CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型
肝纤维化动物模型造模方法的研究进展

肝纤维化动物模型造模方法的研究进展I. 综述肝纤维化是一种严重的肝脏疾病,其病理特征为肝实质中大量纤维组织增生,导致肝脏功能受损。
肝纤维化的发生和发展受到多种因素的影响,如病毒感染、药物毒性、酒精性肝病等。
因此建立有效的动物模型对于研究肝纤维化的发病机制和治疗方法具有重要意义。
本文将对近年来关于肝纤维化动物模型造模方法的研究进展进行综述。
在构建肝纤维化动物模型时,首先需要选择合适的动物种类。
常用的动物模型包括CRISPRCas9基因敲除小鼠、自发性肝纤维化大鼠、四氯化碳(CCl诱导的肝纤维化大鼠等。
其中CRISPRCas9基因敲除小鼠是目前最为理想的肝纤维化动物模型之一,因为它可以精确地靶向特定基因进行敲除,从而有效地模拟人类肝纤维化的病理过程。
目前主要采用CRISPRCas9技术进行基因敲除。
通过构建特定的sgRNA序列,可以特异性地靶向目标基因,实现对其表达水平的抑制。
这种方法的优点是操作简便、高效,且可以精确地控制基因敲除的范围和程度。
然而CRISPRCas9技术仍存在一定的局限性,如可能导致非特异性敲除、影响其他基因的表达等。
因此未来还需要进一步优化该技术,以提高其在肝纤维化动物模型构建中的应用效果。
另一种常用的肝纤维化动物模型构建方法是通过化学物质的直接或间接作用诱导肝纤维化。
常用的化学物质包括四氯化碳(CCl、二甲基亚硝胺(DMN)、苯并芘等。
这些化学物质可以通过不同途径进入肝脏,引起肝细胞损伤和坏死,进而导致肝纤维化的发生。
然而这种方法存在一定的毒副作用,如长期暴露于高浓度的CCl4可能会导致肝癌的发生。
因此在使用化学物质诱导法构建动物模型时,需要严格控制剂量和时间,以降低实验风险。
A. 肝纤维化的定义和重要性肝纤维化是一种严重的肝脏疾病,其特征是正常肝细胞被大量的胶原纤维所替代,导致肝脏结构和功能的严重改变。
这种病变过程被称为纤维化,最终可能导致肝硬化,甚至肝癌。
因此对肝纤维化的早期诊断和治疗具有重要的临床意义。
肝爽颗粒对CCl4诱导的慢性肝损伤小鼠模型和肝损伤细胞模型的保护作用 孙海青
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K e yw o r d s : l i v e r d i s e a s e s ;a u t o p h a g y ; a p o p t o s i s ;G a n s h u a n g p a r t i c l e s ;m i c e ,i n b r e dB A L BC
d o i : 1 0 . 3 9 6 9 / j . i s s n . 1 0 0 1- 5 2 5 6 . 2 0 1 5 . 0 7 . 0 2 8 收稿日期: 2 0 1 4- 1 2- 1 5 ; 修回日期: 2 0 1 5- 0 1- 2 5 。 基金项目: 国家自然科学基金 ( 8 1 3 0 0 3 4 9 ) ; 北京市科技新星计划 Z 1 3 1 1 0 7 0 0 0 4 1 3 0 1 6 ) ; 北京市自然科学基金( 7 1 4 4 2 1 6 ) ( 作者简介: 孙海青( 1 9 8 8 - ) , 女, 主要从事慢性肝病及肝纤维化的研究; 1 9 8 1 - ) , 女, 主治医师, 主要从事慢性肝病及肝纤维 王小琪( 化的研究。二者对本文贡献相同, 共同为第一作者。 通信作者: 时红波, 电子信箱: s h b 4 1 1 @1 2 6 . c o m 。
l i v e r i n j u r yi nm i c e v i aa u t o p h a g y ,a n dt o p r o v i d e a b a s i s f o r i t s c l i n i c a l a p p l i c a t i o n .Me t h o d s ㊀We e s t a b l i s h e da c h r o n i c l i v e r i n j u r y m o d e l i nm i c eb y i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o no f C C l ,a n da c e l l m o d e l o f l i v e r d a m a g e i nc e l l l i n e H L- 7 7 0 2i n d u c e db y C C l nv i t r o .T h e a n i m a l s 4 4i ,G a n s h u a n g g r a n u l ei n t e r v e n t i o ng r o u p ,n o r m a l c o n t r o l g r o u p ,a n dC C l r o u pw i t h o u t r e c e i v i n gG a n s h u a n g w e r e d i v i d e di n t ot h r e e g r o u p s 4g g r a n u l e s .I na d d i t i o n ,w e e x p o s e dt h e c e l l s t o 3- m e t h y l a d e n i n e ( 3- M A ) ,a na u t o p h a g y i n h i b i t o r ,a n do b s e r v e dt h e e f f e c t s o f G a n s h u a n g ;s e r u ma l a n i n ea m i n o t r a n s f e r a s e( A L T )a n da s p a r t a t ea m i n g r a n u l e s o nc e l l a p o p t o s i s .L i v e r t i s s u ei n j u r yw a s e v a l u a t e db yH Es t a i n i n g o t r a n s f e r a s e ( A S T )l e v e l s w e r ed e t e r m i n e db yb i o c h e m i c a l a s s a y s .A u t o p h a g yw a sa s s e s s e db yi m m u n o f l u o r e s c e n c es t a i n i n ga n dWe s t e r n b l o t t i n g .L i v e r a p o p t o s i s w a s a n a l y z e db y f l o wc y t o m e t r y a n dA n n e x i nV/ P I d o u b l e s t a i n i n g .C o m p a r i s o n s b e t w e e ng r o u p s w e r e p e r f o r m e du s i n ga n a l y s i s o f v a r i a n c e . R e s u l t s ㊀H Es t a i n i n g s h o w e dt h a t l i v e r t i s s u e i n j u r y w a s s i g n i f i c a n t l y m i l d e r i nt h e G a n s h u a n g g r a n u l e i n t e r v e n t i o n g r o u pt h a ni nt h e C C l r o u p .S e r u mA L Ta n dA S Tl e v e l s w e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n c e s b e t w e e nG a n s h u a n g g r a n u l e i n t e r v e n t i o ng r o u p ,n o r 4g m a l c o n t r o l g r o u p ,a n dC C l g r o u p ( F= 1 5 7 6 、 1 3 3 5 , P< 0 0 5 ) .B o t hi nv i v oa n di nv i t r ot e s t s s h o w e dt h a t a u t o p h a g yi n c r e a s e ds i g n i f i 4 c a n t l yi nc e l l s t r e a t e dw i t hG a n s h u a n g g r a n u l e s t h a ni nc e l l s e x p o s e dt o C C l a l o n e , w h i l e a p o p t o s i s w a s s i g n i f i c a n t l y r e d u c e di nt h e f o r m e r . 4 T h e a d m i n i s t r a t i o no f 3- M Aw e a k e n e dt h e p r o t e c t i v e e f f e c t o f G a n s h u a n g g r a n u l e s a n di n c r e a s e da p o p t o s i s .F l o wc y t o m e t r y s h o w e dt h a t a p o p t o s i s e s w e r e s i g n i f i c i a n t l yd i f f e r e n c e sb e t w e e nf i v eg r o u p s( F= 2 5 6 3 7 , P< 0 0 1 ) .C o n c l u s i o n ㊀G a n s h u a n gg r a n u l e sh a v ep r o t e c t i v e e f f e c t s a g a i n s t c h r o n i cl i v e r i n j u r yb y i n h i b i t i n ga p o p t o s i s ,p o s s i b l yt h r o u g he n h a n c e da u t o p h a g y .
CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型
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CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质(特别是胶原)过度沉积,不是一个独立的疾病,是许多慢性肝病共同的病理过程,几乎各种慢性肝病(化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性,以及胆汁淤积性)都可以导致肝纤维化。
CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。
在肝细胞内质网中,经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后,CCl4产生了自由CCl3·及Cl,它们与肝细胞内大分子发生共价结合,可攻击膜不饱和脂质,引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化,损伤肝细胞,从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化,释放出Ⅳ型胶原酶,降解Ⅳ型胶原。
同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌I 型胶原,取代了Ⅳ型胶原,促使肝脏纤维化1.实验动物SPF级BablC小鼠,健康,雄性,体重为18g-20g2.实验分组实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组,每组15只动物。
3.实验周期6W4.主要试剂CCl4(上海国药集团)5.建模方法按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液(CCl4:橄榄油=1:4), 每3天1次,连续6W。
对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。
正常饮食饲养,观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。
完成持续给药6W后,称体重,戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠,摘眼球取血,室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清,放入-80℃冰箱冻存。
同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于10%中性福尔马林中固定,石蜡包埋;其余肝组织液氮冷冻-80℃保存。
6.模型评价1.大体观察:CCl4组小鼠随着给药时间延长活动逐渐减少, 精神萎糜,毛发蓬乱无光泽;大体标本显示,CCl4组肝脏与周围组织粘连明显,肝边缘圆顿,肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节。
2.肝脏指数变化:取肝脏,称质量,计算肝脏指数=肝脏重/体重,CCl4组小鼠肝脏显著高于对照组小鼠。
四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察
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基金项目!河南省科技创新人才计划C杰出青年项目"%&)%""&%""!"$%国家-十三五.科技重大专项课题"!"%'RU%"$!&&"+C""!$ 作者单位!%"""(#北京解放军总医院第五医学中心中医肝病科"付双楠#宫?$%河南中医药大学"高达#郭佳佳#苗明三#朱平生$ 通信作者!朱平生#!"#$%!LE)8$,65E+,6! %!+*(G"%宫?#!"#$%!6G,6"#,("!!%+(*(G"
期间自由饮水(摄食#第'天开始联苯双酯组以&*+!& "6+96灌胃#空 白 对 照 组 及 模 型 组 灌 胃 等 剂 量 蒸 馏 水#每天%次#连续灌胃$'%第%&天腹腔注射"*%? 浓度 44=) 橄榄油溶液制备急性肝损伤模型#分别于 造模后((+(%!和!)E后处理各组动物#以%"?水合 氯醛按"*"( "=+%"6麻醉动物#摘眼球取血#) \# )""";+"$,离 心 %& "$,#取 血 清#采 用 全 自 动 生 化 分 析仪测各组生化指标 2=K 及 2IK'
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六味地黄丸抑制巨噬细胞激活抗肝纤维化作用机制研究

六味地黄丸抑制巨噬细胞激活抗肝纤维化作用机制研究王学敏;崔亚钦;王静;石炳烨;李新菊【摘要】目的:观察六味地黄丸对四氯化碳(CCl4)小鼠肝纤维化过程中巨噬细胞激活的影响。
方法每周3次腹腔注射 CCl4共6周制备肝纤维化模型,六味地黄丸在 CCl4造模同时灌胃给药。
免疫荧光检测α-SMA 表达,免疫组化检测巨噬细胞标志物 CD68表达,qPCR 检测α-SMA、TNF-α、IL-1β、MCP1、CXCR3表达,Western blot 检测α-SMA、MCP1和 CXCR3。
结果造模6周,α-SMA 表达显著升高(P <0.01),六味地黄丸显著抑制α-SMA 表达(P <0.01);CCl4造模后CD68主要分布在纤维间隔呈强阳性表达;与正常组相比,模型组 TNF-α、IL-1β、MCP1、CXCR3表达显著升高(P <0.01);与模型组相比,六味地黄丸显著降低CD68及促炎症因子、趋化因子的表达(P <0.01)。
结论六味地黄丸对 CCl4肝纤维化过程中的巨噬细胞激活有显著抑制作用。
%OBJECTIVE To observe the inhibitory effects of Liuwei Dihuang Pills(LWDHP) on macrophages activation in CCl4-induced liver fibrosis in mice.METHODS C57BL/6 mice were induced liver fibrosis by CCl4 exposure and administered with LWDHP for 6 weeks simultaneously.Liver tissue was investigated by HE and Sirius re d staining.α-SMA was analyzed by immunofluorescence,qPCR and Western blot.Liver macrophages were observed by immunohistochemistry of CD68.The pro-inflammatory cytokines and chemokine such as TNF-α,IL-1β,CXCR3 and MCP1 were detected by qPCR or Western blotanalysis.RESULTS After 6 weeks of CCl4 administration,the expression ofα-SMA significantly increased,and LWDHP po-tently inhibited the α-SMA expression.Immunohistochemistry showed that the expression of CD68was very weak in normal group,CD68 was distributed mainly between fibrotic septa with strong positive expression in CCl4 model group;Real-time quantitative PCR showed that TNF-α,IL-1β,MCP1 and CXCR3 expression significantly increased in model group compared with normal pared with the model group,LWDHP significantly reduced the expression of CD68,inflammatory fac-tors and chemotacticfactors.CONCLUSION LWDHP shows a potent inhibition of macrophage activation in CCl4-induced liv-er fibrosis.【期刊名称】《南京中医药大学学报》【年(卷),期】2017(033)001【总页数】4页(P65-68)【关键词】肝纤维化;六味地黄丸;巨噬细胞【作者】王学敏;崔亚钦;王静;石炳烨;李新菊【作者单位】河北大学附属医院,河北保定 071000;河北大学附属医院,河北保定 071000;河北大学附属医院,河北保定 071000;河北大学附属医院,河北保定071000;河北大学附属医院,河北保定 071000【正文语种】中文【中图分类】R285.5六味地黄丸是中医养阴经典方剂,肝肾阴虚是肝纤维化基本病机之一[1],然而,六味地黄丸抗肝纤维化作用及机制则罕见报道。
益生菌VSL#3抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化
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益生菌VSL#3抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化赵晓芳;秦蜀;余文静;罗国松;段春燕;姚富丽;代荣阳【期刊名称】《泸州医学院学报》【年(卷),期】2017(040)005【摘要】目的:研究肠道益生菌VSL#3对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响.方法:建立CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型,分为对照组,VSL#3组,CCl4组,VSL#3+CCl4组.应用HE染色和血清AST、ALT检测分析VSL#3对CCl4诱导的小鼠肝脏损伤的影响;天狼星红染色和western blot方法分析VSL#3对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的影响及其机制.结果:VSL#3明显减轻CCl4诱导的小鼠肝纤维化和肝损伤,并显著抑制Stat3信号通路的活化.结论:益生菌VSL#3通过抑制Stat3信号通路缓解CCl4诱导的小鼠肝纤维化.【总页数】4页(P419-422)【作者】赵晓芳;秦蜀;余文静;罗国松;段春燕;姚富丽;代荣阳【作者单位】西南医科大学:基础医学院生物化学与分子生物学教研室,四川泸州646000;西南医科大学:附属医院肝胆外科,四川泸州 646000;西南医科大学:基础医学院生物化学与分子生物学教研室,四川泸州 646000;西南医科大学:附属医院肝胆外科,四川泸州 646000;西南医科大学:基础医学院生物化学与分子生物学教研室,四川泸州 646000;西南医科大学:基础医学院生物化学与分子生物学教研室,四川泸州646000;西南医科大学:肝脏疾病实验室,四川泸州 646000【正文语种】中文【中图分类】R575;R393【相关文献】1.益生菌VSL#3抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化 [J], 赵晓芳;秦蜀;余文静;罗国松;段春燕;姚富丽;代荣阳;;;;;;;2.双氢青蒿素抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的实验研究 [J], 郭永泽;单铁英;任海霞;蔡莉;李校天;王建华;刘晓东;崔星亮3.四氯化碳诱导ICR小鼠和C57小鼠的肝纤维化模型比较 [J], 钟霞;王丽;王洪连;沈宏春;徐川岚;刘育杭4.脱水穿心莲内酯对四氯化碳诱导的肝纤维化模型小鼠肝细胞凋亡的抑制作用及其机制 [J], 谢婧;李丽华5.四氯化碳诱导ICR小鼠和C57小鼠的肝纤维化模型比较 [J], 钟霞;王丽;王洪连;沈宏春;徐川岚;刘育杭因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
小鼠肝癌诱导实验报告

#### 实验背景肝癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类健康。
近年来,随着生物技术和分子生物学的发展,小鼠肝癌模型已成为研究肝癌发生发展机制的重要工具。
本研究旨在建立一种高效、稳定的小鼠肝癌模型,并探讨其应用价值。
#### 实验材料1. 实验动物:SPF级昆明种小鼠,体重20-25g,雌雄各半。
2. 实验试剂:四氯化碳(CCl4)、橄榄油、肝细胞培养液、胎牛血清、聚凝胺(PFA)、H&E染色液、苏木素染色液、伊红染色液等。
3. 实验仪器:显微镜、离心机、电热恒温培养箱、组织切片机、染色机等。
#### 实验方法1. 小鼠分组:将小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。
2. 实验组:每天用橄榄油溶解CCl4,按照1:9的比例配制成CCl4溶液,以0.2ml/只的剂量给实验组小鼠腹腔注射,每周注射3次,连续12周。
3. 对照组:每天用橄榄油溶解CCl4,按照1:9的比例配制成CCl4溶液,以0.2ml/只的剂量给对照组小鼠腹腔注射,每周注射3次,连续12周。
4. 取材:在第12周结束时,对实验组和对照组小鼠进行安乐死,取出肝脏,用生理盐水冲洗,置于10%甲醛溶液中固定。
5. 组织学观察:将肝脏组织进行常规石蜡包埋、切片,进行H&E染色、苏木素-伊红(HE)染色和免疫组化染色。
6. 结果分析:观察肝脏组织的形态学变化、肿瘤生长情况、肿瘤细胞增殖和凋亡情况。
#### 实验结果1. 肝脏组织学观察:实验组小鼠肝脏组织出现明显的肝细胞损伤、变性、坏死和纤维化,部分小鼠出现明显的肝细胞癌变;对照组小鼠肝脏组织无明显异常。
2. 肿瘤生长情况:实验组小鼠肝脏肿瘤生长迅速,肿瘤直径明显大于对照组,且肿瘤数量多于对照组。
3. 肿瘤细胞增殖和凋亡情况:实验组小鼠肿瘤细胞增殖指数(PI)明显高于对照组,而肿瘤细胞凋亡指数(AI)则低于对照组。
#### 实验讨论1. 本实验采用CCl4诱导小鼠肝癌模型,结果表明该模型具有良好的肿瘤生长和癌变特点,可用于研究肝癌的发生发展机制。
黄芪汤上调肝组织BAMBI表达改善CCl_(4)诱导小鼠肝纤维化

黄芪汤上调肝组织BAMBI表达改善CCl_(4)诱导小鼠肝纤维化蒋微;徐莹;王晓柠;慕永平;陈佳美;刘伟;张华;陈高峰;曹健美;刘平;蒋式骊【期刊名称】《上海中医药杂志》【年(卷),期】2021(55)3【摘要】目的探讨黄芪汤(HQD)对肝纤维化模型小鼠骨形成蛋白和激活素跨膜抑制剂(BAMBI)的作用。
方法以10%CCl4橄榄油溶液2 g/kg腹腔注射建立C57BL/6小鼠肝纤维化模型;于第4周起将造模组小鼠随机分为模型组(M)和黄芪汤组(HQD),每组12只,干预3周;检测各组小鼠的肝功能、肝组织BAMBI及相关胶原基因表达。
体外培养LX-2细胞,观察HQD有效组分黄芪总皂苷(AS)和甘草酸(GA)对转化生长因子-β(TGF-β)信号传导和基因表达的影响。
结果与模型组比较,HQD组血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶活性显著降低(P<0.01);肝组织炎症坏死、胶原沉积均显著减轻(P<0.01);肝组织Ⅰ型胶原(Col1a1)和基质金属蛋白酶-12 mRNA水平显著降低(P<0.05),而Bambi mRNA表达显著增加(P<0.01)。
体外实验结果表明,AS和GA可显著抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞活化和胶原合成;显著降低脂多糖诱导LX-2细胞的肿瘤坏死因子-α表达(P<0.01),且显著增加LX-2细胞BAMBI表达(P<0.01)。
结论黄芪汤抗肝纤维化的作用机制可能与抑制肝脏炎症反应及上调BAMBI表达有关。
【总页数】7页(P74-80)【作者】蒋微;徐莹;王晓柠;慕永平;陈佳美;刘伟;张华;陈高峰;曹健美;刘平;蒋式骊【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院;上海中医药大学交叉科学研究院;上海中医药大学研究生院【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织VEGF表达变化2.四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织和HSC-T6细胞NOX4基因及其蛋白表达的变化3.黄芪通过上调缺氧诱导因子-1α表达对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用4.鳖甲煎丸对CCl_(4)诱导小鼠肝纤维化的治疗作用机制研究5.柔肝方上调肝组织Dectin-1及下调TLR4治疗CCl4造模小鼠肝纤维化的作用机制研究因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
栀子柏皮汤不同配伍对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的治疗作用

栀子柏皮汤不同配伍对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的治疗作用钱正月;李俊;黄成;孟晓明;马陶陶;陈昭琳【摘要】Objective To study the anti-hepatofibrotic effects of Zhizi Bopi Decoction and its compatibility on liver fibrosis. Methods The model of mouse liver fibrosis which was induced by carbon tetraehlofide ( CCl4 ) was used to investigate the effects of Zhizi Bopi Decoction and its compatibility by gavage. Indicators of hepatic fibrosis and inflammation were detected with automated biochemistry analyzer and liver fibrosis of the mice was assessed by Mas-son staining and HE staining. Meanwhile, the protein levels of collagen typeⅠ and α-smooth muscle actin (α-SMA) were evaluated by Western blot analysis. Results Zhizi Bopi Decoction and each different treatment group could evidently inhibit the increased serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), hydroxyproline ( Hyp) and hyaluronic acid ( HA) activities, and improve the pathological changes of mouse livers. Furthermore, the therapeutic effects on liver fibrosis induced by CCl4 in mice were primarily ascribed to the syner-gic effect of Gardenia jasminoides Ellis, Cortex phellodendri and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma ( P<0. 01 ) . And they could obviously reduce the protein expression levels of collagen typeⅠandα-SMA in the liver ( P<0. 01 ) . In addition, Zhizi Bopi Decoction could also obviously reduce the contents of transforming growth factor-beta ( TGF-β) . Conclusion Zhizi Bopi Decoction and its compatibility all perform significant anti-fibrotic effects on the liver in different degree, but thecompatibility of Gardenia jasminoides Ellis, Cortex phellodendri and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma exert the most distinctly anti-fibrotic effects among them, possibly by reducing the contents of TGF-β.%目的研究栀子柏皮汤不同配伍组合的抗肝纤维化药理作用. 方法采用四氯化碳( CCl4 )引起的肝纤维化小鼠模型观察栀子柏皮汤各配伍组的抗肝纤维化作用,同时给予不同配伍的栀子柏皮汤进行灌胃治疗. 生化检测相关肝纤维化及炎症指标,运用Masson染色和HE染色检测肝纤维化的变化,Western blot 法检测Ⅰ型胶原及α-横纹肌肌节肌动蛋白(α-SMA)的表达水平. 结果栀子柏皮汤及各配伍组均可不同程度的降低小鼠血清谷丙转氨酶( ALT)、谷草转氨酶 ( AST)、羟脯氨酸( Hyp)及透明质酸( HA)水平,改善肝脏的病理变化,其中栀子黄柏甘草配伍组抑制 CCl4 诱导的小鼠肝纤维化效果最佳(P<0. 01),并能显著抑制肝组织中Ⅰ型胶原和α-SMA的蛋白表达( P<0. 01 ). 实验结果表明栀子柏皮汤亦可明显降低血清中转化生长因子β( TGF-β)的表达水平. 结论栀子柏皮汤不同配伍组能不同程度改善小鼠肝纤维化,但栀子黄柏甘草配伍,即全汤组抗肝纤维化作用最明显,并且栀子柏皮汤的抗肝纤维化作用可能与降低TGF-β水平有关.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2016(051)001【总页数】5页(P68-72)【关键词】栀子柏皮汤;配伍;肝纤维化;α-平滑肌肌动蛋白【作者】钱正月;李俊;黄成;孟晓明;马陶陶;陈昭琳【作者单位】安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽天然药物活性研究省级实验室,合肥 230032;安徽创新药物产业共性研究院,合肥 230032;安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽天然药物活性研究省级实验室,合肥 230032;安徽创新药物产业共性研究院,合肥 230032;安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽天然药物活性研究省级实验室,合肥 230032;安徽创新药物产业共性研究院,合肥 230032;安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽天然药物活性研究省级实验室,合肥 230032;安徽创新药物产业共性研究院,合肥 230032;安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽天然药物活性研究省级实验室,合肥 230032;安徽创新药物产业共性研究院,合肥230032;安徽医科大学药学院,合肥 230032;安徽天然药物活性研究省级实验室,合肥 230032;安徽创新药物产业共性研究院,合肥 230032【正文语种】中文【中图分类】R285◇药学研究◇肝纤维化是因多种原因诱导所引起的慢性肝脏类疾病,若不积极治疗,将发展为肝硬化甚至肝癌。
四氯化碳诱导肝纤维化原理

四氯化碳诱导肝纤维化原理嘿,朋友们!今天咱来聊聊四氯化碳诱导肝纤维化的原理。
你说这四氯化碳咋就这么厉害,能把好好的肝给弄得纤维化了呢?咱就打个比方吧,这肝脏就好比是一个勤劳的工人,每天兢兢业业地工作着,负责着各种代谢啊、解毒啊之类的重要任务。
那四氯化碳呢,就像是个捣蛋鬼,偷偷摸摸地溜进肝脏这个“工厂”里。
四氯化碳进入肝脏后,会被肝脏里的一些酶给处理。
这一处理可就出问题啦,会产生一些有害物质,这些有害物质就开始搞破坏啦!它们就像一群小混混,在肝脏里到处惹事,让肝细胞受伤。
肝细胞受伤了,那可不得了啊!肝脏就会想办法去修复啊。
可是这修复的过程中,如果反复受到四氯化碳的骚扰,那修复就可能出岔子啦。
就好像补衣服,本来好好补能补好,可老是有人在旁边捣乱,那补出来的能好看吗?能结实吗?慢慢地,肝脏里就会出现一些纤维组织。
这些纤维组织就像是一些乱拉的铁丝网,把肝脏给缠起来了。
这一缠,肝脏的功能可不就受影响了嘛!原本能轻松完成的工作,现在变得困难重重啦。
而且啊,这四氯化碳诱导肝纤维化可不是一下子就完成的,它是一点一点慢慢来的,就像温水煮青蛙一样。
等你发现的时候,可能已经比较严重了呢!这可不是吓唬你哟!你想想,要是你的肝脏被这些纤维组织给缠得透不过气来,那你的身体能好受吗?那肯定不行啊!所以啊,咱可得小心这个四氯化碳。
那怎么小心呢?首先咱得尽量避免接触它呀!像一些化工厂啊之类的地方,可得注意防护。
其次呢,要保持健康的生活方式,让肝脏这个“工人”能好好工作,别给它添乱。
总之,四氯化碳诱导肝纤维化可不是小事,咱可得重视起来。
咱可不能让这个捣蛋鬼在咱的身体里撒野,得保护好我们的肝脏,让它健健康康的,这样我们才能快快乐乐地生活呀,对吧?别不当回事,到时候后悔可就来不及啦!。
3种小鼠肝纤维化模型的建立及评价

3种小鼠肝纤维化模型的建立及评价鲁智文;潘晓莉;宋宇虎【摘要】目的建立胆总管结扎(BDL)、硫代乙酰胺(TAA)及二乙基亚硝胺(DEN)联合四氯化碳(CCl4)3种不同机制的小鼠肝纤维化模型.方法 C57/BL6雄性小鼠40只随机分为2组:BDL组、TAA组各20只,另1只雄鼠与3只雌鼠繁殖的小鼠作为DEN+CCl4组.肝组织作HE染色及天狼猩红染色观察形态学改变及胶原沉积情况.结果 BDL模型组第4周时假小叶形成,死亡率为66.7%;TAA模型组随着造模时间的增加,小鼠第3周开始出现纤维组织增生,在第4周假小叶基本形成,第8周时假小叶最为典型,死亡率为20.0%;DEN+ CCl4组第10周时假小叶基本形成,第12周时最为典型,无小鼠死亡.结论可成功建立BDL、TAA和DEN+ CCl4三种不同机制的小鼠肝纤维化模型.%Objective To establish liver fibrosis of three different mice models induced by bile duct ligation (BDL),Thioacetamide (TAA) and N-Nitrosodiethylamine (DEN) + Tetrachloride (CCl4).Methods FortyC57/BL6 male mice were divided into 2 groups randomly:BDL group and TAA group had 20 mice respectively.The other mice bred by one male and three female mice were used in the DEN combined CCl4 group.The morphological changes and collagen deposition of the liver tissue were observed by HE staining and Sirius red staining.Results The BDL modelgroup formed basical pseudolobule at the 4th week.The mortality rate was 66.7%.In the TAA model group,with the increasing of modeling time,mice began to appear hyperplasia of fibrous tissue at the 3rd week.At the 4th week,the pseudolobule was formed basically,and the most typical pseudolobule appeared at the 8th week.The mortality rate was 20.0%.Inthe DEN + CCl4 group,pseudolobule was basically formed at the 10th week and became more typical at the 12th week.No mice died.Conclusion The mice liver fibrosis model of three different methods induced byBDL,TAA and DEN + CCl4 can be established successfully.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2018(027)004【总页数】3页(P390-392)【关键词】肝纤维化;小鼠;动物模型【作者】鲁智文;潘晓莉;宋宇虎【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科,湖北武汉430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科,湖北武汉430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科,湖北武汉430022【正文语种】中文【中图分类】R575肝纤维化是多种慢性肝病发展的共同病理基础[1],绝大多数的肝硬化和肝癌患者由肝纤维化发展而来[2],肝纤维化属于可逆性病变,因此,建立一种合适的肝纤维化动物模型对于研究肝纤维化的发生发展、防治肝硬化和肝癌具有重要意义[3]。
四氯化碳诱导ICR小鼠和C57小鼠的肝纤维化模型比较

ThecomparisonofliverfibrosismodelinducedbycarbontetrachloridewithinICRandC57mice
ZHONGXia1,WANGLi1,WANGHong-lian1,etal(1ResearchCenterofIntegratedChineseandWesternMedicine,AffiliatedTra ditionalMedicineHospitalofSouthwestMedicalUniversity,Luzhou646000,China;2 SouthwestMedicalUniversity,Luzhou 646000,China)
[12] 范光碧,陈鸿羽,刘 玉,等 电针刺激联合骨髓间充 质干细胞移植治疗对脑出血大鼠出血灶周边区基质金属蛋白 酶 9及血清白细胞介素 2表达的影响[J]中华脑科疾病与康 复杂志(电子版),2013,3(5):36 [13] ReichardtEJH LFNeurotrophins:RolesinNeuronal DevelopmentandFunction[J]AnnualReviewofNeuroscience, 2001,24(1):677 [14] YangD,HanY,ZhangJ,etalStatinsEnhanceExpres sionofGrowthFactorsandActivatethePI3K/Akt-mediatedSig nalingPathwayafterExperimentalIntracerebralHemorrhage[J] WorldJNeurosci,2012,2(2):74 [15] 刘建新,王晓峰,张荣军,等 经枕大池移植神经干细 胞治疗重型颅脑 损 伤 大 鼠 的 实 验 研 究 [J]临 床 神 经 外 科 杂 志,2012,9(3):133
不同浓度CCl4对小鼠肝纤维化模型建立及IL-6和TGF-β1表达的影响

[ 关键 词] 四氯化碳 ;小 鼠; 模 型 ,肝纤维化 [ 中图分类号]R 6 5 7 . 3 [ 文献标识码]A [ 文章编号]l 0 0 7 — 1 9 5 4 ( 2 0 1 4 ) . 0 0 4 8 — 0 4
Ef f e c t o f di fe r e n t c o n c e n t r a t i on o f CC I 4 o n t h e e s t ab l i s h me n t o f he p a t i c ibr f o s i s mo de l a n d t he
mo d e l g r o u p w e r e g i v e n 1 5 %, 3 0 %o r 4 5 %c a r b o n t e t r a c h l o r i d e( C C1 d ) v i a i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n f o r 1 2 we e k s ,
Ch i T o e x p l o r e a r e l i a b l e me t h o d o f e s t a b l i s h me n t o f h e p a t i c f i b r o s i s mo d e l i n mi c e
[ 摘 要] 目的 探索一种稳定可靠的建立小鼠肝纤维化模型的方法。方法 4 6 只6 ~ 8 周龄雄性C 5 7 B L /
6小 鼠 随机 分 为模 型 组 和 对 照 组 ,模 型 组 分别 给 予 浓度 为 1 5 % 、3 0 % 和4 5 % 的 四 氯 化碳 ( C C 1 . ) 腹 腔 注 射 ,每
t wi c e p e r we e k ; mi c e i n c o n t r o l g r o u p we r e g i v e n t h e s a me d o s e o f o l i v e o i l . Mi c e we r e s a c r i f i c e d 3 d a Re r t h e
(精选)常用疾病动物模型

常用疾病动物模型上海丰核可以为广大客户提供各种疾病动物模型定制服务,同时提供相关疾病模型的药物敏感性实验分析服务。
客户只需要提供疾病模型的用途及建模方法的选择,我们会根据客户的具体要求量身定做各种动物模型服务。
4.其他皮下肿瘤小鼠小鼠或裸鼠同上,可采用人源肿瘤细胞,更加贴近实际12天(八)心血管疾病模型1. 动脉粥样硬化(高脂高胆固醇+维生素D喂养)兔高脂、高胆固醇饲喂兔造模,成膜后血脂变化显著,为伴高血脂症的动脉粥样硬化4月血管组织病理切片染色2. 主动脉粥样硬化(高脂高胆固醇+主动脉球囊损伤)兔此模型用大球囊损伤加高脂饲养方法成功建立兔主动脉粥样硬化狭窄的动物模型,为相关基础研究提供可靠模型。
2月动物实验模型病理切片展示一、CCl4诱导的肝脏纤维化简介:肝纤维化是肝细胞坏死或损伤后常见的反应,是诸多慢性肝脏疾病发展至肝硬化过程中的一个中间环节。
肝纤维化的形成与坏死或炎症细胞释放的多种细胞因子或脂质过氧化产物密切相关。
CCl4为一种选择性肝毒性药物,其进入机体后在肝内活化成自由基,如三氯甲基自由基,后者可直接损伤质膜,启动脂质过氧化作用,破坏肝细胞的模型结构等,造成肝细胞变性坏死和肝纤维化的形成。
通过CCl4复制肝纤维化动物模型通常以小鼠或大鼠为对象,染毒途径主要为灌胃、腹腔注射或皮下注射。
动物模型图. 经过3个月的CCl4注射造模,小鼠的肝脏在中央静脉区形成了比较明显的肝纤维化,中央静脉之间形成了纤维桥接。
(Masson染色)二、CXCL14诱导的急性肝损伤动物模型简述:CCl4是最经典的药物性肝损伤造模毒素之一,其在肝内主要被微粒体细胞色素P450氧化酶代谢,产生三氯甲烷自由基和三氯甲基过氧自由基,从而破坏细胞膜结构和功能的完整性,引起肝细胞膜的通透性增加,可溶性酶的大量渗出,最终导致肝细胞死亡,并引发肝脏衰竭。
根据CCl4代谢和肝毒性机制可复制不同的肝损伤模型,其中给药剂量和给药方法是其技术关键。
虫草花多糖抑制CCl4诱导的小鼠肝纤维化的作用与机制

虫草花多糖抑制CCl4诱导的小鼠肝纤维化的作用与机制刘广庆;王丹丹;余茂耘;段亚君;杨潇潇【期刊名称】《合肥工业大学学报:自然科学版》【年(卷),期】2022(45)3【摘要】文章以虫草花为原料,通过水提醇沉法提取粗多糖,Sevag法除蛋白,得到纯度为95.61%的虫草花多糖。
以C57BL/6J小鼠为研究对象,构建CCl_(4)诱导的肝纤维化动物模型,给予虫草花多糖治疗。
记录实验过程中小鼠体质量变化,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,取肝组织进行苏木素伊红(H&E)染色、天狼星红染色,取肝组织裂解液进行蛋白免疫印迹(Western Blot)实验。
结果表明:与模型组相比,虫草花多糖组小鼠体质量显著升高,血清ALT、AST水平均显著下调,肝损伤程度减轻;蛋白水平方面,与模型组相比,虫草花多糖组小鼠肝脏肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、BAX表达水平显著下降,B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)表达水平显著上升。
结果表明虫草花多糖通过抑制炎症和抑制肝细胞凋亡途径发挥治疗肝纤维化的作用。
【总页数】7页(P411-416)【作者】刘广庆;王丹丹;余茂耘;段亚君;杨潇潇【作者单位】合肥工业大学食品与生物工程学院;安徽省教育厅重大疾病代谢及营养调控重点实验室;皖西学院生物与制药工程学院【正文语种】中文【中图分类】R966【相关文献】1.疟母丸抑制CCl4诱导小鼠肝纤维化进程的作用2.新城疫病毒对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的抑制作用研究3.桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠治疗作用及其机制研究4.金蝉花多糖对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的治疗作用及其机制研究5.桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
四氯化碳肝纤维化造模方法

四氯化碳肝纤维化造模方法
四氯化碳这个东西呢,在造模里可算是个“小能手”。
一般咱会把四氯化碳用橄榄油或者玉米油给稀释一下。
为啥要稀释呢?这就好比你喝药太苦得加点糖一样,直接用四氯化碳对小动物的身体刺激太大啦。
咱就说给小鼠造模吧。
通常是通过腹腔注射的方式把稀释好的四氯化碳打到小鼠的肚子里。
这就像是给小鼠的身体里悄悄放了个“小破坏分子”。
不过这个注射的剂量可得把握好呢,多了小鼠可能就受不了啦,少了又达不到造模的效果。
一般刚开始的时候,剂量可以相对小一点,然后随着时间推移,慢慢调整剂量。
注射的频率也很重要哦。
就像你每天吃饭得规律一样,给小鼠注射四氯化碳也得有个规律的频率。
比如说一周注射几次这样。
而且这个造模过程不是一天两天就能完成的,得持续一段时间呢。
在造模的过程中,咱还得时刻关注小鼠的状态。
小鼠可不会说话告诉我们它舒不舒服,所以就得靠我们细心观察啦。
看看小鼠的毛色有没有变得暗淡呀,活动是不是变得迟缓啦。
要是发现小鼠状态特别不好,可能就得调整一下造模的方案啦。
除了腹腔注射这种方式呢,还有通过灌胃的方式给小鼠喂四氯化碳的。
不过灌胃可有点技术含量,得小心别把小鼠弄伤咯。
在整个造模过程中,环境因素也不能忽视。
小鼠住的地方得干净、温度合适,这样才能让造模顺利进行下去。
要是小鼠住的地方又脏又冷,那它的身体状态肯定不好,造模也就容易出问题啦。
柔木丹改善小鼠肝纤维化的TGF-β1/Smad4信号通路机制

柔木丹改善小鼠肝纤维化的TGF β1/Smad4信号通路机制 李 倩1,闫曙光2,惠 毅2,李京涛3,魏海梁3,张 红1,2△(1.陕西中医药大学医学科研实验中心,咸阳712046;2.陕西中医药大学基础医学院,咸阳712046;3.陕西中医药大学附属医院,咸阳712000)【摘要】 目的:探讨柔木丹(RMD)对改善CCl4诱导的小鼠肝纤维化的TGF β1/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白家族4号因子(Smad4)信号通路机制。
方法:雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、RMD治疗组(n=11)。
腹腔注射CCl4诱导小鼠肝纤维化模型,模型及RMD治疗组小鼠腹腔注射20%CCl4(CCl4∶橄榄油=1∶4),注射量为2.5ml/kg,空白对照组以同样方法注射等量橄榄油,每周2次;第2周起调整模型及RMD治疗组小鼠CCl4腹腔注射量为5ml/kg(空白对照组注射等量橄榄油),每周2次。
成模后,RMD治疗组小鼠使用RMD灌胃给药(6.2g/(kg·d);空白对照组、模型组使用等量的水灌胃),模型及RMD治疗组小鼠继续腹腔注射20%CCl4,注射量为1.5ml/kg(空白对照组注射等量橄榄油),每周1次,持续3周。
采取各组小鼠血清样本检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性;采取各组小鼠肝组织样本使用HE、Masson、原位杂交、免疫组织化学染色、Westernblot、Q PCR等方法进行检测。
结果:与正常组相比,CCl4造模5周后,模型组小鼠肝脏纤维化病理特征明显。
与模型组相比,RMD治疗3周,治疗组小鼠肝组织病理学改变减轻,小鼠的肝脏指数(P<0.01)、血清中的ALT(P<0.01)、AST(P<0.01)活性、肝组织中羟脯氨酸的含量(P<0.05)均降低;Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,P<0.01)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ,P<0.01)表达减少,胶原沉积减少;肝组织中TGF β1(P<0.05)和α SMA(P<0.05)表达均降低;肝组织中Smad4阳性表达区域缩小、表达强度降低。
四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型的建立和优化_朱安妮

1.3 方法 1.3.1 CCl4橄榄油溶液的配置 用微量移液器分别 取50、100、150 μl CCl4加入50 ml橄榄油,混合均 匀,配置体积分数为0.1%、0.2%、0.3%的CCl4橄榄 油溶液,于通风橱操作,现用现配。 1.3.2 比较不同浓度CCl4对小鼠血浆转氨酶水平的影 响 将182只C57BL/6小鼠随机分出32只。将32只小 鼠随机分为正常对照组和浓度为0.1%、0.2%、0.3%的 CCl4实验组,每组各8只。采用不同浓度的CCl4橄榄油 溶液,对实验组小鼠进行单次腹腔注射(10 ml/kg), 正常对照组给予等体积的橄榄油作为对照。注射 后12小时取外周血,置于EDTA-Na2抗凝管颠倒混 匀,2000 r/min,离心20分钟,分离血浆,全自动 生化分析仪测定小鼠血浆中ALT、AST的水平。 1.3.3 观察0.1%和0.2% CCl4组小鼠不同时间点血浆 转氨酶水平的变化 将剩余的150只C57BL/6小鼠随 机分为正常对照组(10只)、实验Ⅰ组(70只)和 实验Ⅱ组(70只)。将实验Ⅰ组小鼠随机分为7个 亚组(各亚组每组10只),以0.1% CCl4橄榄油溶 液,按照10 ml/kg剂量对各亚组小鼠进行单次腹腔 注射,分别于注射后6、12、16、20、24、48、72 小时取血,检测小鼠血浆中ALT、AST的水平,方 法同1.3.2。实验Ⅱ组小鼠以0.2% CCl4橄榄油溶液腹 腔注射,亚组时间点的选取及操作同实验Ⅰ组。正 常对照组小鼠给予等体积的橄榄油溶液,单次腹腔 注射,取血操作同前。 1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对数据进行统 计分析,符合正态分布的计量资料以x- ± s表示,
急性肝损伤是指病毒感染、肝毒性药物、有 毒物质和肝缺血再灌注等因素[1]导致的急性肝脏功 能异常,是临床上多种急性肝病共同的病理基础, 严重或持续的损伤最终可导致肝硬化甚至肝功能衰 竭[2,3]。四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导 的肝损伤模型广泛用于肝坏死及肝硬化的病因学、 组织学和肝功能变化的研究以及对保肝药物、药用 植物提取物的评价[4,5]。目前国内多采用SD大鼠和 封闭群小鼠进行CCl4急性肝毒性实验,选取的染毒 途径、剂量、时间点等因素也多有不同。近交系 C57BL/6小鼠,因其有表现型的一致性、遗传的稳 定性以及此背景下试剂和抗体的广泛性等特点,可 以为今后进行免疫学相关的研究打下基础。本研究 通过给予C57BL/6小鼠单次腹腔注射CCl4造模并检 测血浆转氨酶水平,摸索最适造模剂量,为下一步 药理学、免疫学以及临床治疗等后续相关研究提供 可靠的参照依据。 1 材料与方法 1.1 实验动物 选择野生型C57BL/6小鼠182只,雄 性,6~8周龄,体重18~20 g,购于中国医学科学 院动物所,饲养于中国医学科学院0007)。 1.2 主要试剂和设备 CCl4(分析纯,成都市科龙化 工试剂厂,批号20120220);橄榄油(分析纯, 成都市科龙化工试剂厂,批号20130513);低温 多用途离心机(德国Thermo公司,型号Megafuge 1.0R);全自动生化分析仪(日本日立公司,型号 7600-020)。
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CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型
肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质(特别是胶原)过度沉积,不是一个独立的疾病,是许多慢性肝病共同的病理过程,几乎各种慢性肝病(化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性,以及胆汁淤积性)都可以导致肝纤维化。
CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。
在肝细胞内质网中,经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后,CCl4产生了自由CCl3·及Cl,它们与肝细胞内大分子发生共价结合,可攻击膜不饱和脂质,引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化,损伤肝细胞,从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化,释放出Ⅳ型胶原酶,降解Ⅳ型胶原。
同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌I 型胶原,取代了Ⅳ型胶原,促使肝脏纤维化
1.实验动物
SPF级BablC小鼠,健康,雄性,体重为18g-20g
2.实验分组
实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组,每组15只动物。
3.实验周期
6W
4.主要试剂
CCl4(上海国药集团)
5.建模方法
按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液(CCl4:橄榄油=1:4), 每3天1次,连续6W。
对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。
正常饮食饲养,观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。
完成持续给药6W后,称体重,戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠,摘眼球取血,室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清,放入-80℃冰箱冻存。
同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于10%中性福尔马林中固定,石蜡包埋;其余肝组织液氮冷冻-80℃保存。
6.模型评价
1.大体观察:CCl4组小鼠随着给药时间延长活动逐渐减少, 精神萎糜,毛发蓬乱无光泽;大体标本显示,CCl4组肝脏与周围组织粘连明显,肝边缘圆顿,肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节。
2.肝脏指数变化:取肝脏,称质量,计算肝脏指数=肝脏重/体重,CCl4组小鼠肝脏显著高于对照组小鼠。
3.肝功能指标:
检测小鼠血清中肝功能指标:丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBL)、白蛋白(ALB)。
结果发现CCl4组小鼠血清中ALT、AST、TBL的含量显著高于对照组,ALB的含量显著低于对照组。
4.肝脏病理变化
取肝左叶,体积分数为10%福尔马林固定,石蜡包埋切片,经HE及 Masson 染色后在电镜下观察肝脏炎症及肝纤维化程度。
按下述标准评判肝纤维化程度:肝炎病变依炎症活动度分为 4 级:“−”汇管区周围及肝小叶内无炎症;“+”肝细胞变性范围不超过肝小叶半径的1/2,汇管区有炎症,小叶内少数肝细胞变性或呈点状坏死;“++” 肝细胞变性范围超过肝小叶半径 1/2,汇管区大量炎症细胞浸润,较多肝细胞变性,呈碎片状坏死;“+++”肝细胞变性范围超过肝小叶半径的 2/3,汇管区周围重度碎屑坏死,肝细胞以碎片状和桥接状坏死为主。
肝纤维化按情况严重程度分为以下 4 级:“−”无肝纤维化现象;“+”汇管区胶原纤维增多,但无纤维间隔形成;“++”汇管区周围形成彼此不连接的不完全性纤维间隔;“+++”小叶结构紊乱,纤维间隔明显,分割肝实质。
5.细胞因子的变化:
肝脏损伤后,血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等细胞因子的表达显著升高,可以用ELISA 法检测
Oil CCl4
图1 肝脏大体图大体标本显示,Oil组肝脏正常,CCl4组肝边缘圆顿,质地硬,
肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节
表1 2组小鼠肝脏指数的比较(n=7 x ±s)
组别对照组模型组肝脏/体重比0.073±0.008 0.046±0.004*
注:与对照组相比,*P<0.05
武汉云克隆诊断试剂研究所。