纸层析法鉴定转氨基作用(精)

[步骤] 3.层析 在滤纸圆心处打一小孔（如铅 笔芯大小），另取同类滤纸小片 1X2cm ，下一 半剪成须状。将此小片卷成圆筒如灯芯插入小 孔（不要突出于滤纸面） 将滤纸放在培养皿上，灯芯下端浸入层析 液中, 可见溶剂沿灯芯上升到滤纸，再沿滤纸 以同心圆式向四周扩展，待溶剂前沿距滤纸边 缘约1cm处（约45-60分钟），取出滤纸。去处 灯芯立即用铅笔划出溶剂前沿，用吹风机吹干。
试剂（d）源自文库
测定管 对照管 肝匀浆 10 10 37℃水浴 10min 沸水浴 10min 丙氨酸 10 10 α-酮戊二酸 10 10 37℃水浴 20min
2.点样 取直径 13cm圆形滤纸 1张，用圆 规在滤纸正中作一半径为 1cm 的小圆圈作为层 析底线，用铅笔通过圆心作两点互相垂直的线， 并在两线外端等距离点 4个原点，标明1、2、3、 4 。分别用毛细吸管吸取测定管上清液、对照 管上清液、0.1M谷氨酸溶液、0.1M丙氨酸溶液 各 3 滴，依次点在滤纸上标明 1 、 2 、 3 、 4 的原 点处。注意点样斑点不可太大。直径应小于 0.5cm ，每点一滴，用吹风机吹干后方可再点 第二滴，并且点样量应力求均匀相等。
纸层析法鉴定转氨基作用
一、目的
１.掌握氨基酸转氨基作用和纸层析的原理
２.熟悉纸层析的操作技术
二、原理 １.氨基酸的转氨基作用
α-酮戊二酸+丙氨酸
谷丙转氨酶
谷氨酸+丙酮酸
２.层析理论 层析法：是利用混合物各组分物理、化学性（如溶 解度、吸附能力、电荷和分子量等）的差别，使各组分
在支持物上集中分布在不同的区域，借以将各组分分离。
点样处至色斑中心距离(cm) 点样处至溶剂前沿距离(cm) Rf值
将“对”、“测”各色斑的 Rf 值与已知氨基 酸的 Rf 值进行对比，确定它们各是什么氨基酸。 据此解释转氨基作用。
固定相——水 流动相——苯酚 由于混合物中的有效成分和杂质受固定相的阻力 和受流动相的推力影响不同，各组分移动速度不同， 有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、 吸附和交换作用，最终结果是使混合物得到分离。
三、步骤 1.肝匀浆的制备 取兔肝剪碎，在研钵中先加磷酸盐缓冲液１ ml，待 研匀后再加２ml缓冲液。 ２.取干净试管2支，分别标明测定管与对照管，按 下表操作。
[步骤] 3.显色 将上述滤纸平放在培养皿上，用喷雾器向滤 纸均匀喷射0.1%茚三酮溶液，再用吹风机吹干， 此时可见紫红色的同心弧形斑点出现，用铅笔 圈下各显色点。比较色斑的位置及色泽深浅， 分别计算丙氨酸和谷氨酸的 Rf值及样品中氨基 酸的Rf值，分析实验结果。
[步骤] 4.用铅笔描出色斑轮廓 ,并按下表记录有关数 据,计算Rf值。 “谷” “丙” “对”“测”