口炎清颗粒提取和制粒工艺优选

口炎清颗粒提取和制粒工艺优选

目的优选口炎清颗粒的提取和制粒工艺。方法采用高效液相色谱法测定口炎清浸膏中芍药苷含量。以浸膏收率、芍药苷提取率为评价指标，用单因素试验和正交试验优化提取工艺。以吸湿率、堆密度、休止角为评价指标，采用多因素比较法和正交试验优化制粒工艺，并测定口炎清颗粒的临界相对湿度。结果最佳提取工艺为12倍60%乙醇回流提取3次，每次2 h。口炎清浸膏粉与糊精按6∶4比例混合后用90%乙醇制粒，制得的口炎清颗粒吸湿性小，流动性好，临界相对湿度约为63%。结论口炎清颗粒的提取和制粒工艺合理可行，稳定性好，可为工业化生产提供依据。

标签：口炎清颗粒；高效液相色谱法；提取工艺；正交试验；制粒工艺

口炎清颗粒为本院开发的中药汤剂，由赤芍、葛根、石斛、麦冬等组成，功效清热凉血、生津养阴，用于扁平苔藓等口腔疾病的治疗。汤剂味苦，患者依从性差，且久储易酸败，不易携带，为此，我们将其制成胶囊剂。为保证制剂质量，合理制定制备工艺，本试验对提取和制粒工艺进行优选。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司），HWS24型电热恒温水浴锅（上海科技一恒有限公司），RE-2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），CS101-2ABN型电热鼓风干燥箱（重庆市永生实验仪器厂），KQ5200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），BS224S电子天平（德国Sartorius公司）。

口炎清颗粒处方药材购于重庆桐君阁中药材批发公司，经重庆医科大学药学院刘新教授鉴定为正品，均符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）项下有关规定。芍药苷对照品（批号110736-201136，中国食品药品检定研究院），淀粉（批号20120201，曲阜市药用辅料有限公司），乳糖（批号20120101，湖南尔康药用辅料有限公司），糊精（批号20120301，曲阜市药用辅料有限公司），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 芍药苷含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱：Phenomenex-C18柱（150 mm×4.6 mm，10 ?m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；检测波长：229 nm；流速：1 mL/min；柱温：室温；进样量：20 ?L。理论塔板数按芍药苷峰计不低于3 000。

2.1.2 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品12.5 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.5 mg/mL的对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备取口炎清浸膏粉2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加40 mL甲醇，超声处理30 min，冷却至室温，加甲醇至刻度，振摇，过滤，即得供试品溶液。

2.1.4 阴性对照溶液的制备按处方量取除赤芍的各味药材，60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，浓缩，70 ℃烤成干浸膏，粉碎，取粉末2 g，按“2.1.3”项下方法制成缺赤芍的阴性对照溶液。

2.1.5 专属性考察分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液20 ?L，注入液相色谱仪，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录色谱图。结果表明，供试品溶液在与对照品溶液相应保留时间处呈相同的色谱峰，而阴性对照溶液在相应的保留时间处无吸收峰出现，对测定无干扰。色谱图见图1。

2.1.6 标准曲线制备精密吸取0.5 mg/mL芍药苷对照溶液0.1、0.5、1.5、2.5、4.5 mL置5 mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度分别为0.01、0.05、0.15、0.25、0.45 mg/mL的溶液。分别吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录峰面积。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=13 997X-52.45（r=0.999 9），表明芍药苷浓度在0.01～0.45 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

2.1.7 精密度考察精密吸取芍药苷对照品溶液20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，1日内重复进样6次，测定日内精密度，芍药苷峰面积RSD=0.75%；连续测定4 d，芍药苷峰面积RSD=0.68%。

2.1.8 稳定性考察精密吸取供试品溶液20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，测定，记录峰面积。结果芍药苷峰面积RSD=0.88%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.1.9 重复性考察取口炎清浸膏粉5份，按“2.1.3”项下方法制备溶液，精密吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录峰面积。芍药苷峰面积RSD=1.15%。

2.1.10 加样回收率试验取已知芍药苷含量的口炎清浸膏粉0.1 g共9份，分别置10 mL容量瓶中，加入0.5 mg/mL的芍药苷对照品溶液1.0、1.2、1.5 mL，按“2.1.3”项下方法制备低、中、高3种浓度的溶液，分别精密吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，计算加样回收率，结果平均回收率为99.69%，RSD=0.62%。

2.2 芍药苷提取率的测定

取处方量全部药材，按单因素和正交试验安排提取，合并提取液，过滤，浓缩至一定体积，用与提取相应乙醇定容至500 mL，取100 mL，70 ℃烤成干浸膏，粉碎，取口炎清浸膏粉，按“2.1.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算芍药苷提取率。芍药苷提取率（%）=100 mL提取液中芍药苷量×5/药材中芍药苷量。2.3 浸膏收率的测定

按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）[1]浸出物测定法进行测定。取处方量全部药材，按单因素和正交试验安排提取，合并提取液，过滤，浓缩至一定体积（V），精密吸取10 mL置恒重后的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣置恒温烘箱中，105 ℃干燥3 h，取出，干燥器内冷却30 min，精密称定质量，计算浸膏收率。浸膏收率（%）=W1×V/（W2×10）×100%。其中W1为浸膏质量（g），V为药液总体积（mL），10为所吸取药液总体积（mL），W2为提取所用药材总量（g）。

2.4 单因素考察

2.4.1 提取方法考察取处方量全部药材2份，分别采用8倍量60%乙醇回流提取和冷浸提取2次，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法测定浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，回流提取法浸膏收率和芍药苷提取率均优于冷浸法。结果见表1。

2.4.2 提取溶媒考察取处方量全部药材2份，分别用8倍量水和60%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法测定浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明2种溶剂对浸膏收率无明显影响，但60%乙醇回流提取的芍药苷提取效率明显优于水提。结果见表2。

2.4.3 乙醇浓度考察取处方量全部药材6份，分别用8倍量20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，乙醇浓度在60%以下对浸膏收率影响不显著，60%乙醇作溶剂时芍药苷提取率最高。结果见表3。

2.4.4 乙醇用量考察取处方量全部药材5份，分别用4、8、10、12、14倍量60%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，乙醇用量显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。结果见表4。

2.4.5 提取次数考察取处方量全部药材5份，8倍量60%乙醇分别回流提取1、2、3、4、5次，每次1 h，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，提取次数显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。见表5。

2.4.6 提取时间考察取处方量全部药材5份，8倍量60%乙醇回流提取1次，每次1、2、3、4、5 h，浓缩，按“2.3”项下计算浸膏收率，按”2.2”项下方法测定芍药苷提取率。结果表明，提取时间显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。结果见表6。

2.5 正交试验优选提取工艺