殖场, 平均体重 2 . 0 kg , 分为 3组 : 金银花单方 组 ( A ), 金银花、 连翘混提组 ( B) , 金银花、 连翘单提 混合组 ( C) , 每组 6只 , 家兔受试前禁食 12 h 。 1 . 2 试验仪器 高效 液相色谱 仪: A lliance 2695 分离与自动进样系统 , 2487 紫外检测器, 在线真空 脱气机, 柱温 箱, Em pow er2 色谱工作站 , 美国 W a ters公司 ; 高速离心机, 德国 H eraeus ; EBA 型低速离 心机, 德国 H ettich ; 电子天平 BP211D 型 , 德国 Sar to riu s公司 ; SK - 1型漩涡混合器 , 江苏金坛市医疗 仪器厂 ; KQ- 250DB 型超声波清洗器, 昆山市超声仪 器有限公司; 可调微量移液器 ( 10~ 100 L, 100~ 1 000 L ): 美国 N I CH I RYO; MCPKP 自动化药物动力学程 序软件, 华南农业大学药理教研室编制。 1 . 3 试验药品及试剂 受试药品 : 金银花单方注 射液, 金银花、 连翘混合提取注射液 , 金银花、 连翘 单提合并注射液 ( 均为自制 ) 。标准品 : 绿原酸对照 品 , 中 国药品 生物 制品 检定 所, 批号 为 110753 200613 , 纯度 ! 98 % 。乙睛: 色谱纯, 美国 F isher公 司 , 批号 10071743 ; 甲醇 : 色谱纯, 美国 H oneyw ell公 司 , 批号 10071753 ; 磷酸: 色谱纯 , 天津市光复精细 化工研究所 , 批号 20090428 ; 肝素钠: 上海化学试剂 公司, 批号 F20031227 。 2 方法与结果 2 . 1 色谱条件 色谱柱为 Synerg id C18 ( 250 mm ∀ 4 . 60 mm, 4 m ) ; 检测器为紫外检测器; 流动相为 乙腈 - 0 . 4 % 磷酸 ( 10 #90 , V #V ), 0 . 4 % 磷酸溶液经 0 . 45 m 滤膜过滤; 流速 1 . 0 m L /m in; 柱温 30 ∃ ; 检测波长 327 nm; 进样量 20 L。 2 . 2 给药与血样采集 18 只家兔随机分为 3 组 , 给药前家兔禁食 12 h ,按 0 . 5 mL / kg 肌肉注射三种 注射液 , 分别于注射前 ( 0 h)和注射后 0 . 116 、 0 . 25、 0 . 5 、 0 . 75 、 1 、 1 . 5 、 2 、 3 、 4 、 5 、 6 h 自心脏采血, 每次采 血 1. 0 mL, 置于 预先用肝 素钠抗凝 的离心 管内 , 4 000 r/m in 离心 10 m in , 分离血浆, - 20 ∃ 冰箱中 保存备测。 2 . 3 血浆样品处理 血浆样品在室温放置自然解冻 后, 取 0 . 3 mL, 加入 0 . 9 mL 甲醇, 涡旋混匀 1m in , 放入 离心管内 13 000 r/m in 离心 15m in , 再取上清液过 0 . 45 m 微孔滤膜, 取 20 L 进样, 记录色谱图。 2 . 4 标准储备液系列标准工作液制备 精密称取 绿原酸对照品适量, 用纯甲醇溶解定容于 50 mL 容
Study on Phar m acokinetics of Chlorogenic A cid in Rabbits
CHEN M in , ZHU H uan- x ing , X IONG Zhu- x ing , ZH ENG Gu i- chao
(1 . Jiangxi KDN Pa in i B iolog ical - P ha r ma ceu tica l Co. LTD, N anchang, Jiangxi 330500 ; 2 . Jiayue M anagem en t S ta tion in ShanD ong Zhu cheng C ity, Zhu cheng, Shandong 262204 ; Ch ina )
[摘 要 ] 建立了血浆中绿原酸的 H PLC 分析方法 , 比较了金银花三种注射液中绿原酸在家兔 体内的药动学差异, 旨在为研究金银花连翘药提供实验数据 。将 18只健康无伤的家兔随机分成 三组, 按 0 . 5 mL / kg 单次肌 肉注射 给药 , H PLC 同时 测定不 同时间 点血 浆中 绿原酸 浓度 。 用 M CPKP程序计算动力学参数。 健康家兔肌注金银花单提注射液 ( A ), 金银花、 连翘混合提取注射 液 ( B) , 金银花、 连翘单提合并注射液 ( C) 后, 绿原酸在家兔体内的药动学过程均符合一级吸收二 室模型 。 B、 C 注射液中绿原酸的 Tm ax、 T /2、 T 1/ 2ka与 A 相比呈差异显著性, 而 T /2差异不显著, 表明 金银花配伍连翘后能促进绿原酸在体内吸收分布, 迅速达到血峰浓度, 对消除半衰期的影响不 大 。 B 与 C 中绿原酸的药动学参数差异不显著 , 表明连翘与金银花配伍时, 不管是混提还是单提 后合并 , 对绿原酸在家兔体内的药动学特征无明显影响。 [关键词 ] 绿原酸; 家兔; 药动学
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Abstract : In th is article, we set up a m ethod to ana lyse chlorogenic ac id in p lasm a by HPLC, com pare the phar m acokinet ic difference of ch lo rogenic acid in three kinds of honeysuckle injection in rabb its in o rder to analysis m ateria com poent o f honeysuckle and forsy thiae . 18 health rwk.baidu.combb its wh ich in jected w ith 0 . 5 mL / kg in m usc le are d iv id ed into three g roups , and deter m in ed chlorogen ic ac id concentrat io ns in plasm a at different ti me po in ts by H PLC. The pharm acok in etic param eters are calcu lated by MCPKP progra m. T he phar m acokin etic process o f chlorogen ic ac id in rabb its is tw o - com part m en t m ode.l T he para m eter o f Tm ax, T /2, T 1 /2ka have sig nifican t d ifference betw een B, C and A, T /2 has no sig nificance , wh ich show that ch lo rogenic acid can soon distribu te in th e body . T he param eter of B and C have no sig nificance , it is a lso show that forsythia can prom ote the ch lorogen ic ac id s abso rpt ion and d istr ibution in rabb i. t There is no sign ificant difference in chlorogen ic ac id phar m acokinet ic process betw een B and C. K ey w ord s : ch lo rogenic ac id ; rabb i; t phar m acok in etic 金银花系常用中草药, 具有抗菌 抗肿瘤
作者简介 : 陈 敏 ( 1982 年 - ), 男 , 硕士 , 主要 从事兽药制剂的研发工作。 E- m a i:l op010707@ 163. com
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中国兽 药杂志
2010, 44( 8): 13~ 16 /陈 敏 , 等
1 材 料 1 . 1 试验动物
健康无伤家兔 18 只 , 购自安义县
、 抗病毒、
的物质基 础, 任 何配伍效 应都应有 特定的化 学表 述
[ 7- 9]
、 清除体内自由基
[ 5- 6]
[ 4]
和抗氧化作用。金银
。本文分析了金银花三种注射液 中主要成
花配伍连翘应用已有两千多年的历史 , 且已在许多 经典药物组方中应用 。化学成分是中药作用
分绿原酸在家兔体内的药动学差异 , 从而为更深一 层次地研究金银花与连翘药提供理论依据。
2010, 44( 8): 13~ 16 /陈 敏 , 等
中国兽药杂志
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绿原酸在家兔体内的药动学研究
陈 敏 , 朱焕星 , 熊祝新 , 郑贵超
( 1. 江西康地恩派尼生物药业有限公司 , 南昌 [ 收稿日期 ] 2010- 06 - 03 [ 文献标识码 ] A 1 2 1 1 262204) 330500; 2 . 山东省诸城市贾悦畜牧兽医管理站, 山东诸城 [ 文章编号 ] 1002 - 1280( 2010) 08- 0013- 04 [ 中图分类号 ] R 969 . 1
量瓶中, 配成 161 . 6 g /mL 的标准储备液, 取适量 上述 储备 液 用 甲醇 进 行 稀释 ( 即 稀 释 成浓 度 为 32 . 32、12 . 928 、6 . 464 、3. 232 、1 . 2928、0 . 6464 、 0 . 3232 、 0 . 12928 g /mL 的系列浓度 ) , 备用。 2 . 5 绿原酸血浆样品检测方法评价及检测结果 2 . 5 . 1 色谱条件的特异性 在色谱条件下, 分别 取兔空白 血浆、 兔空白血 浆加入绿 原酸标准 品溶 液、 兔给药后的血浆样品 0 . 3 mL, 按 % 血浆样品处 理 &操作处理, 得到色谱图, 见图 1~ 5。
图 5 肌注金银花 、 连翘 单提合并注射液图谱
由图可见, 绿原酸的保留时间为 16 . 641 m in, 血浆中杂质对测定无干扰 , 能够满足色谱分离和检 测要求。 2 . 5 . 2 绿原酸 标准曲线 的制备 精密吸 取 8 份 0 . 3 mL 兔空白血浆于 1 . 5 mL 塑料离心管中 , 分别 加入 0 . 1 mL 绿 原 酸 对 照 品 溶 液 , 配 成 0 . 043、 0 . 108 、 0 . 215 、 0 . 431 、 1 . 077 、 2 . 155 、 4 . 309 、 10 . 773 g /mL 的血浆样品, 加入 0 . 8 mL 甲醇 , 旋涡混匀 , 放入离心管内 13 000 r /m in 离心 15 m in , 再取上清 液过 0 . 45 m 微孔滤膜 , 取 20 L 进样, 记录色谱 图 , 以血浆中绿原酸浓度 ( x )为横坐标, 绿原酸峰面 积 ( y ) 为纵 坐标 , 求 得三 次平 均回 归方程 为 y = 10259x + 728 . 77 , R = 0 . 999 7 , 表 明血 浆样 品在 0 . 043~ 10 . 773 g /mL 范围内线性关系良好 , 最低 检测限为 0 . 043 g /mL。
2010, 44( 8): 13~ 16 /陈 敏 , 等
中国兽药杂志
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度, 求得方法的精密度 ( RSD )。
表 1 家兔血浆中绿原酸方法回收率 ( n = 3)
实际浓度 / ( g m L- 1 ) 4 . 309 ( 实测浓度 / g mL - 1 ) 4. 501 4. 482 4. 463 1. 100 1 . 077 1. 116 1. 090 0. 195 0 . 215 0. 181 0. 202 回收率 /% 104 . 5 104 . 0 103 . 5 102 . 2 103 . 7 101 . 1 90 . 5 84 . 2 94 . 1 1 .0 1 .3 1 .9 RSD /%
某养殖场, 平均体重 2 . 0 kg , 分为 3组 : 金银花单方 组 ( A ), 金银花、 连翘混提组 ( B) , 金银花、 连翘单提 混合组 ( C) , 每组 6只 , 家兔受试前禁食 12 h 。 1 . 2 试验仪器 高效 液相色谱 仪: A lliance 2695 分离与自动进样系统 , 2487 紫外检测器, 在线真空 脱气机, 柱温 箱, Em pow er2 色谱工作站 , 美国 W a ters公司 ; 高速离心机, 德国 H eraeus ; EBA 型低速离 心机, 德国 H ettich ; 电子天平 BP211D 型 , 德国 Sar to riu s公司 ; SK - 1型漩涡混合器 , 江苏金坛市医疗 仪器厂 ; KQ- 250DB 型超声波清洗器, 昆山市超声仪 器有限公司; 可调微量移液器 ( 10~ 100 L, 100~ 1 000 L ): 美国 N I CH I RYO; MCPKP 自动化药物动力学程 序软件, 华南农业大学药理教研室编制。 1 . 3 试验药品及试剂 受试药品 : 金银花单方注 射液, 金银花、 连翘混合提取注射液 , 金银花、 连翘 单提合并注射液 ( 均为自制 ) 。标准品 : 绿原酸对照 品 , 中 国药品 生物 制品 检定 所, 批号 为 110753 200613 , 纯度 ! 98 % 。乙睛: 色谱纯, 美国 F isher公 司 , 批号 10071743 ; 甲醇 : 色谱纯, 美国 H oneyw ell公 司 , 批号 10071753 ; 磷酸: 色谱纯 , 天津市光复精细 化工研究所 , 批号 20090428 ; 肝素钠: 上海化学试剂 公司, 批号 F20031227 。 2 方法与结果 2 . 1 色谱条件 色谱柱为 Synerg id C18 ( 250 mm ∀ 4 . 60 mm, 4 m ) ; 检测器为紫外检测器; 流动相为 乙腈 - 0 . 4 % 磷酸 ( 10 #90 , V #V ), 0 . 4 % 磷酸溶液经 0 . 45 m 滤膜过滤; 流速 1 . 0 m L /m in; 柱温 30 ∃ ; 检测波长 327 nm; 进样量 20 L。 2 . 2 给药与血样采集 18 只家兔随机分为 3 组 , 给药前家兔禁食 12 h ,按 0 . 5 mL / kg 肌肉注射三种 注射液 , 分别于注射前 ( 0 h)和注射后 0 . 116 、 0 . 25、 0 . 5 、 0 . 75 、 1 、 1 . 5 、 2 、 3 、 4 、 5 、 6 h 自心脏采血, 每次采 血 1. 0 mL, 置于 预先用肝 素钠抗凝 的离心 管内 , 4 000 r/m in 离心 10 m in , 分离血浆, - 20 ∃ 冰箱中 保存备测。 2 . 3 血浆样品处理 血浆样品在室温放置自然解冻 后, 取 0 . 3 mL, 加入 0 . 9 mL 甲醇, 涡旋混匀 1m in , 放入 离心管内 13 000 r/m in 离心 15m in , 再取上清液过 0 . 45 m 微孔滤膜, 取 20 L 进样, 记录色谱图。 2 . 4 标准储备液系列标准工作液制备 精密称取 绿原酸对照品适量, 用纯甲醇溶解定容于 50 mL 容
Study on Phar m acokinetics of Chlorogenic A cid in Rabbits
CHEN M in , ZHU H uan- x ing , X IONG Zhu- x ing , ZH ENG Gu i- chao
(1 . Jiangxi KDN Pa in i B iolog ical - P ha r ma ceu tica l Co. LTD, N anchang, Jiangxi 330500 ; 2 . Jiayue M anagem en t S ta tion in ShanD ong Zhu cheng C ity, Zhu cheng, Shandong 262204 ; Ch ina )
[摘 要 ] 建立了血浆中绿原酸的 H PLC 分析方法 , 比较了金银花三种注射液中绿原酸在家兔 体内的药动学差异, 旨在为研究金银花连翘药提供实验数据 。将 18只健康无伤的家兔随机分成 三组, 按 0 . 5 mL / kg 单次肌 肉注射 给药 , H PLC 同时 测定不 同时间 点血 浆中 绿原酸 浓度 。 用 M CPKP程序计算动力学参数。 健康家兔肌注金银花单提注射液 ( A ), 金银花、 连翘混合提取注射 液 ( B) , 金银花、 连翘单提合并注射液 ( C) 后, 绿原酸在家兔体内的药动学过程均符合一级吸收二 室模型 。 B、 C 注射液中绿原酸的 Tm ax、 T /2、 T 1/ 2ka与 A 相比呈差异显著性, 而 T /2差异不显著, 表明 金银花配伍连翘后能促进绿原酸在体内吸收分布, 迅速达到血峰浓度, 对消除半衰期的影响不 大 。 B 与 C 中绿原酸的药动学参数差异不显著 , 表明连翘与金银花配伍时, 不管是混提还是单提 后合并 , 对绿原酸在家兔体内的药动学特征无明显影响。 [关键词 ] 绿原酸; 家兔; 药动学
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Abstract : In th is article, we set up a m ethod to ana lyse chlorogenic ac id in p lasm a by HPLC, com pare the phar m acokinet ic difference of ch lo rogenic acid in three kinds of honeysuckle injection in rabb its in o rder to analysis m ateria com poent o f honeysuckle and forsy thiae . 18 health rwk.baidu.combb its wh ich in jected w ith 0 . 5 mL / kg in m usc le are d iv id ed into three g roups , and deter m in ed chlorogen ic ac id concentrat io ns in plasm a at different ti me po in ts by H PLC. The pharm acok in etic param eters are calcu lated by MCPKP progra m. T he phar m acokin etic process o f chlorogen ic ac id in rabb its is tw o - com part m en t m ode.l T he para m eter o f Tm ax, T /2, T 1 /2ka have sig nifican t d ifference betw een B, C and A, T /2 has no sig nificance , wh ich show that ch lo rogenic acid can soon distribu te in th e body . T he param eter of B and C have no sig nificance , it is a lso show that forsythia can prom ote the ch lorogen ic ac id s abso rpt ion and d istr ibution in rabb i. t There is no sign ificant difference in chlorogen ic ac id phar m acokinet ic process betw een B and C. K ey w ord s : ch lo rogenic ac id ; rabb i; t phar m acok in etic 金银花系常用中草药, 具有抗菌 抗肿瘤
作者简介 : 陈 敏 ( 1982 年 - ), 男 , 硕士 , 主要 从事兽药制剂的研发工作。 E- m a i:l op010707@ 163. com
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中国兽 药杂志
2010, 44( 8): 13~ 16 /陈 敏 , 等
1 材 料 1 . 1 试验动物
健康无伤家兔 18 只 , 购自安义县