逆转多药耐药的实验操作步骤

逆转耐药性的实验步骤: （孵育时间为48h）多柔比星也叫阿霉素

1.各种给药组(多柔比星组,多帕菲,空白制剂,多西胶束制剂)对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株

的IC50值

2.多帕菲组，空白制剂，多西胶束制剂对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株，细胞存活率达到

90%以上的剂量

3.联合培养：针对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株，多帕菲组，空白制剂，多西胶束制剂加入

存活率90%以上的剂量（比如设4个浓度梯度，并固定此浓度，调节多柔比星的浓度，计算多柔比星的IC50值），孵育1h后，加入不同浓度梯度的多柔比星溶液（浓度设定范围应在其IC50值以下，必须包含IC50这一浓度，可以再加一个高一点的浓度）

注意：药物联合时，配制终浓度的阿霉素时，要从母药中只取一次，减少取药多次造成误差；每一次筛药，板子上都要设空白组、单独加药阿霉素组、单独加逆转剂药物组。

4.计算耐药倍数和逆转指数。耐药倍数=耐药细胞IC50/敏感细胞IC50；逆转指数=使用逆

转剂前IC50/使用逆转剂后IC50。

耐药倍数，是分析耐药细胞耐药性的。

实验中用到的是逆转倍数（对耐药细胞叫做逆转倍数=使用逆转剂前IC50/使用逆转剂后IC50）；增敏倍数（联合剂与阿霉素联合对敏感细胞的增敏倍数=使用联合剂前IC50/使用联合剂后IC50）。

比较这两个倍数，如果都大于1（我们一般看逆转倍数至少在2以上才有效，越大越好），且逆转倍数更大，说明具有逆转耐药的作用的同时还具有增敏作用。

如果两个倍数一样，说明你的药物只具有增敏作用。

如果增敏倍数为1，逆转倍数大于1（我们一般看逆转倍数至少在2以上才有效，越大越好），说明你的药物具有逆转耐药的作用。