美国药典微生物检测精要
美国微生物测试USP51和USP61+62
美国微生物测试USP51 和USP61＋62 介绍(2009/12/22 18:31)美国微生物测试USP51 和USP61＋62 介绍玩具需作微生物测试的材料：用于玩具中的化妆品、液体、糊状物、油灰（putties)、凝胶和粉末（艺术品材料，如粉笔、蜡笔、墨水等除外）1. USP<61>微生物限量测试*1- 测试目的: 检验材料本身受微生物污染的情况（也即微生物洁净度情况）- USP<61>包括以下六个微生物测试：(1) Total aerobic microbial Count 菌落总数(定量）(2) Mould and Yeast Count 霉菌和酵母菌数(定量）(3) Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌(定性）(4) Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌（定性）(5) Salmonella 沙门氏菌（定性）(6) Escherichia Coli 大肠杆菌（定性）USP61 Limit Requirement:(1)+(2) < 5000 CFU/g ( if the material was used in baby product or eye area product, the limit should be < 500 CFU/g)(3)/(4)/(5)/(6) should be “ABSENT per 10g “2. USP<51>防腐剂抗菌效力测试- 测试目的为防止的材料在保存过程中或使用过程中发生微生物*现象，须在材料中加入适量的防腐剂，而防腐剂效果如何则需通过USP《51》测试进行评价。
-USP<51>测试简述：将标准指定编号的以下菌种接入样品，然后在第7 天，第14 天，第28 天分别检验每种菌的存活数量，存活数量越少，其防腐剂抗菌效果越好。
Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌Escherichia coli 大肠杆菌Pseudomonas aeruginosa 绿脓杆菌Candida albicans 白色念株菌Aspergillus niger 黑曲霉USP51 Limit requirement (for toy):细菌(Staphylococcus aureus/ Escherichia coli / Pseudomonas aeruginosa)14 天细菌减少≥2.0 LOG (99%)28 天不再繁殖真菌(Candida albicans /Aspergillus niger)14 天和28 天不再繁殖Remark: LOG REDUCTION = LOG10 (INITIAL COUNT / NO. OFMICRO-ORGANISM RECOVERED)*1 Remark:最近，美国药典（USP）发布了重大调整，原第61章“微生物限量测试”被拆分成两部分，即第61章“非灭菌产品中微生物测试：微生物计数检测”和第62章“非灭菌产品中微生物测试：特定微生物检测”。
中国药典和美国药典的内毒素检测要求
鲎试剂－LAL，中国药典和美国药典的内毒素检测要求鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。
鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。
目前国际上销售的鲎试剂有两种，一种称美洲鲎试剂（Limulus Amebocyte Lysate），缩写为LAL，由美国生产；另一种称东方鲎鲎试剂（Tachypleus Amebocyte Lysate），缩写为TAL。
实验证明：美洲鲎试剂-LAL比东方鲎试剂LAL更纯洁，检测效果更好。
TAL检查内毒素有很多方法，目前应用最广泛的是凝胶法，此外还有动态浊度法﹑显色基质法,比色法等。
其用途有以下几方面：1. 药检：用于注射药品﹑放射性药物﹑生物制品﹑注射器及生产工艺流程中的内毒素检测；2. 临床：用于检测病人各种体液中的内毒素含量；3. 其他：用于检测水或食品中的内毒素含量。
2005年版中国药典《细菌内毒素检查法-鲎试剂法》(鲎试剂－LAL法)本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及设置的各种阳性对照。
凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。
定量测定用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。
美国药典微生物限度检测
61微生物限度检测（MICROBIAL LIMIT TESTS）此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。
如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。
在样品检测过程中须进行无菌操作。
若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱内培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。
准备实验 (Preparatory Testing)本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。
因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。
方法如下：将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于10-3稀释的微生物培养物，加1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。
相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序：（1）增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者（2）中和一定数量的干扰因子；或者（3）结合（1）、（2）得出适当条件，使接种物得以生长。
以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用：大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysorbate 20, 4.0%）。
美国药典USP31无菌检查
美国药典USP31无菌检查简介美国药典（United States Pharmacopeia，简称USP）是美国公认的医药行业标准组织，负责制定和发布有关医药品质量的标准和方法。
无菌检查是USP31中的一个重要章节，它主要用于评估药品、医疗器械和其他与患者直接接触的产品的无菌状态。
本文将介绍无菌检查的定义、方法和注意事项。
无菌检查的定义无菌检查是指对药品或医疗器械进行的一系列检验，以确定其是否存在可繁殖的微生物，从而判断其无菌性。
无菌状态是指在没有任何活体微生物存在的情况下。
对于注射剂、眼药水等需要直接进入体内的产品，无菌状态非常重要，以防止微生物感染和其他不良反应的发生。
无菌检查方法无菌检查的方法有多种，常用的方法包括：厌氧培养方法这种方法用于检测生长于缺氧条件下的微生物。
样品通常放置在厌氧培养基中，然后在恒温条件下培养，观察是否有菌落的形成。
高压蒸气灭菌法这种方法通过将样品暴露在高温高压的环境中，使用蒸汽来灭活可能存在的微生物。
灭菌后，用无菌培养基接种样品，并在一段时间后观察是否有菌落的形成。
过滤方法这种方法通过使用无菌过滤器来过滤样品，将可能存在的微生物滤除。
过滤后，将过滤膜接种在无菌培养基上，观察是否有菌落的形成。
光谱学方法这种方法通过使用紫外线、红外线等光谱技术来检测微生物的存在。
由于微生物具有特有的光谱特征，因此可以通过光谱仪器来进行无菌检查。
注意事项在进行无菌检查时，需要注意以下事项：检测设备的无菌性检测设备（培养皿、培养基等）在使用前应进行无菌处理，以避免外源性微生物的干扰。
常用的处理方法包括高温蒸馏、紫外线照射等。
样品的收集和处理在收集样品时，应注意避免样品与外界环境的接触，以防止样品被外源性微生物污染。
在处理样品时，应采取无菌操作，避免微生物的传播。
结果的解读在进行无菌检查后，需要对结果进行解读。
有菌落的形成通常表示样品存在微生物污染，是不符合无菌要求的。
无菌检查的结果应与相应的标准进行比较，以确定样品是否合格。
微生物计数USP61中文版
微生物计数检测需氧菌总计数USP<61>USP<61>中文版美国药典微生物限量61）微生物限度检测（MICROBIAL LIMIT TESTS）此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。
如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。
在样品检测过程中须进行无菌操作。
若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。
准备实验 (Preparatory Testing)本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。
因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。
方法如下：将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于 10-3 稀释的微生物培养物，加 1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。
相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序：（1）增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者（2）中和一定数量的干扰因子；或者（3）结合（1）、（2）得出适当条件，使接种物得以生长。
以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用：大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯 20（polysorbate 20, 4.0%）。
微生物检测美国药典
微生物检测非无菌供试品的微生物检测：微生物计数检测修改：生长促进实验，计数方法的适应性以及阴性对照概论在供试品存在的情况下发现微生物检验能力必须被确定。
如果检验过程中发生变更或者供试品变更，且这些变更可能影响检验结果，适应性必须被确认。
检验菌株的准备使用稳定的标准菌悬液或者按照下面所述备制。
使用菌种保存技术（种子批系统），以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批开始不超过5代。
每种细菌和霉菌菌株的生长分别按照表一中的描述进行。
表一测试微生物的备制和使用使用pH7.0的缓冲氯化钠蛋白胨溶液或者pH7.2的磷酸盐缓冲溶液备制测试菌悬液；备制黑曲霉孢子悬浮液时，0.05%的聚山梨脂80可以被添加到缓冲液中。
测试菌悬液应在两小时内使用，或者在2-8℃的条件下24小时内使用。
也可以通过制备并稀释枯草芽胞杆菌营养细胞的新鲜悬液进行替代，制备稳定的胞子悬液，在接种测试中使用适当体积的胞子菌悬液，稳定的胞子悬液在2-8℃保存，保存期是经过验证的。
阴性对照为了确定检测条件，用选择好的稀释液代替测试备制来进行阴性对照。
必须没有微生物的生长。
当按照供试品检测中的描述进行检验时，也需要进行阴性对照。
如果阴性对照不合格需要进行调查。
培养基的生长促进检测每个批次的已经备制好的培养基以及通过脱水培养基或者描述的配料备制的每个批次的培养基。
在部分/盘大豆酪蛋白消化肉汤培养基以及大豆酪蛋白消化琼脂上接种少量（不超过100CFU）微生物，按表一中所示，每一种微生物应使用单独一部分/一盘培养基。
在沙氏葡萄糖琼脂上接种少量（不超过100CFU）微生物，按表一中所示，每一种微生物应使用单独的一盘培养基。
按照表一中所述的条件进行接种。
固体培养基的生长通过一个不大于2的系数的调节必须不能与标准接种体计算得到的数值有区别。
新鲜备制的接种体微生物的生长应与上一批通过检测的培养基的生长情形相同。
如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过检测的培养基的生长情形相同的话，液体培养基是适合的。
美国药典29微生物限度检查
它山之石------ USP29“微生物限度检查法”供大家学习参考，我认为USP29内确实有许多值得我们学习的东西，但在编辑《中国药典》时也要考虑到我国实际情况，本着真正能提高药品质量的目的，如一味地照抄照搬别人的东西，就会出现看看药品标准确实是上去了，体面、拿的出去，但在实际应用时不适宜操作，反而降低了对药品质量的控制。
我认为2005年版、2010年版的《中国药典》微生物限度检查法就是如此，2005版药典执行后就开始需要进行药品的验证工作，相同的药品不同的厂家之间要验证；既是同一厂家由于生产原料厂家的改变也要验证，因此各厂家之间出现了五花八门的都称已经验证的检验方法，有的说该方法可行，有的又说该方法不行，天知道这些验证方法的可信度？同时又出台了执行药典通知：以后未经验证的检品不能下“微生物限度检查符合规定”的结论。
我国有这么多的药品生产厂家，作为我国药品的监督检验单位，对药品检验来说怎样去验证，每做一个检品都去验证，这样的工作量现实吗？到今天药典还没有一个对具体样品经验证后较科学的检验方法或指导性方法。
我认为现行的“微生物限度检查”法参照USP的方法对具体的样品验证，并按经验证后的方法进行检验，这确实有利于微生物的检出率，提升药品检验标准。
但应分步进行：可先放在“药典附录指导性原则”内，然后再要求药品生产企业对自己生产的品种进行验证并报地市级以上药品检验所对该方法再次进行检验审核后，再报药典会汇总、审核，在《中国药典》具体品种项下写入检验方法后再开始实施。
目前这一步到位的做法，已从2005年版药典实施开始到2010年版的《中国药典》实施，效果到底怎样？我想：从有关专业杂志的相关文章内也可知一、二。
<61> 微生物限度检查本章所提供的检测程序用于测定包括原料药及制剂在内的各种药品中需氧菌数量以及不含有指定的微生物。
如果已有充分的证据证明某种自动化的方法可以给出与本章所提供的方法等效的或更好的实验结果，可以用该方法替代本章所提供的方法。
美国药典微生物检测精要
美国药典微生物检测精要培训小结一微生物实验室规范重要的控制点：无菌技术、培养基控制、菌种控制、设备操作与控制、数据记录与实验室布局和运作、员工培训等。
1无菌技术：防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作方法和管理方法。
可通过无菌环境、灭菌、消毒、卫生要求、无菌操作技术等手段来实现。
2培养基：是微生物实验工作的核心。
包括培养基制备、培养基储存、培养基质量控制。
2.1培养基制备2.1.1根据既定的目的选用正确的培养基2.1.2参考生产商的ＣＯＡ和说明书：关于配制、储存和菌种选用等。
2.1.3所用的水应为去离子水或蒸馏水，应记录用量。
2.1.4成分的称量应用校准过的天平，根据称量量的不同选择合适的天平。
使用清洁的容器和工具（<1051>玻璃器皿清洁）以防外来污染和抑制剂。
应记录称量量。
2.1.5加热帮助溶解时应防止过度加热，通常培养基颜色变深说明加热过度了。
2.1.6灭菌条件：●灭菌参数应验证，验证应同时考虑无菌和培养基生长能力●采用高压蒸汽灭菌或过滤灭菌。
湿热灭菌应考虑装载分布，加热速度过慢会使培养基过度加热，通常为121℃15min，此时间是指培养基温度达到121℃后15min。
●保证最低SAL，在无菌和过度加热之间平衡。
●与污染物分开灭菌●消毒结束后，不应在灭菌柜中储存培养基，过度加热会影响培养基颜色、澄清、pH和凝固能力。
2.2培养基储存2.2.1制备培养基的储存●琼脂培养基易受冷冻影响，低于0℃会破坏凝胶结构。
●应避光避热，密封防止水分蒸发（建议使用螺旋盖的瓶子密封，保存时间长）。
2.2.2培养基融化●不能超过一次，以防过度加热或潜在污染。
●融化可采用水浴、流通蒸汽或微波炉加热。
微波炉加热宜采用少量多次，以防过度。
●培养基融化后在40-50℃水浴中储存不应超过8小时，浇制平皿前应擦干以防污染。
2.2.3培养基标示●培养基名称●批号、制备批号●制备日期、有效期2.2.4有效期确定●根据成分、配方、容器、储存条件等确定●有生长能力试验数据支持2.2.5应在验证过的条件下储存2.2.6重要区域环控用培养基必须●双层包装●最终灭菌，否则进行全数培养及用前检查2.2.7根据当地生物危险品安全程序处置过期培养基2.3培养基质控2.3.1灭菌后培养基检查2.3.1.1生长能力●每批制备的培养基均需进行●测试菌种根据药典，供应商说明书及环境中分离得到●测试不合格应进行调查，如无原因，或无有效纠正措施，不得使用该批号2.3.1.2无菌2.3.1.3pH2.3.1.4容器/平皿的完整性2.3.1.5抑制或指示能力2.3.2定期稳定性检查以确认储存有效期3菌种保藏3.1建立标准程序处理、保存菌种，防止污染和特性变化3.2使用前确认菌种身份和纯度3.3根据生产商说明书复苏菌种，使用接种技术3.4-70℃以下或冷冻干燥保存储备菌种，可延长保存周期3.5开启后不要重新冷冻菌种，剩余部分应弃置3.6传代次数（每接种一次即为一代）不超过5次3.7保藏时间根据具体保藏条件确定4设备维护4.1定期校准、保养4.2定期性能检查4.3定期清洁、消毒5实验室布局和运作5.1防止交叉污染5.2活动分区：无菌、环控样品的处理和培养应在无菌环境中进行5.3当发现微生物生长，后续的工作应转移至“阳性”区5.4环控设备应放置在待取样区域环境中并小心操作5.5应在受控条件下小心取样6样品处理6.1大部分样品、水或环控样品中的微生物对操作、储存环境敏感6.2减少样品，取样与测试间的时间间隔6.3长时间的转移需确认转移条件对测试及样品的影响6.4在无菌条件下，使用无菌技术取样，即使是非无菌样品6.5取样记录：样品信息、取样日期、送样日期、人员/部门、实验室样品接受及确认7培养基培养时间7.1短于3天，用小时表示7.2长于3天，用天表示（上午、下午，相同时间段）8人员培训8.1每个岗位应有相应培训要求，进行上岗前资质确认9实验室文件9.1微生物人员培训和能力确认（上岗资质）9.2设备验证、校准和维护9.3测试中的设备性能（如温度记录）9.4培养基制备、无菌检查、生长能力测试、选择性测试9.5培养基清单与控制9.6根据程序（ＳＯＰ）进行测试的重要数据9.7数据和计算的确认9.8经ＱＡ人员或相应领导审核过的报告9.9超标结果调查10实验室结果维护10.1检测报告至少应包括：●日期●测试样品●微生物检验人员名字●程序编号●测试结果●偏差（如有）●测试参数（设备、菌种、培养基）●管理人员审核签名10.2数据纠错：错误的地方划一横线，签名和日期，必要时说明原因10.3测试结果●应包含平皿计数结果（如有）●数据分析方法应罗列在相关ＳＯＰ中●对粘贴的图表、数据骑缝签名10.4存档：记录应存档并防止丢失，应有记录留存计划11测试结果解释11.1微生物数据有时不容易解释●与人类相关的微生物群落被广泛的用于许多测试●人员污染是始终被关心的问题●样品或环境中的微生物并非均匀分布●微生物检测可变范围大：可能在+/-0.5log10单位左右11.2不符合的结果可能是由2个原因造成的：实验室错误或产品不符合。
美国药典微生物检测精要
美国药典微生物检测精要引言微生物检测在药品生产中起着至关重要的作用。
药品的微生物污染可能对患者的健康造成严重威胁。
为了确保药品的安全性、可靠性和有效性，美国药典（United States Pharmacopeia, USP）制定了一系列用于微生物检测的指南和标准。
本文将概述美国药典微生物检测的精要内容。
检测方法目视法目视法是最简单、最常用的微生物检测方法之一。
该方法通过对样品进行肉眼观察，检验人员可以检测到样品中是否存在明显的微生物污染。
目视法的优点是操作简单，不需要特殊的设备和试剂，适用于多种药品和原料的微生物检测。
然而，目视法存在主观性和局限性，无法检测到微生物的低水平污染。
营养物质法营养物质法是一种常用的培养基法。
该方法以适宜的培养基为基础，通过对样品进行培养，利用微生物的生长特性来检测样品中是否存在微生物污染。
营养物质法可以检测到微生物的低水平污染，并且可以进一步鉴定和计数微生物。
然而，营养物质法需要一定的培养时间，且存在一定的培养基选择性和适应性的局限性。
生物化学法生物化学法是一种通过检测微生物代谢产物来判断样品中是否存在微生物污染的方法。
该方法利用微生物的代谢反应，检测样品中的特定代谢产物的存在与否。
生物化学法可以快速、准确地检测微生物污染，并且不受培养基选择性和适应性的限制。
然而，生物化学法需要特定的试剂和设备，并且对检测人员的技术要求较高。
检测标准美国药典对药品的微生物检测制定了一系列的标准和要求。
这些标准主要包括微生物限度试验、总微生物数试验、鉴别试验和特定微生物试验等。
微生物限度试验微生物限度试验旨在确定样品中存在的微生物数量的限度。
该试验要求将样品接种在适当的培养基中，经过一定的培养时间后，观察并计数生长的微生物数量。
美国药典针对不同类型的药品和原料制定了不同的微生物限度指标，以确保药品的微生物安全性。
总微生物数试验总微生物数试验用于确定样品中所有可培养的微生物的数量。
该试验要求将样品接种在适当的培养基中，经过一定的培养时间后，观察并计数生长的微生物数量。
美国微生物检查要求及微生物监控体系
美国微生物检查要求及微生物监控体系在当今的全球化时代，食品安全和医疗卫生领域的重要性日益凸显。
微生物的存在和传播可能对人类健康和产品质量造成严重威胁，因此，建立有效的微生物检查要求和微生物监控体系至关重要。
美国作为全球领先的经济体和科技强国，在这方面拥有一套成熟且严格的体系。
美国的微生物检查要求涵盖了多个领域，包括食品、药品、化妆品、医疗器械以及环境等。
在食品领域，微生物检查主要关注常见的致病菌，如沙门氏菌、大肠杆菌 O157:H7、李斯特菌等。
这些致病菌可能导致严重的食物中毒和疾病爆发。
例如，沙门氏菌污染的鸡肉或鸡蛋可能引发腹泻、呕吐和发热等症状；大肠杆菌 O157:H7 污染的牛肉制品可能导致溶血性尿毒症综合征，对儿童和老年人的危害尤其严重。
为了确保食品的安全性，美国食品药品监督管理局（FDA）制定了一系列严格的微生物检查标准和检测方法。
食品生产企业需要定期对其产品进行微生物检测，并将检测结果报告给监管机构。
此外，监管机构还会进行不定期的抽检，以确保企业遵守相关法规和标准。
如果发现食品中存在超标或有害的微生物，监管机构将采取严厉的措施，包括召回产品、对企业进行罚款甚至关闭企业。
在药品领域，微生物检查同样至关重要。
药品中的微生物污染可能影响药品的疗效，甚至对患者的健康造成严重危害。
美国的药品监管机构要求药品生产企业在生产过程中实施严格的微生物控制措施，包括对原材料、中间产品和成品进行微生物检测。
对于无菌药品，如注射剂和眼用制剂，要求更为严格，必须确保产品在整个生产过程中处于无菌状态。
化妆品和医疗器械领域的微生物检查要求也不容忽视。
化妆品中的微生物污染可能导致皮肤感染和过敏反应，而医疗器械中的微生物污染可能引发交叉感染和医疗事故。
因此，美国相关监管机构对这两个领域的微生物检查也有明确的规定和要求。
美国的微生物监控体系是一个多层次、多部门协同合作的复杂系统。
联邦政府层面，FDA 负责食品、药品、化妆品和医疗器械的监管工作；环境保护署（EPA）则负责环境领域的微生物监控。
各国药典微生物方法对比 -回复
各国药典微生物方法对比-回复本篇文章旨在比较各国药典中微生物检测方法的不同之处。
微生物检测对于保证药品的质量和安全至关重要，各国药典都提供了相应的指导和标准。
然而，由于各国的文化、法律和技术差异，各国的药典在微生物检测方法上存在一定的差异。
以下将以中括号内的内容为主题，详细介绍各国药典中微生物方法对比。
[美国药典（USP）微生物方法]美国药典（USP）是全球最主要的药典之一，其微生物检测方法有着广泛的应用。
USP推荐的微生物方法主要基于美国食品药品监督管理局（FDA）的要求，主要包括细菌计数、限度测试和特定微生物检测。
其方法的特点在于简单易行、结果可靠且易于验证。
其中，细菌计数方法主要采用菲斯特计数法或冷凝液计数法。
而在限度测试方面，则主要采用的方法是逐级稀释、涂布法和培养法。
USP还明确规定了一些特定微生物的检测方法，如大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌等，其检测方法主要依赖于PCR技术和传统的培养法。
[欧洲药典（Ph. Eur.）微生物方法]欧洲药典（Ph. Eur.）是欧洲地区药典的统一标准，其微生物方法与美国药典存在一定的差异。
Ph. Eur.对微生物检测也有着详细的规定，包括细菌计数、限度测试和特定微生物检测。
在细菌计数方面，Ph. Eur.主要采用薄膜过滤法或蔗糖凝胶法。
而在限度测试方面，Ph. Eur.则主要采用稀释平板法、滚珠法和过滤膜方法。
与USP 不同的是，Ph. Eur.也明确规定了一些特定微生物的检测方法，如霉菌和酵母菌等。
这些检测方法涵盖了PCR技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）和传统的培养法。
[中国药典（ChP）微生物方法]中国药典（ChP）是中国主要的药典标准，其微生物方法也存在一定的特点。
ChP的微生物检测主要分为总菌落计数、限度测试和特定微生物检测。
与美欧药典不同的是，ChP对微生物检测方法的规定相对较为简洁。
在细菌计数方面，ChP主要采用的方法有薄膜过滤法、落下法和滚珠法等。
美国药典-微生物检测
〈61〉非无菌产品的微生物检测：微生物计数检测法生长促进试验和计数方法的适用性概述在供试品存在的情况下，必须确立检测微生物的试验能力。
如果引入了可能影响试验结果的在测试性能或产品方面的变更，则必须确认其适用性。
供试菌株的制备使用供试菌株的标准化稳定悬浮液或者按照以下所述制备。
使用菌种保存技术（种子批系统）以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批不超过五代。
按照表1中的描述，分别培养每种细菌和真菌供试菌株。
表1.供试微生物的制备和使用用pH 7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲溶液或pH7.2的磷酸盐缓冲液配制供试悬浮液；为使黑曲霉孢子悬浮，可将0.05%的聚山梨醇酯80加入该缓冲液中。
这些悬浮液需在2个小时之内使用，或存放在2o～8o条件下24小时内使用。
作为制备并稀释黑曲霉或枯草杆菌营养细胞的新鲜悬浮液的替代方法，可制备稳定的孢子悬浮液，然后将适量的孢子悬浮液用于试验接种。
稳定的孢子悬浮液可在2o～8o下保存，保存期经过时间验证。
阴性对照为了确认试验的条件，用所选的稀释液替代供试品阴性对照。
必须没有微生物的生长。
培养基的生长促进对每一批已制备好的培养基和每一批从脱水培养基或根据描述的组分制备出来的培养基进行测试。
在部分/整个平皿内的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基和大豆酪蛋白消化物琼脂培养基中接种少量(不超过100cfu) 表1中指定的微生物，每种微生物均使用单独一部分/整个平皿培养基。
在平皿内的沙氏葡萄糖琼脂培养基中接种少量(不超过100cfu)表1中指定的微生物，每种均使用一个单独平皿的培养基。
按照表１中描述的条件进行培养。
对于固体培养基，所获得的生长与标准化接种体的计算值之间的差异因素不大于2。
对于刚刚制备好的接种体，发生的微生物生长与用此前检验并批准过的培养基批次所得到的微生物生长相当。
如果出现了与此前从上一个经过测试并通过的培养基批次获得的微生物生长相当、清晰可见的微生物生长，则液体培养基适用。
供试品计数法的适用性样品的制备样品制备方法取决于供试品的物理特征。
USP微生物检测精要
生产商必须按GMP的指导进行制剂产品的生产 储存和分发，以保证最终制剂仅带有低水平的 微生物。
药物制剂和药用物质的接受标准
介绍
非无菌产品的微生物检查根据非无菌产 品的微生物检查：微生物计数<61>和非
无菌产品的微生物检查：控制微生物测 试<62>正文中的方法进行。
药物制剂和药用物质的接受标准
非无菌制剂的微生物质量标准
成品微生物控制的USP观点及文件
<71>无菌测试 <85>细菌内毒素测试 <151>热原测试 <51>抗菌有效性测试 <1222>最终灭菌药品——参数放行 <1207>无菌产品包装——完整性评估
微生物实验室规范
<1117>微生物实验室规范 重要的控制点
无菌技术 培养基控制 菌种控制 设备控制 实验室布局和运作 数据文件控制 员工培训
微生物实验室规范
实验室结果的维护
测试结果 —应包含平皿计数结果（如有） —数据分析的方法应罗列在相关的SOP中 —对粘贴的图表、数据，骑缝签名 存档 —记录应存档并防止丢失 —应有记录保存计划
微生物实验室规范
测试结果解释
微生物数据有时不容易解释
—与人类相关的微生物群落被广泛的用于许多测试 —人员污染是始终被关心的问题 —样品或环境中的微生物并非均匀分布 —微生物检测可变范围大：可能在+/-0.5log10单位左 右 因此，得到的结果与期望的结果略有差异并不是重大 问题。
定期稳定性检查以确认种保藏
—建立标准程序处理、保存菌种。防止污染 和特性变化 —必须小心地处理 —使用前确认菌种的身份，纯度 —根据生产商说明书复苏菌种，使用接种技 术 — -70℃以下或冷冻干燥保存储备菌种，可 延长保存周期 —开启后不要重新冷冻菌种 —追溯传代次数，不超过五代
医疗器械微生物检验
医疗器械微生物检验医疗器械的微生物检验是确保产品质量和安全性的重要环节。
微生物检验可以帮助识别和控制可能存在的微生物污染，从而减少对患者或使用者的潜在风险。
本文将介绍医疗器械微生物检验的重要性、常见的检测方法以及相关的标准要求。
一、医疗器械微生物检验的重要性微生物检验对于医疗器械的生产和使用过程非常重要。
在医疗器械的生产过程中，微生物可能会带来污染，导致产品的质量下降。
而对于使用者来说，微生物污染可能导致感染或其他健康问题。
因此，通过微生物检验可以有效地降低患者和使用者的风险，保障其安全。
二、医疗器械微生物检验的常见方法1. 总菌落计数法（TTC法）总菌落计数法是一种常见的微生物检验方法，用于确定样品中的细菌总数。
该方法将样品接种于特定的培养基上，培养细菌在一定温度下的一段时间后，根据产生的菌落数来评估微生物负荷。
2. 酵母和霉菌计数法酵母和霉菌计数法用于检验样品中酵母和霉菌的数量。
该方法常用的培养基包括葡萄糖酸盐琼脂和菜浸培养基等。
培养细菌在特定条件下的生长，然后通过观察和计数来确定酵母和霉菌的存在与否。
3. 病原微生物检测病原微生物检测是针对特定的病原微生物进行的检验，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
通过特定的培养基和识别试剂，结合PCR技术等快速检测方法，可以快速准确地检测出病原微生物的存在。
三、医疗器械微生物检验的标准要求为确保医疗器械的质量和安全性，相关的标准和法规制定了相应的要求。
以下是一些常见的标准要求：1. ISO 11737系列标准ISO 11737系列标准是关于医疗器械微生物检验的国际标准。
该系列标准包括了微生物检验的各种方法和要求，如总菌落计数法、酵母和霉菌计数法等。
2. 美国药典（USP）美国药典是美国公认的药品质量标准，针对医疗器械微生物检验也有相关的要求。
例如，USP 61章节规定了医疗器械微生物检验的方法和限度。
3. 国家药品监督管理局（CFDA）中国国家药品监督管理局（CFDA）也发布了一系列关于医疗器械微生物检验的标准和指南。
美国药典USP36微生物限度检查
美国药典USP36微生物限度检查USP36 1117 优良微生物检测规范（中英文1/ 2）2013-08-09 15:30:46| 分类：USP|举报|字号订阅1117 MICROBIOLOGICAL BEST LABORATORY PRACTICES 优良微生物检测规范INTRODUCTION 介绍Good laboratory practices in a microbiology laboratory consist of activities that depend on several principles: aseptic technique, control of media, control of test strains, operation and control of equipment, diligent recording and evaluation of data, and training of the laboratory staff. Because of the inherent risk of variability in microbiology data, reliability and reproducibility are dependent on the use of accepted methods and adherence to good laboratory practices.优良微生物检测规范由一些活动组成，这些活动依赖于几个基本要素：无菌技术、培养基控制、检测用菌株控制、设备操作和控制、完善的记录和数据评估、化验室员工的培训。
由于微生物数据具有天生的不确定性，数据的可靠性和重复性取决于是否使用被接受的方法，以及是否严格遵守化验室规范。
MEDIA PREPARATION AND QUALITY CONTROL 培养基制备和质量控制Media Preparation 培养基制备Culture media are the basis for most microbiological tests. Safeguarding the quality of the media is therefore critical to the success of the microbiology laboratory. Media preparation, proper storage, and quality control testing can ensure a consistent supply of high-quality media.培养基是大多数微生物测试的基础。
美国药典微生物限度检测
61微生物限度检测（MICROBIAL LIMIT TESTS）此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。
如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。
在样品检测过程中须进行无菌操作。
若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱内培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。
准备实验 (Preparatory Testing)本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。
因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。
方法如下：将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于10-3稀释的微生物培养物，加1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。
相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序：（1）增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者（2）中和一定数量的干扰因子；或者（3）结合（1）、（2）得出适当条件，使接种物得以生长。
以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用：大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysorbate 20, 4.0%）。
美国药典 非无菌产品微生物限度检查
非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法1.导言微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和霉菌的定量计数当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按照下述规定进行检验，包括样品的取样量，结果的判断。
本法不适用于活菌制剂的检查，可使用包括自动化法在内的替代方法，需确认其与药典方法的等同性。
2. 通用规程微生物计数环境应能防止外来微生物对供试品的污染。
防止污染的措施不能影响供试品中微生物的检出。
备注：检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向气流区域、工作台面及环境应定期进行监测。
如果供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
若使用了中和剂或灭活剂，需确认其有效性及对微生物无毒性。
供试品制备过程中若使用了表面活性剂，需确认其对微生物无毒性以及与所使用的中和剂或灭活剂的相容性。
3.计数方法计数方法包括薄膜过滤法、平皿法和最可能数法（Most-Probable-Number 简称 MPN)。
MPN 法用于微生物计数时精确度最差，但用于微生物污染量小的供试品，MPN 法可能是最合适的方法。
（MPN法不适用于霉菌的检测，仅在供试品总需氧菌数没有适应计数方法的情况下使用。
）供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法。
所选择的计数方法应能够通过检测足量的供试品，判断与质量标准的符合性。
且该计数方法的适用性须经确认。
4. 促生长实验，计数法适用性试验4.1一般要求在有供试品存在的情况下，所选用的计数方法需能够检测微生物。
若检测程序或产品发生变化可能影响检测结果时，计数方法需重新进行适用性确认。
4.2试验菌液的制备试验菌液：使用试验菌株的标准化稳定悬浮液或按下述规定制备。
按表 1 规定程序分别培养各试验菌液。
菌株：采用适宜的菌种保藏技术（种子批系统），试验用菌株传代次数自主种子批（第 0 代）算起不得超过 5代。
菌液制备：取表 1各试验菌株的新鲜培养物，用 PH7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液或 PH7.2的磷酸缓冲液制备混悬液。
美国药典微生物试验说明
實驗數據判讀
不合格原因
–實驗室錯誤 –產品失敗 無論上述何種情況，管理階層必須立即被告知
OOS調查
–數據偏離的程度(嚴重性？) –實驗室環境 –取樣方法 –物料的特性(存活的污染微生物？) –留樣的評估
32/9
<1211>滅菌和無菌保證
每批產品不是通過<71>無菌試驗就可得到無 菌保證。
<1209> 滅菌–化學和物理化學指 示劑，及綜合指示劑
<1211> 滅菌與無菌保證
<1222> 最終滅菌藥品–參數放行
<1223> 微生物方法確效
<1227> 藥物的微生物回收率確效
<1231> 製藥用水
<2021> 微生物計數試驗–營養和 膳食補充劑
<2022> 特定菌的微生物檢查–營 養和膳食補充劑
Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests <62> 特定菌的微生物檢查 / Microbiological Procedures for Absence of Specified Microorganisms <71> 無菌試驗 / Sterility Tests <85> 細菌內毒素試驗 Bacterial Endotoxins Test
劑型 (投藥途徑) 口服固體 口服液劑
外用或鼻腔用藥
陰道用藥
直腸用藥 藥品主成分&賦型劑
<61> TAMC [CFU/g or CFU/ml]
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美国药典微生物检测精要培训小结一微生物实验室规范重要的控制点：无菌技术、培养基控制、菌种控制、设备操作与控制、数据记录与实验室布局和运作、员工培训等。
1无菌技术：防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作方法和管理方法。
可通过无菌环境、灭菌、消毒、卫生要求、无菌操作技术等手段来实现。
2培养基：是微生物实验工作的核心。
包括培养基制备、培养基储存、培养基质量控制。
2.1培养基制备2.1.1根据既定的目的选用正确的培养基2.1.2参考生产商的ＣＯＡ和说明书：关于配制、储存和菌种选用等。
2.1.3所用的水应为去离子水或蒸馏水，应记录用量。
2.1.4成分的称量应用校准过的天平，根据称量量的不同选择合适的天平。
使用清洁的容器和工具（<1051>玻璃器皿清洁）以防外来污染和抑制剂。
应记录称量量。
2.1.5加热帮助溶解时应防止过度加热，通常培养基颜色变深说明加热过度了。
2.1.6灭菌条件：●灭菌参数应验证，验证应同时考虑无菌和培养基生长能力●采用高压蒸汽灭菌或过滤灭菌。
湿热灭菌应考虑装载分布，加热速度过慢会使培养基过度加热，通常为121℃15min，此时间是指培养基温度达到121℃后15min。
●保证最低SAL，在无菌和过度加热之间平衡。
●与污染物分开灭菌●消毒结束后，不应在灭菌柜中储存培养基，过度加热会影响培养基颜色、澄清、pH和凝固能力。
2.2培养基储存2.2.1制备培养基的储存●琼脂培养基易受冷冻影响，低于0℃会破坏凝胶结构。
●应避光避热，密封防止水分蒸发（建议使用螺旋盖的瓶子密封，保存时间长）。
2.2.2培养基融化●不能超过一次，以防过度加热或潜在污染。
●融化可采用水浴、流通蒸汽或微波炉加热。
微波炉加热宜采用少量多次，以防过度。
●培养基融化后在40-50℃水浴中储存不应超过8小时，浇制平皿前应擦干以防污染。
2.2.3培养基标示●培养基名称●批号、制备批号●制备日期、有效期2.2.4有效期确定●根据成分、配方、容器、储存条件等确定●有生长能力试验数据支持2.2.5应在验证过的条件下储存2.2.6重要区域环控用培养基必须●双层包装●最终灭菌，否则进行全数培养及用前检查2.2.7根据当地生物危险品安全程序处置过期培养基2.3培养基质控2.3.1灭菌后培养基检查2.3.1.1生长能力●每批制备的培养基均需进行●测试菌种根据药典，供应商说明书及环境中分离得到●测试不合格应进行调查，如无原因，或无有效纠正措施，不得使用该批号2.3.1.2无菌2.3.1.3pH2.3.1.4容器/平皿的完整性2.3.1.5抑制或指示能力2.3.2定期稳定性检查以确认储存有效期3菌种保藏3.1建立标准程序处理、保存菌种，防止污染和特性变化3.2使用前确认菌种身份和纯度3.3根据生产商说明书复苏菌种，使用接种技术3.4-70℃以下或冷冻干燥保存储备菌种，可延长保存周期3.5开启后不要重新冷冻菌种，剩余部分应弃置3.6传代次数（每接种一次即为一代）不超过5次3.7保藏时间根据具体保藏条件确定4设备维护4.1定期校准、保养4.2定期性能检查4.3定期清洁、消毒5实验室布局和运作5.1防止交叉污染5.2活动分区：无菌、环控样品的处理和培养应在无菌环境中进行5.3当发现微生物生长，后续的工作应转移至“阳性”区5.4环控设备应放置在待取样区域环境中并小心操作5.5应在受控条件下小心取样6样品处理6.1大部分样品、水或环控样品中的微生物对操作、储存环境敏感6.2减少样品，取样与测试间的时间间隔6.3长时间的转移需确认转移条件对测试及样品的影响6.4在无菌条件下，使用无菌技术取样，即使是非无菌样品6.5取样记录：样品信息、取样日期、送样日期、人员/部门、实验室样品接受及确认7培养基培养时间7.1短于3天，用小时表示7.2长于3天，用天表示（上午、下午，相同时间段）8人员培训8.1每个岗位应有相应培训要求，进行上岗前资质确认9实验室文件9.1微生物人员培训和能力确认（上岗资质）9.2设备验证、校准和维护9.3测试中的设备性能（如温度记录）9.4培养基制备、无菌检查、生长能力测试、选择性测试9.5培养基清单与控制9.6根据程序（ＳＯＰ）进行测试的重要数据9.7数据和计算的确认9.8经ＱＡ人员或相应领导审核过的报告9.9超标结果调查10实验室结果维护10.1检测报告至少应包括：●日期●测试样品●微生物检验人员名字●程序编号●测试结果●偏差（如有）●测试参数（设备、菌种、培养基）●管理人员审核签名10.2数据纠错：错误的地方划一横线，签名和日期，必要时说明原因10.3测试结果●应包含平皿计数结果（如有）●数据分析方法应罗列在相关ＳＯＰ中●对粘贴的图表、数据骑缝签名10.4存档：记录应存档并防止丢失，应有记录留存计划11测试结果解释11.1微生物数据有时不容易解释●与人类相关的微生物群落被广泛的用于许多测试●人员污染是始终被关心的问题●样品或环境中的微生物并非均匀分布●微生物检测可变范围大：可能在+/-0.5log10单位左右11.2不符合的结果可能是由2个原因造成的：实验室错误或产品不符合。
无论哪种情况，管理层必须立即被通知11.3调查应包括：●数据偏离的程度（严重性）●平行数据间差异的评估●实验室环境●取样方法●物料特性（存活的污染微生物）●人员面谈●留样评估●测试过程11.4纠偏计划（警戒限、行动限）●如果发现实验室错误，需要●纠偏措施的有效性需要跟踪和记录11.5无效测试：由于错误将试验视作无效必须记录11.6确认测试（复试）：应有ＳＯＰ描述何时进行二非无菌产品：微生物计数1 常规过程1.1 避免产品以外的微生物的污染。
1.2去除细菌抑制/真菌抑制性。
1.3证明表面活性剂的无毒性及其与抑制剂的相容性。
2 计数方法2.1薄膜过滤法2.2平皿计数法：平皿浇注法，表面涂布法。
2.3最大可能性数量法（MPN）：用于检测极少数量的微生物，精密度、准确度差，不适合用于霉菌。
3 生长能力测试和方法适用性3.1 生长能力测试：●一般考虑●测试菌株准备●缓冲液●阴性对照●培养基生长测试3.2 计数方法适用性：●样品制备●接种与稀释●中和/去除抗菌活性●产品存在情况下的微生物的回收率●结果与解释4 微生物数据的可变性4.1 成品测试4.1.1抗菌效力测试4.1.2 微生物限度检查4.2 培养基生长能力测试固体培养基，计数结果与标准接种物的计数数量差别小于系数2。
对新鲜制备的菌液，生长与前批已通过的培养基的前次测试结果一致。
4.3 计数方法适用性测试样品计数结果与对照计数结果的相差小于系数2。
4.4 微生物回收率验证4.4.1 固体培养基的回收率验证4.4.2 受损微生物的恢复三非无菌产品：控制菌微生物测试1 常规过程1.1 避免产品以外的微生物的污染。
1.2 去除细菌抑制/真菌抑制性。
2 产品测试2.1 样品制备和增殖2.2 选择性培养2.3 结果解释3 培养基适用性测试和方法适用性测试3.1 培养基适用性测试：●测试菌株准备●菌株●阴性对照●生长能力测试、抑制及选择性测试3.2 方法适用性：●样品制备●接种与稀释●中和/去除抗菌活性●产品存在的情况下，微生物的回收率●结果与解释4 菌种●金黄色葡萄球菌●铜绿假单胞菌●大肠埃希菌●肠道沙门氏菌●白色念珠菌●梭菌4.1 微生物使用不超过5代4.2 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液或PH7.2磷酸盐缓冲液制备悬浮菌液4.3 悬浮菌液2小时内使用，2-8℃不超过24小时4.4 生孢梭菌也可制备孢子悬浮液，2-8℃保存期限需确认四药物制剂和药用物质的接受标准1 非无菌制剂的微生物质量标准1.1口服固体1.2 口服液体1.3 直肠制剂1.4 局部及鼻腔制剂1.5 阴道制剂1.6 吸入剂1.7 活性药物成分、辅料2 药物产品的接受标准2.1 其他重要性根据评估：●产品用途●产品特点●应用的方法●药物接受者：对婴儿、幼儿及衰弱患者的风险是不同的●存在疾病、伤口、器官损伤相应的因素的风险评估由经授权的有资质的人员进行3 有害微生物3.1 有害微生物的概念不适合无菌产品，无菌产品中不得有任何微生物3.2 将用于非无菌产品的微生物测试，及非无菌产品环境中分离到的微生物评估及清洁验证3.3 有害微生物的定义：3.1.1 能在产品中增殖的微生物，对药品的物理特性及治疗作用有负面影响3.1.2 由于产品中微生物的数量及致病性能导致使用该药品的患者受到感染4 微生物质量相关的产品召回5 USP微生物质量接受标准5.1 USP各论要求是最低的公共标准5.2 通则提供了符合各论要求的方法5.3 有效期内测试5.4 不等于成品所需的所有放行测试五水分活性确定对非无菌药品的应用1 水分活性1.1非无菌药物制剂中水分活性的确定：1.1.1 改善产品处方以提高防腐系统的抗菌效力1.1.2 降低可能在产品处方中化学水解的活性成分的降解1.1.3 降低微生物对产品的污染1.1.4 可以减少和如何筛选需测试的控制菌1.2 降低水分活性在微生物生长方面的作用1.2.1 较长的停滞期、较慢的生长速度、较少的稳定期的微生物数量1.2.2 减少微生物毒素的产生1.2.3 在某个微生物专有的水分活性以下，该微生物不会生长1.2.4 水分活性下降后，微生物的耐热性会提高2 测试策略2.1水分活性高于0.75的多剂量水性药品需要加入防腐剂并将微生物限度测试作为常规放行测试2.2 水分活性低于0.75的药品不需额外防腐，在风险评估后不需要将微生物限度测试作为常规放行测试2.3 制药厂商对原料厂商的生产工艺、质量计划、测试记录有全面的了解。
这些可以通过供应商审计计划得到六无菌测试1 灭菌和无菌保证中的观点：按照无菌最严格的定义，只有当样品中完全没有活的微生物时，它才能被称为是无菌的。
2 无菌测试的首要难点：整批产品不能进行逐个破坏检查是无法证明绝对无菌的。
2.1 无菌是根据概率的原则判断的。
从给定批号的所有产品中存在被污染产品的概率得出判断。
2.2 目的是使其可能性与真实性仅有可接受的微小差异。
3 无菌测试本身并不是设计用于保证产品无菌或产品已灭菌。
产品的无菌保证是通过灭菌工艺或无菌工艺的验证来得到的。
4 无菌测试流程4.1 培养基和细菌抑制/真菌抑制性测试（方法验证）4.2 去除任何抑制细菌和真菌生长的因素4.3确定用于测试的样品数量，每个样品的用量4.4 培养样品4.5 检查测试样品是否有生长的迹象4.6 显微镜检查有疑问的容器是否有生长的迹象4.7 必要的话再接种培养4.8 写报告5 培养基测试5.1 培养基的储存●2-25℃●无菌，密闭容器●储存不超过验证过的期限●硫乙醇酸盐液体培养基颜色指示要求符合5.2 培养基的无菌：●每种要求的培养基取一部分在特定温度下培养14天，检查是否浑浊●与测试同时进行培养基的无菌检查5.3生长能力测试：●在硫乙醇酸盐液体培养基中加入≦100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生饱梭菌●在大豆酪蛋白消化培养基中加入≦100cfu的枯草杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌●细菌3天、真菌5天●检查生长的迹象6 方法适用性测试6.1 将待测样品内在的细菌抑制性和真菌抑制性去除6.2 制备微生物培养的稀释液，最终浓度应使加入产品的微生物数量不超过100cfu6.3 根据产品（或各论要求）使用膜过滤法或直接接种法6.3.1 膜过滤法：●产品特征允许的话，作为首选方法●将测试样品滤过，将微生物截留在滤膜上（孔径不大于0.45uM）●在最后一步冲洗液中在加入不超过100cfu的微生物●将滤膜放入测试用培养基●记住对6个微生物，每个都要这样操作（见上述生长能力测试）●进行培养基生长能力测试作为阳性对照●在适宜温度下培养不超过5天6.3.1.1 冲洗：“每个滤器冲洗不要超过100ml 5次，即使在验证中显示这样的冲洗还不能完全去除抗菌活性6.3.1.2 化学添加物6.3.2 直接接种法：●将样品加入培养基。