miR-17在细胞衰老中的表达变化
LncRNAs在细胞衰老中的作用和治疗靶标
LncRNAs在细胞衰老中的作用和治疗靶标戴凯琴;刘俊;凌霜;许锦文【摘要】长链非编码RNA(long non-coding RNAs,LncRNAs)是一类转录本长度超过200 bp的非编码RNA.细胞衰老是一种稳定的增殖性停滞状态,这种不可逆的细胞停滞状态可能由多种因素引起,如端粒缩短、癌基因诱导或氧化应激.多因素参与细胞衰老,但p53/p21和p16/Rb是不同细胞类型中细胞衰老的主要调节途径.细胞衰老作为一种强大的肿瘤抑制机制已经被广泛研究,以抵抗致癌基因的出现.该文将深入探讨LncRNAs在细胞衰老中的作用机制和治疗靶标.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2019(035)004【总页数】4页(P464-467)【关键词】长链非编码RNA;细胞衰老;p53;p16;衰老相关性疾病;治疗靶标【作者】戴凯琴;刘俊;凌霜;许锦文【作者单位】上海中医药大学交叉科学研究院穆拉德中药现代研究中心,上海201203;上海中医药大学交叉科学研究院穆拉德中药现代研究中心,上海 201203;上海中医药大学交叉科学研究院穆拉德中药现代研究中心,上海 201203;上海中医药大学交叉科学研究院穆拉德中药现代研究中心,上海 201203【正文语种】中文【中图分类】R-05;R339.38;R341;R342.2;R394.2;R977.6细胞衰老是一种稳定的增殖性停滞状态，这种不可逆的细胞停滞状态可能由多种因素引起，如端粒缩短、癌基因诱导或氧化应激。
除此之外，不同的细胞类型中，细胞衰老的形态和分子特征有所不同，例如明显的扁平状态，溶酶体β-半乳糖苷酶的活性增加，laminB1表达降低以及炎性因子的表达增加。
虽然许多因素参与细胞衰老，但p53/p21和p16/Rb是不同细胞类型中细胞衰老的两个主要调节途径。
衰老是一个复杂的生物过程，引发与年龄有关的诸多疾病，如心血管疾病、糖尿病、神经退行性疾病、癌症。
Hsa-miRNA-217在胰腺癌方面的研究
目前 研 究 认 为 能 促 进 胰 腺 癌 侵 袭 转 移 的 ｍ Ｒ Ａ 主 要 ｉＮ 有 ｍｉ一 １ ｍ Ｒ １ａ ｍ Ｒ ２ ４ 和 ｍ Ｒ ４ ６ 而 且 这 些 Ｒ ２ ， ｉ 一０ ｉ 一２ ｉ 一８ ， ｍ Ｒ Ａ 多 在 胰 腺 癌 中 高 表 达 。 Ｌｅ等 ［报 道 约 有 １０个 ｉＮ ｅ ２ ］ ０ ｍ ｃｏ Ｎ 在 胰 腺 癌 中 表 达 异 常 ，包 括 ｍｉ １５ ｍ Ｒ ２ ， ｉｒＲ Ａ Ｒ一５ ， ｉ 一 １ ｍ Ｒ ２ １ ｍｉ一２ ｍｉ ３ ６ ｉ 一２ ， Ｒ ２２． Ｒ一７ａ和 ｍ Ｒ ３ １． ｉｂ ｆ等 在 研 ｉ 一０ Ｄ ｌ ｏ ｌ 究 发 现 ｍｉ ２ 在 ７ ％ 的 胰 腺 癌 组 织 巾 阳 性 表 达 ，在 良性 Ｒ一１ ９ 组 织 中没 有 一 例 ｍｉ ２ Ｒ一１表 达 强 阳性 。 在 淋 巴 结 阴 性 的 胰 腺 癌 患者 中 ， Ｒ２ ｍｉ 。１阳 性 表 达 者 生 存 期 显 著 短 于 阴 性 表
达 者 。Ｒ ｌ 等 研究 表 明 ， Ｒ一０ ｏｄ Ｅ ｏ ｍｉ １３和 ｍｉ一０ Ｒ １７的表 达与 ｍ Ｒ １５的表 达缺 失 可 以区分 胰腺 肿 瘤 与正 常 组织 ． ｉ 一 ｉ 一５ ｍ Ｒ ２ １的过表 达与高 Ｋ６ ｉ７增殖 指数 及 出现 肝转移 高度相 关 。
在 胰 腺 癌 中 表 达 下 凋 或 缺 失 的 ｍ ｃｏ Ｎ 亦 在 肿 瘤 的 ｉｒＲ Ａ 形 成 和 发 展 中 起 到 不 可 忽 视 的 作 用 。 ｍ Ｒ ３ ａ 抑 癌 基 ｉ 一４ 是 Ｐ ３的 一 个 靶 点 ， ｏｙｉ ５ Ｌ ｄｇｎ等 研 究 发 现 部 分 胰 腺 癌 细 胞 系
４ ｍｉ ２ ７在 胰 腺 癌 发 生 发 展 起 到 的 作 用 Ｒ．１
SASP与细胞衰老的研究进展
SASP与细胞衰老的研究进展作者：杨丽华来源：《科技风》2021年第15期关键词：细胞衰老;衰老相关分泌表型;干细胞;成纤维细胞细胞衰老是生物体在性成熟后出现的细胞生理功能进行性减退，是一种细胞状态，与多种生理过程和衰老相关疾病密切相关。
细胞衰老和衰老相关分泌表型（senescence-as-sociated secretory phenotype，SASP）已经成为衰老和很多慢性疾病的主要驱动因素，包括癌症、神经退行性变、心脏病和骨关节炎。
近几年研究发现，SASP与干细胞衰老、成纤维细胞衰老、上皮细胞衰老、内皮细胞衰老及平滑肌细胞衰老有关。
本文对SASP与细胞衰老的研究进行综述，旨在为细胞衰老多种生理过程的研究及衰老相关疾病治疗策略提供一定理论基础。
1 SASP的概述2008年，Coppe J P等首次提出SASP这个概念。
SASP是细胞衰老后分泌的一系列炎症细胞因子、趋化因子、生长因子和蛋白酶。
SASP是细胞衰老的表现特征，影响细胞的微环境，与细胞衰老、个体老化和衰老相关的疾病有密切联系。
2 SASP与细胞衰老2.1 SASP与干细胞衰老成体干细胞/祖细胞是存在于组织中的一小群细胞，在其运作的器官的所有细胞类型中，具有分化的潜力，干细胞/祖细胞衰老与生理和病理过程密切相关。
SASP能够将衰老扩散到附近和远处的非衰老细胞。
用去卵巢（OVX）小鼠作为雌激素缺乏模型，研究发现OVX小鼠的骨髓问充质干细胞（BMSCs）在体内外都表现衰老表型，且JAK2/STAT3信号通路激活，SASP因子分泌上调。
添加雌激素后，可以抑制JAK2/STAT3信号通路，降低SASP因子表达，缓解衰老，增强成骨分化。
用辐射诱导BMSCs衰老模型，研究发现BMSCs的JAKl/STAT3通路被激活，并伴有IL-6、IL-8、基质金属蛋白酶一9（MMP9）等SASP因子分泌增加。
使用JAKl抑制剂（JAKi），可有效抑制BMSCs的JAKl/STAT3通路，同时SASP的分泌下调。
miRNA对心肌细胞缺血再灌注损伤的干预作用机制研究进展
miRNA对心肌细胞缺血再灌注损伤的干预作用机制研究进展符珍珍1，彭瑜2，张钲21 兰州大学第一临床医学院心脏中心，兰州730000；2 兰州大学第一医院心脏中心摘要：心肌缺血再灌注损伤（MIRI）是急性心肌梗死患者预后不良的主要因素，也是血流再通治疗所面临的主要挑战。
现有研究表明，部分miRNA能够通过抑制程序性细胞死亡因子4、磷酸酶和紧张素同源物、Toll样受体4、肿瘤坏死因子超家族家族成员FASLG蛋白、分泌型磷蛋白1等蛋白表达，减少凋亡蛋白的活性及表达量，减少细胞凋亡，从而减轻MIRI。
miRNA还可通过调节氧化应激和线粒体能量代谢、调节细胞自噬和细胞增殖等机制，达到减轻MIRI的目的。
实验研究发现，多种手段调节miRNA表达，有助于减轻MIRI动物心肌细胞凋亡。
然而目前相关技术并不完善，基于miRNA治疗方案的临床应用尚有待进一步研究。
关键词：微小RNA；心肌缺血再灌注损伤；细胞凋亡；细胞自噬；细胞增殖doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.32.027中图分类号：R542.2 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）32-0112-04急性心肌梗死（AMI）是全球心血管疾病患者死亡的主要原因之一［1］，随着各种药物和再灌注技术的应用，AMI患者急性期病死率有所下降，但仍然高，高病死率与心肌梗死面积的增加密切相关［2］。
研究表明，心肌缺血再灌注损伤（MIRI）是导致再灌注后心肌梗死面积增加的主要原因［3-4］。
MIRI可引发一系列不良生物学效应，包括氧化应激和炎症反应加剧、凋亡相关信号通路激活、细胞内钙超载、线粒体功能障碍、细胞膜功能损害及微血管损伤等，这些因素加重组织缺氧损伤并扩大了梗死面积［5-7］。
微小RNA（miRNA）是一类分子量在21~25 nt的非编码RNA［8］，参与基因转录后表达调控，能通过促进体内各种mRNA的降解和沉默［9］，导致细胞生理功能改变，并最终影响疾病的发生发展［10］。
miR-17-92基因簇研究进展
miR-17-92基因簇研究进展于宇;张淑兰【摘要】MicroRNAs (miRNA) are a class of highly conserved small,single-stranded non-coding RNAs that regulate target genes expression by fullyor partially complementary principle binds to target genes 3′UTRs or direct shear target genes mRNA. miR-17-92 cluster is located on human chromosome 13q31.3,which encodes miR-17,miR-18,miR-19a,miR-20, miR-19b and miR-92. miR-17-92 cluster controls 30 kinds of targetgenes ,which involve in cancer development. The paper reviews the structure and function and the roles of miR-17-92 cluster in gynaecology and other tumors occurrence and development.%微小RNA（microRNA，miRNA）是一类内源性的非编码的高度保守的单链小分子RNA，通过完全和（或）部分互补的原则结合到靶基因3′UTRs或者直接剪切靶基因mRNA，以降解或抑制mRNA翻译的方式调控靶基因的表达。
miR-17-92基因簇位于人染色体13q31.3处，可产生miR-17，miR-18，miR-19a，miR-20，miR-19b和miR-92等6个成熟的miRNA。
miR-17-92基因簇通过调控30多种靶基因参与肿瘤的发生发展。
骨髓增生异常综合征患者血清miR-125b-5p、miR-17-5p_表达变化及其与临床特征和预后的
骨髓增生异常综合征患者血清miR -125b -5p 、miR -17-5p 表达变化及其与临床特征和预后的关系姜铭1，徐娟2，贲海祥2，丁林林2，尹红31 如皋市人民医院检验科，江苏如皋226500；2 如皋市人民医院血液内科；3 南通大学附属医院血液病研究室摘要：目的 探讨骨髓增生异常综合征（MDS ）患者血清miR -125b -5p 、miR -17-5p 表达变化及其与临床特征和预后的关系。
方法 选择MDS 患者76例（MDS 组）、健康志愿者32例（对照组），采集所有研究对象空腹外周静脉血，离心留取血清，采用RT -qPCR 法检测血清miR -125b -5p 、miR -17-5p 表达。
比较两组血清miR -125b -5p 、miR -17-5p 表达；分析血清miR -125b -5p 、miR -17-5p 表达与MDS 患者临床特征和预后的关系。
结果 MDS 组血清miR -125b -5p 相对表达量低于对照组，血清miR -17-5p 相对表达量高于对照组（P 均<0.05）。
IPSS -R 分级高危+极高危MDS 患者血清miR -125b -5p 表达低于IPSS -R 分级低危+中危MDS 患者，血清miR -17-5p 表达高于IPSS -R 分级低危+中危MDS 患者（P 均<0.05）。
以血清miR -125b -5p 、miR -17-5p 表达的均数为临界值，将MDS 患者分为血清miR -125b -5p 低表达者与高表达者、血清miR -17-5p 低表达者与高表达者。
血清miR -125b -5p 低表达者3年总体生存率和3年无进展生存率均低于血清miR -125b -5p 高表达者，血清miR -17-5p 低表达者3年总体生存率和3年无进展生存率均高于血清miR -17-5p 高表达者（P 均<0.05）。
结论 MDS 患者血清miR -125b -5p 表达下调、血清miR -17-5p 表达上调，二者表达变化与IPSS -R 分级高危、极高危以及预后不良有关。
microrna家族分类
microrna家族分类microRNA（miRNA）是一类非编码RNA，长度一般为21-24个核苷酸。
miRNA通过与mRNA靶标相结合，调节基因表达。
根据miRNA的序列相似性和功能特点，miRNA家族被分为不同的分类。
本文将介绍几个常见的miRNA家族。
1. let-7家族let-7家族是最早被发现的miRNA家族之一。
let-7家族在多种物种中高度保守，包括果蝇、线虫、人类等。
let-7家族成员在调节细胞增殖、分化以及胚胎发育中发挥重要作用。
研究表明，let-7家族的异常表达与多种肿瘤的发生和发展密切相关。
2. miR-17家族miR-17家族是一组在哺乳动物中高度保守的miRNA。
miR-17家族包括miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a和miR-92a等成员。
miR-17家族在调节细胞周期、凋亡和血管生成等生物过程中发挥重要作用。
研究表明，miR-17家族的异常表达与多种人类疾病，如心血管疾病和肿瘤的发生和发展相关。
3. miR-200家族miR-200家族是一组在多种动物中高度保守的miRNA。
miR-200家族包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429等成员。
miR-200家族在上皮细胞的形态发生、上皮间质转化以及肿瘤浸润和转移等过程中起重要作用。
研究表明，miR-200家族的异常表达与多种癌症的进展和预后密切相关。
4. miR-155家族miR-155家族是一组在哺乳动物中高度保守的miRNA。
miR-155家族包括miR-155、miR-155-5p和miR-155-3p等成员。
miR-155家族在免疫应答、炎症反应以及肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。
研究表明，miR-155家族的异常表达与多种免疫相关疾病和肿瘤的发生和发展密切相关。
5. miR-34家族miR-34家族是一组在多种物种中高度保守的miRNA。
SMAD3_对消化道恶性肿瘤调控作用的研究进展
- 160 -*基金项目：国家自然科学基金项目（82260483；81502556）；云南省科技厅基础研究专项-重点项目（202301AS070015）；云南省消化内镜临床医学中心项目（2022LCZXKF-XH19）①昆明理工大学医学院 云南 昆明 650500②云南省第一人民医院通信作者：郭强SMAD3对消化道恶性肿瘤调控作用的研究进展*李西沙① 唐慧② 刘中建② 郭强② 【摘要】 消化道恶性肿瘤的发生及进展机制一直是国内外研究的热点。
SMAD3作为一种受体调节型蛋白，参与了癌症信号通路，对多数消化道恶性肿瘤的增殖、迁移及侵袭等起着重要的调控作用，与肿瘤患者的预后密切相关。
本文就SMAD3的结构功能、其在消化道恶性肿瘤中的作用机制的最新研究做一综述，以对SMAD3有更全面的了解。
【关键词】 SMAD3 消化道恶性肿瘤 癌基因 Research Progress on the Regulatory Effect of SMAD3 on Gastrointestinal Malignant Tumor/LI Xisha, TANG Hui, LIU Zhongjian, GUO Qiang. //Medical Innovation of China, 2023, 20(36): 160-164 [Abstract] The occurrence and progression mechanism of gastrointestinal malignant tumor have been the focus of research at home and abroad. As a receptor regulated protein, SMAD3 is involved in cancer signaling pathway and plays an important regulatory role in the proliferation, migration and invasion of most gastrointestinal malignant tumor, which is closely related to the prognosis of tumor patients. In this paper, the structure and function of SMAD3 and its mechanism of action in gastrointestinal malignant tumor are reviewed, so as to have a more comprehensive understanding of SMAD3. [Key words] SMAD3 Gastrointestinal malignant tumor Oncogene First-author's address: School of Medicine, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650500, China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.36.036 肿瘤的发生发展是一个复杂多步骤的生物学过程，多基因参与了肿瘤的调控，在肿瘤的调控网络中存在着一些关键基因。
外泌体源性miRNA在纤维化疾病中的作用机制及其相关信号通路研究进展
山东医药2021年第61卷第17期外泌体源性miRNA在纤维化疾病中的作用机制及其相关信号通路研究进展张焱，冉丽权，张宝喆，张明珠昆明医科大学附属口腔医院，昆明650106摘要：纤维化是以细胞外基质异常增多或过度沉积为特征的病理过程，可导致器官、组织结构受损甚至器官衰竭。
外泌体通过分泌蛋白质、脂质和核酸等生物信息进行细胞间通信，其携带的微小RNA（miRNA）在纤维化疾病中发挥重要作用。
外泌体源性miRNA能够通过多种信号通路介导成纤维细胞增殖分化、间充质细胞转化及细胞凋亡，进而在纤维化疾病中发挥调控作用，有望成为纤维化疾病诊断的重要标志物和治疗的重要靶点。
关键词：外泌体；微小RNA，纤维化疾病；作用机制；信号通路doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2021.17.025中图分类号：R363文献标志码：A文章编号：1002-266X（2021）17-0092-03外泌体是由各种细胞分泌到细胞外液中的特异性细胞外囊泡，其可携带蛋白质、脂质和核酸等生物活性分子并将这些分子转运到邻近或远处的细胞，从而改变靶细胞的基因表达、信号传递和整体功能［1］。
微小RNA（miRNA）是由各种细胞产生的单链非编码RNA，其可通过外泌体从供体细胞转移到受体细胞，在受体细胞中转录后干扰基因表达，在各种生物过程中发挥着重要的调控作用［2］。
纤维化的主要特征是成纤维细胞增殖、活化或转化为肌成纤维细胞，大量细胞外基质（ECM）异常增多或过度沉积，可导致组织、器官结构受损甚至器官衰竭。
大量研究表明，外泌体源性miRNA在纤维化疾病中发挥重要作用。
本文就外泌体源性miRNA在纤维化疾病中的作用机制及其相关信号通路综述如下。
1外泌体源性miRNA在纤维化疾病中的作用机制1.1介导成纤维细胞增殖分化成纤维细胞是全身结缔组织中最常见的细胞类型，也是ECM的主要来源，其可以被各种化学信号（如细胞因子、趋化因子和生长因子等）激活并加快增殖和分化，形成可以上调基质生成速率的肌成纤维细胞，表达α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）并产生大量具有收缩作用的胶原蛋白，从而促进纤维化的发生［3］。
MicroRNA+调控成骨细胞增殖、凋亡的研究进展
・综述・基金项目：国家临床重点专科建设项目资助；重庆市卫生局科研基金（２０１２－２－０４１）*通讯作者：冯正平，Ｅｍａｉｌ：ｆｅｎｇｚｈｅｎｇｐｉｎｇ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍＭｉｃｒｏＲＮＡ调控成骨细胞增殖、凋亡的研究进展李济伶 冯正平*审校重庆医科大学附属第一医院内分泌科，重庆 ４０００１６中图分类号：Ｒ６８１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６－７１０８（２０１５）０４－０４９９－０５摘要：微小ＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）是一类非编码小分子ＲＮＡ，在基因表达调控中起重要作用，它通过与靶ｍＲＮＡ的特异性结合，导致靶ｍＲＮＡ降解或者抑制其翻译，对基因进行转录后调控，从而控制细胞的增殖、分化、凋亡等，参与疾病的发生发展。
成骨细胞是骨形成过程中的重要细胞，其数量或功能的改变明显影响骨代谢。
近年来，ｍｉｃｒｏＲＮＡ与骨代谢的关系备受关注，诸多研究表明ｍｉｃｒｏＲＮＡ在成骨细胞的分化中发挥重要调控作用，但其调节成骨细胞增殖和凋亡的研究相对较少。
本文就ｍｉｃｒｏＲＮＡ调控成骨细胞增殖、凋亡的研究进展进行综述。
关键词：ｍｉｃｒｏＲＮＡ；成骨细胞；增殖；凋亡ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓＬＩＪｉｌｉｎｇ，ＦＥＮＧＺｈｅｎｇｐｉｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１６，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＦＥＮＧＺｈｅｎｇｐｉｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｆｅｎｇｚｈｅｎｇｐｉｎｇ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍＡｂｓｔｒａｃｔ：ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）ｉｓａｃｌａｓｓｏｆｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇｓｍａｌｌＲＮＡｔｈａｔｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ｍｉＲＮＡｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓｉｎｔｈｅｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎａｔｔｈｅｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌｂｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏｔａｒｇｅｔｔｈｅｍＲＮＡ，ｒｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔａｒｇｅｔｍＲＮＡｏｒｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｉｔｓｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ，ｔｈｅｒｅｂｙｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｔｈｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｌｙｉｎｖｏｌｖｅｓｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｔｈｅｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｓａｋｅｙｍｅｍｂｅｒｉｎｂｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｎｕｍｂｅｒｏｒｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｍｉＲＮＡａｎｄｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｈａｓｂｅｅｎｃｏｎｃｅｒｎｅｄｍｏｓｔｌｙ．ＭａｎｙｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｍｉＲＮＡｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｍｉＲＮＡｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｌｉｔｔｌｅ．ＴｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｍｉＲＮＡｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｒｏＲＮＡ；Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 微小ＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ，ｍｉＲＮＡ）是一类进化上高度保守，长约２２个核苷酸的非编码单链小分子ＲＮＡ，通过与靶ｍＲＮＡ的特异性结合导致其降解或抑制其翻译，对基因进行转录后的调控［１－３］。
MicroRNA在衰老调控中的研究进展
MicroRNA在衰老调控中的研究进展邱雯莉;王明艳;张旭【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P157-159)【关键词】MicroRNA;衰老;调控;进展【作者】邱雯莉;王明艳;张旭【作者单位】江苏省南京中医药大学基础医学院南京 210046;江苏省南京中医药大学基础医学院南京 210046;江苏省南京中医药大学基础医学院南京 210046【正文语种】中文【中图分类】Q522+.2衰老是本世纪生物学研究的方向之一。
衰老涉及面广，机制复杂，对衰老调控的研究始终是生命科学领域中最关键的问题。
近年来，随着现代遗传学、分子生物学、细胞生物学、现代遗传学等学科的快速发展，对衰老调控的研究也越来越趋向于分子水平，发现MicroRNA（miRNA）参与衰老调控的多个方面［1］。
衰老对体内细胞的新陈代谢以及维持正常生命活动具有重要意义。
同时，细胞衰老过程也参与调控多种相关性疾病，如心血管疾病、肿瘤、纤维化疾病等，发挥着“双刃剑”的作用。
随着衰老调控研究的深入，不仅有利于我们认识生长发育的过程，更为我们延缓衰老，提高生活质量提供了可能性。
本文将近年来miRNA 在衰老调控中的研究进展综述如下。
1 miRNA 的生成及生物学特性miRNA 是一类普遍存在于真核生物中，长约21～25个核苷酸，在基因转录后水平发挥重要调控功能的非编码单链小分子RNA［2］。
miRNAs大多来源于编码基因的内含子或非编码基因，少部分来源于编码基因的外显子。
miRNA 由RNA聚合酶Ⅱ转录成初级pri－miRNA，pri－miRNA 再经RNA 酶Ⅲ核酸内切酶Drosha剪切成长70～100个核苷酸的发夹结构的前体pre－miRNA。
pre－miRNA 经转运蛋白exportin－5运输到细胞质，最后通过另一种RNA 酶Ⅲ核酸内切酶Dicer的剪切得到双链miRNA。
双链结构在解旋酶的作用下打开，一条链被降解，另一条发展为21～25个核苷酸的成熟miRNA。
微小RNA信号通路在肿瘤中的作用
微小RNA信号通路在肿瘤中的作用随着生物领域的不断深入研究，越来越多关于微小RNA的研究结果被科学家所发现。
微小RNA作为一种短链RNA分子，它在细胞内部发挥着至关重要的作用。
微小RNA分子通过调控基因表达方式，参与细胞生长、分化、凋亡等生命过程，是细胞调节的一个重要方面。
而且在最近的研究中也发现微小RNA在肿瘤的形成、发展过程中起着重要的作用。
1.微小RNA信号通路的作用微小RNA信号通路为肿瘤的发生提供了理论基础。
例如，miR-21是一种重要的微小RNA。
他能调节基因表达和肿瘤相关信号通路。
因此，miR-21在肿瘤中的表达水平与肿瘤恶性程度和预后密切相关。
其他的微小RNA同样是非常重要的调节分子。
这些微小RNA包括let-7、miR-34、miR-17、miR-155等等。
2.微小RNA参与肿瘤的发生和发展研究发现，一些微小RNA在肿瘤中有着良好的表达，如miR-21、miR-17-5p、miR-155等，这些微小RNA在肿瘤中的表达可促进肿瘤细胞增殖、减轻凋亡、调节细胞周期、促进血管新生、增强肿瘤细胞迁移和入侵等。
与此相反的，一些其他微小RNA在肿瘤中则表达受到抑制，如let-7、miR-34a等，在肿瘤中可以抑制体内癌细胞的增殖和迁移。
3.微小RNA作为治疗癌症的新靶点在最近的研究中，科学家们发现抑制肿瘤微小RNA的表达可以有效地抑制肿瘤的生长和转移。
同时，也有研究表明通过提高某些微小RNA的表达水平，可以制止肿瘤生长和转移。
所以，微小RNA在治疗癌症中有着重要的潜力。
总之，微小RNA信号通路是肿瘤的发生、发展中一个重要的调节因子。
他可以介导基因表达和信号通路的变化，从而促进或抑制肿瘤的发生、发展和转移。
微小RNA还被认为是新的治疗癌症的靶点，为未来肿瘤治疗提供了新思路。
在未来的研究中，我们需要不断深入的研究微小RNA在肿瘤中的作用机制，才能进一步提高癌症治疗的有效性和疗效。
成纤维细胞衰老研究进展
成纤维细胞衰老的研究进展王文浩胡火珍四川大学生命科学院摘要：皮肤是人体最大的器官，是机体最外观的表现，而随着人们生活水平的提高，人们对于皮肤抗衰老的意识较前增强，因此皮肤抗衰老的研究已经成为时代的热点。
皮肤是由三部分组成：表皮层，真皮层以及角质层组成，而表皮层和真皮层是由结缔组织细胞—成纤维细胞构成。
所以成纤维细胞的衰老会使表皮和真皮的功能紊乱从而导致了色斑以及皱纹的产生。
目前的研究已经表明，成纤维细胞的老化，其特征在于作为损失的稳定性和生理完整性和增加细胞损伤死亡并且细胞的老化至少在某些方面是被调控的。
一般来说，我们将细胞损伤导致细胞增殖能力下降作为细胞衰老的依据。
对于成纤维细胞的衰老，其不仅受到了遗传学调控如一些衰老相关特定基因的调控，也受表观遗传学调控。
在这篇综述中，我们总结了之前对于成纤维细胞衰老的研究和可能的衰老机制以及对抗衰老的展望。
关键词：成纤维细胞；衰老；皮肤老化Research progress of fibroblasts’ aging mechanisms Abstract: Skin consist of three parts:epidermis dermal and hypodermic.And the dermal and hypodermic is composed of syndesm cells—fibroblasts .Fibroblasts’ senescence will cause dysfunction of dermal and hypodermic which may contribute to wrinkles and chloasma’s appearance on the surface of skins.Current study has suggested that fibroblasts’ aging is characterized as loss of stability and physiological integrity and increase cell damage todeath.Over recent years,aging research showed that aging is a controlled progress—at least in some aspects. Generally,we consider cellular senescence as disabled proliferation due to cellular damage.As for fibroblast,we emphasis not just on intracellular such as genomicinstability,epigenetic alteration,and also on its function such as collagen secretion. In this review we conclude several candidate mechanism of fibroblasts’ aging and prospect of some classic or evolutionary way to anti-aging.key words : Fibroblasts,anti-aging,senescence,skin’s aging引言从古代开始，长寿一直是人们不断追求的一个目标。
MicroRNA对相关癌细胞作用的研究进展
MicroRNA对相关癌细胞作用的研究进展作者：吴万里来源：《科技视界》 2014年第31期吴万里（浙江大学，浙江杭州 310058）【摘要】MicroRNA是一种单链小分子RNA，其在发育和疾病中起了非常重要的作用。
最近的研究发现，miRNA表达与多种癌症相关，可以充当抑癌基因，也可以充当癌基因。
本文简要介绍了MicroRNA和癌细胞，然后讲述了microRNA-486对肺癌细胞的抑制作用，miRN-224及221对大肠癌细胞的生长和转移的抑制作用，MicroRNA-10a对肝癌细胞的抑制作用，microRNA-7对胃癌细胞转移的抑制作用，miR-17-92 基因簇作为致癌基因诱导肿瘤发生，miR-21可能作为胶质母细胞瘤的癌基因。
【关键词】MicroRNA；癌细胞；抑癌基因；癌基因1 MicroRNA的介绍MicroRNA一般简写作miRNA ，是一种21-25nt长的单链小分子RNA，成熟的miRNA，5’端有一个磷酸基团，3’端为羟基。
它广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA。
编码miRNAs的基因最初产生一个长的pri-RNA分子，这种初期分子被剪切成约70-90个碱基大小、具发夹结构的单链RNA前体，并经过Dicer酶加工后生成。
成熟的miRNA 5’端的磷酸基团和3’端羟基则是它与相同长度的功能RNA降解片段的区分标志。
目前只有一小部分miRNAs生物学功能得到阐明。
这些miRNAs调节了细胞生长，组织分化，与生命过程中发育、疾病有关。
通过对基因组上miRNA的位点分析，显示其在发育和疾病中起了非常重要的作用。
而最近的研究发现，miRNA表达与多种癌症相关，大约50%得到注解的miRNAs在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点，这说明miRNAs在肿瘤发生过程中起至关重要的作用。
同时据推测，miRNA调节着人类1/3的基因。
2 癌细胞的介绍癌细胞是一种产生了变异的细胞，可以无限生长、转化和转移，能够无限增殖并破坏正常的细胞组织，难以消灭，它是癌症的根源。
血小板RNA与肿瘤
血小板RNA与肿瘤仲金秋;曹玉珠;沈培亮;张婷婷;王爱云;陈文星;陆茵【摘要】Platelets are anucleate blood cells best known for their role in hemostasis and wound healing.In addition to hemostasis, platelets are involved in a variety of pathophysiological responses including immune inflammation, angiogenesis, tissue regeneration, and cancer metastasis, and participate in multiple process of tumor development.Recent studies have shown that tumor microenvironment affects the state of RNA in platelets and biology of downstream.This review will focus on our understanding of the possible influence of tumor microenvironment on platelet RNA and the pathological effect, and how this knowledge can guide the development of the interaction between platelets and tumor for clinical application.%血小板是人体中重要的无核血细胞,生理状态下主要发挥止血和促进伤口愈合的作用.此外,血小板也参与了多种病理过程,主要包括炎症、血管生成、组织再生以及肿瘤的恶性发展等.目前,大量研究显示血小板在肿瘤发生发展中发挥着极其重要的作用,并且参与了肿瘤发生发展的多个过程.最新的研究证明肿瘤微环境中血小板RNA水平发生明显改变并且影响着肿瘤的发展进程.该文综述了近几年报道的在肿瘤微环境中肿瘤细胞对血小板RNA影响及其可能产生的病理效应的相关研究.为临床肿瘤检测以及基于RNA进行血小板与肿瘤之间交互作用的研究提供一定指导.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2017(033)004【总页数】4页(P461-464)【关键词】血小板;肿瘤;RNA;微囊泡;内皮细胞;液体活检【作者】仲金秋;曹玉珠;沈培亮;张婷婷;王爱云;陈文星;陆茵【作者单位】南京中医药大学药学院,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心,江苏南京210023【正文语种】中文【中图分类】R-05;R331.124;R342.2;R730.2;R730.4众所周知，血小板在正常机体中主要起到促进凝血的作用，有研究显示血小板被激活后能有效地将RNA翻译成蛋白质，从而改变自身的蛋白质水平，发挥着促凝血、抗炎等多种生理功能[8]。
MicroRNA生物学功能及其在肿瘤中的作用机制
MicroRNA生物学功能及其在肿瘤中的作用机制陈国庆;赵志伟;曹霞;羊惠君【摘要】MicroRNA是新近发现的一类调控性小分子RNA,通过降解靶基因mRNA或者转录后抑制靶基因表达而发挥作用.目前的研究已经发现microRNA参与调控发育、细胞分化、细胞凋亡、细胞能量代谢等多种生理过程以及心血管疾病、神经系统疾病、糖尿病、肿瘤等多种病理过程.本文就microRNA的生物学功能及其在肿瘤发生、发展中的作用机制做一综述.【期刊名称】《四川解剖学杂志》【年(卷),期】2010(018)002【总页数】4页(P34-37)【关键词】MicroRNA;基因调控;肿瘤治疗【作者】陈国庆;赵志伟;曹霞;羊惠君【作者单位】武汉体育学院健康科学学院,武汉,430079;四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室,成都,610041;四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室,成都,610041;四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】R730.2MicroRNA是一类长度约为21至23个核苷酸的调控性小分子RNA,至1993年Anbros等人在线虫中发现第一个microRNA分子lin-4以来,microRNA的功能及其作用机制引起人们极大的重视,是当前生物医学领域研究的热点。
绝大多数microRNA来源于基因组中的非编码序列,microRNA的发现也使得人们得以重新认识基因组结构和功能,早先被认为是垃圾DNA的内含子、间隔序列、重复序列等也开始引起研究人员的注意。
迄今为止,人们在拟南芥、线虫、果蝇、小鼠、人类等多种生物中发现数千个microRNA分子,这些microRNA分子参与了包括发育、细胞分化、细胞凋亡、细胞能量代谢等多种生理过程以及心血管疾病、神经系统疾病、糖尿病、肿瘤等多种病理过程[1]。
microRNA的发现为基因表达调控的机制提供了一个全新的模式和更为复杂的调控网络。
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miR-17在细胞衰老中的表达变化课题研究：王怡丹指导教师：符永兰（北京师大二附中）王苗（北京师范大学生命科学学院）该文获2010年西城区科技创新大赛二等奖摘要:miRNA（全称microRNA，通用简称是miRNA，以下简称miRNA，miR-17是13号染色体长臂上的miRNA）是一种长约22个碱基的小RNA,近些年来miR-17被报道在许多肿瘤中表达上调。
但miR-17在衰老细胞中的表达还没有报道。
目的:本实验的目的是建立年轻和衰老的WI38细胞系,检测已知在多种肿瘤中高表达的miR-17细胞衰老中的表达情况。
方法:通过传代培养细胞，细胞计数确定细胞代数，β-Gal染色检测细胞是否衰老。
用Trizol试剂提取细胞的总RNA,逆转录获得cDNA 模板。
最后通过实时定量PCR比较miR-17在年轻和衰老细胞中的表达。
结果:构建了年轻和衰老的WI38细胞系，发现与在肿瘤细胞中相反，衰老细胞中miR-17的表达水平显著降低。
这一结果预示miR-17可能同时参与细胞衰老和肿瘤的发生发展。
一、综述（一）细胞衰老1.细胞衰老概述衰老是一种有机体的死亡危险随年龄增加而增大的现象，是生命的基本现象，也是生物界的普遍规律。
随着衰老研究及分子生物学的迅猛发展，人们对衰老的探究已经逐渐深入到细胞、基因及分子水平。
1961年，L.Hayflick做过这样的实验，体外培养的人体某种细胞，最多分裂50次左右就停止分裂了，并且丧失了正常的功能[1]。
这种原来具有分裂能力的细胞随着整体年龄增长而减缓或停滞分裂的现象叫做细胞衰老。
成纤维细胞WI38是研究细胞衰老的经典模型。
衰老细胞与年轻细胞相比，在形态结构和生理生化反应上会出现明显的变化，主要表现在膜透性及脆性增加，核膜内陷，核增大，核中染色质凝聚、破碎，线粒体数量减少，胞内脂褐素等异常物质沉积等。
在pH=6时，衰老细胞的酸性β-半乳糖苷酶染色呈阳性。
2.细胞衰老的机制从诱因来看衰老一般分为复制型衰老和过早型衰老两种，由于细胞分裂增殖进而端粒缩短或端粒机构的破坏而引起的人类和某些物种细胞的衰老称为复制型衰老，这是人类和某些物种细胞衰老的主要机理[2]。
由外界因素诱导比如，离子辐射，氧化胁迫，某些肿瘤抑制因子和癌基因的过表达诱导的衰老称为过早型衰老。
3.细胞衰老与肿瘤的关系细胞衰老是细胞经历的不可逆的生命过程，在这个时期里，组成细胞的化学物质在运动中不断受到内外环境的影响而发生损伤，造成退化时期生理功能下降和紊乱。
当机体组织受到某些外界或内源的刺激时，导致细胞发生转化，脱离了正常的周期而不断进行无限增殖时，肿瘤即便产生。
可见，细胞衰老作为细胞的一种主要的肿瘤抑制机制，与癌变有着密切的联系。
多种研究表明，当细胞处于发生癌变风险的情形下，会诱发细胞发生衰老。
（二）miRNA1.miRNA概述miRNA是一种长度约为22个碱基的小RNA,在动物、植物和真菌中广泛存在，可以在转录后水平调节基因的表达。
迄今发现的miRNA在生物的发育，细胞增殖，凋亡，衰老和肿瘤发展中发挥调节功能。
2. miRNA与肿瘤miRNA调控转录后水平的基因表达抑制或者是基因沉默的方式，很多与信号通路中细胞周期调控的转录因子及相关蛋白有关，且近来研究发现50%有注释的人类miRNAs集中于基因组的脆性位点， miRNA 突变或者异位表达与多种人类癌症相关，miRNAs 可以起到肿瘤抑制基因或者癌基因的功能。
这就注定了其与癌症等疾病有着重要的关联。
3. miRNA与衰老正如miRNA对生长发育的调节作用一样,科学家们也猜测是否miRNA在衰老和死亡过程中也起到重要作用。
在秀丽隐杆线虫模型中发现，miRNA lin-4，通过胰岛素/类胰岛素生长因子-1信号通路影响寿命和衰老的节奏。
缺失lin-4会缩短线虫的寿命[3]。
利用基因芯片的技术，在不同的模式生物中，人们发现随着年龄的变化，miRNA的表达图谱发生改变。
随着miRNA在细胞发育，增殖，凋亡及癌症中的调节作用逐步被揭示。
miRNA 调节衰老的机制及miRNA如何参与细胞衰老的信号通路等问题将成为今后miRNA研究的热点之一。
4．miR-17miR-17位于13号染色体长臂. miR-17所在的mir-17基因簇被认为是一个致癌基因，表达该基因可促进细胞增殖，抑制肿瘤细胞的凋亡，导致肿瘤发生等。
在B 淋巴细胞瘤中，miR-17所在的基因簇会高表达，同时抑制肿瘤细胞的凋亡。
原癌基因c-Myc可以诱导miR-17的表达，而miR-17可以抑制转录调控因子E2F1的表达。
从而促进c-Myc介导的细胞增殖，与肿瘤形成相关。
在其它一些造血细胞瘤及实体瘤中，该基因簇的高表达也被证明可以促进肿瘤发生[4]。
由上述实验结论可知，mir-17通过调节转录调控因子E2F1等靶基因起到了调节细胞周期，影响细胞增殖、分化的作用。
这与细胞衰老的分子机制息息相关。
此外，近期的报道也证实其在心、肺及免疫系统等正常细胞组织发育中起到了重要作用。
（三）立题依据miR-17位于人13号染色体长臂，已有报道显示miR-17在许多恶性肿瘤中存在高表达，包括肺癌，胰腺癌，结肠癌等。
衰老作为细胞的一种主要的肿瘤抑制机制，与癌变有着密切的联系。
虽然人们对细胞衰老相关蛋白的作用有比较深入的了解，但细胞衰老的调节机制还不是很清楚，近些年来科研人员发现miRNA可能与细胞衰老的调节有关。
miR-17是miRNA家族中的一员，据报道miR-17在许多肿瘤中高表达，参与肿瘤的发生和发展。
但miR-17是否调节衰老还没有报道。
鉴于miR-17在多数肿瘤中存在异常表达，并与肿瘤的发生发展有关，我们推测miR-17可能参与细胞衰老过程的调节,细胞衰老和癌变存在某些共同的调控机制。
为了研究miR-17在细胞衰老中的调节作用，本课题主要研究miR-17在细胞衰老过程中的表达情况。
二、实验部分（一）实验材料WI38，人胚肺成纤维细胞。
mir-17 逆转录引物：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACactaccmir-17实时定量PCR引物：上游引物:GCAAAGTGCTTACAGTGCAGGT下游引物:GTGCAGGGTCCGAGGT（二）试剂DMEM，Trypsin-EDTA, L-Glutamin, Penicillin-Streptomycin 购自GIBCO公司；DEPC 购自Sigma公司；M-MLV Reverse Transcriptase 购自Promega公司；DNase I 购自Ambion公司；琼脂糖(Agarose), 酵母提取物(Yeast Extract), 胰蛋白胨(Trptone)购自OXOID 公司SYBR Green超混合物购自Biorad公司DMF，K3Fe(CN)6，K4Fe(CN)6，Citric Acid，Na2HPO4，KH2PO4，KCl，MgCl2，NaCl，溴化乙锭（EB）,甲醛溶液，戊二醛，琼脂粉(Agar) 购自科海军舟（三）实验方法1.细胞复苏实验目的:将冻存的细胞复苏，使细胞贴壁生长1.1 培养基在37℃水浴锅温浴1.2 从液氮中取出细胞，立即放入37℃水浴锅1.3 冻存管中冻存液融化后，立即将其放入15ml离心管中，加入5ml预热好的培养基，1200转离心5分钟1.4 吸出上清，用10ml预热好的培养基重悬细胞，放入10mm培养皿中，将细胞混匀，放入37℃，5%CO2培养箱中，使细胞贴壁并培养1.5 3天后，吸去旧的培养基，加入10ml新鲜培养基2.细胞传代和细胞计数实验目的:使细胞的密度适合细胞的生长和分裂，并计算细胞生长的代数2.1吸去培养基，用PBS洗细胞一次，加入1ml胰酶2.2 放入37℃，5%CO2培养箱，孵育3分钟，将贴壁的细胞消化下来2.3 用5ml培养基将细胞吹吸均匀，吸取100μl,放入10ml细胞计数液中2.4 将5×105细胞放入10mm培养皿中，加培养基到10ml,将细胞混匀，放入37℃培养箱中，使细胞贴壁并培养2.5 3天后，吸去旧的培养基，加入10ml新鲜培养基细胞代数的计算方法如下：△PD=lg（A/B）/0.3PDA=△PD+PDBA为当前细胞数量，B为接种时细胞数量，△PD为细胞从接种至此时的代数增加值，PDA为当前细胞的代数，PDB为接种时细胞的代数。
3.细胞冻存实验目的:长期保存细胞，为以后的实验保存实验材料3.1吸去培养基，用PBS洗细胞一次，加入1ml胰酶3.2 放入37℃，5%CO2培养箱，孵育3分钟，将贴壁的细胞消化下来3.3用5ml培养基将细胞吹吸均匀,将细胞吸至15 mL离心管中，1200转离心5分钟3.4 吸除上清，加入适量冻存液（完全培养基加5%DMSO）将细胞吹打均匀，分装入冻存管中，放入程序降温盒于-80℃过夜3.5移入液氮罐中长期保存。
4 .β-gal 染色实验目的:检验细胞是否衰老WI38细胞进入50代后，细胞生长速度放缓，细胞逐渐衰老，此时对细胞进行β-gal 染色处理，可观察过表达细胞系与对照组细胞衰老的程度是否存在差异，进一步鉴定过表达目标基因对复制性细胞衰老的影响。
4.1准备细胞将细胞分至新的35mm培养皿中，每盘0.1M，每种细胞3盘平行，生长24小时后，进行β-gal 染色。
4.2β-gal 染色从细胞培养箱中取出细胞，用PBS清洗2-3次，取适量固定液，室温固定5分钟。
倒掉固定液，用PBS清洗2-3次，加入适量染色液，37℃放置12-16小时。
倒掉染色液，PBS清洗1次，显微镜下观察。
5. 细胞总RNA的提取实验目的:提取年轻和衰老细胞的RNA,为检测miR-17的表达提供实验材料5.1从细胞培养箱中取出细胞，用预冷的PBS洗2-3次，加入1mlTrizol试剂，用刮刀刮取细胞，室温放置5-8分钟。
5.2向其中加入0.2ml氯仿，剧烈混匀15秒钟，室温放置3分钟，4℃、12000 转离心15分钟。
5.3取无色水相，加入0.5mL异丙醇，室温放置10分钟，4℃、12000 转离心10-15分钟。
5.4弃上清，加入1mL75%乙醇，混匀，4℃、10000 转离心5分钟。
5.5弃上清，空气中干燥10-20分钟，加入20µl0.1%DEPC水,57℃水浴10分钟，取出置于-80℃保存。
6.总RNA浓度测定实验目的:对年轻和衰老细胞的RNA进行定量利用分光光度计对所提取的RNA浓度进行测定，原理及步骤与DNA浓度的测定相似，RNA在OD260处有最大吸收峰，纯的RNA其OD260/OD280为2，该值大于1.6说明样品纯度可以使用。
7.DNA酶Ⅰ处理总RNA实验目的:去除RNA中的DNA,防止DNA污染在无RNA酶的离心管里建立如下反应体系：10×DNA酶I缓冲液: 3μlRNA 10μgDNA酶I 1μl加无RNA酶的水到终体积 30μl37℃作用10分钟，70℃15分钟灭活DNA酶 I。