植物组织培养52718PPT课件
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外植体上残留的杂菌会和外植体争夺培养基中的营养物质，并 且产生大量对外植体有害的物质，导致外植体死亡，所以要先 消毒再接种。
.
3、接种 ⑴将已消毒的外植体插入培养基，形态学上端朝上。 ⑵在酒精灯旁，每个锥形瓶接种2-3外植体。
注意事项： ①注意无菌操作 ②注意别烫伤植物材料 ③注意植物材料插入方向
.
4、培养
⑴在日光灯下保持18-25℃培养，每天的光照不少于 14.5h ⑵先生芽培养，然后再生根培养 2～3 周后将生长健壮的丛状苗 在无菌条件下一个个转 入生根培养基中，在上述条件下继续培养。
注意事项： ①无菌箱中培养并定期消毒 ②如果培养顺序颠倒，则不容易诱导芽的形成 ③一般情况下，愈伤组织形成不需要光，试管苗形成后需要见光培养
.
结果 诱导芽生成 愈伤组织继续生长而不分化 诱导根生成
2. 萘乙酸(NAA)需用少量 0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶 解，苄基腺嘌呤(BA)需用少量0.1mol/L 盐酸溶解。也 可配成母液冰箱中保存。
3. 发芽培养基：3 000mL MS 培养基+含 1.5mg BA 的溶液+含 0.02mg NAA的溶液+30g 蔗糖+40g 琼 脂，再加蒸馏水至 4 000mL，混合均匀，加热至琼脂 融化后，通过三角漏斗分装至 100mL 三角瓶中，每瓶 40mL，共 100 瓶。三角瓶加上封口膜后 1kg 压力下 在灭菌锅中灭菌 20min。
植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天 然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的 激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间 长，作用效果明显。
.
生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的相互作用
比例 细胞分裂素浓度>生长素浓度 细胞分裂素浓度=生长素浓度 细胞分裂素浓度<生长素浓度
.
菊花组织培养操作步骤:
.
1、配制MS培养基 ⑴配制各种母液→配制培养基→灭菌
⑵培养基由大量元素、微量元素和有机成分组成
在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，因为其茎段 培养比较容易
.
2、外植体消毒 一般选择未开花植株的茎上部新萌发的侧枝 若使用自然生长的茎进行组织培养，则可取一段茎在 70%的乙醇中浸泡10分钟，在放入5%的次氯酸钠溶液 中浸泡5分钟，然后用另一次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最 后在超净台中用无菌水冲洗，将茎的切段培养在生芽培 养基中。
.
5、移栽锻炼 将生根的苗从锥形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或 塑料布保持80%以上的湿度，2-3天后打开玻璃罩逐渐降 低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度为止。
6、定植 苗健壮后移至土中培养（定植），即可长成植株并开花。
.
例题：右图是实验室进行植 物组织培养的一般过程。请 回答下列问题：
.
MS培养基中各成分的作用
成分
作用
微量Fra Baidu bibliotek大量元素
提供植物细胞生活所必需的无机盐
蔗糖
提供碳源，维持细胞渗透压
甘氨酸、维生素、 满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影 烟酸、肌醇等 响后所产生的特殊营养需求
.
植物激素和人工合成的植物激素
天然植物激素
植物激素类似物
生长素 细胞分裂素
萘乙酸（NAA） 苄基腺嘌呤（BA）
植物组织培养
.
一般不需要光
取一部分植物组织,在无菌的条件下接种在培养基上,给予一定的 温度和光照,使之产生愈伤组织,或进而生根发芽,培养为成熟植株 的技术。
.
1．植物组织培养的基本过程
(1)理论基础：植物细胞的_全___能__性____。
(2)细胞分化：在植物的个体发育过程中，细胞在 __形__态____、__结__构____和生理功能上出现__稳__定__性__差___异__的 过程。
.
防止外植体带菌植、物保组证织培培养养基的及条接件种器 具彻底灭菌、严格遵守无菌操作规程
无菌环境
一定的温度
MS培养基
一适定时的光照
含有全部营养成分的培养基
适量空气 适合的PH
适宜的外植体 植物激素比例合适
.
MS培养基配方表：
由 大量元素 、微量元素和 有机成分 三大成分组成
其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐 含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要
⑵脱分化和再分化过程中都需要植物激素发挥作用
⑶因植物细胞都具有全能性,故菊花组织培养实验中 选材不会影响实验结果
⑷野生菊花苗段在接种前要用酒精和次氯酸钠溶液 进行消毒,再用自然水清洗。
.
植物组织培养技术
1、概念：
取一部分植物组织，在 无菌 的条件下接种在 培养基上，给予一定的 温度 和 光照 ，使 之产生 愈伤组织 ，或进而生根发芽，培养为成 熟植株的技术。
.
(3)基本过程
①愈伤组织：由离体的植物组织或细胞经 脱分化 形成的一 种 相对没有分化 的活的薄壁细胞团组成的新生组织。 ②脱分化：又叫去分化，是由_高__度__分__化___的植物组织或细胞产 生_愈__伤___组__织__的过程。 ③再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成_根__或___芽__等器官的 过程。
从历状苗 和生根苗两个阶段,形成试管苗。定植前还需要将试管苗移栽
至草炭蛭土石或
中继续培养,其目的湿是度锻炼/炼苗(适应土壤种植)
。
⑷下表所列B 该实验设备、用品及材料与其灭菌或消毒方法的对应关系中,错
误的是
。
A. 三角瓶 高压蒸汽灭菌 B. 培养基. G6玻璃砂漏斗过滤
[判一判]
⑴实验过程中先使茎段生根,再使生根苗长叶
⑴下列设备及用品中,该实验无需使用的是 D .
A．酒精灯 B．灭菌锅 C．封口膜 D．玻璃刮刀
⑵培养过程中涉及的培养基有: MS 培养基、发芽 培养基、 生根 培养
基。与微生物培养基相比,植物组织培养一般要添N加AA
B、A
作为生长调节剂。
⑶离体组织接种后脱分化形成愈伤组织 ,在不同配比激素的诱导下,依次经
.
4. 生根培养基：1 000mL MS 培养基+含 0.38mg NAA 的溶 液+30g 蔗糖+20g琼脂，再加蒸馏水至 2 000mL，混合均匀 ，加热至琼脂融化后，分装至 100mL 的三角瓶中，每瓶 40mL，共 50 瓶。灭菌操作同步骤 3。
三角瓶加上封口膜后 1kg 压力下在灭菌锅中灭菌 20min
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3、接种 ⑴将已消毒的外植体插入培养基，形态学上端朝上。 ⑵在酒精灯旁，每个锥形瓶接种2-3外植体。
注意事项： ①注意无菌操作 ②注意别烫伤植物材料 ③注意植物材料插入方向
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4、培养
⑴在日光灯下保持18-25℃培养，每天的光照不少于 14.5h ⑵先生芽培养，然后再生根培养 2～3 周后将生长健壮的丛状苗 在无菌条件下一个个转 入生根培养基中，在上述条件下继续培养。
注意事项： ①无菌箱中培养并定期消毒 ②如果培养顺序颠倒，则不容易诱导芽的形成 ③一般情况下，愈伤组织形成不需要光，试管苗形成后需要见光培养
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结果 诱导芽生成 愈伤组织继续生长而不分化 诱导根生成
2. 萘乙酸(NAA)需用少量 0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶 解，苄基腺嘌呤(BA)需用少量0.1mol/L 盐酸溶解。也 可配成母液冰箱中保存。
3. 发芽培养基：3 000mL MS 培养基+含 1.5mg BA 的溶液+含 0.02mg NAA的溶液+30g 蔗糖+40g 琼 脂，再加蒸馏水至 4 000mL，混合均匀，加热至琼脂 融化后，通过三角漏斗分装至 100mL 三角瓶中，每瓶 40mL，共 100 瓶。三角瓶加上封口膜后 1kg 压力下 在灭菌锅中灭菌 20min。
植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天 然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的 激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间 长，作用效果明显。
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生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的相互作用
比例 细胞分裂素浓度>生长素浓度 细胞分裂素浓度=生长素浓度 细胞分裂素浓度<生长素浓度
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菊花组织培养操作步骤:
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1、配制MS培养基 ⑴配制各种母液→配制培养基→灭菌
⑵培养基由大量元素、微量元素和有机成分组成
在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，因为其茎段 培养比较容易
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2、外植体消毒 一般选择未开花植株的茎上部新萌发的侧枝 若使用自然生长的茎进行组织培养，则可取一段茎在 70%的乙醇中浸泡10分钟，在放入5%的次氯酸钠溶液 中浸泡5分钟，然后用另一次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最 后在超净台中用无菌水冲洗，将茎的切段培养在生芽培 养基中。
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5、移栽锻炼 将生根的苗从锥形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或 塑料布保持80%以上的湿度，2-3天后打开玻璃罩逐渐降 低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度为止。
6、定植 苗健壮后移至土中培养（定植），即可长成植株并开花。
.
例题：右图是实验室进行植 物组织培养的一般过程。请 回答下列问题：
.
MS培养基中各成分的作用
成分
作用
微量Fra Baidu bibliotek大量元素
提供植物细胞生活所必需的无机盐
蔗糖
提供碳源，维持细胞渗透压
甘氨酸、维生素、 满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影 烟酸、肌醇等 响后所产生的特殊营养需求
.
植物激素和人工合成的植物激素
天然植物激素
植物激素类似物
生长素 细胞分裂素
萘乙酸（NAA） 苄基腺嘌呤（BA）
植物组织培养
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一般不需要光
取一部分植物组织,在无菌的条件下接种在培养基上,给予一定的 温度和光照,使之产生愈伤组织,或进而生根发芽,培养为成熟植株 的技术。
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1．植物组织培养的基本过程
(1)理论基础：植物细胞的_全___能__性____。
(2)细胞分化：在植物的个体发育过程中，细胞在 __形__态____、__结__构____和生理功能上出现__稳__定__性__差___异__的 过程。
.
防止外植体带菌植、物保组证织培培养养基的及条接件种器 具彻底灭菌、严格遵守无菌操作规程
无菌环境
一定的温度
MS培养基
一适定时的光照
含有全部营养成分的培养基
适量空气 适合的PH
适宜的外植体 植物激素比例合适
.
MS培养基配方表：
由 大量元素 、微量元素和 有机成分 三大成分组成
其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐 含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要
⑵脱分化和再分化过程中都需要植物激素发挥作用
⑶因植物细胞都具有全能性,故菊花组织培养实验中 选材不会影响实验结果
⑷野生菊花苗段在接种前要用酒精和次氯酸钠溶液 进行消毒,再用自然水清洗。
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植物组织培养技术
1、概念：
取一部分植物组织，在 无菌 的条件下接种在 培养基上，给予一定的 温度 和 光照 ，使 之产生 愈伤组织 ，或进而生根发芽，培养为成 熟植株的技术。
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(3)基本过程
①愈伤组织：由离体的植物组织或细胞经 脱分化 形成的一 种 相对没有分化 的活的薄壁细胞团组成的新生组织。 ②脱分化：又叫去分化，是由_高__度__分__化___的植物组织或细胞产 生_愈__伤___组__织__的过程。 ③再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成_根__或___芽__等器官的 过程。
从历状苗 和生根苗两个阶段,形成试管苗。定植前还需要将试管苗移栽
至草炭蛭土石或
中继续培养,其目的湿是度锻炼/炼苗(适应土壤种植)
。
⑷下表所列B 该实验设备、用品及材料与其灭菌或消毒方法的对应关系中,错
误的是
。
A. 三角瓶 高压蒸汽灭菌 B. 培养基. G6玻璃砂漏斗过滤
[判一判]
⑴实验过程中先使茎段生根,再使生根苗长叶
⑴下列设备及用品中,该实验无需使用的是 D .
A．酒精灯 B．灭菌锅 C．封口膜 D．玻璃刮刀
⑵培养过程中涉及的培养基有: MS 培养基、发芽 培养基、 生根 培养
基。与微生物培养基相比,植物组织培养一般要添N加AA
B、A
作为生长调节剂。
⑶离体组织接种后脱分化形成愈伤组织 ,在不同配比激素的诱导下,依次经
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4. 生根培养基：1 000mL MS 培养基+含 0.38mg NAA 的溶 液+30g 蔗糖+20g琼脂，再加蒸馏水至 2 000mL，混合均匀 ，加热至琼脂融化后，分装至 100mL 的三角瓶中，每瓶 40mL，共 50 瓶。灭菌操作同步骤 3。
三角瓶加上封口膜后 1kg 压力下在灭菌锅中灭菌 20min