小鼠脂肪细胞的苏丹

小鼠脂肪细胞的苏丹Ⅲ染色

------实验报告【摘要】脂肪细胞在组织里一般呈现无色，无法分辨，但经过苏丹Ⅲ染色后可以在显微镜下观察到染色后的脂肪颗粒，从而观察到脂肪细胞。

【关键字】脂肪细胞脂肪颗粒染色肠系膜

【背景介绍】细胞是有膜包围的，能进行独立繁殖的最小原生质团，同时细胞是生命活动的基本结构和功能单位，细胞主要组成成分是水，所以细胞或细胞器在显微镜下是无色的，分不清细胞之间的界限，因此在一般情况下通过染色来分辨细胞，染色时一般是通过将细胞的某些特殊部位，或特殊组成成染色，从而从组织中分辨细胞。

在脂肪组织中，脂质类物质可以以油粒的形式贮存在脂肪细胞中，但是在低倍显微镜下，这些颗粒状的物质很难看到，除非经过染色，从而观察到。常用的用来染色的染液是苏丹液，比如苏丹Ⅲ、苏丹Ⅴ等。

苏丹Ⅲ是一种常用来对甘油三酯进行染色的可溶于油脂的染液。它的颜色是淡红棕色，在507（304）nm处有最大紫外吸收。有时也称Sudan Red BK, Fat Ponceau G, Cerasin Red, C.I. 26100, Solvent Red 23, Sudan Red, Sudan Red III, Sudan V, Sudan Red B, Sudan G, Scarlet B, and Tony Red.。在工业上，它常用来对非极性的物质，像油，脂肪，蜡，动物油脂等多种碳氢化合物产品，以及丙烯酸的乳液，或乳液。

苏丹Ⅰ，苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ已经被国际癌症研究协会归到3类致癌物，对人体的危害很大。

脂肪细胞主要是贮存脂肪，而脂肪组织主要由脂肪细胞组成，从而贮存能量。主要由两种脂肪组织，白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT），它们是由两种不同的脂肪细胞组成，在小鼠的肠系膜中主要是WAT。

肠系膜是腹膜的双层膜，它在腹部的后壁连接着空肠和回肠，也就是说，它一般连接着多种腹腔的组成部分。

在本实验中，主要通过小鼠的肠系膜染色观察脂肪细胞，用断头法直接将小鼠杀死，分离小鼠的的腹腔处的肠系膜，经染色后，在显微镜下观察。

【实验材料】

实验试剂：

小鼠（直接由市场买来的活的小鼠）、70%的乙醇、蒸馏水、苏丹Ⅲ、甲醛钙

实验仪器：

解剖盘、剪刀、手术钳、显微镜、盖玻片、载玻片、吸管

【实验步骤】

1、检查实验所许多的试剂以及仪器是否齐全，准备实验；

2、杀死小鼠：

1）取一只小鼠置于解剖盘中，抓住小鼠的尾巴，确保小鼠的前爪在解剖盘中，慢慢的使小鼠安静下来；

2）用剪刀或手术钳紧紧的按住小鼠的颈的后部，使劲的向后拉小鼠的尾巴；

3）按住剪刀几分钟，确保小鼠已经死亡；

3、将小鼠的脸部朝上，用蒸馏水将小鼠的腹部湿润，用手术钳轻轻拉起小鼠的

外皮，用剪刀在水平位置剪开一个小伤口，再用手扯开外皮，使肌肉层暴露，然后用剪刀轻轻的剪一个V字型的伤口，暴露腹腔；

4、用手术钳轻轻的拉起小鼠的小肠，我们可以看到几乎透明的肠系膜，将肠系

膜轻轻的展开，将一块5mm长宽的小的盖玻片粘附在接近血管处的肠系膜上，当我们把肠系膜盖玻片，我们发现，盖玻片及肠系膜胶对方；

5、用剪刀轻轻的将盖玻片上的肠系膜剪断，小心操作，以免损坏肠系膜；

6、将粘附有肠系膜的盖玻片放在载玻片上，用蒸馏水先进行润湿，吸干之后，

再用甲醛钙固定20min，固定之后对细胞染色效果更好;

7、用蒸馏水冲洗在盖玻片和载玻片之间的肠系膜，在载玻片的一端滴一滴蒸馏

水，在另一端用吸水纸吸收蒸馏水；

8、用同样的方法再用70%的乙醇冲洗；

9、用少量的苏丹Ⅲ染液染色30min，染色后可以看到肠系膜上明显的变黄色;

10、用吸水纸吸干多于的染液，用蒸馏水清洗干净载玻片的底面和边缘，以及盖玻片的表面，之后在显微镜下观察；

【实验注意事项】

1、尊重实验动物，实验材料未经老师允许不准带出实验室，由负责人统一回收；

2、用断头法杀死小白鼠时，抓住小的尾巴的中部，轻轻操作，以免造成小鼠尾

巴不必要伤害；

3、小白鼠的肠系膜组织最好取血管附近的膜组织，此处脂肪组织比较发达；

4、染色过程的冲洗液以及染液适量，不要造成不必要的浪费；

5、盖玻片和载玻片保持干净；

6、盖玻片的大小要掌握好，不要太大或太小；

7、最好保持载玻片样品始终湿润，以免细胞缺少水分等而失去细胞应有的结构

形态，观察不到细胞；

【实验结果】

在显微镜下观察脂肪细胞的染色结果:

经过实验染色前后肠系膜处脂肪细胞是否可以明显观察到。

以上便是肠系膜处的细胞在没有染色时在显微镜下，可知在没有染色时，几乎观察不到预期的实验结果，分不清脂肪细胞。这也是本实验采用染色的方法观察脂肪细胞的目的。

以下便是在经染色后观察到的脂肪细胞：

由以上的图片，可以明显的看到，脂肪细胞，虽然观察不到细胞器以及细胞核，但是通过经染色的脂肪颗粒，而明显的分清脂肪细胞的界限，从而在组织中分清脂肪细胞。

【实验讨论】

1、在本实验中小鼠要用断头法而杀死，掌握小鼠杀死的方法，熟练操作。小鼠

作为细胞实验的常用的实验材料，有时需要将其杀死，有时则没有必要，只要将其昏迷，根据实验目的和实验方法，选择适当的方法。

2、选取实验的肠系膜时，选择在血管附近的肠系膜，此处细胞含脂肪颗粒比较

多，容易观察。

3、染色过程把握时间已经染液的量，因为苏丹Ⅲ有毒，所以为了避免给人体带

来过大的伤害，或浪费染液，造成污染，染液的量要适量，如果染液过少，载玻片上干燥，则会影响实验结果。

4、在用甲醛钙固定已经蒸馏水或乙醇冲洗时注意不要将肠系膜重叠而造成在显

微镜的视野中黑暗，无法观察到实验结果。

5、脂肪细胞染色过程中因最终染液过少，导致样品干燥，观察不到实验结果，

没有把握好实验观察的最佳时机，需要进行平行实验，取多个载玻片，同时实验，提高实验效率；

【实验结论】