大肠杆菌测试方法
鉴别大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的方法
鉴别大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的方法引言大肠杆菌（Escherichia coli）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是两种常见的细菌。
它们在形态、生理特征和生长条件上存在一些差异，因此可以通过一系列实验方法来鉴别它们。
本文将介绍鉴别大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的常用方法。
1. 形态特征鉴别大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在形态上存在一些差异，可以通过以下方法进行鉴别：•观察细胞形状：大肠杆菌呈长圆柱形或椭圆形，而枯草芽孢杆菌呈短圆柱形或长椭圆形。
•观察细胞大小：大肠杆菌通常较小，长度约为2-4微米，直径约为0.5-1微米；而枯草芽孢杆菌较大，长度约为3-5微米，直径约为0.8-1.5微米。
•观察胞外结构：大肠杆菌通常具有鞭毛，而枯草芽孢杆菌不具有鞭毛。
2. 生理特征鉴别大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在生理特征上也存在一些差异，可以通过以下方法进行鉴别：•发酵能力：大肠杆菌能够发酵乳糖和葡萄糖，产生酸和气泡，而枯草芽孢杆菌不能发酵乳糖和葡萄糖。
•氧需求：大肠杆菌为厌氧菌，可以在无氧条件下生长；而枯草芽孢杆菌为好氧菌，需要氧气才能生长。
•温度适应性：大肠杆菌通常在37摄氏度下生长最好，而枯草芽孢杆菌在30-40摄氏度范围内都能生长。
3. 生长条件鉴别大肠杆菌和枯草芽孢杆菌对于不同的生长条件也有一定的差异，可以通过以下方法进行鉴别：•培养基选择：大肠杆菌通常在富含葡萄糖和氨基酸的培养基上生长，例如LB培养基；而枯草芽孢杆菌通常在富含有机物和无机盐的培养基上生长，例如NA培养基。
•pH适应性：大肠杆菌对中性或弱碱性环境更适应，pH范围为6-8；而枯草芽孢杆菌对中性或弱酸性环境更适应，pH范围为5-7。
4. 鉴别实验方法为了更准确地鉴别大肠杆菌和枯草芽孢杆菌，可以通过以下实验方法进行进一步鉴别：4.1 青霉素抗性试验青霉素抗性是大肠杆菌的一个特征，可以通过以下步骤进行测试：1.取一块含有青霉素的抗生素纸片。
2.在含有大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的琼脂平板上分别接种一条直径约为3-5毫米的细菌线。
饮用水大肠杆菌测试
多管发酵法测大肠杆菌群一、实验目的1、学习测定水中大肠杆菌群数量的国标测试法（主要为多管发酵法）2、了解大肠杆菌群的数量在水中的重要性二、实验原理我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准具体规定如下：1、细菌总数1ml水中不超过100个。
2、大肠杆菌数1L水中不超过3个。
3、若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过10000个。
多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN 来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
三、适用范围：大肠菌群系指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
通常用此法作为粪便污染指标来评价食品以及饮用水的卫生质量。
四、检验程序：→→→→→→五、操作方法：5.1 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
5.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均（均液的PH值应在6.5～７.5之间，必要时分别用1mol/L 匀，做成1：100的稀释液。
氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL）调节。
纯净水大肠杆菌检测方法
纯净水大肠杆菌检测方法纯净水是一种用于饮用和工业用途的水，在生产和配送过程中，可能会暴露于各种潜在的微生物污染源，其中包括大肠杆菌。
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，它可以被用来作为环境卫生和水质卫生的指标微生物。
因此，检测纯净水中的大肠杆菌含量是必要的，以确保水质符合国家标准和消费者的安全需求。
纯净水大肠杆菌检测方法包括传统培养和分子生物学技术两种方法。
下面将详细介绍这两种方法的原理和应用。
1. 传统培养法传统培养法是一种基于培养大肠杆菌菌落的定量和质量检测方法。
该方法是最常用的水质检测方法之一，可以检测出细菌数量较低的水样品，并且相对简单易行，分析成本较低。
传统培养法的原理是将样品接种到肉汤或营养琼脂培养基中，然后在恰当的条件下孵育，使大肠杆菌繁殖形成典型的圆形、平坦、有光泽、直径约为2mm的蓝色或暗紫色菌落，最终通过计数菌落的数量来确定样品中大肠杆菌的含量。
该方法的优势在于其简单、直观、可重复，并且可以根据环境状况进行某些微生物特定测试。
但是，此测试方法需要培养菌落，所以需要较长时间，必须在8-24小时内进行读数，这可能会影响检测的准确性和效率，尤其是当仅检测少量样品时。
2. 分子生物学技术分子生物学技术是一种基于DNA分析的方法，可以检测到细胞和病毒等微生物的DNA序列。
作为一种新型的检测技术，分子生物学技术的优点在于其高灵敏度、快速性和精确性，它可以解决传统培养法缺点，提高检测灵敏度和准确性。
此外，分子生物学技术还有助于检测未能在传统培养法中检测到的微生物。
分子生物学技术主要包括聚合酶链式反应（PCR）、即时PCR、荧光定量PCR、基因芯片技术等，这些方法可以测量纯净水中微生物或微生物DNA的含量，从而确定大肠杆菌是存在于样品中，其数量的多寡、菌株的种类和亚型、具体DNA 分布等相关信息。
此外，为了提高检测的准确性，还可以使用核苷酸序列分析、基因测序等进一步验证检测结果。
总结在纯净水生产和配送前，进行大肠杆菌检测是必要的。
大肠杆菌的鉴定方法
大肠杆菌的鉴定方法大肠杆菌是常见的肠道细菌，广泛存在于自然环境中，包括土壤、水体和动植物体内。
它是引起人类肠道感染和食源性疾病的重要致病菌之一、准确鉴定大肠杆菌的方法对于食品安全和公共卫生至关重要。
下面将介绍常见的大肠杆菌鉴定方法。
1.外观和生理鉴定大肠杆菌形态特征为革兰阴性，为短杆状细菌，常产生单一或双子。
在艾柯培养基上，大肠杆菌形成典型的金黄色、大且圆形的菌落，使用其可以初步鉴定大肠杆菌。
大肠杆菌是革兰阴性细菌，可以通过革兰氏染色进行鉴定。
大肠杆菌的细胞壁含有脂多糖，染色后呈现红色。
2.纯培养和典型菌落的选择将样品接种于含有葡萄糖和肉汤的液体营养培养基中，经过16-24小时的培养后，利用墨汁培养基将菌液分带于增菌板表面，进行分离纯化。
然后选择培养在巴斯德固体琼脂培养基上呈金黄色，并有金属光泽的典型菌落。
3.酶活性测试大肠杆菌具有多种酶活性，常用的酶活性测试有氧化/发酵测试、甲基红松解试验和呈色反应等。
（1）氧化/发酵测试：大肠杆菌通常以无氧产酸为代谢途径进行葡萄糖发酵。
将菌液接种于以葡萄糖为唯一碳源的气泡管中，通过产酸后的颜色变化来鉴定大肠杆菌。
气泡管中产生黄色的酸性底部，说明转化为酸性，即为大肠杆菌。
（2）甲基红松解试验：大肠杆菌代谢糖酸，产生酸性代谢产物，导致菌落周围的甲基红转为黄色。
通过添加甲基红指示剂，观察溶解指示剂颜色的变化，由红色转为黄色可以初步鉴定大肠杆菌。
（3）呈色反应：大肠杆菌产生酶活性，能够将一些酶底物转化为有颜色的产物。
例如，大肠杆菌在聚糖中生成酶胆红素琼脂糖，呈现金黄色。
这种特征可以用于大肠杆菌的鉴定。
4.生化和生理特性鉴定（1）靛酚蓝糖蛋白胱氨酸琼脂糖（Ipv）试验：肠道杆菌能产生硫化氢，将外源底物半胱氨酸转化为硫化氢，使琼脂糖中的靛酚蓝变为铁蓝色，可以通过这个试验鉴定大肠杆菌。
（2）铁蛋白试验：大肠杆菌可以利用铁蛋白作为唯一的铁源进行生长，将铁蛋白分解为铁和胆红素，使培养基呈现深绿色，可通过这个试验鉴定大肠杆菌。
鉴别大肠杆菌的方法
鉴别大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌是正常肠道菌群的一部分，但有些菌株可以引起食物中毒和感染。
因此，准确鉴别大肠杆菌的方法对食品安全和公共卫生至关重要。
在鉴别大肠杆菌时，通常需要从样品中分离出细菌，并进行初步的鉴定。
下面是一些常用的鉴别大肠杆菌的方法：1. 培养基选择：大肠杆菌可以在普通富营养的培养基上生长，如营养琼脂和TSA 寒天琼脂。
与其他致病菌不同的是，大肠杆菌具有乳糖发酵能力，因此可以使用含有乳糖的培养基如EOH（大肠杆菌溶血素乳糖琼脂）、MacConkey琼脂和XLD （硫代硫酸亚铁氧化琼脂）来选择性培养大肠杆菌。
2. 形态学特征：在琼脂平板上培养后，大肠杆菌形成小型、粉红色的圆形菌落。
在显微镜下观察，大肠杆菌呈革兰阴性，为杆状细菌，长度约为2微米，直径约为1微米。
此外，大肠杆菌具有移动性，在液体培养基中呈现出活跃的运动。
3. 生化特性：通过测试大肠杆菌的生化特性，可以进一步鉴别该菌株。
常见的生化试验包括蔗糖发酵试验、气体发酵试验、硫化试验和尿素酶试验等。
大肠杆菌通常可以产生气体和酸，而不产生硫化物，同时具有尿素酶活性。
4. 分子生物学方法：PCR（聚合酶链式反应）和基因测序技术能够快速、准确地鉴定大肠杆菌。
通过特定引物放大大肠杆菌特有的基因片段，再进行测序比对，可以确定分离菌株是否为大肠杆菌。
5. 抗生素敏感性测试：鉴别大肠杆菌的方法还可以包括抗生素敏感性测试。
通过对细菌进行抗生素敏感性的测试，可以确定菌株对不同抗生素的敏感程度。
大肠杆菌通常对多种抗生素敏感，但也能产生耐药株。
通过该方法，可以观察和评估细菌感染的治疗方法。
综上所述，鉴别大肠杆菌的方法包括培养基选择、形态学特征观察、生化特性测试、分子生物学方法以及抗生素敏感性测试。
这些方法可以相互配合，提供准确和可靠的鉴别结果，对于食品安全和公共卫生具有重要意义。
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌(Escherichia coli)是一种革兰氏阴性的厌氧菌，常常被用作指示性微生物来评估食品和水源的卫生质量。
以下是常见的大肠杆菌检验方法：
1. 培养基方法：将样品接种在包含大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上，如大肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)和EC培养基等。
大肠杆菌能够利用琼脂中的乳糖发酵产生酸，导致培养基呈现红色或粉红色。
此外，EC 培养基还包含了可以检测大肠杆菌β-葡萄糖苷酶的亚甲基红试剂，如果大肠杆菌存在，则培养基呈现金属光泽。
2. 确认方法：对落有培养基上的鲜艳深色菌落进行进一步确认。
典型的确认方法包括革兰染色、目测观察形态特征、氧化发酵试验和测试产气杆菌酶试验。
3. PCR检测方法：利用聚合酶链反应(PCR)技术，从样品中扩增大肠杆菌特异性基因片段（如16S rRNA基因），然后通过凝胶电泳检测扩增产物。
4. 快速方法：如免疫层析试纸法和光学组织测定法。
免疫层析试纸法利用抗大肠杆菌抗体与大肠杆菌特异性抗原结合生成可视化结果。
光学组织测定法利用大肠杆菌的β-葡萄糖苷酶水解比色底物产生颜色变化。
这些方法都可用于检测大肠杆菌在食品和水源中的存在及其数量。
在进行检验时，应严格遵守相关的操作规程和实验室操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。
大肠杆菌的检测方法
大肠杆菌的检测方法大肠杆菌（Escherichia coli，简称E. coli）是一种常见的细菌，它存在于人和动物的肠道中，同时也是一种重要的指示性微生物，可以用来评估环境和水源的卫生状况。
对大肠杆菌的检测具有重要的意义，可以帮助预防细菌感染和传播，保障公共卫生安全。
现在，我将详细介绍大肠杆菌的检测方法。
大肠杆菌的检测方法主要分为传统培养法和分子生物学方法两大类。
传统培养法是最常用的大肠杆菌检测方法之一。
其基本原理是将样品在含有大肠杆菌生长所需的培养基上孵育，然后观察培养基上是否有典型的大肠杆菌形态和生长特征。
具体步骤如下：1. 准备样品：样品可以是水、食品、环境表面等。
2. 分装样品：将样品分装到培养基培养皿或试管中。
3. 孵育培养：将分装好的样品在适当的温度和时间条件下进行培养，通常是在37摄氏度下孵育24小时，有时也需要采用其他不同的条件。
4. 观察结果：在培养基上观察是否有大肠杆菌形态和生长特征的典型菌落，如红色菌落、金属光泽等。
5. 进一步确认：对观察到的典型菌落进行进一步的生化和生理测试，如大肠杆菌产气试验、甲烷气生成试验等，以确认是否为大肠杆菌。
传统培养法有着较长的检测时间和较低的检测灵敏度，但由于其成本较低且操作简单，仍然是大肠杆菌检测的常用方法。
另一种常用的大肠杆菌检测方法是分子生物学方法。
相对于传统培养法，分子生物学方法具有更高的检测灵敏度和特异性，且检测速度更快。
以下是一些常用的分子生物学方法：1. PCR扩增法：该方法利用特异性引物和酶的作用，通过对大肠杆菌特定基因（如16S rRNA基因）进行扩增，可以检测到极少量的大肠杆菌DNA。
2. 实时荧光PCR法：该方法是PCR扩增法的改进，可以同时进行扩增和检测，通过实时监测荧光信号的产生来判断样品中是否存在大肠杆菌。
3. 基因芯片技术：这种技术利用微阵列芯片，含有大肠杆菌的特异性探针，可同时检测多个基因和多个大肠杆菌菌株。
大肠杆菌检测
检测原理
基因芯片技术(gene chip)是20世纪90年代兴起的生 物技术，也叫DNA微阵列(DNA mi—croarray)。采用原 位合成(insitu synthesis)或显微打印方法，将数以万计 的DNA探针固化在支持物表面，产生二维DNA探针阵列， 接着与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现 对生物样品快速、并行、高效地检测，由于它常用硅芯 片作为固相支持物，而且制备中运用了计算机芯片的制 备技术，所以称为基因芯片技术。基因芯片可以对食品 Your text 中的致病菌实行高通量和平行检测，一次实验就可以得 Your text 出全部检测结果。另外整个检测在很短时间内即可得出 Your text 检测结果，且敏感性高，特异性强。 Your text
Your text Your text Your text
检测原理
气相色谱法主要是将大肠杆菌经过一系列衍生化的前 处理后，为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。 大肠杆菌的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析，其原 理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物 CO2对微生 物进行分析。这种方法对食品质量安全检测有重大意义。 与上述传统技术相比，此种方法具有检测速度快、灵敏度 高的优点。高效液相色谱法（HPLC）主要是根据离子配 对反相层析的原理来分析核酸。HPLC主要是针对DNA片 Your text 段分离。长链DNA所携带的磷酸基团比较多，因此会有更 Your text 多的TEAA与之相融合，其在柱内停留的时间增加。
传统检测方法
多管发酵法
滤膜法 平板计数法
气相色谱与液相色谱法
基因芯片技术 自动化仪器
检测新技术
大肠杆菌的生化反应鉴定
大肠杆菌的生化反应鉴定大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，对人类和动物的肠道具有重要的生理功能。
在实验室中，通过对大肠杆菌的生化反应进行鉴定，可以帮助我们了解其特定的生理特征和代谢途径。
下面将按照步骤逐步介绍大肠杆菌的生化反应鉴定方法。
第一步：培养大肠杆菌首先，需要从一个纯培养的大肠杆菌菌落开始。
这可以通过在含有适宜营养物质的琼脂平板上接种一小部分细菌样本，并在37°C的恒温箱中培养过夜。
第二步：氧需求测试大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，对氧的需求具有一定的特征。
将大肠杆菌接种到含有牛肉膏和葡萄糖的气体管中，观察细菌生长的情况。
如果细菌在管内生长，并形成红色沉淀物，则说明大肠杆菌是一种兼性厌氧菌；如果细菌只在管的液体上层生长，则说明大肠杆菌是一种兼性好氧菌。
第三步：产气反应测试大肠杆菌是一种发酵菌，通过产生气体来转化底物。
将大肠杆菌接种到含有果糖、葡萄糖、乳糖等碳源的培养基中，观察培养液中是否有气泡产生。
如果有气泡产生，则说明大肠杆菌具有相应的发酵酶。
第四步：酸碱反应测试大肠杆菌的代谢产物可以使培养基的pH值发生变化。
将大肠杆菌接种到含有葡萄糖、乳糖等碳源的菌落鉴定培养基上，观察培养基颜色变化。
如果培养基变为黄色，则说明大肠杆菌产生酸性代谢产物；如果培养基变为红色或粉红色，则说明大肠杆菌产生碱性代谢产物。
第五步：氧化反应测试大肠杆菌可以通过氧化代谢来利用一些特定的底物。
将大肠杆菌接种到含有柠檬酸盐、酒石酸等底物的特定培养基上，观察培养液的颜色变化。
如果培养液变为蓝色，则说明大肠杆菌产生了相应的酶。
通过以上步骤的生化反应鉴定，我们可以初步确定大肠杆菌的一些特征，如氧需求、产气能力、酸碱代谢和氧化代谢等。
这些特征对于帮助我们了解大肠杆菌的生理功能和代谢途径非常重要。
当然，这些方法只是初步的鉴定方法，还可以进一步通过分子生物学技术和其他生化试验来确认大肠杆菌的特征和身份。
大肠杆菌检测步骤
餐饮具用大肠菌群测试片
采样:
（1）随机抽取消毒后准备使用的各类食具（碗、盘、杯等），取样量可根据大、中、小不同饮食行业每次采样6件～10件，每件贴纸片两张，每张纸片面积25cm²
（5cmX5cm）。
（2）用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后，立即贴于食具内侧表面，30s后取下，置于无菌塑料袋内.
（3）筷子以5只为一件样品，用灭菌1mL吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm）抹试纸片，每件样品抹拭两张，放入无菌塑料袋内。
培养：
将已采样的纸片置于37℃恒温培养箱中培养16h～18h，取出观察结果。
结果判断：
若纸片保持紫蓝色不变，或有红色斑点但斑点周围无黄晕者为大肠菌群阴性；在红色斑点周围有黄晕，或纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。
国家标准规定：在50cm的纸片上（即两片纸片上），大肠菌群不得检出。
简述食品中大肠杆菌的快速检测方法相关研究进展
科技文苑Sep 2020 CHINA FOOD SAFETY67大肠杆菌是两端钝圆、无芽孢且能运动的革兰氏阴性短杆菌，其寄生部位主要是生物的大肠内，约占肠道菌的1%。
大肠杆菌可合成维生素B、K，正常栖居条件下无致病的可能性。
但是，食物在生产加工过程中被粪便中的大肠杆菌直接或间接污染，人们食用被污染的食品后就会影响身体健康，严重时还会致死。
因此，为保障国人身体健康，有必要对食品中大肠杆菌的快速检测方法展开研究。
1 食品中大肠杆菌传统检测方法1.1 多管发酵法该方法是以大肠菌群可发酵乳糖产酸产气的特征为依据来检测大肠菌群——大肠菌群阳性管在44.5℃培养基内持续培养24h 后会产生荧光产物，培养基在紫外光源照射下会有荧光出现。
具体方法步骤为：将一定量水样加入土壤蛋白胨培养液内，随后分步骤展开初发酵实验、平半分利、复发酵试验鉴定；然后参照最可能数（MPN）表，结合各稀释度发酵管数，对每升或每10mL 水样内的大肠菌群数进行收集。
多管发酵法无需耗费太多成本，且实验要求相对简单；不足之处在于其他因素极易对其构成影响，检测结果缺乏准确性。
1.2 平板计数法该方法首先需要稀释食品样本，即将其中的微生物分散为单个细胞组织，减少一定量的稀释液，以便通过肉眼观察，并计算稀释液浓度与样本数量来得到菌落数量。
菌落通常为紫红色，经培养后会有气泡产生，表示大肠杆菌阳性。
平板计数法不但能将大肠杆菌数量计算出来，还可对其特征进行观察，操作相对简单。
但是，该检测方法会使样本中的大肠杆菌肉眼辨识度偏低，需借助放大镜进行。
1.3 测试片法该方法是在国外纸片检测技术的运用下对大肠杆菌进行检测，国内外学者围绕测试片进行了深入研究。
蔡军[1]对平皿计数法与测试片法进行了对比试验，结果发现测试片法特异性较强，且检出限度较低，诊断效率接近于平板计数法。
文霞等[2]采用3M Petrifilm TM大肠菌群测试片法对大肠菌群进行了检测，发现3M Petrifilm TM 大肠菌群测试片法在计数方面与传统平皿计数结果相比无差异。
食品冷链品控专业《86. 大肠杆菌 stec的检测方法(大肠杆菌 stec测试片使用说明)》
大肠杆菌s tec的检测方法〔大肠杆菌stec测试片使用说明〕1方法原理及适用范围大肠杆菌STEC，是肠出血性大肠杆菌的一种，能产生志贺毒素的非O157：H7大肠杆菌，包括了在日本出现的O111以及2021年在德国及欧洲其他国家出现的O104。
这类大肠杆菌感染后，可引起自限性腹泻、出血性结肠炎和溶血性尿毒综合症〔HUS〕。
一般寄生在牛、羊等家畜和其他反刍动物体内，人类主要是通过未经烹调或烹调不彻底的肉类和奶制品等被感染。
另外有60种STEC血清型在世界各地的腹泻疾病中被发现，一些非O157的血清型已证明与在美国欧洲及亚洲发生的食源性疾病有关。
因此，世界各地的监管部门呼吁食品行业，对这些微生物加以重视并采取监管措施。
大肠杆菌STEC测试片采用进口高选择性培养基作为主要原料，参加特异性酶显色剂，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h 就可确认，大大地简化了检测程序，非常适合各级检验部门和食品企业使用。
2 操作方法样品处理：取样品25mL〔g〕放入含有225mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。
接种：将大肠杆菌STEC测试片〔BS211〕置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置5min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下，每个样品接种两片。
培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
培养温度为37℃±1℃，培养15～24h。
3 结果判读对测试片进行观察，呈紫红色的菌落为大肠杆菌STEC；呈蓝色的菌落为其他大肠菌群。
出现阳性菌落的样本，最好用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的话至少再取样重复检验一次。
4附加说明注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物平安废弃物处理原那么进行处理。
大肠杆菌测试片检定规程
大肠杆菌测试片成品检验规程一、用途大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌，食物或水中大肠杆菌的检出即意味着直接或间接被粪便污染。
大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品，与传统检测方法相比省去了乳糖发酵、氧化酶试验、三糖铁琼脂（TSI）、靛基质试验、尿素酶试验等鉴定过程，大大缩短了检测周期。
本产品适用于食品、饮用水及原料中大肠杆菌的计数，也可用于食品设备加工设备表面的卫生检查。
执行标准：食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数PetrifilmTM测试片法（GB/T 4789.38二、基本要求设施与生产质量管理按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。
三、成品检定成品按下述技术指标进行检定。
【物理性状】组成规格盛装材料物理性状上层70×90cm 米色粉末淡黄色薄膜下层65×85cm 淡黄色培养基圆形淡黄色薄膜底板【相关参数要求】[准确度]大肠杆菌测试片对样本检测的准确度为：80%~100%[假阳性率]本测试片通过对判定为大肠杆菌阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定，假阳性率应小于20%。
[误差率]随机抽取20片测试片进行同一样本平行检测，进行P值检验，比较P值与α值的大小，从而判断本测试片检测样本的均一性。
[稳定性及老化]取半成品30片分别进行4℃和37℃保存12天的数据比对,12天两组保存数据菌落数符合率大于90%（一）样品：食品大类食品品种典型代表样品序号1 饮料桶（瓶）装饮用水娃哈哈碳酸饮料可口可乐2 乳制品乳粉伊利女士营养奶粉液体乳旺仔牛奶、三花酸奶、伊利纯牛奶 3肉制品生肉 鸡肉、猪肉、里脊、鸭肉（选其一） 熟肉熟肉干制品、熏烧烤肉制品（选熟肉即可）4 速冻食品 速冻面米食品 饺子、汤圆 5蔬菜制品 蔬菜生菜蔬菜干制品挑选一种有代表性的注：每大类不少于2中样本，样本可随季节和客户需求进行更换2.国标方法所用试剂：VRBA -MUG 培养基、蛋白胨水、缓冲葡萄糖蛋白胨水、西柠檬酸盐培养基、无菌生理盐水、甲基红试剂、V-P 试剂、Kovacs 靛基质试剂、1M HCL 和 NaOH 等。
大肠杆菌生化实验报告
大肠杆菌生化实验报告大肠杆菌生化实验报告引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人类和动物的消化系统中。
由于其简单的生长条件和高度适应性，大肠杆菌成为了许多生化实验的理想模型。
本报告旨在介绍大肠杆菌在生化实验中的应用和结果。
实验一：酶活性测定酶活性是衡量细胞代谢活跃程度的重要指标之一。
在本实验中，我们选择了大肠杆菌中的一种酶，β-半乳糖苷酶（LacZ），来进行酶活性测定。
实验步骤：1. 培养大肠杆菌细胞。
2. 采集细胞样品，并进行离心。
3. 悬浮细胞样品，并加入底物。
4. 反应一段时间后，停止反应，并测定底物的降解程度。
结果与讨论：通过测定底物的降解程度，我们可以得到β-半乳糖苷酶的酶活性。
实验结果显示，在不同培养条件下，大肠杆菌中的β-半乳糖苷酶酶活性存在差异。
这表明培养条件对细菌酶活性有一定的影响。
进一步的研究可以探究这些影响因素，并优化培养条件，提高酶活性。
实验二：代谢产物分析大肠杆菌是一种典型的乳酸菌，其代谢途径复杂多样。
在本实验中，我们选择了大肠杆菌中的乳酸代谢途径作为研究对象，通过代谢产物分析来了解细菌的代谢特征。
实验步骤：1. 培养大肠杆菌细胞。
2. 采集细胞样品，并进行离心。
3. 提取细胞内代谢产物。
4. 使用色谱或质谱等技术，对代谢产物进行分析。
结果与讨论：通过代谢产物分析，我们可以了解大肠杆菌在不同培养条件下的代谢特征。
实验结果显示，大肠杆菌在不同培养基中产生的代谢产物有所差异。
这表明培养基成分对细菌代谢途径的选择有一定的影响。
进一步的研究可以探究这些影响因素，并优化培养基配方，调控代谢途径，提高产物产量。
实验三：抗生素敏感性测试抗生素敏感性测试是评估细菌对抗生素的耐药性的重要方法之一。
在本实验中，我们选择了几种常用的抗生素，对大肠杆菌进行敏感性测试。
实验步骤：1. 培养大肠杆菌细胞。
2. 制备不同浓度的抗生素溶液。
3. 在琼脂平板上涂布细菌样品。
大肠杆菌的检测(MPN计数法)
食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测（MPN计数法）院系：食品科学与药学学院班级：食科114姓名: 张花学号: 114031431组长: 张军玲成员：张花赵晶郁朱娟娟大肠杆菌Petrifilm测试片计数法摘要食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段,而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一.根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。
Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。
该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。
关键词大肠杆菌Petrifilm测试法1设备和材料1。
1恒温培养箱:36±1℃。
1.2冰箱2～5℃。
1.3恒温水浴箱 :44。
5±0。
2℃。
1.4天平:感量0。
1g.1.5均质器1.6振荡器。
1.7无菌吸管：lmL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0。
1mL刻度）或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶：容量500mL。
1。
9 玻璃珠:直径约5mm。
1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸1。
11试管架.2. 培养基和试剂2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。
2.2EC肉汤.2。
3蛋白胨水.2。
4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP—VP实验用）。
2。
5磷酸盐缓冲液。
2。
6无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
2。
71mol/L氢氧化钠（NaOH ）：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。
2.81mol/L 盐酸（HCI ）：移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml。
3检验程序4.样品稀释4。
1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
大肠杆菌的测定方法
大肠杆菌的测定方法
致病性大肠杆菌是病原体，它的筛选、鉴定以及测定是病原微生物的重要步骤。
本文将介绍大肠杆菌测定的一般方法，其中包括细菌的培养、鉴定与测定流程。
一、细菌培养
大肠杆菌的培养，首先要选择利于细菌生长的培养基，培养基需要含有必须的养分和活性，具有适宜的pH值，用于维持细菌的生长。
常用的培养基包括牛油硫磺琼脂（MacConkey）、牛油硫磺琼脂（SS agar）、牛油硫磺琼脂棕榈酸（MSA）、牛油硫磺琼脂乳酸（MSL）以及甲氧苄啶琼脂（MMB）等。
培养的大肠杆菌会产生具有细胞膜抗原特性的抗原。
细胞膜抗原可以形成抗原抗体复合物，从而产生免疫反应。
将样本装置在具有合理浓度的抗原抗体复合液中，将有助于调节抗体与抗原的反应，使抗体与抗原之间形成稳定的结合，增强抗体的特异性，同时也可以提高测定的准确性，提高测试的灵敏度。
二、细菌鉴定
通过培养可以初步判断大肠杆菌的类型，但要确定其种类，可以采用血凝试验（血清凝集），该试验可用于识别各种凝集素。
另外，培养过程中产生的生化特性也可以帮助在识别大肠杆菌中发挥作用。
大肠杆菌的检测及原理
大肠杆菌的检测及原理大肠杆菌是一种常见的肠道菌群中的细菌，通常是无害的，但某些毒株可以引起食物中毒和其他健康问题。
因此，检测大肠杆菌在食品和水源中的存在非常重要，以确保公众的健康和安全。
大肠杆菌检测通常通过检测这种细菌的DNA或蛋白质来完成。
这些检测方法可以分为质量检测和定量检测两种方法。
1. 质量检测质量检测是检测大肠杆菌是否存在的一种简单方法。
常用的方法有：(1) 培养法培养法是一种直接检测大肠杆菌存在的方法。
在这个方法中，食品或水样本直接加入含有特定营养成分和染色剂的富营养基质中进行培养。
如果存在大肠杆菌，则可以观察到菌落，并且这些菌落通常呈现出淡粉红色或金属绿色。
(2) 葡萄糖发酵试验这是一种利用大肠杆菌对糖的发酵反应来检测其存在的方法。
在这种测试中，食品或水样本被添加到含有葡萄糖和试剂的培养基中，并在一段时间后观察产生的气体或酸度的变化。
大肠杆菌通常能够迅速发酵葡萄糖，所以如果存在大肠杆菌，则会导致培养基的酸度降低和气泡的产生。
(3) 快速测试条这是一种利用特殊的测试条来检测大肠杆菌存在的方法。
在这种测试中，食品或水样本被加入到测试条上，并观察测试条变色。
这种测试条通常采用专有的化学反应，可以针对大肠杆菌的生长特性进行设计。
(1)酶联免疫吸附测定法(ELISA)ELISA是一种高灵敏度、高特异性的定量检测方法。
这种方法是利用特异性抗体与大肠杆菌中的特定蛋白质结合，再结合酶进行检测，检测结果会显示大肠杆菌的数量。
(2)PCR检测法PCR检测法是一种用来扩增DNA段的方法，可以检测大肠杆菌的存在。
PCR检测法利用针对大肠杆菌特定的DNA序列的反应，通过扩增这些特定的DNA段，来检测大肠杆菌在食品和水源样本中的存在。
总的来说，检测大肠杆菌的存在非常重要，因为它可以导致许多健康问题。
以上列举的方法都有自己的优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法进行检测。
大肠杆菌O157
介质温度时间
蒸汽93℃5分钟
水76.6℃5—20分钟
干热82℃20分钟
热水通常用作清洁剂，尤其在食品服务操作中，象洗碗机、大型操作用大型多层箱输送清洗机器。输送带把盘子通过清洗、漂洗、消毒箱，在清洗步骤中用热水。适宜的清洗意味着被消毒的器具温度至少要加热到71℃，在器具中建立的加热一部分要通过65.5℃左右的清洗和漂洗喷雾。
通常，进入消毒喷雾机的水必须至少82℃，固定的架子除外，单个温度机械上最低清洗温度为74℃，使器具的温度升到65.5℃或更高。
另一个重要因素是喷雾的压力，太大的压力，使水滴雾化而导致其到达器具之前冷却太快。另一方面太小的压力可能导致形不成喷雾，通常每平方英尺15-25磅的压力工作最好。
清洁频率
对不同类型的设备清洁频率是不同的。例如，切板必须每四小时被清洗消毒，在细菌能繁殖到危险水平之前必须去除它们。切板也需在不同用途时被清洁以避免交叉污染。例如，如果切板首先用于生的产品，那么在它们用在蒸煮的即食产品时，必须被清洗和消毒，为防止交叉污染，锅、盘和其他处理食品的设备，其含有生的产品或含有蒸煮的产品，在再次使用它们之前，必须清洗和消毒。
在检测过程中，也可以在选择性增菌后，取出5mL增菌液，经100℃水浴15分钟灭活后，供自动酶联荧光免疫测试（VIDAS），迅速获得初步结果，阳性反应者需作进一步证实。
附:自动酶联荧光免疫测试（mini-VIDAS）
自动酶联荧光免疫测试（VIDAS）测定程序
EHEC O157:H7检验程序图解
检样25g
美国FDA已批准对猪肉、牛肉、禽肉、羊肉、香料、调味品进行辐照，也可以用于水果、蔬菜和谷物。有关食品辐照的要求在21CFR PART179可以查到。
每种技术都有自已的术语，辐照也不例外。KILOGRAY是个用于食品加工业中描述辐照量值的术语。
大肠杆菌的检测方法国标
大肠杆菌的检测方法国标
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，可用于评价食品和水的卫生质量。
因此，大肠杆菌的检测方法在食品、水处理等领域被广泛采用。
本文将介绍国际上常见的大肠杆菌检测方法国标。
一、 ISO 9308-1：水质–检测和计数大肠杆菌–第1部分：膜过滤法
该标准适用于检测与供水、游泳池、浴缸等有关的水样中的大肠杆菌。
该标准使用膜过滤技术，将水样过滤通过0.45微米的滤膜上的杆菌层，然后将滤膜培养在培养基上，检测和计数大肠杆菌的数量。
该标准具有简便、快捷、准确等特点。
二、ISO 21150：食品和饲料–检测和计数大肠杆菌和厌氧菌–气相培养法
该标准适用于肉、肠衣、豆腐等食品样品，通过瓶内培养的方法检测大肠杆菌的数量。
该标准使用培养基使大肠杆菌产生二氧化碳，然后采用气相色谱技术检测二氧化碳的量，以计算大肠杆菌的数量。
该标准的优点是能在单一瓶中同时检测大肠杆菌和厌氧菌的数量。
三、ISO 9308-2：水质–检测和计数大肠杆菌和沙门氏菌–第2部分：多管发酵管技术
该标准适用于检测污染水样和废水样品中的大肠杆菌和沙门氏菌。
该标准使用多管发酵管技术，将水样转移到多个管子中，这些管子中的培养基不断地搅拌，检测管子中产生的气体，以检测大肠杆菌和沙门氏菌的数量。
该标准较为耗时，但能同时检测两种菌群。
以上三种标准是国际上常见的用于大肠杆菌检测的方法。
在具体应用中可以选择适宜的方法，选择合适的培养基，并按照标准操作规范执行测试，以得到准确可靠的检测结果。
大肠杆菌药敏试验标准
大肠杆菌药敏试验标准
大肠杆菌药敏试验是用于测试大肠杆菌对不同抗生素的敏感性的一种实验方法。
以下是一般的大肠杆菌药敏试验的标准步骤：
1. 实验材料准备：准备好需要测试的抗生素药片或药物溶液，以及含有大肠杆菌菌株的培养基。
2. 菌株接种：从培养物中选取单个菌落，接种到含有营养物的培养基中。
3. 选取菌液：生长到适当密度的菌液将被选取进行进一步药敏试验。
4. 菌液均匀涂布：将选取的菌液均匀涂布在含有乳糖的富尔曼琼脂培养基平板上。
5. 加入抗生素：在平板上等距离地加入不同抗生素的药片或药物溶液。
6. 孵育：将平板在恒温箱中孵育一定时间，通常为24小时。
7. 结果观察：观察菌落周围是否有抑制圈形成，圈的直径和抑制程度可用来判断对该抗生素的敏感性。
8. 结果分析：将菌落周围抑制圈的直径用抗生素敏感性分类标准进行解读和分析，依据抗生素的浓度、直径等因素判断菌株是否对该抗生素敏感。
需要注意的是，药敏试验标准可能在不同的实验室或文献中有所不同，具体的实验步骤和解读依据应以实验所使用的标准为准。
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一材料 1 水样取宿舍某品牌桶装饮用水（处于饮用状态的第2天），分别编号为1、2、3...。
在饮水机的冷水端出口用灭菌三角烧瓶接取500ml中间流水，立即带回实验室进行检测。
2 仪器与试剂仪器：垂直流超净工作台、恒温培养箱、冰箱、光学显微镜、手提式高压灭菌锅等。
药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、Nacl 、乳糖、磷酸二氢钾、伊红美蓝琼脂、2%伊红水溶液、0.5%美蓝水溶液、10.0%NaOH溶液、10.0%HCl溶液、灭菌生理盐水。
3 培养基牛肉膏蛋白胨培养基。
培养基配方：水 1000ml、牛肉膏 5.0g、蛋白胨 10.0g、Nacl 5.0g、琼脂 20.0g,PH调至7.0--7.2。
高压蒸汽灭菌121℃灭菌20分钟。
伊红美蓝培养液。
伊红美蓝培养液是用来培养和观察是否有大肠菌群。
培养基配方：水 1000ml、乳糖 10.0g、蛋白胨 10.0g、磷酸氢二钾 2.0g、2%伊红水溶液 2ml、0.5%美蓝水溶液 1ml, PH调至7.2--7.4。
高压蒸汽灭菌115℃灭菌20分钟。
伊红美蓝琼脂培养基。
伊红美蓝琼脂培养基被广泛用于分离和鉴别大肠菌群。
培养基配方：水 1000ml、伊红美蓝琼脂 45.0g, PH 调至7.2--7.4。
高压蒸汽灭菌115℃灭菌20分钟。
二；方法：各取1ml加入灭菌培养皿中,每个稀释度做2个重复。
分别倾入约15ml已溶化并冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即摇动平皿，使水样与培养基充分混匀。
待培养基凝固后，倒置于培养箱中37℃培养24h。
1.2.1.2 菌落形态学的鉴
定
细菌在合适的培养基表面生长形成菌落。
利用菌落的形态学可以鉴定一些菌种。
菌落的形态学包括菌落大小、形状、高度、边缘、颜色、表面状态、密度、硬度。
菌落形态学一般在培养24～48 h 内肉眼观测，不同培养基菌落形态学可发生变化。
1.2.1.3 统计数据[1] 1.2.2 大肠菌群的测定[5,6] 初发酵试验：在2个含有50ml伊红美蓝培养液的三角烧瓶中各加入100ml水样。
在10支装有5ml伊红美蓝培养液的试管中，各加入10ml水样。
混匀后，37℃培养24h，24h未变色的继续培养至48h。
平板分离：将24h培养后变色和48h培养后变色的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18～24h，将符合下列特征菌落：深紫黑色有金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色中心颜色较深，其中的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。
复发酵试验：经涂片、染色、镜检，如果是革兰氏阴性无芽胞杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于伊红美蓝培养液中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1～3个，37℃培养24h，实验结果若有金属光泽，即证实有大肠杆菌群存在。
证实有大肠杆菌群存在后。
最后测试消毒剂的作用。