人类性染色质体观察

姓名班级同组人

科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组

一、研究背景

1949年，美国人Barr发现，雌猫神经元细胞核中在间期有一个深染的小体，而雄猫没有。

以后在其他哺乳动物中发现同样现象。称为Barr’s body，巴氏小体。

研究发现巴氏小体的数目＝x染色体数-1

1961年Mary Lyon提出巴氏小体是通过异固缩形成异染色体而失活的X染色体，是

达到雌雄两性X染色体上活性基因剂量平衡的一种补偿方式。巴氏小体也被称为性染色

质体或 X染色质体。

Lyon假说的要点：

1. X染色体失活发生在胚胎发育的早期（受精后的16天左右，胚胎的细胞数达到

5000～6000左右，植入子宫壁时），一旦失活，其上的大部分基因也失去表达活性；

2. 每一体细胞中哪一条x染色体失活是随机的；

3. X染色体的失活状态可以通过有丝分裂传递，即一旦某条X染色体失活，在其所有子细

胞中都是同样一条X染色体失活。

修正：失活的X染色体上并非全部基因都呈莱昂化（失活）：

①呈莱昂化（失活）的基因如G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血Ⅷ因子）；这些

基因表现了完全的失活，即XGXG≈XGY

②非莱昂化基因：如Xg血型基因、MIC2抗原基因等，这些基因无论在有活性还是在无活

性的X染色体上都能够表达。即 XGXG≈XGY的2倍

③不完全的剂量补偿效应：如 XSXS 的产物是 XSY 产物的1.3倍，而没有达到2倍。

二、研究目的

1、确定巴氏小体的位置，观察巴氏小体的形态；

2、尝试通过观察巴氏小体的有无进一步验证性别

三、实验原理

巴氏小体形态：在间期也表现为浓缩致密的、深染的结构，在DNA复制期表现为晚复制。大小约1～1.5微米。女性细胞中观察到的频率为13～39％，正常男性0～2％。

但是：

1.生殖细胞中不发生X染色体失活。

2.失活的X染色体上有活性基因似乎是与失活基因相嵌存在。

因此，哺乳动物的雌性就X染色体上基因的作用来说是嵌合体。

四、实验器材

1、女生的口腔上皮细胞

2、载玻片

姓名班级同组人

科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组

五、实验试剂

95%乙醇水溶液、1 mol/L 的HCl、改良酚红液

六、实验步骤

1. 涂片

(1) 清洁口腔:细胞提供者需重复两三次用水漱口,以便去掉松动的上皮细胞和细菌.

(2) 然后用清洁灭菌的牙签或适当的刮片,从女性口腔两颊刮取上皮黏膜细胞, 涂抹在干净载玻片上,每次可涂1～3 片,涂抹范围大约1～2 张盖玻片大小.

2. 滴加1 mol/L 的HCl水解10 min。

3. 从玻片反面用成45度角的流水冲洗。晾干5-10 min。

4. 染色：待涂片完全干燥后，滴上几滴改良酚红染液，在室温下(～25 ℃)染色约 2 min，勿

使染色液干燥。

5. 从玻片反面用成45度角的流水冲洗。晾干。

6. 镜检，观察巴氏小体。

7. 若染色太深可用95％酒精成45度角流加在玻片正面染色区域脱色。

在涂片法中冲洗玻片时,应将玻片倾斜成45 ℃,用细水流从玻片的一端将染色液冲洗干净,并且要在完全干燥之后才能进行镜检,因为未干燥的玻片会使显微镜的物镜受到污染。

七、观察鉴别

先在低倍镜下检出典型的可数细胞,其标准为:

(1) 核质呈网状或细颗粒状分布;

(2) 核膜清晰,核无缺损;

(3) 染色适度;

(4) 周围无杂物.

选定细胞后再换高倍镜或油镜进一步观察.

巴氏小体(直径大约为1μm) 具有典型的平凸的外形,其形态常表现为一结构致密的浓染小体, 轮廓清晰,常附着于核膜边缘或靠近内侧,其形状有三角形、球形、短棒状、

卵形、微凸形等. 若染色时间太短,X 染色质着色不明显;如果染色时间过长,则其他染色

质也着色较深,均不能分辨出X 染色质. 建议采用一个时间梯度进行染色,以确定在其实

验条件下的最佳染色时间

八、思考与反思

1、据观察，染色时间在一分半左右为最佳，若之前水未完全干，则染色时间可以长

至2分钟以上

2、在辨别巴氏小体时，大部分在显微镜下都不会紧贴核膜，只有紧贴核膜的才能算

作巴氏小体，并且应核膜未有任何突起