线粒体詹姆斯绿染色
线粒体的活体染色
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3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进 行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布 着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是 线粒体。
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2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色观察
1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔， 取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管 吸取Ringer 液，的活体染色与观察 1、人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察 1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴两 滴1/5000詹纳斯绿B染液。
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2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中， 染色10—15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再 加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的 染液，置显微镜下观察。
4) 在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜下观察，可 见具有l～2 个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的 线粒体，注意其形态和分布状况。
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五、作业：
1、绘口腔上皮细胞形态结构。
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口腔上皮细胞 的线粒体分布
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洋葱内整理表ppt皮细胞的线粒体分布 13
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三、实验用品
1. 器材： 显微镜、手术器械、载玻片、盖玻片、吸管、牙
签、吸水纸、小平皿。 2. 试剂：
Ringer液、1/5000詹纳斯绿B、1%甲苯胺兰。 3. 材料：人口腔上皮细胞、小白鼠肝细胞。
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四、实验方法
（一）人口腔上皮细胞的制备与观察
• 用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上(不可反复涂沫)，滴一 滴甲苯胺兰染液，染色5分钟，盖上盖片，吸去多余染液。显微镜下 观察可见覆盖口腔表面的上皮细胞为扁平椭圆形，中央有椭圆形核 ，染成蓝色。
实验八线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验八线粒体和液泡系的超活染色与观察活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法,其目的是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生任何物理,化学变化以致引起细胞的死亡.活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理,病理状态.通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类.体外活体染色又称超活染色,它是由活的动,植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色.活体染料之所以能固定,堆积在细胞内某些特殊的部分,主要是靠染料的"电化学"特性.碱性染料的胶粒表面带阳离子,酸性染料的胶粒表面带有阴离子,而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子,这样,它们彼此之间就发生了吸引作用.但并非任何染料均可用于活体染色,理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料,且使用时需要配成稀淡的溶液.一般说来,最为适用的是碱性染料,这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂,胆固醇等)的特性,易于被细胞吸收.詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料,对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性.实验目的1,观察动,植物活细胞内线粒体,液泡系的形态,数量与分布;2,学习一些细胞器的超活染色技术.实验原理线粒体是细胞内一种重要细胞器,是细胞进行呼吸作用的场所.细胞的各项活动所需要的能量,主要是通过线粒体呼吸作用来提供的.活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法.詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂.线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态.中性红为弱碱性染料,对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性,只将活细胞中的液泡系染成红色,细胞核与细胞质完全不着色,这可能是与液泡中某些蛋白质有关.实验用品1,器材显微镜,恒温水浴锅,解剖盘,剪刀,镊子,双面刀片,解剖盘.载玻片,凹面载玻片,盖玻片,表面皿,吸管,牙签,吸水纸.2,试剂(1)Ringer溶液:氯化钠 0.85g (变温动物用0.65g)氯化钾 0.25g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml(2)10%,1/3000中性红溶液:称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液,稍加热 (30~40?)使之很快溶解,用滤纸过滤,装入棕色瓶于暗处保存,否则易氧化沉淀,失去染色能力.临用前,取已配制的1%中性红溶液1ml,加入29ml Ringer溶液混匀,装入棕色瓶备用.(3) 1%,1/5000詹纳斯绿B溶液称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中,稍加微热(30~40?),使之溶解,用滤纸过滤后,即为1%原液.取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液,即成1/5000工作液装入瓶中备用.最好现用现配,以保持它的充分氧化能力.实验材料人口腔上皮细胞,小麦种子或黄豆幼根根尖.实验方法1,人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察?清洁载玻片放在37?恒温水浴锅的金属板上?滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液?用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞?刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中?染色10~l5min(注意不可使染液干燥,必要时可再加滴染液) ?盖上盖玻片,显微镜下观察2,植物细胞液泡系的超活染色与观察取豆芽的根尖?用刀片纵切根尖?放入中性红染液滴中,染色5~10min. ?吸去染液,滴一滴Ringer液?盖上盖玻片进行镜检(镊子轻轻地下压盖玻片,使根尖压扁,利于观察)实验结果在高倍镜下,先观察根尖部分的生长点的细胞,可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡,这是初生的幼小液泡.然后,由生长点向延长区观察,在一些已分化长大的细胞内,液泡的染色较浅,体积增大,数目变少.在成熟区细胞中,一般只有一个淡红色的巨大液泡,占据细胞的绝大部分,将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处.实验报告(1). 绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布(2). 绘蟾蜍胸骨剑突软骨细胞示液泡系的形态与分布线粒体的最新知识线粒体为线状、长杆状、卵圆形或圆形小体，外被双层界膜。
差速离心分离线粒体
差速离心法分离线粒体课程名称： 细胞生物学 指导老师： 成绩：__________________ 实验名称： 差速离心法分离线粒体 同组学生姓名： 喻儿一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的1.学会差速离心方法及活体染色一般方法。
2.掌握鼠肝线粒体的分离与鉴定方法二、实验原理1.差速离心法:在一定的离心场中，大小不一的颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。
在一个均匀悬浮介质中离心一定时间，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同而停留在高低不同的位置。
依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。
细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其它更轻的细胞器和大分子可依次再分离。
2.悬浮介质的选择：通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2 的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。
离心力 RCF=1.119 ⨯ 10-5 ⨯ r ⨯ n2 （单位：重力常数 g ； r 离心场半径；n 转速）3. 詹纳斯绿活染法鉴定线粒体： 线粒体内的细胞色素氧化酶能使詹纳斯绿染料始终保持在氧化状态而呈现蓝色；而在周围的细胞质内，这些染料被还原成为无色。
在进行线粒体的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染液中染色15min 以上，才能放上盖玻片，以便材料经过氧化（即与空气接触）后，线粒体被染色。
活性样品检测的关键环节：整个操作过程应注意使样品保持4℃，避免酶失活。
三、实验材料与试剂材料：小白鼠肝脏器材：玻璃匀浆器，高速冷冻离心机，普通离心机，剪刀，镊子，小烧杯，离心管，载玻片，盖玻片，滴管，普通光学显微镜，试剂：匀浆介质；詹纳斯绿染色液四、实验步骤I 差速离心法分离线粒体1．小白鼠断颈致死，用75%乙醇消毒外部 皮肤后，剖腹取肝；2．用预冷至0℃的匀浆介质洗肝，干净滤纸 吸干水分后称重；3．往平皿中先加入适量匀浆介质，将肝剪 碎，按每克肝组织加8mL 匀浆介质，加至10mL 玻璃匀浆器中，在冰浴中匀浆；4．待肝组织基本碎裂后，将匀浆液移至10mL 离心管中，平衡后， 4℃下4800rpm 离心15min ，吸取上清液；（染色观察）；5.将1mL 上清液转移至Eppendorf (EP)管 中，4℃，11000rpm(10000g)离心 20min ；(位置)6．转移上清液至新EP 管中；7．沉淀以适量匀浆介质悬浮制成线粒体悬 浮液。
詹纳斯绿B染色液(1%)
版本：A2 修改日期：2023.12.18 詹纳斯绿B 染色液(1%)产品简介：詹纳斯绿B(Janus Green B)又称健那绿，是一种活体染色剂，专一用于线粒体、细胞核的染色，也可判定细胞存活情况。
染色原理是与线粒体中细胞色素C 氧化酶结合，从而出现蓝绿色。
Leagene 詹纳斯绿B 染色液(1%) 由詹纳斯绿B 、Ringer 液配制而成。
染色过程中务必保持标本的活性，并且迅速操作，当细胞死亡或开始死亡时，随着酶的失活，细胞质和细胞核也被染色，呈不同程度的绿色。
在取材时要准确、快速；染色时，组织块表面暴露在染液外面，使细胞内线粒体的酶可以充分进行氧化，保持染料的氧化状态。
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取新鲜较薄的动物组织(2~3mm 3)，用Ringer 液清洗3次，去除血液，用滤纸吸干。
2、 组织上滴加詹纳斯绿B 染色液(1%)，根据不同样本染色而异。
3、 组织移至载玻片上，用镊子将其拉碎后，去除组织块，留下细胞，再滴加一滴 Ringer液，盖上盖玻片，滤纸从侧面吸去多余的液体。
镜下观察。
注意事项：1、 詹纳斯绿有微弱毒性，染色时间过长，有可能导致线粒体形成空泡，操作中应注意。
2、 染色的组织应是新鲜的，尽快染色，一般2h 内全部完成。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
有效期：12个月有效。
常温运输，4℃保存。
编号 名称 DZ0007 Storage 詹纳斯绿B 染色液(1%) 10ml 4℃ 避光 使用说明书1份。
小鼠线粒体的分离与观察
小鼠肝线粒体的分离与观察生科三班2011/5/2实验目的1 了解提取线粒体的基本原理及其过程，掌握差速离心法分离细胞器。
2 通过光学显微镜的观察了解体外分离的线粒体的一般形态。
3 巩固普通染色步骤及注意事项。
实验原理线粒体是细胞中重要的细胞器，存在于绝大多数生活细胞中，它的主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。
正由于这样，对线粒体膜，呼吸链酶及线粒体DNA等成分的结构，功能以及物理化学性质的研究已经成为细胞生物学研究中的重要课题，所以提取线粒体的技术已经成为线粒体研究中必不可少的手段，线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌，肝，肾等器官和组织的细胞中，大量置备线粒体就是从这些器官组织中提取，当所用样品较少时（如电镜和光镜的观察）可采用从组织培养细胞中提取。
本实验是介绍从小鼠肝细胞中提取线粒体并在光镜下观察的方法。
线粒体（mitochondria）是真核细胞特有的，是能量转换的重要细胞器。
细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。
对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。
制备线粒体采用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心。
在一给定的离心场中，球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。
在均匀悬浮介质中离心一定时间内，组织匀浆中的各种细胞器及其它内食物，由于沉降速度不同将停留在不同的位置。
依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。
细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其他更轻的细胞器和大分子可一次再分离。
悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。
整个操作过程注意使样品保持4℃，避免酶失活。
本实验用的是Ringer缓冲液作为悬浮介质。
线粒体的鉴定用詹纳斯绿活染法，詹纳斯绿B(Janus green B)是对线粒体专一的活细胞染料毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由此吸引堆积在线粒体膜上，线粒体 cell色素氧化酶，使该料保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色。
线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理
Cas 编号: 2869-83-2 EINECS 编号: 220-695-6 MDL 编号: MFCD00011758 Beilstein 编号:分子式: C30H31ClN6 分子量: 511.06中文别名:詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium chloride小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。
2. 实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠3. 实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。
这种染色方法常用的是化学染料。
目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。
应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。
（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。
体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。
一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
实验九 液泡系和线粒体的活体染色及观察
五．实验结果
4. 在小麦或黄豆根尖细胞制片中，可见细 胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色 的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后， 由生长点向延长区观察，在一些已分化长 大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大， 数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一 个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部 分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞 壁处。
六．实验中的注意事项
1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持 它的充分氧化能力。 2、实验中速度要快，以免组织细胞死 亡。
七．实验作业
1．绘制口腔上皮细胞线粒体形态示意 图。 2．绘制蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡形 态示意图。 3.清谈谈实验中有哪些注意事项?
八．思考题
1．高等动物和高等植物细胞中的线粒体形态、数 量和分布上有何不同？ 2．用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什 么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？ 3．小麦或黄豆根尖经中性红超活染色后，为什么 看到生长点的细胞中液泡小而多，而且染色深， 延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？植物细胞 液泡系的形态演进有何规律性？ 4．高等动物和高等植物细胞中的液泡系（高尔基 体）分布上有何不同？ 5．谈谈徒手切片、撕片、涂片技术的要点。
（三）材料
人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 蟾蜍胸骨剑突软骨细胞 小麦或黄豆幼根根尖
四、实验步骤
（一）线粒体的超活染色与观察
1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和 数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理 状态而发生变化。
1）人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 ⑴取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上， 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察
五．实验结果
线粒体詹姆斯绿染色
线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。
苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。
化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。
能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。
詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。
它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。
原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。
通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。
Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。
【细胞生物学】06-线粒体的结构功能与遗传(36)
1989年：Boyer提出“结合变化机制”和“旋转催化模 型”
阐述ATP合成酶的工作机制
Contents
线粒体的形态结构 线粒体的化学组成及酶的定位 线粒体的功能 线粒体的半自主性 线粒体的生物发生 线粒体与医学
学习要点
▲ 线粒体内外膜的蛋白分布是不同的： 外膜：14种不溶蛋白 内膜：21种不溶蛋白
（二）脂类:占线粒体干重的30%-35%。 90%为磷脂，胆固醇含量极少。
外膜主要含：磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇 内膜主要含：心磷脂（双磷脂酰甘油）
占脂质总量的20%，与内膜较低的通透性有关。
心磷脂分子式
（三）水、无机盐离子及其他
★分布：
分布不均，细胞代谢旺盛的需能部位比较集中。 ☆肌细胞: 线粒体沿肌原纤维规则排列； ☆精子细胞: 线粒体集中在鞭毛中区；
线粒体的分布多集中在细胞的需能部位，有利于 细胞需
二、线粒体的超微结构
核糖体
膜间腔 基质腔
外膜
嵴膜
内膜
ATP合成酶（基本微粒）
(a)扫描电镜照片： 示线粒体立体结构；
1. 水：结合水
游离水
2.无机盐离子：主要为二价阳离子
3.其他：CoQ、FMN（黄素单核苷酸） 、
酸）、
FAD（黄素腺嘌呤二核苷
内外膜组分比较
部位 组分 胆固醇
脂类总量
内膜Biblioteka 外膜少（1/6外膜， 多 含心磷脂）
少（1/3外膜） 多
不溶性蛋白 21种
14种
蛋白质/脂类 4:1
1:1
结论：各组成成分的差别是内膜区别于外膜的重要标记， 赋予二者功能上的差异。
健那绿
健那绿健那绿，即Janus green B 染液，原来也曾译为詹纳斯绿B，常用作线粒体专一性活体染色剂。
【中文别名】健那绿；詹纳斯绿；双氮嗪绿。
苏铁木精.【英文别名】Janus green；Diazine green；Diazine green S 。
分子式C30H31ClN6 分子量511.07【原理】线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态.线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时,通过染色,可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布.【配制】配制质量分数为1%健那绿染液:将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解.健那绿染液可以将线粒体染成蓝色。
甲基绿可以将DNA染成绿色。
所以细胞核可以呈现绿色。
同时线粒体和叶绿体中也含有DNA但一般看不出来。
因为比较小，而且叶绿体本身就是绿色的。
高考生物实验冲刺专题15 安徽二轮实验专题15 第六部分实验专题测试一一、选择题（共20题，共40分）1．观察黑藻叶中叶绿体的实验时，下列操作不正确的是A．制作临时装片时，先在载玻片中央滴一滴健那绿染液B．先在低倍镜下找到细胞，再用高倍镜观察C．随时保持临时装片中有水状态D．若视野比较暗，可调节反光镜和增大光圈【答案】Ａ2．生物学研究中，经常使用染色剂对生物体的结构或物质染色，以便观察和鉴定。
下列有关叙述中正确的是A．观察线粒体时用健那绿染色，线粒体被染成蓝黑色B．鉴定蛋白质时用斐林试剂，混合后加热变成砖红色c．使用甲基绿和吡罗红染色，细胞核变红色，细胞质变绿色D．观察染色体的形态，用0．02g／ml的龙胆紫将染色体染成深色【答案】Ｄ3．在探究不同的温度对酶活性的影响实验中，温度和pH值分别属于A．自变量和因变量B．因变量和无关变量C．自变量和无关变量D．自变量和对照变量【答案】Ｃ4．斐林试剂可以鉴定麦芽糖，是由于麦芽糖具有A．醛基B．肽键C．酮基。
液泡系和线粒体的活体染色及观察
2）植物细胞线粒体的活体染色与观察（洋葱鳞茎内表皮 细胞）
⑴用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干净的载波片上， 然后用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于染液中，染色10～ 15mห้องสมุดไป่ตู้n。
⑵吸去染液，加一滴Ringer 液，注意使洋葱内表皮展平，盖上盖 片，显微镜观察。
⑶在高倍镜下，可见表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤 至旁边，在其周围有线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状。 仔细观察细胞质中线粒体的形态、数目和分布。
⑷ 在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大 小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点 向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大， 数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的 绝大部分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
六．实验中的注意事项
1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充分氧化能力。 2、实验中速度要快，以免组织细胞死亡。
称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热（30~40度）使之很快溶 解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于
暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml
Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
3．1%、1/5000詹姆斯绿B溶液
称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加
二、实验原理
• 线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上分布有细胞色素 氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而 使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。
• 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。中性 红是液泡的特殊染色剂，将液泡染成红色。在活细胞中，细胞 质和细胞核不着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核着 色。
实验四、线粒体的超活染色与观察
实验四线粒体的超活染色1、材料：口腔上皮细胞、洋葱表皮临时装片一、原理：詹姆斯绿染料是专一性用于线粒体染色的活细胞染液，可以将线粒体染成蓝绿色，而线粒体周围的细胞质中的詹姆斯绿被还原成无色状态，从而显示线粒体。
二、实验材料与试剂1、材料：人的口腔上皮细胞、洋葱内表皮2、器具：显微镜，载玻片，盖玻片，消毒牙签，吸水纸，镊子；3、试剂的配制：（1）Ringer液（复合生理盐水）：0.25g kcl+0.85gNacl+0.03gCacl 加入100ml水）（2）1%詹姆斯绿染液（原液）50mg 詹姆斯绿溶解于5ml Ringer液。
稍加热（30-40℃）使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
（3）詹姆斯绿染液（应用液）取1%詹姆斯绿1ml，加入49ml Ringer液，混匀装入棕色瓶备用。
现用现配。
三、步骤1.观察人口腔上皮细胞线粒体(1)把清洁的载玻片平放在桌上，滴几滴健那绿绿染液于载玻片中央。
(2)用消毒牙签的钝端在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取口腔上皮细胞，均匀地涂到载玻片的染液中。
盖上盖玻片，四周溢出的染液用吸水纸吸干。
(3) 10分钟后用高倍镜或油镜观察，可以看到在接近无色的口腔上皮细胞的细胞质中，特别是在细胞核周围，散布着许多被染成蓝绿色的短棒状或颗粒状结构，即为线粒体。
2.观察洋葱鳞茎表皮细胞线粒体(1)撕取5×5毫米一块新鲜洋葱鳞茎内表皮，展平在洁净载玻片中央。
(2)滴几滴健那绿绿染液，染色10分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去周围溢出的染液。
(3)在高倍镜或油镜下可以观察到细胞质中的线粒体被染成蓝绿色，呈条状或颗粒状。
四、注意事项1、詹姆斯绿染液浓度不宜过高，染色时间不宜太长，否则细胞质会重新氧化成有色状态而不能充分还原染料成无色状态。
2、配制时间：詹姆斯绿染液宜在使用时配制新鲜液，不可久存。
3、如果观察发现染色不足，在盖玻片一侧滴加健那绿液，另一侧用吸水纸吸。
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察-精选文档
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同， 通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。 体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体 内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结 构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活 染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组 织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活 细胞的某种结构上而显色。
3、各部结构名称要在图的一侧引直线注明。各引 线要平行不得交叉。
4、每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当， 并注意纸面的整洁。
实验报告
实验目的 实验用品 实验原理 实验方法 形态与分布 2. 绘示小麦根尖液泡系的形态与分布 3、什么是活体染色？要想获得体外活体染色成功
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料 的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而 被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼 此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活 体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染 料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染 料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、 胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹姆斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体 染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有 专一性。
线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上 分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B 保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显 色，而细胞质中的染料被还原成无色。
液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重 要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂，将液 泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不 着色。如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核 着色。
实验三 线粒体活体染色
线粒体活体染色
活体染色：是使生活有机体的细胞或组织特异性着色， 但对该样本又没有毒害作用的一种染色方法。 目的：既显示活体细胞内的某些结构，又不影响细胞 的生命活动和产生任何物理和化学变化以致细胞的死亡。 应用：活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形 态结构和细胞生理、病理状态
线粒体活体染色
3. 加至5ml低渗液，吹打后将离心管置37℃水浴中低渗 20min。
染色体标本制备
4. 1000r／min离心8min。，弃上清液。 5. 固定：加入新配制的甲醇：冰醋酸(3：1)固定液5ml，
立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀，静置固定20min。 （如此反复固定2～3次，每次20min。） 6. 滴片：固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，加入
油镜下小鼠骨髓细胞染色体
油镜下观察
染色体标本观察
线粒体活体染色
线粒体活体染色
线粒体电镜观察
A
C
M
C
N
M
线粒体电镜观察
C C C
N M
MV L
线粒体电镜观察
B M
M
N L
MV
MV
N
L
N
染色体标本制备
实验仪器、用具
天平 离心机 温箱 显微镜 酒精灯
注射器 解剖盘 解剖剪 刀片 离心管 吸管 烧杯 冰冻载玻片
骨髓细胞染色体标本制备
1. 秋水仙素处理动物：按4μg/g体重的剂量经腹腔注 射秋水仙素，3～4h后杀死动物。
2. 取骨髓取出动物后肢的股骨，剪去两端骨骺。 用注射器吸取2ml 0.075M KCl溶液注入骨髓腔，将 骨髓细胞冲入离心管中，用吸管反复吸打骨髓细胞， 使细胞团块分散。
《细胞生物学》填空题
1、溶酶体内pH呈酸性，维持其酸性pH的质子泵为V型质子泵，而在线粒体和叶绿体内膜上的质子泵为F型质子泵2、植物细胞维持其细胞内外电位差是H+泵（H+-ATP酶）1、能对线粒体进行专一染色的活性染料是詹姆斯绿B。
2、线粒体在超微结构上可分为内膜、外膜、膜间隙、基质。
3、线粒体各部位都有其特异的标志酶，内膜是细胞色素氧化酶、外膜是单胺氧化酶、膜间隙是腺苷酸激酶、基质是柠檬酸合成酶。
4、线粒体中，氧化和磷酸化密切偶联在一起，但却由两个不同的系统实现的，氧化过程主要由子传递链（呼吸链）实现，磷酸化主要由ATP合成酶完成完成。
5、细胞内膜上的呼吸链主要可以分为两类，既NADH呼吸链和FADH2呼吸链。
6、由线粒体异常病变而产生的疾病称为线粒体病，其中典型的是一种心肌线粒体病克山病。
7、植物细胞中具有特异的质体细胞器主要分为叶绿体、有色体、白色体。
8、叶绿体在显微结构上主要分为叶绿体膜、基质、类囊体。
9、在自然界中含量最丰富且在光合作用中起重要作用的酶是核酮糖－1，5－二磷酸羧化酶。
10、光合作用的过程主要可分为三步：原初反应、电子传递和光合磷酸化和碳同化。
11、光合作用根据是否需要光可分为光反应和暗反应。
12、真核细胞中由双层膜包裹形成的细胞器是线粒体和叶绿体。
13、引导蛋白到线粒体中去的具有定向信息的特异氨基酸序列被称为导肽。
14、叶绿体中每3个H+穿过叶绿体ATP合成酶，生成1个ATP分子，线粒体中每2个H+穿过ATP合成酶，生成1个ATP分子。
15、氧是在植物细胞中叶绿体的类囊体部位上所进行的光合磷酸化（光合作用）的过程中产生的。
1、在糙面内质网上合成的蛋白质主要包括分泌蛋白、膜整合蛋白、细胞器驻留蛋白等。
2、蛋白质的糖基化修饰主要分为 N-连接和 O-连接；其中 N-连接主要在内质网上进行，指的是蛋白质上的天冬酰胺残基与 N乙酰葡糖胺直接连接，而 O-连接则是蛋白质上的丝氨酸与 N-乙酰半孔糖胺直接连接。
线粒体结构与功能
.线粒体（mitochondria）线粒体的研究历史1890: R.Altman（亚特曼）在动物细胞中首次发现线粒体,命名为生命小体(bioblast)。
1897: Von Benda 命名为线粒体(Mitochondrion)1900：L.Michaelis（米凯利斯) 用詹姆斯绿B对线粒体进行活体染色，发现线粒体存在大量的细胞色素氧化酶系。
1913：Engelhardt（恩格尔哈特）证明细胞内ATP磷酸化与细胞内氧消耗相偶联。
1943-1950：Kennedy等证明糖最终氧化场所在线粒体。
1952-1953：Palade（帕拉登）等用电镜观察线粒体的形态结构。
1976： Hatefi等纯化呼吸链四个独立的复合体。
1961-1980：Mitchell（米切尔）氧化磷酸化的化学渗透假说。
1963年：Nass首次发现线粒体存在DNA。
Contents线粒体的形态结构线粒体的化学组成及酶的定位线粒体的功能线粒体的半自主性线粒体的生物发生（自学）第一节线粒体的形态结构一、光镜下线粒体形态、大小、数量及分布（一）形态、大小光镜下常见线粒体呈线状和颗粒状，也可呈环形、哑铃形、分枝状等，随细胞生理状况而变。
一般直径0.5～1.0μm，长1.5～3.0μm。
不同细胞线粒体大小变动很大，大鼠肝细胞线粒体长5μm; 胰腺外分泌细胞线粒体长10～20μm，人成纤维细胞线粒体长40μm。
线粒体形态、大小因细胞种类和生理状况不同而异。
光镜下:线状、杆状、粒状二）数量依细胞类型而异，动物细胞一般数百到数千个。
...利什曼原虫:一个巨大的线粒体；海胆卵母细胞：30多万个。
随细胞生理功能及生理状态变化需能细胞：线粒体数目多，如哺乳动物心肌、小肠、肝等内脏细胞；飞翔鸟类胸肌细胞：线粒体数目比不飞翔鸟多；运动员肌细胞：线粒体数目比不常运动人的多。
（三）分布分布: 不均，细胞代谢旺盛的需能部位比较集中。
肌细胞: 线粒体沿肌原纤维规则排列；精子细胞: 线粒体集中在鞭毛中区；分泌细胞：线粒体聚集在分泌物合成的区域；肾细胞：线粒体靠近微血管，呈平行或栅状列。
液泡系和线粒体的活体染色及观察
⑵实验者用牙签宽头在自己口腔颊部粘膜处稍用 力刮取上皮细胞， 力刮取上皮细胞，将第一次刮下的粘液状物洗 去，将第二次刮下的粘液状物放入载玻片的染液 滴中，染色10 15min（注意不可使染液干燥， 10～ 滴中，染色10～15min（注意不可使染液干燥， 必要时可再加滴染液），盖上盖玻片， ），盖上盖玻片 必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸 吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞， ⑶在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高 倍镜或油镜进行观察。 倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核 周围胞质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或 短棒状的结构，即线粒体。 短棒状的结构，即线粒体。
口腔颊部上皮细胞示线粒体
2、鸡肝细胞超活染色与观察 、
(1)处死鸡取肝脏 处死鸡取肝脏 (2)在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加詹纳绿 应用 在干净的凹面载玻片的凹穴中， 在干净的凹面载玻片的凹穴中 滴加詹纳绿B 再将肝组织块移入染液， 液，再将肝组织块移入染液，注意不可将组织块完全 淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞 淹没，要使组织块上面部分半露在染液外， 内的线粒体表面可充分得到氧化，易被染色。 内的线粒体表面可充分得到氧化，易被染色。当组织 块边缘被染成蓝绿色即成(—般需染 般需染20～ 块边缘被染成蓝绿色即成 般需染 ～30min)。 。 (3) 吸去染液，滴加 吸去染液，滴加Ringer 溶液，用眼科剪将组织块 溶液， 着色部分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后， 着色部分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后，用吸管 吸取分离出的细胞悬液，滴一滴子载玻片上， 吸取分离出的细胞悬液，滴一滴子载玻片上，盖上盖 玻片进行观察。 玻片进行观察。 (4) 在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜或油 在低倍镜下选择不重叠的肝细胞， 镜下观察，可见具有l～ 个核的肝细胞质中， 镜下观察，可见具有 ～2 个核的肝细胞质中，有许多 被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。 被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。
线粒体的超活染色与观察
姓名系年级13级生科3班组别同组者科目细胞生物学实验题目线粒体的超活染色与观察学号【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。
【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml；1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
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线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。
苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。
化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。
能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。
詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。
它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。
原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。
通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。
Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。
常用作线粒体专一性活体性状: 染色剂. 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 贮存: 联合国编号: Risk: Safety: Hazard: 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。
密封干燥保存。
S24/25小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。
2. 实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠 3. 实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。
这种染色方法常用的是化学染料。
目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。
应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。
（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。
体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。
一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。
（3）选择活体染料的原则：① 性质：有电化学特性② 低毒、无毒③ 低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液④ 专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色⑤ 常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。
4. 实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，取出肝脏。
选取边缘较薄的肝组织0.5cm2放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。
（2）滴加1/5000的詹纳斯绿B染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。
以组织边缘被染成蓝绿色为准。
（3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。
滴加Ringer液约0.5mL，用剪刀充分剪碎组织制成悬液。
（4）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。
5. 实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。
视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。
10*40显微镜下6. 分析与讨论（1）结果分析：部分肝细胞的线粒体被染成绿色（2）注意事项① 取肝组织：取肝组织时，应注意选择肝的边缘部分，这一部分组织的厚度差比分剪碎组织制成悬液。
（3）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。
5. 实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。
视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。
10*40显微镜下观察：6. 分析与讨论GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂是一种旨在通过一种毒性较小的碱性染料特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色，从而判断线粒体功能的完整性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）制备物的功能检测。
产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。
线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌、肝、肾等器官和组织的细胞中。
大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。
在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。
詹纳斯绿B（Janus green B），是一种毒性较小的碱性染料。
它可以对活细胞进行直接染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体的线粒体。
线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。
产品内容GENMED保存液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）毫升GENMED清理液（Reagent C）毫升保存方式保存在－20℃冰箱里；GENMED染色液(Reagent B)，避免光照；有效保证6月用户自备毫升离心管：用于线粒体染色的容器光学显微镜：用于线粒体染色观察分析实验步骤实验开始前，将℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置于冰槽里融化，并放在暗室里。
然后进行下列操作。
一、纯化线粒体染色1．从纯化的线粒体样品中移出至微升（含细胞中提取的线粒体）到新的预冷的毫升离心管，置于冰槽里（注意：线粒体须均匀分布，没有聚集成团）。
2．加入等量微升的GENMED染色液（Reagent B），轻柔混匀。
3．放进暗室里，在室温下孵育1分钟。
4．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片。
5．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色圆形或椭圆形颗粒（注意：可见蓝绿色渐渐变淡现象）。
6．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失。
二、活体细胞染色1．将待测细胞（X 细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf 5415）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED清理液（Reagent C）或GENMED保存液（Reagent A）5．加入微升GENMED染色液（Reagent B），充分混匀6．放进暗室里，在冰槽里孵育分钟7．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片8．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色线状或颗粒小体。
9．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失。
注意事项1．本产品为20次（活体细胞）或400次（纯化线粒体）操作2．所有操作均须无菌状态下进行3．线粒体样品操作须在低温下进行，且操作快速4．操作时，须戴手套5．建议染色完成后，即刻进行显微镜观察分析6．孵育时，须避免光照7．本公司提供系列线粒体试剂产品兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B是线垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。
(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。