201011298银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较

银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较

韩威1，姜瑞芝2，陈英红2，高阳3，高其品3*

（1．延边大学，吉林延吉133002；2．吉林省中医药科学院，吉林长春130012；3．长

春中医药大学，吉林长春130117）

摘要：为选择一种准确快捷的方法测定银耳多糖的单糖组成，对薄层色谱法（TLC）、气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）三种色谱方法进行比较。结果表明，前两种方法的测定结果均不理想，而HPLC法，操作简便，灵敏度高，分离效果好，信息完整。测定结果为由葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、岩藻糖组成，其摩尔比为0.24：1.00：0.06：0.29：0.25。HPLC法对酸性杂多糖组成糖分析是一种比较理想的选择。

关键词：银耳多糖；单糖组成；TCL；GC；HPLC

Comparison of three kinds of chromatographic methods for monosaccharide composition analysis of Tremella polysaccharide

Han Wei1, Jiang Rui-zhi2, Chen Ying-hong2, Gao Yang3, G ao Qi-pin3*

(1. Yanbian University, Yanji 133002, China; 2. Academy of Traditional Chinese Medicine and Material Medical of Jilin Province, Changchun 130012, China; 3. Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China)

Abstract：To find an accurate and fast method to determine the monosaccharide composition of Tremella polysaccharide, thin layer chromatography (TLC), gas chromatography (GC) and high performance liquid chromatography (HPLC) was compared. The results of TLC and GC were not significant. However, HPLC was a simple method, showed high sensitivity, good resolution and integrity information. The result of HPLC analysis showed that the monosaccharide composition were Glc, Man, GlcA, Xyl and Fuc, with the mole percentage of 0.24:1.00:0.06:0.29:0.25. Consequently, HPLC is the most suitable method for monosaccharide composition analysis.

Key words：Tremella polysaccharide; monosaccharide composition; TLC; GC; HPLC 银耳（Tremella fuciformis Berk）是真菌类银耳科银耳属植物，也叫白木耳，

基金项目：十一五国家科技重大专项（No. 2009ZX09103-333）；国家自然科学基金（No. 30873370）

*通讯作者Tel：（0431）86172070；E-Mail：gaoqipin@

在我国有悠久的药食兼用历史，具有增强人体免疫力的作用。近年来，对银耳多糖的化学及药理活性方面的研究很多，有提高机体免疫力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗溃疡、增强肿瘤患者对放、化疗的耐受力及升高白细胞等作用[1-4]。多糖研究中单糖组成分析是一项重要内容，随着科学仪器及研究手段地发展，目前已有多种方法应用于多糖的单糖组成分析中，但不同的分析方法报道的结果有一定差异[5-9]。为进一步了解各分析方法的特点和差异，本文以银耳多糖为研究对象，分别采用薄层色谱法、糖醇乙酸酯衍生物、糖醇乙酸酯酰胺衍生物气相色谱法及柱前衍生高效液相色谱法进行了单糖组成分析，并对各方法的特点和测定结果进行了比较，为多糖组成糖分析提供科学参考依据。

1 材料与仪器

纤维素板（美国Sigma公司）；752紫外分光光度计（上海精密仪器科技有限公司）；9790型气相色谱仪（浙江温岭），色谱柱为1%OV-225不锈钢填充柱（2 m×0.3 cm）；LC-2010C高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD-M10A

（Φ4.6 mm×150 mm）紫外检测器；色谱柱为XDB-C18分析柱（Agilent公司）

银耳子实体（产自福建省古田县）购自市场；牛血清白蛋白对照品（BSA），单糖标准品：岩藻糖（Fuc）、阿拉伯糖（Ara）、木糖（Xyl）、甘露糖(Man)、葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、甘露糖醛酸(ManA)、葡萄糖醛酸(GlcA)、半乳糖醛酸(GalA)均购自美国Sigma公司；衍生化试剂: 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）和三氟乙酸（TFA）购自国药集团化学试剂有限公司；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为国产分析纯。

2 实验方法

2.1 银耳多糖的制备

取银耳子实体10 g，除去托盘，加20倍量的水，煎煮两次，每次6 h，合并滤液，浓缩至一定体积，加乙醇沉淀，静置过夜，离心，沉淀冷冻干燥，即得。

2.2 银耳多糖理化性质的测定

采用苯酚-硫酸法[10]，以Man为对照品测定中性糖含量；采用间羟基联苯法[11]，以GlcA为对照品测定糖醛酸含量；采用Lowry法[12]，以BSA为对照品测定蛋白质含量。结果表明银耳多糖由酸性杂多糖组成。

2.3 银耳多糖组成糖分析